高分化胃腺癌组织表达缺失蛋白质分析

目的本研究应用蛋白质组学方法,分析胃癌(gastric carcinoma, GC)中表达缺失蛋白质分子.方法提取胃癌及配对正常胃黏膜组织总蛋白,采用双向电泳获得胃癌与配对正常胃黏膜组织蛋白质表达谱并进行分析,鉴定胃癌表达缺失的蛋白质分子.结果通过比较分析5对高分化胃腺癌及配对正常胃黏膜组织的蛋白表达谱,共发现差异表达蛋白点81个,其中7个蛋白点仅正常胃黏膜组织表达,而在胃癌组织中表达缺失,分别为:细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白12(P16)、细胞周期素依赖激酶抑制蛋白1(P21)、抗氧化蛋白2、二硫化蛋白异构酶A2、C-1-四氢叶酸合成酶、Rho-GTPase-激活蛋白4、胰岛素样生长因子结合蛋白2.结论胃癌组织与正常胃黏膜组织之间存在蛋白质表达差异.寻找胃癌组织与正常胃黏膜组织之间表达差异蛋白质,为探讨胃癌发病分子机制提供有用依据.     

蛋白质指纹图谱在胃癌新辅助化疗疗效评价中的应用

[目的]探讨蛋白质指纹图谱与胃癌新辅助化疗疗效的关系.[方法]采用SELDI-TOF蛋白质芯片技术,检测胃癌化疗前血清蛋白指纹图谱,通过比较分析发现差异蛋白质,进一步筛选与新辅助化疗疗效相关的血清蛋白质指纹图谱差异.[结果]17 162、22 331、29 901M/Z蛋白质在无效组中均高表达(P＜0.01),有效组和健康组比较无统计学意义.[结论]17 162、22 331、29901M/Z3种蛋白质有可能成为筛选胃癌新辅助化疗疗效的蛋白分子.血清蛋白质指纹图谱对筛选胃癌新辅助化疗疗效预测分子有潜在应用前景.     

胃癌及慢性胃炎幽门螺杆菌的蛋白质组学研究

目的:建立胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌的双向凝胶电泳图谱,识别鉴定其差异表达的蛋白质,探讨细菌本身因素在发病过程中的作用.方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌菌株的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,采用PDQuest图像分析软件比较、分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点.结果:获得分辨率较高、重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,鉴定出14个差异蛋白质,包括抗氧化作用、分子伴侣、解毒和DNA修复相关蛋白质、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号传导相关蛋白质.结论:建立了分辨率高且重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了两种不同疾病来源幽门螺杆菌差异表达的蛋白质,其蛋白质表达的差异可能在胃癌的发生中起重要作用.     

胃癌高、低发区胃癌与慢性胃炎患者幽门螺杆菌差异蛋白质的比较

目的:建立胃癌高、低发地区胃癌与慢性胃炎相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图谱,识别鉴定其差异表达蛋白质,探讨细菌本身因素在发病过程中的作用。方法:胃癌高发区(青海省西宁市)和胃癌低发区(北京市)的胃癌及慢性胃炎患者,胃镜下取胃黏膜组织,分离培养得到Hp临床株并冻存于-80℃。实验时将保存菌株复苏后,收集菌体并提取蛋白,利用双向凝胶电泳分离Hp蛋白,采用PDQuest软件分析、比较差异表达蛋白质点,利用四极杆飞行时间电喷雾串联质谱(four extremelystem flight time electrospray ionization tandem mass spectrometry,ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,并用Mascot数据库进行检索。结果:两地区胃癌及慢性胃炎相关Hp菌株总蛋白进行双向凝胶电泳,获得分辨率较高、重复性较好的2-DE图谱。鉴定出的9个差异蛋白质点中有4个在两地区胃癌菌株中均高表达,即尿素酶α、分子伴侣dnaK、DNA引导的RNA聚合酶α、超氧物岐化酶;2个在两地区慢性胃炎菌株中均高表达,即巯基过氧化物酶和核苷二磷酸激酶;此外还有3个蛋白质点仅在一个地区差异性表达,即分子伴侣60×103和无机焦磷酸酶仅在西宁市胃癌菌株中高表达,S-核糖基同型半胱氨酸裂解酶仅在北京市胃癌菌株中高表达。结论:胃癌高、低发区胃癌相关临床菌株与同一地区胃炎相关菌株蛋白质比较存在差异,但两地区2/3的差异蛋白质是一致的,胃癌高发区胃癌相关菌株高表达的差异蛋白质多于胃癌低发区,提示致胃癌的Hp菌株在不同地区其致胃癌的机制是相似的,但胃癌高发区胃癌相关菌株可能有强于低发区的致胃癌作用。     

不同分期胃腺癌及癌旁组织蛋白质表达谱的研究

目的 建立II、IV期胃腺癌及癌旁胃组织的蛋白质表达谱并分析其表达的差异。方法 从胃腺癌II期和IV期患者各3例提取胃癌组织（CaII和CaIV）及胃旁组织（PII和PIV）中总蛋白,采用双向凝胶电泳获得CaII、CaIV、PII、PIV胃组织蛋白质表达谱,通过基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）对主要差异蛋白进行分析。结果PII与CaII之间蛋白质表达有显著差异（达2.0倍以上）的蛋白点有28个,CaII3个蛋白点表达上调,25个蛋白点表达下调;PIV与CaIV之间蛋白质表达有显著差异（达2.0倍以上）的蛋白点有25个,CaIV这些蛋白点表达均下调。使用MALDI－TOF/TOF质谱成功鉴定到8个蛋白点在CaII和CaIV中的表达与PII、PIV均有显著差异,分别是谷胱甘肽巯基转移酶、内质网蛋白ERP29、SH3P、蛋白质膜联蛋白A4、肝脏型脂肪酸结合蛋白、磷酸丙糖异构酶、Transgelin和磷脂酰乙醇结合蛋白,这些蛋白大多与细胞增殖、细胞凋亡及信号转导相关。结论不同分期胃癌与其癌旁组织之间存在蛋白质表达差异,有助于从分子水平了解胃癌的发病机制,探索新的胃癌相关标志物和基因治疗靶点。     

胃癌高、低发区胃癌与慢性胃炎患者幽门螺杆菌差异蛋白质的比较

目的:建立胃癌高、低发地区胃癌与慢性胃炎相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图谱,识别鉴定其差异表达蛋白质,探讨细菌本身因素在发病过程中的作用.方法:胃癌高发区(青海省西宁市)和胃癌低发区(北京市)的胃癌及慢性胃炎患者,胃镜下取胃黏膜组织,分离培养得到Hp临床株并冻存于-80℃.实验时将保存菌株复苏后,收集菌体并提取蛋白,利用双向凝胶电泳分离Hp蛋白,采用PDQuest软件分析、比较差异表达蛋白质点,利用四极杆飞行时间电喷雾串联质谱(four extremely stem flight time electrospray ionization tandem mass spectrometry,ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,并用Mascot数据库进行检索.结果:两地区胃癌及慢性胃炎相关Hp菌株总蛋白进行双向凝胶电泳,获得分辨率较高、重复性较好的2-DE图谱.鉴定出的9个差异蛋白质点中有4个在两地区胃癌菌株中均高表达,即尿素酶α、分子伴侣dnaK、DNA引导的RNA聚合酶α、超氧物岐化酶;2个在两地区慢性胃炎菌株中均高表达,即巯基过氧化物酶和核苷二磷酸激酶;此外还有3个蛋白质点仅在一个地区差异性表达,即分子伴侣60×103和无机焦磷酸酶仅在西宁市胃癌菌株中高表达,S-核糖基同型半胱氨酸裂解酶仅在北京市胃癌菌株中高表达.结论:胃癌高、低发区胃癌相关临床菌株与同一地区胃炎相关菌株蛋白质比较存在差异,但两地区2/3的差异蛋白质是一致的,胃癌高发区胃癌相关菌株高表达的差异蛋白质多于胃癌低发区,提示致胃癌的Hp菌株在不同地区其致胃癌的机制是相似的,但胃癌高发区胃癌相关菌株可能有强于低发区的致胃癌作用.     

紫杉醇耐药与敏感细胞的差异表达蛋白分析

目的 比较人肺腺癌细胞系A549与肺腺癌紫杉醇耐药细胞系A549-Taxol的差异表达蛋白.方法 提取A549和A549-Taxol总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离,ImageMaster 5.0软件分析并筛选出两者间差异表达的蛋白点,质谱分析加以鉴定.结果 获得分辨率高且重复性好的肺腺癌耐紫杉醇细胞系及亲代细胞系2-DE图谱.ImageMaster软件分析差异大于2倍的蛋白质点共有80个,其中33个在耐药细胞系中上调,47个下调.质谱分析鉴定出19种差异表达蛋白,其中A549-Taxol中上调蛋白11种,涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、分子伴侣和信号转导相关蛋白质.结论 应用2-DE技术整体展示了紫杉醇耐药细胞系及敏感细胞系的蛋白表达谱,质谱法鉴定的差异蛋白为进一步从多因素角度研究紫杉醇耐药机制提供了新线索.     

紫杉醇耐药与敏感细胞的差异表达蛋白分析

目的 比较人肺腺癌细胞系A549与肺腺癌紫杉醇耐药细胞系A549-Taxol的差异表达蛋白.方法 提取A549和A549-Taxol总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离,ImageMaster 5.0软件分析并筛选出两者间差异表达的蛋白点,质谱分析加以鉴定.结果 获得分辨率高且重复性好的肺腺癌耐紫杉醇细胞系及亲代细胞系2-DE图谱.ImageMaster软件分析差异大于2倍的蛋白质点共有80个,其中33个在耐药细胞系中上调,47个下调.质谱分析鉴定出19种差异表达蛋白,其中A549-Taxol中上调蛋白11种,涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、分子伴侣和信号转导相关蛋白质.结论 应用2-DE技术整体展示了紫杉醇耐药细胞系及敏感细胞系的蛋白表达谱,质谱法鉴定的差异蛋白为进一步从多因素角度研究紫杉醇耐药机制提供了新线索.     

胃癌组织差异蛋白表达谱的初步研究

目的:建立胃癌和癌旁胃黏膜组织pH 4~7蛋白质表达谱,分析胃癌和癌旁黏膜组织中蛋白质表达的差异。方法:提取胃癌及癌旁胃黏膜组织总蛋白,采用二维电泳获得胃癌和癌旁胃黏膜组织蛋白质表达谱并进行分析。结果:通过比较分析5对胃癌和癌旁胃黏膜组织pH 4~7蛋白质表达谱,共发现128个差异表达的蛋白质点,其中仅在胃癌组织中表达的蛋白质点56个,胃癌组织中失表达的蛋白质点27个,32个点在胃癌组织中表达上调,13个点在胃癌组织中表达下调。结论:胃癌与癌旁胃黏膜组织之间存在蛋白质表达差异。寻找胃癌与癌旁胃黏膜组织之间表达差异的蛋白质,为阐明胃癌发生的分子机制奠定基础。     

双向电泳联合串联质谱技术筛查人胃癌血清蛋白质标记物

目的:通过血清蛋白质组学技术寻找胃癌标记物,是目前肿瘤研究的热点.文中比较胃癌患者与正常人血清蛋白质的差异,以寻找候选血清标记物. 方法:①随机选取20例胃癌患者(胃癌组)血清,pTNM分期(Ⅰ～Ⅳ期)各5例,10例正常人(对照组)血清作对照.②血清样品处理:通过蛋白亲和柱去除血清清蛋白和IgG两种高丰度蛋白.③通过双向电泳进行差异比较,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)鉴定差异蛋白点.④利用免疫印记方法对筛选的标记物蛋白质进行验证. 结果:发现胃癌患者较正常人存在多个蛋白质点差异,差异蛋白质点质谱鉴定结果显示,补体 C4-B 前体在胃癌血清中含量明显增高;补体因子Ⅰ前体和血清结合珠蛋白前体则含量显著降低(P＜0.01). 结论:利用血清蛋白质组学技术可筛选出胃癌血清蛋白标记物,为胃癌的血清学诊断提供依据.