RNA干扰（RNAi）技术及其在功能基因组学研究中的应用

近年来的研究表明 ,一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内某些基因致使mRNA降解 ,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型 ,称为RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)。由于可以作为代替基因敲除的遗传工具 ,RNAi技术正在改变着功能基因组学 (functionalgenomics)领域的研究步伐。《科学》杂志和美国科学促进会将RNAi技术评选为2 0 0 2年十大重大科学成就之首。1　RNAi及其作用机制1.1　RNAi回顾首次发现双链RNA (doublestrandRNA ,dsR NA)能够导致基因沉默的现象来源于对线虫Caenorhabditiselegans的研究。1995年 ,康乃尔大学的…     

RNAi功能及应用

RNA干涉（RNA interference,RNAi）是将双链RNA（dsRNA）导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程,它是转录后基因沉默（PTGS）的一种。这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示。RNAi具有高效性和高度特异性,在维持基因组稳定、基因表达调控、保护基因组免受外源核酸侵入等方面发挥重要生物学作用。RNAi作为基因沉默的一个工具,RNAi作为基因沉默的一个工具,已被广泛用于基因功能研究、基因治疗和新药研究与开发等方面。     

RNAi的机制及RNAi技术的应用

1995年，Guo和Kemphues试图利用反义和正义RNA影响秀丽新小杆线虫中的par-1基因表达，结果意外的发现二者同样地抑制了par-1基因的表达。到1998年，Fire等证实了正义RNA抑制基因表达，以及过去的反义RNA对基因表达的阻断，都是由于体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA而引起。当他们将体外转录得到的单链RNA纯化后注射线     

RNA干扰技术的演进及其在基因功能和基因治疗研究中的应用

RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指双链RNA（double strands RNA, dsRNA）引起的mRNA水平互补序列基因表达的关闭,即序列特异性转录后基因沉寂,是生物体进化过程中抵御外来基因和病毒感染的进化保守机制。RNA干扰技术不仅被广泛地运用于基因功能研究,而且在基因治疗中显示出极大潜力。体外RAN干扰技术包括双链RNA的合成、基因导入及干扰作用评价等。本文阐述了近年来这一新兴生物学技术的发展与演进以及在基因功能及基因治疗研究中的应用和前景。     

RNAi的研究进展

RNAi是由双链RNA导入而引起的基因沉默现象,是近几年迅速发展起来的一种基因阻断技术。dsRNA经酶切成为siRNA(short interfering RNA),进一步形成RISC(RNA induced silencing complex),在siRNAs引导下切割靶mRNA。RNAi技术在基因研究,疾病的基因治疗等方面均有广阔前景。     

RNAi技术及其应用

自从1998年Fire等提出siRNA以来,短短的几年间人们对它的认识和应用速度是惊人的。RNAi现象的发现及其分子生物学机制和功能的深入研究,为成功地应用RNAi研究与治疗遗传性疾病、病毒感染、免疫缺陷疾病和肿瘤等重大疾病提供了理论基础,而且目前已取得重大进展,尤其是在肿瘤、艾滋病和肝炎等方面。本文就有关RNAi综述如下。1 RNAi的发现RNAi(RNA interference)即RNA干扰,是1998年由Fire首次发现并命名的。1995年,康乃尔大学的Guo和Kem-phues et al[1]在试图阻断秀丽新小杆线虫(C·elegans)中的par-1基因时,想利用反义RNA技术特…     

RNAi的研究进展

RNAi是由双链RNA导入而引起的基因沉默现象，是近几年迅速发展起来的一种基因阻断技术。dsRNA经酶切成为siRNA（short interfering RNA），进一步形成RISC（RNA induced silencing complex），在siRNAs引导下切割靶mRNA。RNAi技术在基因研究，疾病的基因治疗等方面均有广阔前景。     

RNAi在哺乳动物细胞功能基因组学研究中的应用

随着人类基因组测序计划的完成,绘出了人类大约3万到4万个基因的图谱,然而其中大部分基因的功能还不清楚,因此对基因功能的研究成为当前基因学研究的热点。RNAi（RNA interference,RNA干扰）作为一种新的、强有力的研究工具,正在功能基因组学研究中蕴育着巨大潜力,     

RNAi技术在肿瘤研究中的应用

外源性或内源性双链RNA（Double—stranded RNA,dsRNA）在细胞导致与其同源的mRNA分子发生特异性降解,从而干扰相应基因的表达,这种现象被称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）．RNAi主要由长dsRNA分子裂解形成的小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）分子介导,是在RNA水平调节基因表达的一种方式,     

抑制端粒酶活性的pSUPER RNAi系统的构建

目的 构建抑制端粒酶活性的siRNA表达载体。方法 化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向端粒酶hTERT基因的寡核苷酸，各64个碱基，退火，克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切同时CIP处理后的pSUPER载体的polⅢH1启动子的下游，重组构建RNAi质粒，同时设立非特异对照．结果 重组构建的pSUP—hTE载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析，结果表明64个碱基成功插入到预计位点，并且序列完全一致。结论 载体的成功构建，为进一步研究其对端粒酶活性的抑制作用打下基础。同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法，这项技术能广泛的用在分析基因功能、肿瘤治疗等，更加便捷地把RNAi技术用于细胞培养和哺乳动物研究。     

RNAi在白血病相关基因功能研究与基因治疗中的应用

白血病是血液系统最主要的恶性肿瘤之一,估计我国白血病的发病率每年2.71/10万,每年死于白血病患者近4万人,5年无病生存率仅达20%左右。RNA干扰(RNAi)是一种特异有效的阻断靶基因表达的新技术。目前,广泛地应用于人类白血病相关基因功能研究以及白血病基因治疗实验研究中。现就最近应用RANi研究白血病的成果进行综述。     

RNA干扰技术的应用

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是与靶基因序列同源的双链RNA诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。目前 ,RNAi的作用机制已经基本明确 ,并显示了广阔的应用前景。RNAi技术作为新的基因阻断技术已经成功地应用于人类基因组功能的研究 ,同时提供了一条人类抗病毒治疗的新技术。另外 ,借助RNAi技术还有望在将来于基因水平对肿瘤进行治疗。     

RNAi在胃癌研究中应用的进展

胃癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤，其发病率在恶性肿瘤中占第四位，死亡率居第二位，且胃癌发病率在世界不同国家和地区有较大的差异，表现出明显的地域性。RNA干扰技术（RNA interference，RNAi）在哺乳动物细胞中是利用小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）诱导特异性基因表达抑制，具有基因抑制效果确切、抑制具有严格的序列特异性、作用迅速等特点，已被广泛用于胃癌相关基因功能、胃癌化疗的多药耐药、胃癌的治疗方面的研究和探索。随着对RNAi机制的深入研究，相信不久的将来RNAi技术能在肿瘤的基因治疗方面发挥越来越重要的作用。     

靶向RNAi抑制survivin基因增强胰腺癌对厄洛替尼化疗敏感性的实验研究

目的:胰腺癌的化疗药物耐药是一个亟待解决的问题.存活素(survivin)基因是肿瘤化疗耐药的重要原因.运用RNAi载体抑制survivin的表达对增强胰腺癌对厄洛替尼敏感性的影响.为增强胰腺癌化疗敏感性奠定一定的实验基础.方法:培养胰腺癌细胞PANC-1,构建以U6为启动子的RNAi载体并转染PANC-1,运用FCM检测加入厄洛替尼前后胰腺癌细胞凋亡指数和Hoechest 33258检测凋亡形态,MTT检测转染前后IC50.结果:转染survivin的RNAi载体后48h,流式细胞仪检测的凋亡指数为15.24％±1.35％,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05);Hoechst33258染色显示,PANC-1细胞出现核皱缩、浓染和碎裂等典型的凋亡形态,MTT检测转染前及转染后48h厄洛替尼的IC50分别为(1.35±0.05) μg/mL,(0.46±0.08) μg/mL,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:Survivin的RNAi载体,能有效地增强胰腺癌对厄洛替尼的化疗敏感性.     

RNA干扰技术的研究现状及应用

RNAi是一种细胞内导入与特定基因序列相同的双链RNA(double—stranded RNA)，从而特异关闭基因的新方法。随着dsRNA对靶mRNA抑制作用的特异性高效性的确认，RNAi技术得到广泛重视。如今，RNAi技术的新基因筛选、基因功能的鉴定、基因治疗和获得抗病毒植株等方面已被广泛应用。     

RNAi在哺乳动物细胞中的应用前景

RNA干涉(RNA interference，RNAi)是近年来发现的一种重要基因沉默现象。1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年，Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA。这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的。     

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的运用RNAi技术，设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA)，研究其干扰效果。方法针对c-myc mRNA的第1357靶位点设计siRNAs，经Lipofectamine^TM 2000脂质体法转染K562细胞，进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测，观察其干扰效果。结果转染组与阴性对照组和空白对照组相比，c-myc mRNA表达明显减弱．细胞计数和MTTD(λ)值均有显降低，并有明显的凋亡率。结论运用RNAi技术，可以有效地干扰c-myc的表达．并进一步诱导细胞凋亡。