瘦素对缺氧复氧培养L02肝细胞功能和凋亡的影响

目的 观察瘦素对缺氧复氧人肝脏细胞(102)的肝功能保护和拮抗细胞凋亡的作用.方法 将102细胞分别分为正常对照组、单纯缺氧12 h复氧组和缺氧12 h复氧加不同浓度的瘦素(分别为100、200、400、800、1600μg/L)干预组,用CCK-8检测各组细胞的A4490值,与正常组比较算出细胞的存活率;取细胞上清液检测ALT;流式细胞仪检测细胞的凋亡率以及电镜检测细胞凋亡的形态学改变.结果 与正常对照组比较,L02细胞经缺氧12 h复氧培养后,CCK-8检测细胞的存活率下降(P<0.01),加用不同浓度瘦素干预组细胞存活率较单纯缺氧12 h复氧组增高(P<0.01),以400μg/L LEP处理组细胞存活率增高明显;流式细胞仪检测细胞凋亡率结果与CCK-8法一致;电镜检测单纯缺氧复氧后细胞呈现明显凋亡形态学改变,而加用瘦素100μg/L处理细胞组细胞仅轻度改变;与正常组比较,细胞缺氧复氧后ALT升高明显(P<0.01),加用不同浓度瘦素组处理后细胞ALT较单纯缺氧复氧组升高幅度下降(P<0.05).结论 瘦素对缺氧复氧培养后的L02细胞肝功能有保护作用,并能减轻肝细胞凋亡.     

七氟醚预先给药对大鼠肾脏缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的 探讨七氟醚预先给药对大鼠肾脏缺血再灌注时细胞凋亡的影响.方法 健康清洁级雄性SD大鼠30只,体重220～260 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=10):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚组(S组).I/R组和S组采用夹闭左肾蒂45 min后恢复再灌注的方法 建立肾脏缺血再灌注模型,C组腹部正中切口,右肾切除,左肾蒂游离后,缝合腹腔;S组模型制备前30 min开始吸入2.2%七氟醚和氧气的混合气体至再灌注3 h.于再灌注3 h时采集下腔静脉血样5 ml,测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度,然后取肾组织,光镜下观察肾组织病理学结果,TUNEL法检测细胞凋亡,计算细胞凋亡指数,采用RT-PCR和Western blot法测定血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA及蛋白表达水平.结果 与C组比较,I/R组和S组血清BUN、Cr浓度、肾脏近曲小管坏死程度、细胞凋亡指数升高,HO-1 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,S组血清BUN、Cr浓度、细胞凋亡指数、肾脏近曲小管坏死程度降低,HO-1 mRNA表达上调(P＜0.05).结论 七氟醚预先给药可通过抑制细胞凋亡而减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤,其抑制细胞凋亡作用可能与HO-1 mRNA表达上调有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of sevoflurane pretreatment on renal ischemia-reperfusion (I/R)-induced apoptosis in kidney in rats. Methods Thirty pathogen-free male SD rats weighing 220-260 g were randomized into 3 groups (n=10 each):group control (group C);group I/R and group sevoflurane(group S). Renal I/R was induced by clamping the left renal pedicle for 45 min in I/R and S groups. In group S inhalation of 2.2% sevoflurane in O2 was started at 30 min before operation and maintained throughout the experiment.Venous blood samples were taken at 3 h of reperfusion for determination of serum BUN and Cr concentrations. The animals were then sacrificed and the left kidneys were removed for microscopic examination, detection of apoptosis(by TUNEL)and determination of heme oxygenase-1(HO-1) mRNA and protein expression (by RT-PCR and Western blot).Results Renal I/R significantly increased serum BUN and Cr concentrations, apoptotic index(percentage of apoptotic cells) and the severity of necrosis of renal proximal convoluted tubules (0=normal,4=necrosis of whole segment of proximal convoluted tubules).Sevoflurane inhalation attenuated the I/R-induced changes mentioned above.HO-1 mRNA and protein expression was up-regulated by I/R and HO-1 mRNA expression was further up-regulated by sevoflurane inhalation.Conclusion Sevoflurane pretreatment can protect kidney against I/R injury by attenuating cell apoptosis.Up-regulation of HO-1 mRNA expression may be involved in the mechanism.     

二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时细胞凋亡的影响

目的 探讨二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时细胞凋亡的影响.方法培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,以1×106个/ml的密度接种于96孔培养板(100 μl/孔)或培养皿(2 ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12),正常对照组(C组)不作任何处理,缺氧复氧组(H/R组)、二氮嗪预先给药组(DZ组)和二氮嗪预先给药+5-羟葵酸组(DZ+5-HD组)均进行缺氧2 h复氧2 h,DZ组和DZ+5-HD组在缺氧前2 h分别加入100 μmol/L二氮嗪和100 μmol/L二氮嗪+100 μmol/L线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-羟葵酸.于复氧2 h时测定细胞活力和凋亡率.结果 与C组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01);与H/R组比较,DZ组细胞活力升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05或0.01);5-羟葵酸可抑制二氮嗪预先给药导致的上述改变(P＜0.05或0.01).结论 二氮嗪预先给药可抑制大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡,从而减轻缺氧复氧损伤,其机制与激活线粒体ATP敏感性钾通道有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of diazoxide pretreatment on apoptosis in rat myocardial microvascular endothelial cells exposed to hypoxia-reoxygenation (H/R) . Methods The SD rat myocardial microvascular endothelial cells were cultured. The cells were seeded in 96-well plates (100 μl/hole) or in 6 cm diameter dishes (2 ml/dish) with the density of 1×106/ml and randomly divided into 4 groups ( n = 12 each) : normal con trol group (group C), H/R group, diazoxide pretreatment group (group DZ) and diazoxide pretreatment + 5-hydroxydecanoate (5-HD, a mitochondrial ATP-sensitive potassium channel blocker) group (group DZ + 5-HD) .The cells were exposed to 2 h hypoxia followed by 2 h reoxygenation. Diazoxide 100 μmol/L and diazoxide 100 μmol/L + 5-HD 100 μmol/L were added to the culture medium 2 h before hypoxia in groups DZ and DZ + 5-HD respectively. The cell viability and apoptotic rate were detected at the end of reoxygenation. Results Compared with group C, the cell viability was significantly decreased, while the apoptotic rate increased in group H/R ( P ＜ 0.01) . Compared with group H/R, the cell viability was significantly increased, while the apoptotic rate decreased in group DZ (P ＜ 0.05 or 0.01) . 5-HD could inhibit diazoxide pretreatment-induced changes mentioned above ( P ＜ 0.05 or 0.01). Conclusion Diazoxide pretreatment can reduce H/R injury through inhibiting apoptosis in rat myocardial microvascular endothelial cells, and the mechanism is related to the activation of mitochondrial ATP-sensitive potassium channels.     

咪达唑仑对新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧时细胞凋亡的影响

目的 探讨咪达唑仑对新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧时细胞凋亡的影响.方法 分离、培养出生2～4 d的Wistar大鼠心肌细胞,将培养融合的心肌细胞随机分为7组(n=7):正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(HR组)、外周型苯二氮革类受体(PBR)拮抗剂PK 11195组(P组)、PBR激动剂Ro 5-4864组(R组)、咪达唑仑组(M组)、PK 11195+Ro 5-4864组(PR组)和PK 11195+咪达唑仑组(PM组).HR组缺氧30 min复氧2 h建立缺氧/复氧模型.P组、R组、M组、PR组、PM组在培养皿中分别加入终浓度为10-4mol/L的PK 11195、Ro 5-4864和咪达唑仑及相应混合药物共同孵育,30 min后行缺氧/复氧.复氧2 h时收集细胞,采用HTC-Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数(AI);Western blot法测定心肌细胞蛋白激酶C(PKc)表达水平;Meta Flour单细胞内钙测定系统测定细胞内钙离子浓度.结果 与C组比较,其余各组AI升高,除R组外其余各组细胞内钙离子浓度升高,PKC表达下调(P<0.01);与HR组比较,R组AI和细胞内钙离子浓度降低,PKC表达上调,M组和PM组AI降低(P<0.01);与P组比较,R组AI和细胞内钙离子浓度降低,PKC表达上调(P<0.01),PR组、PM组差异无统计学意义(P>0.05);与R组比较,M组、PR组、PM组Al和细胞内钙离子浓度均升高,PKC表达下调(P<0.01).结论 咪达唑仑10-4mol/L可减轻新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧时细胞凋亡,其作用机制可能是非PBR依赖性的,且与细胞内钙离子浓度和PKC表达无关.     

异丙酚预先给药对大鼠脑缺血再灌注时内质网应激性细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时内质网应激性细胞凋亡的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠80只,体重240～280 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=20):假手术组(S组);局灶性脑缺血再灌注组(FCIR组)采用阻塞大脑中动脉4h恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;异丙酚预先给药组(P组)于缺血前30 min股静脉泵注异丙酚12mg·kg-1·h-1至缺血15min;脂肪乳预先给药组(Ⅰ组)给予脂肪乳1.2 ml·kg-1·h-1.于再灌注6h时各组随机取10只大鼠采用Longa评分法行神经功能缺陷评分(NDS),处死取左侧大脑,用干湿重法测定脑含水量,余10只大鼠处死后取左侧海马,采用Western blot法检测C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、Bcl-2和活化型caspase-3蛋白的表达水平.结果 与S组比较,FCIR组再灌注6h时NDS评分和脑含水量升高,CHOP和活化型caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,P组NDS评分升高(P＜0.05);与FCIR组比较,P组再灌注6h时NDS评分和脑含水量降低,CHOP和活化型caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P＜0.05),Ⅰ组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可通过抑制内质网应激介导的细胞凋亡减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

氯胺酮预先给药对缺氧复氧诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的 研究氯胺酮预先给药对缺氧复氧诱导大鼠小脑颗粒神经元（CGNs）凋亡的影响，及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）／Akt通路在其中的作用。方法 出生7-8d的清洁级SD大鼠，雌雄不拘，体重15～20g；制备CGNs，培养的8d的CGNs随机分为5组，对照组（A组）、缺氧复氧组（B组）、氯胺酮预先给药组（C组）、PDK／Akt通路的特异性抑制剂Ly294002-氯胺酮预先给药组（D组）、Ly294002组（E组）。B组将CGNs放入特制缺氧盒中，缺氧3h后复氧；C组缺氧前1h加入200μmol／L氯胺酮；D组加入氯胺酮前30min加入20μmol／LLy294002；E组加入20μmol／LLy294002。复氧16h后进行下述指标的观察。二乙酸荧光素染色法测定CGNs存活率，Hoechst33258核染色检测CGNs凋亡细胞核，琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化水平，蛋白免疫印迹法（Western blot法）检测CGNs磷酸化Akt、磷酸化GSK3β及总Akt水平。结果缺氧复氧可诱导CGNs的凋亡，降低CGNs磷酸化Akt和磷酸化GSK3β水平（P〈0．05），氯胺酮预先给药可减轻缺氧复氧诱导的上述改变，氯胺酮对CGNs的这种保护作用可被Ly294002部分抑制。结论 氯胺酮预先给药可减轻缺氧复氧诱导大鼠CGNs凋亡，其机制与激活PI3K／Akt通路有关。     

瑞芬太尼对大鼠肠缺血再灌注时肝细胞凋亡的影响

目的 评价瑞芬太尼对大鼠肠缺血再灌注时肝细胞凋亡的影响.方法 成年Wistar大鼠54只,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、肠缺血再灌注组(IIR组)和瑞芬太尼组(R组).IIR组及R组采用夹闭肠系膜上动脉1 h后再灌注的方法制备肠缺血再灌注模型,R组于缺血前10min开始静脉输注瑞芬太尼1 μg·kg-1·min-1至再灌注末,S组及IIR组给予等容量生理盐水.分别于再灌注1、3、6 h时处死6只大鼠,取肝组织,检测肝组织Bcl-2与Bax表达水平及肝细胞凋亡情况,计算肝细胞凋亡指数(AI).结果 与S组相比,IIR组和R组Bcl-2与Box表达上调,肝细胞AI升高,IIR组Bcl-2/Bax比值降低,R组Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05);与IIR组相比,R组Bcl-2表达、Bcl-2/Bax比值升高,Box表达下调,肝细胞AI降低(P<0.05).结论 瑞芬太尼可抑制大鼠肠缺血再灌注时肝细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2表达及抑制Bax表达上调有关.     

尼可地尔预先给药对心肌缺血再灌注兔心肌细胞凋亡的影响

目的观察尼可地尔预先给药对心肌缺血再灌注兔心肌细胞凋亡的影响。方法 雄 性新西兰白兔40只,随机分为5组(n=8),假手术组(Sham组):仅穿线,不结扎;IR组:缺血30 min再 灌注120min;Nic组:缺血前10min静脉注射尼可地尔100μg·kg-1负荷量,随后以10μg·kg-1·min-1的 速率持续静脉输注至缺血前即刻;Nic 5-HD、Nic Gli组:在缺血前20 min静脉注射五羧基葵酸钠或 格列本脲5 mg·kg-1,其余的处理同Nic组。再灌注120 min时处死兔,计算心肌梗塞面积,通过两种染 色方法检测心肌细胞凋亡情况,观察心肌超微结构改变,并用免疫组织化学方法测定活化的caspase-3 蛋白表达。结果与IR组比较,Nic组心肌梗塞面积减小,早期凋亡细胞数减少,活化的caspase-3蛋 白表达下降(P<0．05),与Sham组比较,Nic组心肌仍有一定损伤,但较IR组明显改善。与Nic组比 较,Nic 5-HD、Nic Gli组心肌梗塞面积、早期凋亡细胞数、活化的caspase-3蛋白表达增加(P< 0．05)。结论尼可地尔预先给药对缺心肌血再灌注损伤有一定的保护作用,主要通过开放mito-KATPC 及下调活化的caspase-3蛋白的表达。     

利多卡因对缺氧/复氧后肝细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨利多卡因预处理对肝细胞缺氧/复氧后Bcl-2、Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将体外培养的肝细胞分为三组:缺氧/复氧组(Ⅰ组)、利多卡因预处理组(Ⅱ组)和正常对照组(Ⅲ组),每组10份。检测肝细胞缺氧/复氧培养后细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)浓度,肝细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白表达、肝细胞凋亡率及超微结构变化。结果Ⅰ、Ⅱ组细胞培养液中ALT、AST浓度、肝细胞Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡率较Ⅲ组均升高(P<0.05),透射电镜示肝细胞损伤,可见凋亡细胞;Ⅱ组细胞复氧后培养液中ALT、AST浓度、肝细胞Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率均低于Ⅰ组(P<0.05),而肝细胞Bcl-2蛋白表达较Ⅰ组升高(P<0.05),透射电镜观察也显示Ⅱ组肝细胞比Ⅰ组损伤轻微。结论利多卡因预处理可以在一定程度上减轻缺氧/复氧后肝细胞损伤,降低细胞凋亡率,保护机制可能与Bcl-2、Caspase-3蛋白表达有关。     

热缺血再灌注损伤时肝细胞凋亡的变化

越来越多的研究表明 ,细胞凋亡在肝脏缺血再灌注损伤这一过程中发挥着重要作用。本文探讨肝脏缺血再灌注时细胞凋亡的变化。一、材料与方法1.本实验采用健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 4只 ,随机分成 4组 ,每组 6只 :(1)假手术组 :只做大鼠肝脏的游离 ,目的是作为正常对照以排除手术因素对实验结果的影响 ;(2 )对照组 :阻断大鼠肝左叶和中叶的门静脉、肝动脉 6 0ｍｉｎ后 ,立即切取左叶和右叶肝组织标本检测 ;(3)实验组 1:阻断血流操作同对照组 ,恢复血流再灌注 2ｈ后 ,切取左叶和右叶肝组织标本检测 ;(4)实验组 2 :操作同实验组 1,在再灌注 2 …     

瘦素对三苯氧胺诱导的乳腺癌MCF-7细胞的凋亡抑制作用及相关机制

目的 探讨瘦素在体外对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡抑制作用及其抑制MCF-7细胞凋亡的相关机制.方法 将MCF-7细胞接种于48孔板中.分组处理48 h后,ELISA测定不同浓度瘦素对不同浓度三苯氧胺引起的MCF-7细胞凋亡.实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中Survivin、BCL-2、BAX的mRNA的相对表达水平改变.结果 103 ng/mL和104 ng/mL瘦素可以有效抑制TAM诱导的MCF-7细胞凋亡.104 ng/mL明显上调了乳腺癌MCF-7内Survivin mRNA的表达,而BCL-2、BAX mRNA改变无统计学意义.结论 瘦素可以有效抑制TAM诱导的MCF-7细胞凋亡,其机制可能与瘦素上调Survivin mRNA的表达有关.     

体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建

目的探讨L02肝细胞氧化损伤模型的构建方法。方法将L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,每组再根据加入不同浓度的过氧化氢(H2O2)分为100、200、300、500、750、1 000μmol/L 6个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行细胞计数试剂盒(CCK)-8检测。另1组L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,损伤3 h组再根据加入H2O2浓度不同分为100、200、300、500、750μmol/L 5个亚组,损伤6 h组分为100、200、300、500μmol/L 4个亚组,损伤12 h组分为100、200、300μmol/L 3个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞检测。损伤模型的建立及鉴定:L02肝细胞培养后损伤组加入200μmol/L H2O2,对照组不加入H2O2。在培养箱中继续孵育6 h后检测细胞线粒体膜电位、丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)等指标。结果损伤3 h组中,200、300、500、750、1 000μmol/L等各亚组的细胞存活率与对照组比较,差异有统计学意义(均为P0.01);损伤6 h组中,各亚组细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P0.01);损伤12 h组中,各亚组存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P0.01)。3 h H2O2浓度与细胞存活率的相关系数为-0.993,6 h组为-0.955,12 h组为-0.819。Annexin V-FITC/PI双染检测不同浓度、不同作用时间的H2O2损伤情况下细胞凋亡/坏死率:损伤3、6、12 h组中,损伤各亚组与对照组比较,差异均有统计学意义(均为P0.01)。3 h组H2O2浓度与细胞凋亡或坏死率的相关系数为0.971,6 h组为0.992,12 h组为0.986。与对照组比较,200μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞损伤组的线粒体膜电位、MDA、ROS、SOD、ALT、AST差异均有统计学意义(均为P0.01)。结论 200μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞是体外模拟缺血-再灌注或氧化损伤的良好模型。     

肾上腺髓质素对缺氧复氧诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)对缺氧复氧(HR)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的影响及其机制.方法 体外培养的NRK-52E细胞,随机分为4组:正常对照组、HR组、空质粒+HR组、ADM质粒+HR组.采用Fugene HD转染试剂,将pcDNA3.1-myc-his B空质粒和ADM真核表达质粒分别转染至NRK-52E细胞内,应用免疫细胞化学的方法检测转染效率,转染成功48 h后制作HR模型.锥虫蓝摄取法进行细胞计数并计算细胞存活率,分光光度法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量评价细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测ADM、Bax、Bcl-2、Fas的mRNA表达;Western印迹法检测活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8、9(Caspase-3、8、9)的蛋白表达.结果 HR组ADM的表达显著高于正常对照组(P＜0.05).ADM质粒+HR组的ADM表达显著高于空质粒+ HR组(P＜0.05).与正常对照组相比,HR组活细胞计数和细胞存活率显著降低,LDH含量及细胞凋亡率显著升高,Bax、Bcl-2、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著上调,Bax上调更明显,故Bax/Bcl-2升高(均P＜0.05).与HR组相比,ADM质粒+HR组活细胞计数和细胞存活率显著升高,LDH含量及细胞凋亡率显著降低,Bax、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著下调,Bcl-2表达进一步上调,Bax/Bcl-2降低(均P＜0.05).空质粒+HR组和HR组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ADM在NRK-52E细胞中的高表达可以减轻HR诱导的细胞凋亡,其机制至少部分是通过抑制线粒体通路和死亡受体通路实现的.     

转染血红素氧合酶—1基因减轻人肝细胞体外缺氧—复氧损伤

目的 探讨血红素氧合酶-1重组腺病毒载体(Ad-HO-1)体外转染人肝细胞的转染效果及其对肝细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 取人肝细胞系L-02细胞,滴加低温保存的Ad-HO-1,分别培养24 h、48 h和72 h(24 h组、48 h组和72 h组),并以加入空载体腺病毒共培养的L-02细胞为空白对照.采用逆转录聚合酶链反应法检测各组肝细胞HO-1 mRNA的表达水平;以间接免疫荧光标记法检测各组肝细胞的HO-1表达率;在倒置荧光显微镜下观察转染24 h和72 h的肝细胞中绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.取空白对照组肝细胞(培养48 h)和48 h组肝细胞,缺氧培养4 h后再有氧培养8 h,采用四甲基偶氮唑盐法测定两组肝细胞存活率.结果 24 h组、48 h组和72 h组HO-1 mRNA表达水平明显高于空白对照组,且随着转染时间的延长,HO-1 mRNA的表达水平逐渐升高.空白对照组HO-1的表达率为2.0%,24 h组为29%,48 h组为85.6%,72 h组为84.6%.基因转染后24 h和72 h,可以观察到L-02细胞中EGFP的表达.经历缺氧-复氧实验后,空白对照组肝细胞的存活率为(37.7±3.5)%,48 h组肝细胞的存活率为(89.4±5.2)%,二者相比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Ad-HO-1在体外能有效的转染人肝细胞;与未转染者相比,转染肝细胞的缺氧-复氧损伤程度较轻.     

瘦素对肠缺血/再灌注损伤大鼠肝脏功能的影响及其机制

目的:探讨瘦素(leptin)对大鼠肠缺血/再灌注(I/R)损伤时肝脏的保护作用及其机制。方法:99只Wistar大鼠随机分成11组:假手术组,肠缺血45min再灌注15min、30min、1h、3h、6h的肠I/R损伤组和相应时间点的leptin治疗组,每组9只大鼠。肠I/R损伤组和leptin治疗组建立大鼠肠I/R损伤模型;leptin治疗组于再灌注的同时腹腔注射leptin0.2mg/kg。假手术组术后1h处死,其余各组大鼠于相应时间点处死,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT),肝组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-10和超氧化物歧化酶(SOD)水平的动态变化。结果:肠I/R组血清ALT随着时间变化逐渐升高,肝组织中的IL-6水平于再灌注3h显著升高,而IL-10水平基本处于平稳的波动状态,SOD活性于再灌注早期呈略微下降趋势,1h后逐步回升至假手术组水平;leptin治疗后血清ALT水平基本稳定在较低水平,再灌注3h后,肝组织IL-6水平较损伤组明显降低,同时SOD活性显著提高,IL-10水平于再灌注15min时突然增高,随即恢复到假手术组水平。结论:leptin对大鼠肠I/R造成的肝脏功能损伤具有改善作用,可能与其调节肝组织中的细胞因子释放、提高肝脏的抗氧化损伤能力有关。