耐受性树突状细胞延长大鼠移植脾存活时间

目的 观察供者来源的耐受性树突状细胞（DC）在脾移植中的作用，并探讨其作用机理。方法 以Wista大鼠为供者，SD大鼠为受者，建立同种颈部异位脾脏移植模型。（1）分离供者的骨髓细胞，分别采用白细胞介素4（IL-4）和白细胞介素10（IL-10）诱导培养出成熟的DC和耐受性DC，并在光镜下观察两者的细胞形态学差别。采用流式细胞术检测两者对共刺激分子CD86表达的差异，采用混合淋巴细胞反应比较其在体外刺激同种异体T淋巴细胞增殖的反应能力。（2）将受者随机分成4组，每组10只。单纯移植组：受者不经任何预处理仅进行脾移植。IL-10DC组：在移植前7d经受者尾静脉注射2×10^6／ml的经IL-10诱导的DC 1 ml。IL-4 DC组：在移植前7d经受者尾静脉注射2×10^6／ml的经IL-4诱导的DC 1 ml。空白对照组：在移植前7d经受者尾静脉注射无细胞的培养液1ml。观察各组移植术后发生急性排斥反应的时间。结果 （1）经IL-10诱导的骨髓细胞表现为未成熟树突状细胞的形态和特性，细胞体积大，但少见树突状突起，细胞表面低表达CD86分子，不能有效刺激T淋巴细胞的增殖。而经IL-4诱导的骨髓细胞为典型的成熟树突状细胞，细胞胞体大，并有树突状突起，细胞表面高表达共刺激分子CD86，可显著刺激T细胞的增殖。（2）IL-10 DC组发生急性排斥反应的时间较其他3组明显延迟（P〈0．01）；IL-4 DC组发生急性排斥反应的时间较单纯移植组和空白对照组明显提前（P〈0．05）；而单纯移植组与空白对照组间则无明显差异（P〉0．05）。结论 应用供者来源的耐受性树突状细胞能够延缓大鼠移植脾急性排斥反应的发生时间。     

负载Ad-CTLA4Ig的未成熟树突状细胞延长大鼠移植肾存活时间的探讨

目的 探讨负载细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白基因重组腺病毒(Ad-CTLA4Ig)的受者未成熟树突状细胞(DC)对大鼠移植肾存活时间的影响.方法 选择雄性SD大鼠为供者,雄性Wistar大鼠为受者,建立大鼠肾移植模型.将受者随机分为4组,每组12只.制备Ad-CTLA4Ig及受者未成熟DC悬液,37℃混合孵育6 h,于移植前7 d,实验组经腹腔内注射负载Ad-CTLA4Ig的DC悬液;Ad-CTLA4Ig对照组、重组腺病毒空载体(Ad-VG)对照组和生理盐水(NS)对照组分别经腹腔内注射1 ml Ad-CTLA4Ig、Ad-VG和NS.观察各组移植肾的存活时间、组织形态学改变、受者血液中腺病毒中和抗体滴度、血清CTLA4Ig水平及混合淋巴细胞反应(MLR)的变化.结果 实验组移植肾存活时间为(94.6±9.0)d,较各对照组显著延长:[Ad-CTLA4Ig对照组为(39.6±10.6)d,Ad-VG对照组为(8.6±2.8)d,NS对照组为(8.4±2.6)d],差异均有统计学意义(P＜0.01),实验组移植肾组织损伤程度较轻,血液中腺病毒中和抗体滴度及混合淋巴细胞反应指数均较各对照组显著减少;实验组血清CTLA4Ig水平较Ad-CTFLA4Ig对照组显著升高.结论 负载Ad-CTLA4Ig的受者未成熟DC可减少腺病毒中和抗体,维持CTLA4Ig的稳定表达,从而延长大鼠移植肾的存活时间.     

输注负载胎盘滋养层细胞抗原的受者aaDC延长小鼠移植心的存活时间

目的 探讨输注负载供者胎盘滋养层细胞抗原的受者耐受性选择性激活树突状细胞(aaDC)对小鼠移植心存活时间的影响.方法 雌性Balb/c小鼠和雄性C57BL/6小鼠合笼后,获取雌鼠胎盘滋养层细胞,并提取其抗原.体外制备Balb/c小鼠的aaDC,分别与滋养层细胞抗原或者C57BL/6小鼠脾细胞抗原共培养,获得负载滋养层细胞抗原或者C57BL/6小鼠脾细胞抗原的aaDC,测定培养液中白细胞介素10(IL-10)和IL-12的含量以及aaDC表面CD40、CD80、CD86和主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子的表达.取Balb/c小鼠,分别接受负载滋养层细胞抗原或者C57BL/6小鼠脾细胞抗原的aaDC输注(滋养层细胞抗原组和脾细胞抗原组),7 d后接受C57BL/6小鼠心脏异位移植,以注射生理盐水者为对照组,输注负载滋养层细胞抗原aaDC后接受昆明小鼠心脏移植者为第三供者对照组.术后记录移植心存活时间,并检测受者脾脏和移植心组织中IL-2、IL-10和γ干扰素(IFN-7)mRNA的表达.结果 负载脾细胞抗原的aaDC,CD86和MHCⅡ类分子的表达明显升高,而负载滋养层细胞抗原的aaDC,仅MHCⅡ类分子表达升高.滋养层细胞抗原aalDC的培养液中,IL-10为(122.6±15.4)ng/L,IL-12为(232.8±25.4)ng/L,空白对照aaDC的IL-10和IL-12分别为(35.4±8.5)ng/L和(267.3±12.5)ng/L,二者间IL-10的差异有统计学意义(P<0.05),而IL-12的差异无统计学意义(P>0.05).脾细胞抗原aaDC培养液中的IL-10和IL-12与空白对照aaDC相近,差异均无统计学意义(P>0.05).对照组移植心存活时间为(6.73±0.58)d,脾细胞抗原组为(12.28±0.76)d,滋养层细胞抗原组为(38.83±2.79)d,第三供者对照组为(6.68±0.62)d.滋养层细胞抗原组移植心存活时间明显长于脾细胞抗原组和对照组(P<0.01),而第三供者对照组和对照组间移植心存活时间的差异无统计学意义(P>0.05).结论 预先输注负载供者胎盘滋养层细胞抗原的受者aaDC,可延长小鼠移植心的存活时间.     

采用经姜黄素处理的未成熟树突状细胞延长大鼠移植肾存活时间

目的 探讨姜黄素(Cur)处理的树突状细胞(DC)诱导同种T淋巴细胞低反应性的效果以及对大鼠移植肾存活时间的影响.方法 体外培养Wistar大鼠骨髓来源的DC,经Cur处理后,以流式细胞仪检测细胞CD11c、CD80、CD86及主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类抗原的变化,酶联免疫吸附试验测定DC分泌白细胞介素12(IL-12)的水平,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激Lewis大鼠T淋巴细胞增殖的能力,二次MLR测定其诱导的T淋巴细胞抗原特异性低反应性.以Wistar大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,进行肾移植.术前第7天,经尾静脉给受者输注用Cur处理的供者DC,分设不处理对照组和未成熟DC对照组(经尾静脉注射供者的未成熟DC),术后观察移植肾存活时间及组织学改变情况,第14天检测受者T淋巴细胞对供者成熟DC的反应性.结果 Cur能明显抑制DC共刺激分子CD11c、CD80、CD86及MHCⅡ类抗原的表达以及IL-12的分泌(P＜0.05).同种T淋巴细胞对经Cur处理过的DC刺激的增殖能力明显减低,且这种低反应性具有抗原特异性.对照组和未成熟DC对照组移植肾的存活时间分别为(8.6±2.1)d和(22.4±7.4)d,实验组为(31.5±6.9)d,实验组移植肾存活时间明显长于对照组和未成熟DC对照组(P＜0.05),且其移植肾组织的损伤程度最轻.实验组受者的T淋巴细胞对供者成熟DC刺激的反应性明显低于对照组(P＜0.05),而对第三方无关抗原的刺激保持较高增殖强度.结论 Cur能抑制DC成熟功能,诱导供者特异性的T淋巴细胞低反应性,移植前输注经Cur处理的未成熟DC能显著延长大鼠移植肾的存活时间.     

转染IKK2dn的受者树突状细胞回输延长同种异体肾移植大鼠的存活时间

目的 探讨IKK2dn基因转染并负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞(imDC)延长同种异体肾移植大鼠的存活时间及其机制.方法 获取和培养Lewis大鼠骨髓源性DC,转染IKK2dn并负载BN大鼠可溶性抗原进行体外实验,检测CD86和主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ的表达及DC刺激T淋巴细胞增殖的能力.肾移植受者为Lewis大鼠,用随即数字表法分DC组、空转染组、转染组、对照组,术前7d分别输注1×10~7个D、Adv-0-DC、负载BN抗原的Adv-IKK2dn-DC和等量生理盐水,供者均为BN大鼠.另设第三方供者组,术前处理同转染组,供者为Wistar大鼠.移植后检测各组受者T淋巴细胞的增殖能力及血清白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平,观察各组大鼠的存活时间和发生排斥反应情况.结果 DC的体外实验结果显示:与转染IKK2dn前相比,转染后DC仍能低水平表达CD86和MHC Ⅱ,负载供者抗原后CD86和MHCⅡ表达均增加,而转染IKK2dn后再负载供者抗原,CD86和MHC Ⅱ的表达未发生明显变化;DC负载供者抗原后,刺激T淋巴细胞增殖的能力明显增强(P<0.05),而转染IKK2dn并负载供者抗原后不能有效刺激T淋巴细胞增殖.肾移植术后的检测结果显示:转染组T淋巴细胞的增殖能力明显低于其他4组(P<0.05或P相似文献   

大鼠供肾转染Fas配体基因延长移植肾存活时间

目的观察大鼠供肾转染Fas配体(FasL)基因是否能延长肾移植后受者和移植肾的存活时间,研究其对移植肾的保护作用。方法供者为SD大鼠,受者为Wistar大鼠,随机配对分为实验组和对照组。实验组供肾移植前用1ml含重组腺病毒AdV-FasL的HC-A肾脏冷保存液(0~4℃)经肾动脉灌注;对照组用1mlHC-A肾脏冷保存液(0~4℃)灌注。建立同种肾移植模型。应用逆转录聚合酶链法(RT-PCR)及免疫组织化学方法检测外源FasL基因的表达;透射电镜观察移植肾超微结构的变化;并对肾移植后大鼠的存活率及血肌酐水平进行观察。结果实验组移植肾转基因后FasLmRNA及蛋白均呈阳性表达,FasL蛋白的表达主要分布于小动脉、肾小球及近曲小管。实验组移植肾免疫排斥反应及超微结构变化均较对照组减轻。实验组及对照组肾移植后大鼠的存活时间中位数分别为32.2d和12.1d;术后第7d,实验组血肌酐水平为(315.2±19.2)μmol/L,对照组为(416.2±48.6)μmol/L;两组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腺病毒载体可成功介导FasL基因对大鼠肾脏的转移,并对移植肾起免疫保护作用、延长移植肾的存活时间。     

他克莫司处理的供者树突状细胞延长大鼠移植心脏的存活时间

目的 研究经他克莫司(Tac)处理的供者未成熟树突状细胞(imEX3)在延长大鼠移植心脏存活时间中的作用和机制.方法 以Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者,行颈部异位心脏移植.心脏移植前将受者随机分为3组,每组15只,进行不同的预处理.第1组:为对照组,术前7 d经受者的尾静脉注射生理盐水1.0ml;第2组:为未经Tac处理组,术前7 d经受者的尾静脉注射未经Tac处理的imDC 2×106(1.0 m1);第3组:为Tac处理组,术前7 d经受者的尾静脉注射经Tac处理的imDC 2×106(1.0 m1).术后观察:移植心脏的存活时间、受者与供者及无关供者(Lewis大鼠)的单向混合淋巴细胞反应(MLR)、心肌组织病理学表现及血清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10和γ干扰素(IFN-γ)的水平变化.结果 第1、2、3组移植心脏的存活时间分别为(8.57±1.34)d、(20.92±2.68)d和(33.30±3.92)d.各组之间比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);第2、3组受者对供者的MLR刺激指数较第1组明显降低,而对无关供者的MLR刺激指数则与第1组相近;各组受者血清IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10浓度问差异有统计学意义(P＜0.01),第3组IL-2和IFN-γ(代表TH1细胞)水平明显降低,而IL-4和IL-10(代表TH2细胞)水平明显增高.结论 imDC能够延长大鼠心脏移植后的存活时间,经Tac处理的imDC能够进一步加强这种作用;且imDC所诱导的免疫低反应性是供者特异性的.其机制可能主要与调节T淋巴细胞免疫应答类型(TH1至TH2的免疫偏移)和诱导T淋巴细胞免疫应答降低有关.     

西罗莫司与未成熟树突状细胞延长小鼠皮肤移植存活时间的协同作用

目的 研究西罗莫司（SRL）对小鼠骨髓源树突状细胞（DC）分化及成熟的影响，观察西罗莫司与未成熟树突状细胞在延长小鼠皮肤移植存活时间中的协同作用。方法 （1）在诱导C57BL／6小鼠骨髓细胞定向分化为DC时加入SRL，通过流式细胞仪检测CD11c、CD86及MHCⅡ类分子表达情况，经脂多糖（LPS）刺激后，再检测各分子表达的变化。（2）通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）观察经SRL处理的DC刺激同种异基因小鼠T细胞增殖情况。（3）以C57BL／6小鼠为供者，BALB／c小鼠为受者建立皮肤移植模型。观察皮肤移植前7d经尾静脉注射供者未成熟DC及经胃管连续灌注SRL7d的受者移植皮片存活情况及组织学变化。结果 （1）经SRL处理的DC表面CD11c表达仅有轻度降低，但CD86和MHCⅡ类分子表达明显减少。（2）MLR显示经SRL处理的DC刺激同种异基因小鼠T细胞增殖的能力降低。（3）受者皮肤移植术前联合应用供者未成熟DC和SRL，可减轻移植皮片炎症反应并延长其存活时间。结论 SRL对DC分化的影响不明显，但可抑制DC发育成熟。受者术前应用SRL和未成熟DC可延长皮肤移植的存活时间。     

转染IL-12p35siRNA的供者树突状细胞延长大鼠移植小肠的存活时间

目的探讨转染IL-12p35siRNA的供者树突状细胞(DC)对大鼠移植小肠存活时间的影响。方法在体外以IL-12p35siRNA转染Wistar大鼠骨髓来源的DC,用逆转录聚合酶链反应测定转染细胞IL-12p35mRNA的表达,进行混合淋巴细胞反应,观察DC对SD大鼠T淋巴细胞的刺激作用。制作Wistar大鼠到SD大鼠的节段小肠异位移植模型,转染组小肠移植前7 d经阴茎背静脉给受者注射转染IL-12p35siRNA的DC 4×106个/只;未转染组移植前7 d注射未转染的DC 4×106个/只;对照组注射生理盐水。术后观察受者的存活时间,移植小肠进行组织病理学检查,应用酶联免疫吸附试验检测受者血清中白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果DC转染IL- 12p35siRNA后,IL-12p35mRNA的表达明显降低,其刺激T淋巴细胞增殖的能力降低(P<0.01)。转染组受者小肠移植后的存活时间为(16.63±3.38)d,明显长于对照组和未转染组(P<0.01);转染组移植小肠组织中仅有炎症细胞浸润、黏膜层肿胀,绒毛腺体结构和肌层破坏程度较对照组和未转染组明显减轻;术后第10天,转染组的血清IL-2浓度为(175.8±11.5)ng/L,IFN-γ浓度为(70.6±7.2)ng/L,均显著低于对照组和未转染组(P<0.05)。结论转染IL-12p35siRNA,在体外可减轻DC对T淋巴细胞的刺激作用,在体内可抑制大鼠小肠移植后的排斥反应,延长移植小肠的存活时间。     

输注转染MyD88siRNA基因的供者树突状细胞延长小鼠移植心存活时间

目的 探讨输注供者来源的转染了髓样分化因子88(MyD88)siRNA基因的树突状细胞(DC)在延长同种小鼠移植心存活时间中的作用及机制.方法 以脂质体为载体,将化学合成的MyD88siRNA导入BALB/c小鼠(供者)骨髓来源的DC中,制备转染MyD88siRNA基因的DC(MyD88siRNA-DC).随机将27只C57BL/6小鼠(受者)平均分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、培养8 d的DC(Day8-DC)组及MyD88siRNA-DC组,分别将PBS、Day8-DC及MyD88siRNA-DC输注至受者体内.于输注后第7、14和21天时应用免疫双荧光染色法观察供者DC在受者脾脏内的存活情况;混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏内T淋巴细胞对供者同种抗原的反应性.另取27对供、受者(BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠),通过袖套管技术建立颈部异位心脏移植模型,随机平均分为PBS对照移植组、Day8-DC移植组及MyD88siRNA-DC移植组,各组于移植前7 d分别经受者门静脉注射0.5 ml PBS、2.0× 106个Day8-DC及2.0× 106个MyD88siRNA-DC.于输注后第7天,观察各组移植心的存活时间;病理检查观察排斥反应程度;酶联免疫吸附试验测定受者血清巾Th1及Th2型细胞因子[γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素(IL)-12、IL-4和IL-10]水平的变化.结果 MyD88siRNA-DC在受者脾脏内的存活时间明显延长,MyD88siRNA-DC组受者脾脏内T淋巴细胞对供者抗原的反应性最低(P＜0.01).PBS对照移植组、Day8-DC移植组及MyD88siRNA-DC移植组移植心的存活时间分别为:(6.67±1.37)d、(13.67±2.25)d和(24.50±4.42)d,与PBS对照移植组相比,Day8-DC移植组移植心存活时间延长(P＜0.01),而MyD88siRNA-DC移植组移植心存活时间较Dby8-DC移植组进一步延长(P＜0.01);MyD88siRNA-DC移植组移植心排斥反应病理分级最低,受者血清中INF-γ和IL-12水平显著降低(P＜0.01),而IL-4和IL-10水平明显升高(P＜0.01).结论 输注转染MyD88siRNA基因的供者DC能够延长同种小鼠移植心的存活时间;其机制可能与诱导受者Th1/Th2免疫偏移及形成供、受者微嵌合状态有关.     

霉酚酸酯预处理供者未成熟树突状细胞回输受者延长移植物的存活

目的观察霉酚酸酯(MMF)处理的供者来源的树突状细胞(DC)回输受者延长移植物存活的作用。方法在DC前体的体外培养过程中加入MMF处理,利用同种小鼠异位心脏移植模型,设单纯移植组、供者未成熟DC回输受者组,以及MMF处理的供者未成熟DC回输受者组,观察MMF处理后DC的抗原提呈能力的变化、移植心脏存活时间并做微嵌合和病理学分析。结果MMF处理后DC的抗原提呈能力明显下降,单纯移植组移植心脏的存活期仅为8d,未成熟DC回输受者组心脏存活期为21d,而MMF处理的未成熟DC组移植物存活时间延长为30d,差异有统计学意义(P<0.01);MMF处理的供者未成熟DC在受者体内的嵌合期可达28d以上,且病理分析显示可以明显抑制炎症的产生。结论MMF处理的DC回输受者能够诱导针对移植供者的特异性免疫耐受,进而延长移植物的存活。     

未成熟树突状细胞诱导大鼠免疫低反应性

目的观察供者来源的未成熟树突状细胞(imDCs)联合骨髓移植(BMT)对大鼠移植肾的保护作用,并探讨其机制.方法DA(RT1a)大鼠为供者,Lewis(RT11)大鼠为受者,Wistar大鼠为无关第三品系.将实验动物随机分为5组,每组8只,进行不同的预处理后进行肾移植.(1)阴性对照组受者不接受任何预处理;(2)imDCs诱导组受者术前7d经尾静脉注射经60Co照射(30 Gy)灭活的、供者来源的未成熟树突状细胞2×107/只;(3)BMT诱导组受者术前4 d经尾静脉注射供者来源的新鲜骨髓细胞2×108/只;(4)imDCs+BMT联合诱导组受者术前7 d经尾静脉注射经60Co照射(30 Gy)灭活的、供者来源的未成熟树突状细胞2×107/只,术前4 d经尾静脉注射供者来源的新鲜骨髓细胞2×108/只;(5)第三品系组预处理与imDCs+BMT联合诱导组相同,但供者肾脏来自Wistar大鼠.术后进行单向混合淋巴细胞反应(MLR);白细胞介素2(IL-2)逆转实验;体内细胞转移实验(DTH);流式细胞仪检测RT1a阳性细胞百分率.结果各组大鼠肾移植后平均存活时间分别为阴性对照组(7.12±1.25)d;imDCs诱导组(24.38±3.20)d;BMT诱导组(7.87±2.10)d;第三品系组(6.63±1.06)d;而imDCs+BMT联合诱导组延长到(80.75±16.88)d;后者与上述4组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).免疫耐受的大鼠脾细胞增殖程度(SI值,3.41)明显低于对照组(7.56),P＜0.01;转移耐受的Lewis大鼠(FI值,0.55)明显低于对照大鼠(0.93),P＜0.01;在免疫耐受的受者体内检测到RT1a阳性细胞.结论术前输注供者来源的未成熟树突状细胞联合骨髓移植,可成功诱导受者产生免疫耐受,显著延长肾移植大鼠的存活时间.可能机制为特异性T细胞克隆无能、T细胞的负向免疫调节以及嵌合体的形成.     

第三方未成熟树突状细胞负载异体抗原诱导免疫耐受的实验研究

目的观察第三方未成熟树突状细胞（imDC）负载同种异体抗原后对其免疫特性的影响。方法从健康足月新生儿脐血中分离单核细胞，采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-SCg）和重组人白细胞介素（rhIL）4联合培养7d，诱导其分化成imDC，并通过光学显微镜和扫描电镜观察细胞形态、检测细胞表型及混合淋巴细胞反应（MLR）；将培养的细胞与异体淋巴细胞抗原共同孵育，并给予共刺激分子阻断剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（CTLA-4Ig）处理，检测抗原负载前后的细胞表型变化，通过MLR比较致敏前后T淋巴细胞增殖的能力。结果（1）培养后细胞具有典型的imDC特征，CD1α、CD83、CD80、CD86等成熟标志呈低表达，分别为21．42％、0．59％、5．39％、3．85％；人类白细胞DR抗原（HLA-DR）的表达率为60．66％，MLR结果提示其不能刺激同种异体T淋巴细胞增殖。（2）负载抗原后的DC表现出成熟特性，CD1α、CD83、CD80、CD86及HLA-DR表达明显增高，分别为65．51％、42．20％、56．45％、38．52％、76．44％（P〈0．05）；能够刺激T淋巴细胞增殖[刺激指数（SI）〉2．00]。（3）给予共刺激阻断剂CTLA-4Ig致耐处理后，SI由2．51下降到0．39。可明显抑制T淋巴细胞增殖。结论第三方imDC负载抗原后能表现出成熟特性；经CTLA-4Ig致耐处理，不能刺激未致敏T淋巴细胞增殖。有望诱导受体针对供者抗原的特异性免疫耐受。     

供者DC介导的淋巴细胞反应在肾移植后个体化免疫抑制治疗中的作用

目的 探讨根据供者骨髓源性树突状细胞(DC)介导肾移植受者淋巴细胞反应指导肾移植术后免疫抑制剂个体化应用的价值。方法 2008年1月至2010年1月间接受亲属活体供肾移植者30例,根据药物剂量调整依据的不同分为试验组和对照组,每组各15例,免疫抑制方案同为他克莫司(Tac)+吗替麦考酚酯(MMF)+皮质激素。试验组术后根据受者淋巴细胞对供者DC的反应强度,结合血Tac、MMF浓度调整药物剂量;对照组术后仅根据血药浓度调整药物剂量。术后每月检查肝功能、肾功能、血常规、尿常规、血糖,随访时间为1年。结果 随访期内试验组急性排斥反应的发生率为13.3％,对照组为46.7％(P＜0.05);试验组和对照组的感染发生率分别为6.7％和40.0％(P＜0.05);试验组和对照组不良反应的总体发生率分别为13.3％和46.7％(P＜0.05)。两组各时间点的血清肌酐的差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 利用供者骨髓源性DC介导肾移植受者淋巴细胞反应结合治疗药物血药浓度监测作为免疫监测指标,指导肾移植术后免疫抑制剂个体化应用,较仅利用血药浓度监测更全面、准确。     

水溶性一氧化碳释放分子抑制供肾树突状细胞活化减轻移植后排斥反应

目的 研究水溶性一氧化碳释放分子3 (CORM-3)减轻小鼠肾移植后排斥反应的作用及机制.方法 以C57BL/6J小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,采用随机数字表法将供、受鼠分为2组,制备小鼠肾移植模型.CORM-3组受鼠接受经CORM-3预处理的供肾,iCORM组受鼠接受经无CO活性的iCORM预处理的供肾.术后检测各组受鼠的血清肌酐(SCr)水平,观察各组移植肾组织的病理改变,记录各组移植肾存活时间.以C.FVB-Tg (Itgax-DTR/GFP) 57Lan/J小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,肾移植后24 h通过流式细胞仪检测移植肾内供鼠rDC的活化情况.结果 术后iCORM组和CORM-3组间移植肾中位存活时间分别为40.5和70 d(P＜0.05);术后两组受鼠的SCr水平均进行性升高,但CORM-3组受鼠的SCr水平始终保持在较低的水平(P＜0.05或P＜0.01);与正常小鼠肾组织相比,术后第4周iCORM组受鼠的移植肾间质出现弥漫性单个核细胞浸润,中度肾小管炎症,以及部分肾小球硬化;CORM-3组移植肾组织单个核细胞浸润较iCORM组明显减轻,肾小球与肾小管形态基本正常.移植后24 h,iCORM组和CORM-3组移植肾内供鼠rDC表面均高表达CD80和CD86,表明rDC处于活化状态,而CORM-3组rDC表面CD80和CD86的表达较iCORM组明显减少(P＜0.05).结论 CORM-3可显著减轻同种肾移植小鼠的排斥反应,改善移植肾功能,其机制可能是CORM-3抑制了移植后供鼠rDC的活化.     

核因子κB诱骗剂处理的树突状细胞延长小鼠移植心脏存活时间

目的探讨核因子κB（NF-κB）诱骗剂处理供者树突状细胞（DC）对同种异体小鼠移植心脏存活时间的影响。方法在体外以NF-κB诱骗剂处理供者骨髓来源的DC，并于心脏移植术前7d经门静脉输注2×10^6个DC给受者，术后1～7d受者接受亚治疗量的环孢素A（10mg·kg^-1·d^-1）腹腔注射（联合方案组），并设不作任何处理（对照组）、单用环孢素A（CsA组）、单纯输注未经处理DC（DC对照组）和单纯输注经处理DC（DC实验组）的对照组，另设接受来自第三方供者的对照组（第三供者组，受者的处理同联合方案组），所有受者均接受腹腔心脏移植。观察各组移植心脏的存活时间；采用酶联免疫吸附法检测术后第7天受者血清白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-10和γ干扰素（IFN-γ）的含量。结果移植心脏平均存活时间（MST），对照组为7d，CsA组为10．3d，DC对照组为7．6d，DC实验组为21．4d，联合方案组为53．6d，第三供者组为9d，DC实验组移植心脏MST明显长于对照组和DC对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）；联合方案组移植心脏MST明显长于CsA组、DC实验组及第三供者组，差异有统计学意义（P〈0．01）。联合方案组IL-2和IFN-γ的含量最低，而IL-4和IL-10的含量最高，与其它各组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；与对照组、DC对照组及CsA组相比，DC实验组IL-2及IFN-γ的含量也显著降低（P〈0．05），而IL-4和IL-10则升高（P〈0．05）。结论术前输注经NF-κB诱骗剂处理的供者DC可延长同种小鼠移植心脏的存活时间，若术后加用短程亚治疗量CsA，则移植心脏的存活时间得到进一步延长。     

神经氨酸酶预处理供体骨髓细胞延长大鼠异体移植物成活时间的观察

目的筛选神经氨酸酶(Neu)预处理供体骨髓细胞(dBMCs)的最佳浓度,使经大鼠尾静脉注射该浓度Neu后的dBMCs偏向性分布于受体肝脏,并观察Neu预处理dBMCs(Neu-dBMCs)联合环孢素A(CsA)短期应用对异体皮片成活时间的影响。方法供体为雄性SD大鼠49只,受体为雌性Wistar大鼠49只。常规制备dBMCs并留取供体皮片备用。Neu预处理浓度筛选实验：按Neu终浓度将26只受体大鼠随机分为0、0．5、1．0、2．0 U/ml 4组(各组分别为6、8、6、6只),用上述4种浓度Neu预处理dBMCs,以~(99m)Tc-SnCl_2法标记,再经受体尾静脉注入,5h后取受体各主要器官,测定其放射性活度,计算出各器官的放射性活度占全部所测器官总放射性活度的百分比,筛选出使dBMCs偏向性分布于受体肝脏的最佳Neu预处理浓度。异体皮片移植实验：将余下23只受体大鼠随机分为对照组、dBMCs组和Neu-dBMCs组,每组均行异体皮片移植,其中后两组在手术当天经尾静脉分别输注dBMCs和Neu-dBMCs(Neu为筛选出的最佳浓度),并分别于术后第2、5天腹腔注射CsA (10 mg/kg),观察各组异体皮片的成活情况。结果在Neu预处理浓度为1．0U/ml时,受体肝脏内dBMCs呈偏向性分布,其百分比为(75．3±9．8)%,明显高于其他浓度组,与0 U/ml组[(58．9±4．2)%]比较差异有统计学意义(P＜0．01)。1．0 U/ml为Neu的最佳浓度。Neu-dBMCs组的同种异体皮片成活时间较dBMCs组明显延长,两组比较差异有统计学意义(P＜0．05)。这两组异体皮片成活时间均较对照组明显延长(P＜0．01)。结论适当浓度的Neu预处理可增强dBMCs与肝脏的亲和性,使经外周静脉输注的dBMCs偏向性分布于受体肝脏内。Neu-dBMCs短期联合应用CsA可明显延长移植的供体皮片成活时间。