氟对体外大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素B mRNA表达的影响

目的研究氟对体外培养大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(ABP)和抑制素B(INHB)转录水平的影响。方法建立支持细胞体外培养模型,以浓度分别为2.5、5.0、10.0和20.0mg/L氟化钠溶液染毒细胞,用RT-PCR方法检测ABP和INHB mRNA的相对表达量。结果①ABP mRNA相对表达量在各剂量组与对照组相比,2.5mg/L组高于对照组,且差异有统计学意义(P0.05);5.0mg/L高于对照组,但差异没有统计学意义;其余各组低于对照组,但差异没有统计学意义(P0.05)。②INHB mRNA相对表达量在各剂量组与对照组比较,2.5和5mg/L组均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);其余两组低于对照组,但是差异均无统计学意义(P0.05)。结论在2.5～20.0mg/L剂量范围内,未观察到氟对体外培养大鼠睾丸支持细胞ABP和INHB mRNA的表达有明显影响。     

邻苯二甲酸二丁酯对睾酮合成的影响

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对睾酮合成的影响及相关机制。方法6周龄雄性SD大鼠随机分成0,250,500和1 000 mg/(kg.d)4组,每组8只,灌胃给予DBP。放免法测定黄体生成素(LH)、17β雌二醇(17βE2)、睾酮(T)。RT-PCR法测定细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA和3β类固醇脱氢酶(3βHSD)mRNA的相对表达量。结果血清17βE2浓度在DBP250和1 000 mg/(kg.d)剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。血清和匀浆T浓度500和1 000 mg/(kg.d)剂量组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。P450scc mRNA和3βHSDmRNA表达水平随着染毒剂量的增加下降趋势明显。相关与回归分析结果显示,mRNA(Y)表达水平与染毒剂量(对数,X)之间存在明显的剂量-依赖关系,P450scc mRNA:r=0.78,Y=0.54-0.10X(P<0.01);3βHSD mRNA:r=0.79,Y=0.79-0.13X(P<0.01)。结论间质细胞是DBP的主要靶细胞之一。DBP导致T合成减少的可能机制包括T合成相关酶mRNA表达水平的下调和17βE2水平的上升干扰了下丘脑-垂体-睾丸轴的生理平衡。     

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。     

微囊藻毒素对大鼠睾丸支持细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的 利用体外培养的大鼠睾丸支持细胞研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对细胞中凋亡相关蛋白表达水平的影响.方法 大鼠睾丸细胞分别染毒0(对照)、0.5、1、10、20 μg/ml MC-LR溶液后培养24和48 h,采用MTT法检测细胞活性.调整细胞密度为4×106～5×106/ml,分别染毒含0(对照)、1、10 μ...     

壬基酚母鼠染毒对仔鼠睾丸支持细胞功能的影响

[目的]研究壬基酚（NP）对性成熟期F1雄性SD大鼠睾丸支持细胞功能的影响机制。[方法]设50、100、200mg／kgNP3个剂量染毒组和1个对照组，对母鼠从妊娠第7天至断乳期灌胃染毒，产后55天处死雄性子代，取睾丸固定制片后，分别作病理组织学观察，作波形蛋白（vimentin）、广谱钙黏附蛋白（pan-cadherin）、信号转换和转录激活因子3（STAT3）的免疫组化分析和雄激素结合蛋白（ABP）、白细胞介素-6（IL-6）的原位杂交试验。[结果]睾丸组织病理学检查显示，各剂量染毒组发育异常的生精小管数增多，支持细胞数量减少；200mg／kg组波形蛋白、广谱钙黏附蛋白的表达低于对照组（P〈0．05）；各染毒组STAT3的表达与对照组相比差异无统计学意义；100mg／kg和200mg／kg组ABPmRNA和IL-6mRNA的表达低于对照组（P〈0．05）。[结论]200mg／kgNP可抑制性成熟期F1雄性SD大鼠支持细胞的波形蛋白、广谱钙黏附蛋白、IL-6、ABP的表达，影响支持细胞功能。     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白影响的体外实验研究

目的：进一步探索环境雌激素双酚A（BPA）影响大鼠睾丸支持细胞波形蛋白（Vimentin)的机理。方法：采用支持细胞体外原代培养，免疫组织化学以及mRNA原位杂交技术分析了BPA对支持细胞Vimentin及其基转转录，参与Vimentin降解的蛋白激酶C（PKC）表达的影响。结果：BPA使支持细胞拉长，支持细胞在体外系统中良好地表达Vimentin，BPA使其基因转录抑制，PKC在支持细胞中不表达。结论：环境雌激素BPA通过抑制基因转录而干扰Vimentin合成，从而影响支持细胞骨架的正常形成，导致细胞形态改变，PKC不直接干扰支持细胞Vimentin代谢。     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠生殖相关元素影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠血液中生殖相关元素的影响。方法 6周龄雄性大鼠分为5组,其中4组为DBP实验组,1组为对照组。经口灌胃DBP,每天1次,连续30 d。染毒结束后采血,摘取睾丸和附睾称重并计算脏/体比;火焰原子吸收法测定血液中锌、锰、镁和铜元素含量。结果 0.50 g/kg及以上DBP组睾丸脏/体比明显低于对照组(P<0.05);1.00和2.00 g/kg DBP组附睾脏/体比也明显低于对照组(P<0.05)。1.00和2.00g/kg DBP组血液元素锌和锰水平〔(45.52±6.60),(48.21±8.08)和(1.71±0.97),0.68±0.73)〕明显低于对照组〔(64.39±11.68)和(4.40±0.82)〕,呈剂量-反应关系(P<0.05);但血液中铜和镁元素水平无明显变化。结论 邻苯二甲酸二丁酯可能通过影响机体内锌、锰等元素水平而产生睾丸毒性。     

氯化三丁基锡对大鼠睾丸支持细胞的影响

[目的]探讨氯化三丁基锡对雄性sD大鼠睾丸支持细胞活力和增殖的影响。[方法]无菌制备20-23天龄sD大鼠的睾丸支持细胞,用HE染色、FAS—L免疫组化染色进行细胞鉴定。设空白对照组、溶剂对照组和20×10^-9、40×10^-9、80×10^—9、120×10^—9mol／L氯化三丁基锡染毒组,用四唑盐比色法（MTT）、免疫细胞化学法观察细胞增殖及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况,流式细胞仪分析细胞周期分布。[结果]各染毒组睾丸支持细胞的存活率明显低于对照组（P〈0．05）,G0／G1期细胞构成比增加,细胞增殖指数下降,80×10^-9、120×10^-9mol／L染毒组PCNA表达量下降。[结论]氯化三丁基锡可通过抑制睾丸支持细胞增殖,影响细胞周期分布和PCNA表达而表现出对雄性大鼠的生殖毒性。     

化学物质对睾丸支持细胞某些功能影响的研究进展

本文简要介绍了化学物质对丸支持细胞与生精过程能量代谢有关的乳酸分泌，以及参与运送雄激素和调节精子成熟过程有关的雄激素结合蛋白和转铁蛋白分泌影响的研究进展。     

水中邻苯二甲酸二丁酯的光催化降解

目的：研究光降解饮用水中邻苯二甲酸二丁酯化合物。方法：水中DBP在紫外光照射下，紫外光和臭氧共同作用下，以及加入纳米TiO2进行光催化降解。结果：紫外光和臭氧共同处理对DBP的降解有协同作用，单紫外光照射的半衰期是10．6min，紫外光与臭氧协同降解的半衰期是7．8min，而光催化的半衰期则小于1min，较小的粒经20～30nm的TiO2光催化效果要好于较大粒经30～50nm的TiO2光催化效果，加入20～30nmTiO2光催化剂的最佳剂量是0．5g／L，初始pH越大越有利于DBP的光催化降解。结论：光催化可有效降解水中邻苯二甲酸二丁酯。     

邻苯二甲酸二丁酯与邻苯二甲酸单丁酯对睾丸间质细胞睾酮水平和胰岛素样因子3表达的影响

目的 观察邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)、邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)对小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)中胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3) mRNA 及蛋白的表达量和细胞睾酮分泌水平的影响.方法 以小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)为模型,经过DBP、MBP直接染毒后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养基上清中睾酮的含量,采用荧光定量PCR测定细胞中INSL3 mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(western blot)测定INSL3蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,MA-10细胞睾酮合成量在低染毒剂量(10-9～10-6 mol/L)时均表现出刺激效应,睾酮含量增加;在高染毒剂量(10-3 mol/L)时表现抑制效应,随着染毒时间的延长,睾酮水平逐渐降低.荧光定量PCR以及Western blot测定结果显示,DBP在10-6、10-4 mol/L染毒时,INSL3 mRNA及蛋白表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);随着MBP染毒剂量的增加,INSL3 mRNA及蛋白表达水平呈现下降趋势,但MBP在10-7 mol/L时,与对照组相比,对MA-10细胞中INSL3蛋白表达表现出刺激作用.结论 DBP、MBP染毒对MA-10细胞睾酮分泌表现出高剂量抑制、低剂量刺激的双向效应;DBP、MBP染毒可抑制MA-10细胞中INSL3 mRNA和蛋白的表达.     

邻苯二甲酸二丁酯分子印迹聚合物的合成及其应用研究

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)分子印迹聚合物的合成.方法 以邻苯二甲酸二丁酯为模板分子,α-甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,在氯仿中采用本体聚合法制备分子印迹聚合物并应用于气相色谱-质谱分析.结果 模板分子、功能单体、交联剂的物质量比为1:6:30时所得的印迹聚合物对邻苯二甲酸二丁酯吸附量最大;扫描电镜表征显示聚合物表面具有多孔疏松结构;热重差热分析显示聚合物有良好的热稳定性.将聚合物用做固相萃取柱填料对DMP、DEP等5种邻苯二甲酸酯检测,方法的r2为0.9899～0.9941,检出限为0.013～0.022 μg/ml,回收率为75.8％～106.4％,RSD为2.41％～10.11％.结论 应用该聚合物的方法具有较好的回收率和检出限.     

高效液相色谱法测定化妆品中邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯的含量

目的：建立了高效液相色谱法测定化妆品中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）和邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DE-HP）含量的方法。方法：采用固相萃取法处理样品，淋洗试剂为甲醇：乙醚=1：19。甲醇和水作为流动相，二极管阵列检测器测定DBP和DEHP。结果：DBP测定的线性范围为5．0～200μg／ml，线性相关系数为0．9993，DEHP测定的线性范围为5．5～220μg／ml，线性相关系数为0．9997。DBP的回收率范围在84％～93％，相对标准偏差为3．2％～4．8％。DE-HP的回收率范围在98％～105％，相对标准偏差为2．8％～4．7％。结论：该方法灵敏度高，结果准确而且稳定。     

糖皮质激素通路介导邻苯二甲酸二丁酯对大鼠睾酮合成的抑制作用

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)抑制大鼠睾酮(T)合成的作用机制.方法 雄性Wistar大鼠按数字表法随机分为5组,即0.25、0.50、1.00和2.00g/kg DBP剂量组和溶剂对照组,每组16只.经口灌胃,每天1次,连续30 d,染毒结束后,每组处死8只动物,另8只饲养15 d后处死.放射免疫法检测血清T和糖皮质激素(GC)水平;RT-PCR法检测11 β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)和类固醇生成急性调控蛋白(StAR)基因表达水平;Western blotting检测糖皮质激素受体(GR)表达水平.结果 染毒期,1.00和2.00 g/kg DBP剂量组血清T水平分别为(0.260±0.218)和(0.260±0.342)ng/ml,GC水平分别为(13.470±5.661)和(13.740±3.977)ng/ml,对照组血清T水平为(1.045±1.222)ng/ml,GC水平为(9.224±3.496)ng/ml,1.00和2.00g/kg DBP剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(tT值分别为-2.295、-2.295,tGC值分别为2.159和2.296,P值均小于0.05);1.00和2.00 g/kg DBP剂量组StAR基因表达水平降低,STAR/β-Actin比值分别为0.657±0.060和0.407±0.033,与对照组(0.871±0.081)比较,差异有统计学意义(t值分别为-3.707和-8.037,P值均小于0.05);1.00和2.00 g/kg DBP剂量组11β-HSD基因表达水平(11β-HSD/β-Actin比值分别为0.538±0.138和0.988±0.133)和GR蛋白表达水平(GR/β-Actin比值分别为0.785±0.106和0.956±0.076)与对照组(0.285±0.106和0.275±0.035)比较,差异有统计学意义(t11β-HSD/β-Actin值分别为2.829、7.860,tGR/β-Actin值分别为8.064和10.77,P值均小于0.05),与DBP剂量呈正相关,r值分别为0.776和0.790.恢复期,DBP各剂量组上述指标与对照组比较差异均无统计学意义.结论 DBP能通过GC通路介导对大鼠T合成的抑制作用.     

维生素C对青春期邻苯二甲酸二丁酯暴露致大鼠卵巢氧化应激的干预作用

目的探讨维生素C(vitamin C,Vit C)对青春期邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)暴露致大鼠卵巢氧化应激的干预作用。方法将160只健康初断乳SPF级Wistar雌性大鼠随机分为5组,分别为对照(玉米油)组和低(100mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量DBP暴露组及低(100 mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量DBP+Vit C(125 g/L)干预组。采用灌胃方式暴露DBP,暴露容量为10 ml/kg,每天1次;采用自由饮水方式暴露Vit C,连续暴露30 d。分别于暴露第5、10、20、30天,测定大鼠卵巢组织中MDA、GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力。结果与对照组相比,DBP暴露组大鼠卵巢组织中MDA含量均升高,而GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力均下降;与相同剂量DBP暴露组相比,Vit C干预组大鼠卵巢组织中MDA均下降,而GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力均升高。且随着DBP暴露剂量的升高,DBP暴露组和Vit C干预组大鼠卵巢组织中的GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力均呈下降趋势,而MDA含量呈上升趋势。结论 DBP暴露可致青春期雌性大鼠卵巢组织产生脂质过氧化反应,诱导氧化应激,导致卵巢抗氧化能力下降;而抗氧化剂Vit C对于DBP所致生殖系统的氧化损伤具有一定的拮抗作用。     

ERK-MAPK通路在DBP致大鼠睾丸缝隙连接损伤中作用

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯（DBP）对大鼠睾丸的损害作用及与细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路激活、缝隙连接损伤关联性。方法 SD大鼠随机分为3个DBP剂量组（50、500、1 000 mg/kg）和溶剂对照组,经口灌胃染毒,每日1次,持续5周。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮等生殖激素水平;精子分析仪分析精子密度、活率和总畸形率;苏木素-伊红染色法观察睾丸组织结构变化;Western blot法检测ERK1/2和p-ERK蛋白表达;RT-PCR法检测缝隙连接蛋白43（Cx43）mRNA表达。结果 与对照组比较,中、高剂量DBP组大鼠血清睾酮水平[（6.65±0.97）、（3.57±0.54）nmol/L]明显降低（P<0.05）,高剂量DBP组大鼠精子密度（64.71±11.36）10⁵个/mL显著降低（P<0.05）,中、高剂量DBP组大鼠精子总畸形率[（13.64±1.68）%、（19.54±2.86）%]明显升高（P<0.05）;随DBP剂量升高大鼠睾丸组织结构损伤程度增加;与对照组比较,中、高剂量DBP组大鼠睾丸组织中p-ERK表达明显升高,各剂量DBP组大鼠睾丸组织中Cx43 mRNA表达均明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 DBP可激活ERK通路、下调Cx43表达,引起大鼠睾丸组织结构和功能损伤。     

The influence of perinatal maternal exposure to dibutyl phthalate on glucolipid metabolism in adult female offspring

BackgroundMaternal exposure to dibutyl phthalate (DBP) may result in obesity in female offspring. However, the underlying mechanisms remain elusive.Materials and methodsSprague-Dawley rats were intraperitoneally injected with different doses of DBP and corn oil from gestational day 7 until the end of lactation. The weights, visceral fat percentage, serum lipid, insulin and glucose, protein levels of PI3K signal pathway in muscle were detected in F1 female offspring.ResultsAlthough the birth weight of F1 female offspring was not different among groups, the weights were heavier in DBP groups from postnatal day 7 to adult (P < 0.001). The visceral adipose percentage in adult female offspring was increased by perinatal exposure to DBP (P < 0.001). Decreased serum level of triglyceride (P = 0.001) in F1 female offspring was found in DBP group as compared to control, especially in medium and high DBP. However, none difference was found for fasting glucose, prolactin, HOMA-IR, fasting insulin, total cholesterol, adiponectin. Different protein levels of GPR30 were observed in muscle of female offspring among four groups (P = 0.016). The protein level of AKT seemed higher in DBP group but without statistical significance (P = 0.05). None difference was observed for the protein levels of PI3K, p-AKT, pAKT/AKT, PTEN, GLUT4, InsR, IRS.ConclusionMaternal perinatal exposure to DBP might induce obesity and accumulation of visceral adipose tissue for the adult female offspring. Serum glucolipid and local signal transduction of PTEN/PI3K/AKT pathway in muscle were not adversely affected by perinatal exposure to DBP for adult female offspring.