尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

尖吻蝮蛇毒去纤酶治疗视网膜静脉阻塞(附60例报告)

尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒纤维蛋白原酶是中国科学院昆明动物研究所从尖吻蝮蛇的毒液中提出的一种蛇毒酶新制剂,命名为尖吻蝮蛇毒去纤维蛋白酶,简称去纤酶。它有使纤维蛋白原下降的独特作用,产生非常显著的抗凝血效应。我们自1981年3月起至1984年7月的三年中用去纤酶对视网膜静脉阻塞患者60例61只眼进行治疗,现报告如下:     

抗尖吻蝮蛇蛇毒金属酶类共同基序IgY抗体的制备与研究

[目的]制备针对尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶类共同基序的IgY抗体,并对其中和蛇毒活性的作用进行研究.[方法]通过分析尖吻蝮蛇蛇毒各类金属蛋白酶类共有序列,设计合成与其酶活性密切相关且高度保守的抗原肽PT1和PT2;偶联复合物KLH-PT1、KLH-PT2免疫母鸡获得IgY抗体.采用ELISA和Western blot等方法对IgY效价及与尖吻蝮蛇蛇毒和短尾蝮蛇蛇毒的交叉反应特性进行初步研究;最后通过抗小鼠皮下出血实验对IgY中和活性进行评价.[结果]ELISA、Western blot结果表明,抗KLH-PT1、抗尖吻蝮蛇蛇毒IgY均可与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒发生交叉反应且后者显著强于前者;抗KLH-PT2 IgY在体外与尖吻蝮蛇蛇毒、短尾蝮蛇蛇毒无明显交叉反应,在体内抗出血实验中却表现出很强的中和毒性作用,并且显著优于前两者.[结论]通过设计金属蛋白酶共有序列抗原肽,制备了能与多种血循型蛇毒交叉反应的IgY抗体,这为制备特异、高效、低毒性且广谱的抗出血型蛇毒抗体奠定了基础.     

尖吻蝮蛇毒类凝血酶抗实验动物血栓的效应

欧阳等对台湾尖吻蝮蛇毒进行分离纯化,并对类凝血酶组分进行系统研究后指出,类凝血酶具有去纤维蛋白原作用,能使血液产生低凝状态. 张洪基以及李麟仙等对大陆尖吻蝮蛇毒进行分离纯化,研究了“去纤酶”的体内抗凝血作用,对大鼠动静脉实验性血栓的形成有预防效应. 本文报导家兔静注尖吻蝮(Agkistrodn acutus)类凝血酶对体外血栓形成的影响进行研究,认为药效满意.     

尖吻蝮蛇毒去纤酶治疗视网膜静脉阻塞初步报告

视网膜静脉阻塞多发生于高血压、动脉硬化的老年患者。对本病的治疗至今方法不多,效果不理想,是眼科临床上有待进一步研究解决的课题。尖吻蝮蛇毒去纤酶是中国科学院昆明动物研究所,从尖吻蝮蛇的毒液中提纯出的一种蛇毒酶新制剂,命名为尖吻蝮蛇毒去纤维蛋白酶(以下简称去纤酶)。经药理实验证明去纤酶     

尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的影响

目的：观察刚地弓形虫速殖子在来源于安徽省南部地区的尖吻蝮蛇蛇毒的作用下侵入Hela细胞的数量，探讨尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的作用。方法：以不同浓度尖吻蝮蛇毒加入分孔培养的细胞中，于不同时间观察感染弓形虫速殖子细胞的数量。结果：尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞有明显的促进作用，弓形虫速殖子在蛇毒的作用下在同一时间内对宿主细胞侵入的数量均高于对照组(P＜0．05——P＜0．01)，但不同剂量的尖吻蝮蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的作用差异无显著性(P＞0．05)。5．0μg/ml和0．25μg/ml的剂量分别比对照组平均提高了125．49％和81．37％。结论：尖吻蝮蛇毒可以明显增加弓形虫速殖子对宿主细胞的感染率。     

尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列抗原位点分析及免疫保护效果观察

目的采用生物信息学方法分析尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列的关键抗原位点,并观察根据这些位点设计合成的新型免疫原的免疫保护效果。方法扩增尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列,采用Jameson-Wolf方法和ClustalX软件结合的生物信息学方法分析其抗原位点,人工合成筛选的抗原位点序列,并连接到pIRESneo表达载体,3次(0、2、4周)对BALB/c小鼠进行核酸免疫,ELISA法测定免疫后机体抗体水平,出血中和实验和攻毒实验初步观察其免疫保护效果。结果生物信息学方法分析得到6个关键抗原位点(MPA-1～MPA-6);ELISA法检测抗血清结果表明,抗原位点序列诱导小鼠产生的抗血清相对未免疫的小鼠血清稀释100倍后仍能表现出阳性结果;出血中和实验和攻毒实验表明,将抗原位点序列免疫小鼠可以诱导机体产生免疫反应,使体内产生抗体,能有效中和蛇毒,从而对尖吻蝮蛇蛇毒引起的出血有防护作用。结论用生物信息学方法成功获得尖吻蝮蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA序列的6个关键抗原位点,针对这些位点设计合成的新型免疫原展示出初步免疫保护效果。     

尖吻蝮蛇毒去纤酶制剂对大白鼠动、静脉血栓形成防治效应的研究

尖吻蝮蛇毒“去纤酶”,系中国科学院昆明动物研究所从尖吻蝮蛇(又名五步蛇,Agkistrodon acutus)毒中分离纯化所提取的一种酶制剂,经动物实验及健康人体试用后,证明该制剂能使血浆纤维蛋白原含量明显降低,全血凝固时间,凝血酶元时间、复钙时间等显著延长,优球蛋白溶解时间大大缩短。临床试用以治疗闭塞性脑血管疾病、视网膜静脉栓塞性疾患以及心绞痛,急性心肌梗塞等疾病有良好效果。但国内尚无使用该药     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶对动物凝血功能的影响

目的：探讨尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme，NHFLE)对动物凝血功能的影响。方法：用动物体内外实验方法观察NHFLE对富血小板血浆中经ADP诱导的血小板聚集的影响及NHFLE对凝血功能的影响。结果：NHFLE能明显延长全血凝固时间、活化的部分凝血酶原时间、凝血酶时间和凝血酶原时间，产生抗凝作用。动物体内注射NHFLE后血浆纤维蛋白原含量降低，优球蛋白的溶解时间缩短。结论：尖吻蝮蛇毒NHFLE对动物的凝血功能有影响，具有明显的抗凝作用。     

五种抗氰药物的抗毒效价比较

本文报导对二甲氨基苯酚盐酸盐(DMAP·HCl)、对氨基苯丙酮盐酸盐(PAPP·HCl)、依地酸二钴(Co_2EDTA)、亚硝酸钠(NaNO_2)和硫代硫酸钠(Na_2S_2O_3)对小白鼠抗氰化钠中毒的治疗指数,并比较了各抗毒剂单用和两药合用的抗氰效价。 小白鼠腹腔注射Na_2S_2O_3的急性LD_(50)大于5g/kg,其它4药的LD_(50)值按下列次序递降:PAPP·HCl>Co_2EDTA>NaNO_2>DMAP·HCl。各抗毒剂对抗氰化钠中毒的治疗指数,以PAPP·HCl最高(36.8),其次是Na_2S_2O_3(10.6)、NaNO_2(4.9)、Co_2EDTA(3.7),DMAP·HCl最小(2.7)。 各抗毒剂采用等毒性剂量单用时,以Na_2S_2O_3的抗氰效价为最高,其次是PAPP·HCl和Co_2-EDTA,NaNO_2和DMAP·HCl的效价较差。将这些药物随意地以两药合用配成9组,除Co_2EDTA和DMAP·HCl合用组外,两药合用的抗氰作用都比单药的强。这9组抗氰效价高低的顺序是:“Na_2S_2O_3 PAPP”或“Na_2S_2O_3 PAPP·HCl”>“Na_2S_2O_3 DMAP·HCl”>“Na_2S_2O_3 Co_2EDTA”>“Na_2S_2O_3 NaNO_2”>“Co_2EDTA NaNO_2”>“DMAP·HCl PAPP·HCl”>“DMAP·HCl PAPP”>“Co_2EDTA DMAP·HCl”。     

蝮蛇类毒素免疫原性的研究

应用蚁醛脱毒蝮蛇类毒素与等量美粘士混合制剂免疫的豚鼠,可抵御14.786mg蝮蛇毒的攻击,相当于体重300～400g豚鼠肌内注射蝮蛇毒9.86MLD毒量。每毫升免疫豚鼠血清可中和蝮蛇毒200ug,相当于中和体重20g小鼠腹腔注射12.34LD_(50)蝮蛇毒量。免疫血清的蝮蛇毒沉淀素效价达1:10000。在第二次及第三次免疫注射类毒素前一小时给予抗组织胺药扑尔敏,可有效地防止过敏反应。     

注射用尖吻蝮蛇凝血酶Ⅱa期临床应用研究

目的 评估注射用尖吻蝮蛇凝血酶的疗效和安全性,探索并确定注射用尖吻蝮蛇凝血酶的有效剂量.方法 腹部中等手术病例45例随机分为1 U剂量组、2 U剂量组和空白对照组,两试验组分别于手术前30 min缓慢静脉给予1 U和2 U尖吻蝮蛇凝血酶,空白对照组不作任何处理,评价注射用尖吻蝮蛇凝血酶疗效并观察其不良反应.结果 1 U和2U两试验组切口出血量、切口单位面积出血量均较空白对照组小,差异有统计学意义(P＜0.05);切口出血时间两试验组较空白对照组小,但差异无统计学意义(P＞0.05);2 U剂量组切口单位面积出血量较1 U剂量组小,差异有统计学意义(P＜0.05);不良反应3组无统计学意义.结论 1 U和2 U剂量的尖吻蝮蛇凝血酶对腹部手术切口均有一定止血作用,且2U剂量较1 U剂量明显.两试验剂量用药均安全.     

煤油纳米磁流体组织内固定的实验研究

目的　研究纳米磁流体在组织间自身固定的可能性。方法　煤油纳米磁流体与1 2 5I-碘化钠、微米级硬磁粉混合 ,实验组局部注射到 5只昆明鼠左腹股沟皮下 ,(煤油磁流体 0 .1ml+1 2 5I-碘化钠 5× 37× 1 0 3 Bq +硬磁粉 1mg) /只 ,5只昆明鼠左腹股沟皮下注射 (煤油磁流体 0 .1ml+1 2 5I-碘化钠 5× 37× 1 0 3 Bq) /只为对照组 ,在 4周后处死动物 ,取注射点有磁流体污染的全部组织 ,行γ计数。结果　实验组局部γ计数显著高于对照组 ,相差几乎 1个数量级 ,单因素方差分析F值 380 .862 ,P <0 .0 0 1。结论　煤油纳米磁流体与微米级硬磁粉混合在局部有可能达到自身固定 ,为局部药物自身固定研究提示新的可能     

注射用尖吻蝮蛇血凝酶引起过敏性休克1例

正蛇毒类凝血酶作为一种动物来源的蛋白酶类止血药,由于其毒性低、起效快、药效持久且不引起血管内栓塞等优点,近年来已经引起了人们的极大关注[1]。尖吻蝮蛇血凝酶(Haemo-coagulase Agkistrodon,HCA,商品名苏灵)是一种从尖吻蝮蛇毒液中提取分离出的蛇毒类凝血酶,该类凝血酶具有良好的止血作用[2],用于各种出血、血友病血肿、血小板减少性疾病伴出血症     

尖吻蝮蛇血凝酶不同给药方式对心脏瓣膜置换术患者出血量的影响

目的观察尖吻蝮蛇血凝酶不同给药方式对心脏瓣膜置换术患者围术期出血量的影响。方法选取2018年4月至2019年10月首都医科大学附属北京朝阳医院拟行瓣膜置换术的患者60例,随机分为空白组(C组)、静脉用药组(V组)和静脉用药加局部用药组(LV组)。V组在切皮前15 min静脉缓慢推注尖吻蝮蛇血凝酶2 U,鱼精蛋白拮抗肝素后静脉推注尖吻蝮蛇血凝酶2 U;C组使用等剂量生理盐水;LV组在V组基础上关胸前伤口局部喷洒尖吻蝮蛇血凝酶4U。3组分别记录术中出血量、异体血输入量以及术后24 h引流量;记录术前(T₀)、术毕(T₁)及术后24 h(T₂)的PT、APTT、FIB值;记录术后24 h下肢血管超声检查结果。结果 V组、LV组与C组比,术中出血量、术中异体血输入量明显减少(P <0.05);LV组与V组术中出血量及异体血输入量差异无统计学意义;LV组术后24 h引流量与V组相比明显减少(P <0.05)。V组、LV组在T₁、T₂时刻,PT、APTT较C组明显缩短,FIB较...     

尖吻蝮蛇血凝酶在耳鼻咽喉头颈外科手术中的安全性评价

目的:评价注射用尖吻蝮蛇血凝酶(HCA)在耳鼻咽喉头颈外科手术中、手术后止血的安全性。方法:随机选取在耳鼻咽喉头颈外科住院部接受外科手术治疗的30例患者,手术中及手术后1~3天静脉注射尖吻蝮蛇血凝酶(HCA)2u,采用自身对照研究方法,观察对比患者手术前和手术后的血常规、凝血功能、肝肾功能等安全性指标。结果:在耳鼻咽喉头颈外科手术中及手术后常规应用尖吻蝮蛇血凝酶(HCA)止血,用药前和用药后第3天,手术患者的血常规、凝血功能、肝肾功能等指标,均未发生显著性变化(P>0.05),手术前后过程中无明显不良事件的发生。结论:在耳鼻咽喉头颈外科手术前后常规使用注射用尖吻蝮蛇血凝酶(HCA)止血是安全可靠的。     

尖吻蝮蛇血凝酶治疗上消化道出血的临床疗效及对凝血功能的影响

目的探究尖吻蝮蛇血凝酶治疗上消化道出血的临床疗效及对凝血功能的影响。方法选择2017年8月至2019年3月于该院接受治疗的上消化道出血患者130例,随机分为两组,每组各65例。对照组采用常规治疗,观察组采用尖吻蝮蛇血凝酶治疗。对比两组治疗效果、凝血功能和不良反应。结果对照组治疗有效率为86.15%,观察组有效率为96.92%,观察组高于对照组;与对照组相比,观察组各项凝血功能指标水平均较低;对照组总不良反应发生率为18.46%,观察组总不良反应发生率为6.15%,观察组低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论尖吻蝮蛇血凝酶治疗有助于改善上消化道出血患者凝血功能和临床疗效,降低不良反应发生率,安全性较高,疗效稳定,值得临床推广。     

尖吻蝮蛇凝血酶对胸部手术切口止血有效性及凝血安全性的临床研究

目的:评价尖吻蝮蛇凝血酶在胸部手术切口的止血作用,及其对机体凝血功能的影响和安全性。方法:采用双盲单模拟、安慰剂平行对照和多中心的研究方法,将入选研究的120例随机分为研究组(60例。术前15 min静注尖吻蝮蛇凝血酶2 U)和对照组(60例。术前15 min静注模拟尖吻蝮蛇凝血酶2 U),并对手术切口、止血时间、出血量、单位面积出血量,以及机体凝血功能和安全性指标等进行观察。结果:研究组平均止血时间[(97±16.5)s]、切口平均出血量[(1.89±0.25)g]及平均单位面积出血量[(0.48±0.16)g/cm2]较对照组[(185.0±27.5)s、(2.67±0.59)g、(0.57±0.26)g/cm2]明显减少(P<0.05)。在凝血功能及安全性指标等方面,两组结果相似(P>0.05),整个试验过程无不良事件。结论:尖吻蝮蛇凝血酶对胸部切口有较好的止血作用和安全性。     

蛇毒与播散性血管内凝血(DIC)的研究 Ⅰ.尖吻蝮蛇毒对狗引起的急性DIC

用尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom,AAV)(0.5mg/kg)静注麻醉狗。观察到AAV对狗引起血小板计数和血浆纤维蛋白原含量明显下降,“PT”和KPTT试验显著延长,血清FDP大大增加,3P试验阳性以及肾小球内呈现纤维蛋白沉积。这些结果表明,AAV对狗引起了急性DIC,因而加重由AAV直接引起的严重出血。此外,对由AAV导致的急性DIC机理作了初步讨论。     

尖吻蝮蛇血凝酶不同用法用量在乳腺良性肿块麦默通围手术期应用的对比研究

目的 比较尖吻蝮蛇血凝酶(Haemocoagulase Agkistrodon,HCA)不同用法用量在预防乳腺良性肿块麦默通(Mammotome,MMT)微创旋切术围手术期出血的应用疗效、安全性及经济性.方法 收集我医院胸外乳腺科2016年4-9月住院的乳腺良性肿块行MMT微创旋切术治疗的患者75例,其中MMT术前使用尖吻蝮蛇血凝酶2 U的患者35例纳入A组,MMT术前术后分别使用尖吻蝮蛇血凝酶1 U的患者40例纳入B组,比较两组的平均术中出血量、术后血肿发生率、不良反应发生率、平均住院天数、平均住院药物费用和平均住院给药费用,并进行成本-效果分析.结果 两组之间平均术中出血量、术后血肿发生率、治疗有效率、不良反应发生率、平均住院天数和平均住院药物费用比较差异均无统计学意义(P>0.05),但B组的平均住院给药费用高于A组(P<0.05),A组具有成本-效果优势.结论 尖吻蝮蛇血凝酶术前使用2 U与术前术后分别使用1 U在预防乳腺良性肿块MMT微创旋切术围手术期出血应用中具有相似的疗效及安全性,但术前术后分别给1 U增加患者的平均住院给药费用,经济性较差.