丙型肝炎病毒非结构蛋白4B研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)是至今为止功能尚不明确的HCV非结构蛋白,近年来的研究表明其定位于内质网膜,与细胞内膜结构的功能有关.在体外实验中,它和NS4A一起可以抑制宿主细胞的翻译;在一定程度上可以减弱机体对抗病毒药物干扰素-α(INF-α)的反应,同时使病毒可以逃避宿主对病毒的免疫;在HCV病毒的致瘤性方面亦有重要作用.可以与NS3、NS4A、NS5A、NS5B等相互作用,对其它非结构蛋白的功能起协同、促进甚或是下调作用.     

HCV NS3/4A介导的逃逸机体固有免疫研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链RNA病毒,归类于黄病毒科、肝炎病毒属,有6个基因型.HCV基因组含有约9600个碱基,编码一条约3010个氨基酸的多聚蛋白前体,该多聚蛋白在翻译的同时或之后被宿主和病毒的蛋白酶剪切加工成至少10种成熟蛋白,包括结构蛋白Core、E1、E2和p7,非结构蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B.其中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶不仅是HCV多聚蛋白前体加工成熟的关键酶,而且还通过调控干扰素调控因子(IRF)-3的表达水平,从而破坏细胞内固有免疫通路,使病毒能够逃避宿主的固有免疫反应,并形成长期的持续性感染[1].     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成，具有线氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶（NTPase）和螺旋酶（Helicase）的功能，在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用。非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性，是检测HCV感染的主要抗原之一。近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能。此外，NS53蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等。     

p7蛋白--丙型肝炎病毒潜在抑制靶点

丙型肝炎（hepatitisc）是严重的慢性传染病之一，全世界病毒感染者约1．7～2亿。HCV为单链RNA病毒，一个开放读码框编码了3010个氨基酸的前体蛋白，在细胞和病毒蛋白酶共同作用下，前体蛋白被降解成结构蛋白和非结构蛋白两部分。结构蛋白包括核心蛋白（C）和膜蛋白（E1、E2）以及p7蛋白，非结构蛋白包括NS2、NS3、NS4A、NS4B、NSSA和NSSB。p7蛋白结构、功能仍然了解甚少。最近有研究发现p7蛋白可能是一个重要的病毒抑制靶点。     

丙肝病毒NS5A蛋白对NS5B的RdRP活性影响的研究

丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV )非结构蛋白 (Nonstructural,NS) 5 A在 HCV基因组复制中的作用目前尚不清楚。本文研究 His- NS5 A对 NS5 B的 RNA依赖性 RNA酶 (Rd RP)活性的影响 ,以了解 NS5 A在HCV RNA复制中的作用。采用变性 -复性方法 ,纯化大肠杆菌表达的重组组氨酸 NS5 A融合蛋白。 GST结合洗脱实验 (GST pull- down assay)研究 NS5 A和 NS5 B是否结合。以不同的摩尔浓度比 ,将纯化的 NS5 B和 NS5 A蛋白混合 ,检测 NS5 A对 NS5 B的 Rd RP活性的影响。获得高得率的纯化 His- NS5 A蛋白。重组 NS5 A蛋白可在体外与NS5 B结合并抑制后者的 Rd RP活性。本研究报道了纯化重组 His- NS5 A蛋白的变性 -复性方法 ,结果显示纯化的重组 NS5 A在体外可与 NS5 B相互结合 ,并明显抑制 NS5 B Rd RP活性。提示了 HCV NS5 A在病毒复制中的可能作用。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的研究进展

对丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS5A的研究表明，NS5A在HCV转录，复制及细胞信号转导中有重要作用，NS5A影响干扰素（IFN）治疗丙型肝炎的疗效，但日本和欧洲对这方面的研究结果间存在差异，现就这方面的进展作一综述。     

HCVNS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶（RdRp）,作为核心酶在HCV复制中起关键作用。NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有丝氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶(NTPase)和螺旋酶(Helicase)的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用.非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性,是检测HCV感染的主要抗原之一.近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能.此外,NS3蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等.     

破坏HCV组装病毒体的重要基因

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2008／4／11）报道，HCV（Hepatitis C Virion，C型肝炎病毒）是一种危害人类极严重的病毒体，全球感染率超过3％，在美国估计有400万人受到感染。美国佛罗里达州Scripps感染学院的研究人员发现，将病毒的NS5A磷酸蛋白进行突变，能够破坏病毒体的产生。研究人员表示：NS5A磷酸蛋白主要负责RNA的复制工作，一旦此蛋白被破坏，HCV就无法正常组装完成病毒体，显示此NS5A磷酸蛋白对HCV的重要性。     

HCV非结构蛋白质5A基因全长和高免疫源区的表达及免疫活性检测

目的探讨HCV非结构蛋白质5A（NS5A）基因全长和高免疫源区的表达并比较其检测灵敏度。方法以含HCV全基因组的质粒pBR^tm／HCV-3011（1b型）为模板，采用PCR方法扩增出NS5A全长基因（以下用NS5AL代替）和高免疫源区基因（以下用NS5AS代替），与pET-32a载体相连接构建重组表达载体pET-NS5AL和pET-NS5AS，分别转化E.coli Rosetta（DE3）pLysS和BL21（DE3）感受态细胞，经异丙幕-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后，蛋白质印迹法检测其表达，镍螯合（Ni2^＋-NTA）琼脂糖亲和层析柱纯化重组NS5AL和NS5AS蛋白，最后通过ELISA法检测重组蛋白的免疫活性并对其榆测灵敏度进行比较。结果SDS—PAGE鉴定与蛋白质印迹验证结果表明，重组NS5AL和NS5AS蛋白均得到很好地表达；纯化的重组NS5AL和NS5AS蛋白浓度分别为0．146和0．426mg／ml，纯度均〉96％；ELISA检测结果表明，重组NS5AL和NS5AS蛋白均具有较好的免疫活性，且重组NS5AL蛋白的检测灵敏度明显高于NS5AS。结论成功地表达出重组NS5AL和NS5AS蛋白，均具有较高的免疫活性，将有助于提高HCV临床检测的灵敏度。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A反式激活基因的克隆化研究

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，进行SSH分析。将富集的二次PCR产物与TIA载体连接，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑取克隆，聚合酶链反应（PCR）扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到36个阳性克隆，经菌落PCR分析显示200～1000bp插入片段。对其中的25个片段测序，并进行同源性分析，显示18种已知基因编码蛋白和2种未知功能基因序列，包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因，可能是NS4A反式激活靶基因。结论成功构建了HCV NS4A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，为进一步阐明HCV NS4A反式调节的靶基因等提供了相关的平台。     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.