紫花牡荆素通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并探讨其诱导凋亡机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞.细胞凋亡ELISA试剂盒检测HeLa细胞组蛋白/DNA碎片;碘化丙啶染色流式细胞术定量分析Sub-G1细胞百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.caspase比色试剂盒检测caspase-3/-9活性;Rh123探针染色FCM检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表达.结果:不同浓度的CAS处理48h后,HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加、Sub-G1细胞百分率显著增高、DNA琼脂糖凝胶电泳法观察到典型的DNA梯形条带;CAS处理组caspase-3/-9活性明显升高、线粒体膜电位降低、细胞色素c、Bax显著升高,而Bcl-xL和XIAP蛋白表达水平降低.结论:CAS通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡.     

紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:观察紫花牡荆素(Casticin,CAS)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用。方法:体外培养HeLa细胞。ELISA法测定细胞培养液组蛋白/DNA碎片。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析Sub-G1细胞百分率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:CAS以浓度依赖方式增加HeLa细胞组蛋白/DNA碎片的渗漏(P<0.05),同时显著升高HeLa细胞Sub-G1百分率(P<0.05)。CAS以Caspase依赖方式激活HeLa细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:CAS能有效诱导HeLa细胞凋亡。     

青蒿琥酯对人子宫颈癌细胞株HeLa凋亡与增殖的影响

目的研究青蒿琥酯（artesunate,ART）对人子宫颈癌细胞HeLa凋亡与增殖的影响。方法通过MTT法观察ART对HeLa细胞的生长抑制作用;荧光染色观察ART作用前后细胞形态的改变;免疫组化检测HeLa细胞caspase-3表达;流式细胞术观察ART对细胞周期的影响,并检测细胞线粒体膜电位△ψm。和细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的改变。结果ART对HeLa细胞的生长抑制作用呈时间、剂量依赖关系;荧光染色观察见凋亡小体形成;透射电镜见细胞染色质凝聚,边集呈新月形;免疫组化检测细胞质caspase-3呈阳性表达;流式细胞术检测ART可引起HeLa细胞周期S期阻滞;细胞内ROS明显升高（P〈0．01）,△ψm显著降低（P〈0．05）。结论ART作用于人子宫颈癌HeLa细胞,可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ）,并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532,P〈0．05）;流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性（P〈0．05）;白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。     

高浓度葡萄糖损伤人腹膜间皮细胞分子机制的研究

目的：探讨高浓度葡萄糖损伤人腹膜间皮细胞的机制。方法：（1）人腹膜间皮细胞分别经含1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖的M199培养基培养48小时后，检测间皮细胞线粒体膜电位（Ψ）、凋亡率、caspase-3活性、bax和bcl-2基因mRNA表达；（2）分别用0．1μmol／L和0．01μmol／L环孢素A（CsA）与4．25％葡萄糖共同作用人腹膜间皮细胞，检测细胞凋亡率和caspase-3活性。结果：（1）随着葡萄糖浓度增加，Ψ丧失的细胞百分率、bax mRNA表达量、caspase-3活性、凋亡率增加（P〈0．05），而bcl-2 mRNA表达量减少；（2）随着葡萄糖浓度增加，bax mRNA的表达量与皿丧失的间皮细胞百分率呈显著正相关（P〈0．01）；bcl-2 mRNA的表达量与Ψ丧失的间皮细胞百分率呈显著负相关（P〈0．01），Ψ丧失的间皮细胞百分率与间皮细胞凋亡率、caspase-3活性呈显著正相关（P〈0．01）：（3）0．1μmol／L CsA组间皮细胞凋亡率和caspase-3活性显著低于高糖对照组（P〈0．05）。结论：（1）高糖可能通过上调bax基因表达和下调bcl-2基因表达，诱导人腹膜间皮细胞线粒体活化、caspase-3活化和凋亡。（2）高糖诱导人腹膜间皮细胞caspase-3活化和凋亡可能依赖于线粒体活化。     

5,7-二甲氧基黄酮诱导白细胞U937细胞凋亡

目的:研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyflavone,DMF)诱导人前单核细胞系U937细胞凋亡作用。方法:体外培养U937细胞,PI染色FCM分析Sub-G1细胞百分率;ELISA法检测细胞培养液组蛋白/DNA碎片、Caspase-9和Caspase-3活性。结果:DMF增高U937细胞Sub-G1百分率(P<0.05),呈浓度依赖性。DMF以浓度依赖方式刺激U937细胞组蛋白/DNA碎片渗漏(P<0.05)。DMF能有效诱导U937细胞Caspase-9和Caspase-3活化。结论:DMF诱导U937细胞凋亡作用与其激活线粒体途径相关。     

桦褐孔菌醇对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的：研究桦褐孔菌醇（Inotodi01）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：以不同浓度的Inotodiol处理HeLa细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞增殖情况,透射电镜观察细胞超微结构变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测caspase-3蛋白的表达。结果：Inotodiol能抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖关系（P〈0．05,P〈0．01）;超微结构观察可见细胞体积缩小、核固缩、核内异染色质增多并边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;TUNEL法显示,经50μg/ml的lnotodiol处理48h,HeLa细胞发生凋亡;免疫细胞化学结果表明,与对照组相比,Inotodiol组HeLa细胞中caspase-3蛋白表达上调（P〈0．01）。结论：在一定浓度范围内,Inotodiol可在体外抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调easpase-3蛋白的表达有关。     

奥美拉唑诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制研究

【目的】探讨质子泵抑制剂奥美拉唑体外对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。【方法】0、100、200、300μmol／L奥美拉唑分别作用于体外培养的HeLa细胞,荧光显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡基因caspase-3和bcl-2的mRNA表达。【结果】HeLa细胞经奥美拉唑作用24h后,均可见染色质凝集;MTT法检测示各组24h增殖抑制率为（2．19±0．24）％、（16．70±1．61）％、（27．50±1．37）％和（31．20±2．04）％,48h增殖抑制率为（2．38±0．76）％、（16．80±3．00）％、（40．50±2．64）％和（45．80±2．18）％。增殖抑制率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;各组流式细胞仪检测24h凋亡率为（3．99±0．75）％、（11．50±2．61）％、（25．70±3．1）％和（37．3±2．67）％;200μmol／L组48h凋亡率为（45±2．15）％,72h为（62．4±2．89）％。细胞凋亡率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;RT-PCR结果示casepase-3基因表达随奥美拉唑浓度增加而增加,bcl-2基因表达随奥美拉唑浓度增加而降低。【结论】奥美拉唑通过上调casepase-3和下调bcl-2基因的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的 观察5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素（ADFMChR）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用效果及其可能机制.方法 体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分别应用不同浓度的ADFMChR处理人宫颈癌HeLa细胞,用AO/EB染色观察ADFMChR作用HeLa细胞48h后凋亡形态学改变;流式细胞术（FCM）检测ADFMChR作用HeLa细胞后的凋亡率;Westernblot分析ADFMChR对HeLa细胞caspase-3蛋白和mcl-1蛋白表达的影响.结果 不同浓度的ADFMChR处理HeLa细胞48h后,细胞出现典型的细胞凋亡形态特征,凋亡率呈浓度依赖性,同时细胞caspase-3蛋白表达上调,mcl-1蛋白表达下降.结论 ADFMChR具有体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,呈浓度依赖性,其机制可能与其上调caspase-3及下调mcl-1蛋白表达有关.     

南赤瓟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及作用机制研究

目的 观察南赤瓟提取物对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度的南赤瓟提取物(0.10、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟提取物在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用0.50和1.00 mg/ml的南赤瓟提取物处理宫颈癌HeLa细胞48 h后Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果 南赤瓟提取物对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性;南赤瓟提取物(0.50和1.00 mg/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,促进HeLa细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P＜0.05,P＜0.01).结论 南赤瓟提取物可诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制与降低HeLa细胞线粒体膜电位及调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-9、Caspase-3的表达有关.     

活性氧介导紫花牡荆素诱导卵巢癌HO-8910细胞调亡

目的:探讨紫花牡荆素(Casticin,CAS)诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡是否涉及活性氧生成和线粒体膜去极化。方法:体外培养HO-8910细胞。AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针FCM检测细胞活性氧生成;Rh123探针FCM分析细胞线粒体跨膜电位。结果:CAS诱导HO-8910细胞凋亡率增高,呈剂量依赖性。CAS以浓度依赖方式增高HO-8910细胞内活性氧水平。CAS处理细胞的Rh123平均荧光强度显著降低,表明CAS具有诱导细胞线粒体膜去极化作用。N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)部分拮抗CAS诱导细胞凋亡,并能减弱CAS诱导活性氧生成和线粒体膜去极化作用。结论:CAS诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡作用机制可能与促进细胞活性氧生成介导的线粒体膜去极化相关。     

Involvement of the Mitochondrion-dependent and the Endoplasmic Reticulum Stress-signaling Pathways in Isoliquiritigenin-induced Apoptosis of HeLa Cell

Objective Isoliquiritigenin(ISL),a licorice chalconoid,is considered to be a bioactive agent with chemopreventive potential.This study investigates the mechanisms involved in ISL-induced apoptosis in human cervical carcinoma HeLa cells.Methods Cell viability was evaluated using a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide(MTT)assay.Apoptosis was determined by flow cytometry using an Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit.The intracellular ROS levels were assessed using a 2,7-dichlorofluorescein probe assay.The mitochondrial membrane potential was measured with the dual-emission potential-sensitive probe 5,5’,6,6’-tetra-chloro-1,1’,3,3’-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide(JC-1).The degradation of poly-ADP-ribose polymerase(PARP)protein,the phosphorylation of PKR-like ER kinase(PERK),the phosphorylation of the α-subunit of eukaryotic initiation factor 2(eIF2α),the expression of the 78 kD glucose-regulated protein(GRP 78),and the activation of caspase-12 were analyzed via western blot analysis.Results ISL significantly inhibited the proliferation,the increase in ROS levels and apoptotic rates of HeLa cells in a concentration-dependent manner.Moreover,ISL induced mitochondrial dysfunction,caspase activation,and PARP cleavage,which displayed features of mitochondria dependent on apoptotic signals.Besides,exposure of HeLa cells to ISL triggered endoplasmic reticulum(ER)stress,as indicated by the increase in p-eIF2α and GRP78 expression,ER stress-dependent apoptosis is caused by the activation of ER-specific caspase-12.Conclusion The findings from our study suggest that ISL-induced oxidative stress causes HeLa cell apoptosis via the mitochondrion-dependent and the ER stress-triggered signaling pathways.     

三叶青乙酸乙酯提取物诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的:评价三叶青乙酸乙酯提取物(ethyl-acetate fraction of extracts from Tetrastigma hemsleyanumDiels et.Gilg,EAFT)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。Western Blotting分析细胞Bax蛋白和细胞色素C的表达。结果:EAFT以浓度依赖方式诱导annexinⅤ染色阳性细胞百分率和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.01)。10.0 mg/L EAFT分别作用HeLa细胞6 h、12 h和24 h,细胞色素C和Bax蛋白表达上调。结论:EAFT具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用,其作用机制与激活线粒体途径有关。     

苦参碱诱导MDS细胞株SKM-1凋亡作用的研究

目的:研究苦参碱诱导骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1的凋亡作用及其机制。方法:采用WST-1法检测不同浓度的苦参碱对SKM-1细胞生长的抑制作用;应用流式细胞术检测早期凋亡细胞以及线粒体跨膜电位的变化;用分光光度法检测caspase-9活性。结果:0.25～2.0mg/ml苦参碱对SKM-1细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);苦参碱处理48小时后,细胞凋亡率明显增加,并呈剂量依赖性(P<0.05);1.0mg/ml苦参碱处理后48小时内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低,caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性(P<0.01)。结论:苦参碱可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活caspase-9而诱导SKM-1细胞早期凋亡。     

异甘草素诱导人宫颈癌细胞增殖的影响及作用机制的研究

目的 研究异甘草素(ISL)抑制宫颈癌Hela细胞增殖作用及促进细胞凋亡的作用机制.方法 采用 0.025、0.050、0.100、0.200、0.300、0.400 mg/mL浓度ISL处理HeLa细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色 法检测HeLa细胞增殖;采用流式细胞仪检测HeLa细胞凋亡情况;应用罗丹明123染色法检测HeLa细胞线粒体跨膜 电位的变化;采用RT-PCR检测6种不同浓度ISL对Bcl-2、P53、P21、E6 mRNA基因表达的影响.结果 (1)MTT 检测结果显示:随着ISL浓度增加,对不同时间段HeLa细胞的抑制作用明显增加(P<0.05);(2)流式细胞仪 检测:相比于空白对照组,随着ISL浓度逐渐增加,Hela细胞凋亡率明显升高(P<0.01),且凋亡率呈剂量依赖性;(3)罗丹明123荧光染色检测结果:随着ISL浓度逐渐增加,细胞线粒体膜电位下降(P<0.01);(4)RT-PCR 结果显示:随着ISL浓度逐渐增加,E6、Bcl-2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而P53、p21 mRNA表达水平越 升高(P<0.05).结论 ISL通过下调E6、Bcl-2的表达和上调P21、P53基因的表达来抑制宫颈癌细胞的增殖.     

吲哚美辛诱导的HL-60白血病细胞凋亡与JNK信号转导途径活化

目的 :观察吲哚美辛对HL 6 0白血病细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的诱导作用 ,了解C JunN 末端激酶 (JNK)信号转导途径在介导吲哚美辛诱导的HL 6 0细胞凋亡中的活化状态 ,揭示吲哚美辛诱导HL 6 0细胞凋亡的分子机制。方法 :以台盼蓝染色检测药物干预后的HL 6 0细胞活力 ;分析HL 6 0细胞的增殖能力 ;DNA梯状胶电泳及吖啶橙 /溴化乙锭染色形态学分析鉴定细胞凋亡 ;Western印迹检测凋亡信号蛋白caspase 9, 3和PARP的裂解激活以及JNK信号途径蛋白质MEK4 ,JNK ,P JNK ,P C Jun的表达及活化状态。结果 :2 0 0～ 4 0 0 μmol的吲哚美辛能够显著抑制HL 6 0细胞增殖和诱导HL 6 0白血病细胞凋亡 ,并呈浓度和时间依赖性 ;HL 6 0细胞凋亡伴有caspase 9,3和PARP的表达上调及裂解激活 ;MEK4蛋白表达呈浓度依赖性上调 ;磷酸化JNK和磷酸化C Jun呈浓度依赖性上调。结论 :吲哚美辛可抑制HL 6 0细胞增殖和诱导细胞凋亡 ;JNK信号途径活化介导了吲哚美辛诱导的凋亡。JNK途径的活化导致了下游caspase途径的活化。     

Phosphorylated extracellular signal-regulated kinase up-regulated p53 expression in shikonin-induced HeLa cell apoptosis

Background The role of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) in shikonin-induced HeLa cells apoptosis remains vague. This study was to investigate the activation of caspase pathways and the role of ERK1/2 in human cervical cancer cells, HeLa, by shikonin. Methods The inhibitory effect of shikonin on the growth of HeLa cells was measured by MTr assay. Fluorescent microscopic analysis of apoptotic cells stained with 4‘ , 6‘-oliiamiclino-2-phenylindole C (DAPI) and Hoechst 33258 was carried out. Caspase-3 and -8 activities were detected using caspase-3 substrate and caspase-8 substrate as substrates, respectively. The protein levels of ERK, p53 and p-ERK were determined by Western blot analysis. Results Shikonin inhibited cell growth in a time- and dose-dependent manner. Caspase-3 and caspase-8 were activated in the apoptotic process and caspase inhibitors effectively reversed shikonin-induced apoptosis. Phosphorylation of ERK resulted in up-regulation of p53 expression, which was blocked by mitogen-activated protein kinase (MEK) , inhibitor PD 98059. Conclusion Shikonin induces HeLa cell apoptosis through the ERK, p53 and caspase pathways.