钙钴法测NAP孵育时间探讨

中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)的检测,临床上多采用改良戈(Gomori)氏钙-钴法,有关方法中的孵育时间(要求37℃4～6小时),有人探讨可以缩短.但我们发现,有些实验室为了方便,于当日下班前将固定好的血片放入基质孵育液,次日晨再取出染色,使孵育时间大为延长.为探讨延长孵育时间对结果是否有影响,我们做了如下实验.选择白细胞数大于10×10~9/L 的病人50例,各取其耳血制血片4张,经95%乙醇固定10分钟,水洗待干后,各两张血片放入同一基质液置37℃温箱分     

福马林对纤维胆道镜熏蒸消毒效果的测试

纤维胆道镜经水洗后继以含０．２５％戊二醛的醛立净溶液洗涤２分钟，再用８０ｍｌ／ｍ３福马林熏蒸消毒３０分钟，可使胆道镜各部位均无菌生长。仅水洗后以福马林熏蒸者不能达到无菌     

固蓝BB盐的浓度对特异性酯酶染色灵敏度的影响

氯醋酸AS-D萘酚酯酶(SE)染色对确诊急性粒细胞白血病具有重要价值。固蓝RR盐的浓度可对SE染色灵敏度产生大的影响[1]。本文的目的是探讨pH7.4时,常用偶联剂固蓝BB盐的不同浓度对SE染色灵敏度的影响,以确定固蓝BB盐的实际有效浓度。1材料与方法1.1实验步骤与孵育液配制参照文献[1,2]设计本实验操作步骤。取同一病人的骨髓片4张,经4℃保存的FAB固定液[1,2]固定30s～1min后,水洗晾干,分别浸入含固蓝BB盐[2]4种不同浓度的孵育液中。于37℃中温育30min[1],水洗后用苏木素复染细胞核。孵育液配制如下:每份取0.067mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.…     

病毒酶联细胞免疫试验(VELCIA)检测轮状病毒抗原及其中和抗体

病毒酶联细胞免疫试验(VELCIA)不仅能检出和滴定适应株或野毒株轮状病毒,还能测定血清中的抗轮状病毒总抗体和中和抗体。具体方法如下:MA-104细胞用含10%胎牛血清的MEM培养液悬浮成10~6细胞/ml,加50μl/孔至聚苯乙烯96孔板上,37℃孵育48-72小时长成单层细胞。粪便标本用PBS制成20%悬液,离心后取上清与等量含30μl/ml胰酶的MEM混合,37℃活化90分钟后,50μl/孔接种在MEM洗过3次的微孔板单层细胞上,室温吸附60分钟,倾弃样本,用MEM洗板上细胞3次,置于100μl/孔MEM孵育18-20小时。猪轮状病毒OSU株接种用含30μl/ml胰酶的MEM作一系列10倍稀释,活化60分钟,接种于MEM洗过3次的单层细胞上,37℃孵育48小时。然后用预冷至-20℃,85%丙酮固定不超过24小时,倾弃丙酮,自然干燥,用前及每次温育间均用含0.05%吐温20的盐水洗3—5次。VELCIA检测轮状病毒抗原时,每孔加50μl1/200稀释的猪抗轮状病毒过氧化物酶结合物37℃温育2小时,随即加100μl/孔ABTS底物(2.2-叠氮-3-二乙基苯噻唑磺酸)作用1小时后,将80μl     

多聚体超声造影剂微泡携带DNA能力研究

目的研究自行研制的新型多聚体超声造影剂(UCA)微泡携带DNA片段的能力.方法以乳液共聚法制备多聚体UCA;以人血细胞提取人类基因组DNA,并用超声将其破碎为DNA片段;将多聚体UCA与PI染色的DNA片段共孵育30、60、90、120分钟后,在荧光显微镜下观察微泡与DNA片段结合情况;将多聚体UCA与PI染色的DNA片段共孵育30分钟,经不同转速离心后观察微泡与DNA片段结合情况.结果多聚体UCA与PI染色的DNA片段共孵育30分钟后,荧光显微镜下均可见带有红色荧光物质的微泡分布,没有发现由于孵育时间延长,微泡表面荧光增强或减弱的现象,不同离心转速对微泡表面荧光强度没有影响.结论自行研制的新型多聚体UCA微泡与DNA片段在30分钟以内即可结合,并经过高速离心仍然保持与DNA片段结合状态.     

输注孵育血小板浓缩物不会增加输注后的回收率

近来体内研究表明将贮存血小板在37℃孵育1小时较未经孵育后的血小板有较好的形态且能更好地保持其正常的圆盘形。在给小儿血小板减少症患者输注孵育后的贮存血小板具有较高的血小板回收率。为此,作者在成人白血病患者中通过检测输注孵育后血小板浓缩物10分钟后的校正计效增值来测定是否可提高血小板的回收率。选取临床病情稳定,血小板计数少于30000/μl     

尼加拉天兰6B—一种新的粒细胞染色剂

本文叙述了用酸性尼加拉天兰6B染色粒细胞的新方法.试剂①改良Bouin氏固定液:取饱和苦味酸水溶液75ml,加入37%甲醛水溶液25ml和冰乙酸5ml制成.②染色液:取尼加拉天兰6B(Niagara sky blue 6B)1g,加入pH3.5水溶液溶解并加至100ml刻度即成.此液于使用前配制.染色方法取血片、骨髓片或组织印片置固定液中60分钟(骨髓活检切片固定3小时),水洗5分钟,空气干燥,置染色液中30分钟,水洗8～10分钟,空气干燥后镜检.     

简要快讯

文中介绍涂片经固定后,放入1%碱性篮(basic blue 93)水溶液中孵育5分钟,溶酶体着黑色.早幼粒和中幼粒细胞中出现大量黑色颗粒,而     

分离和测定血浆中骨和肝型碱性磷酸酶同工酶的两种新方法

凝集素是植物中的高度特异性结合糖蛋白,常被用来分离同工酶。作者报告了两种用麦芽凝集素分离和测定血浆中骨和肝碱性磷酸酶(ALP)同工酶的新方法。总ALP的测定:作者在30℃时测定总ALP活力,使用4—硝基苯基磷酸盐作为基质,二乙醇胺作为缓冲液。ALP同工酶的测定:作者制备5g/L(139uml/L)的麦芽凝集素水溶液,测定ALP同工酶时,用50ul凝集素溶液与50ul血浆混合,如果标本经常规电泳证实含有胆汁型ALP时,应将标本50ul加5ul(20g/L蒸馏水)Triton X-100表面活性剂置于37℃孵育30分钟,凝集素和血浆混合液在37℃孵育30分钟后,离心(2000×g)15分钟,吸出全部     

赛纳克雷尔黑AN:一种染正常和异常人巨核细胞的新染科

作者推荐一种用硷性阳离子织物染科赛纳克雷尔黑 AN(Synacril black AN)染人巨核细胞的染色法.方法:(1)将血或骨髓涂片放入无水甲醇中固定5分钟,水洗、凉千.     

抗球蛋白血清用于毛细管试验

作者介绍一种使用抗球蛋白(antiglobulin、AHG)血清进行毛细管试验的快速方法。该法用等量的血清和50％红细胞盐水悬液充盈毛细管(0.4mm内径×90mm),如同Crawford所述的方法一样,只是不加用白蛋白。然后将毛细管颠倒,并以60°角插入粘土封闭的盘中,在20°～22℃孵育30分钟,让细胞在血清中沉降。当孵育至15分钟时,把插有毛细管的盘颠倒,让细胞沉降回去。30分钟后,折断粘土封闭端,弃去。置毛细管于相应标记的试管里,加生理盐水至试管容量的一半,离心后倒掉盐水及现已空了的毛细管,再用生理盐水洗涤剩下的细胞两次。然后加入AHG血清,离心后,检查凝集情况。     

人血液经56℃孵育处理后溶血率及血型抗原抗体变化

目的 为降低传染风险,对疑似或确诊新型冠状病毒(SARS-Cov-2)患者血样,部分实验室采用56℃孵育30分钟后再进行血型血清学检测,该处理方法对输血前检测的影响未见评估研究.本研究对血液样本经56℃孵育后的溶血率、红细胞A、B、D抗原凝集强度及其抗体效价进行评估.方法 从上海地区随机抽取正常献血者A型20例,B型2...     

血清脂蛋白-X的比浊测定

血清中脂蛋白-X(Lp-x)的出现是胆汁淤积的特异标志,因此Lp-x的定量测定对估计胆汁梗阻的程度有帮助。Lp-x还在极罕见的家族性卵磷脂:胆固醇酰基转移酶缺乏症中出现。测定步骤于小离心管中加血清0.2ml和0.2ml每升含1g肝素和9g氯化钠的溶液,混匀,40℃孵育10分钟。再加0.26md/L醋酸锌溶液0.04ml、混匀,40℃继续孵育1小时。自来水下冷却,3000-     

检测疟原虫穿透性的新方法——双染色法

为了解孢子体与肝细胞相互作用的情况,作者报道1种新的检查方法——酶联免疫和免疫荧光双染色测定法来鉴定孢子体是寄生于肝细胞膜表面,还是侵入肝细胞内。该法首先将有代谢功能的肝细胞体外培养,再接种一定量的疟原虫孢子体继续培养数小时使其感染,然后用这些培养物分二步进行染色观察。第1步酶联免疫测定:培养物洗3次——4%聚甲醛固定5分钟孢子体表面抗原单克隆抗体37℃孵育30分钟——洗3次——过氧化物酶标记的第2抗体(羊抗鼠Ig)洗3次加底物显色——洗3次——无水乙醇处理20分钟——洗3次——置37℃过夜。第2步免疫荧光测定:次日将上述处理的培养物洗3次——单克隆抗体孵育洗3次——荧光     

间脑癫痫一例

患者,女、67岁。农民。一九九○年四月就诊,发作性出汗三年余。初,日发十余次。每次均无明显诱因,突然发生,周身出汗,如水洗状,并心慌乏力。发作时意识清楚,不遗尿,不发热。约四分钟自解,缓解期如常人。近一年发作次数增多,日发二十余次,每次约六分钟。夜不能寐,精神     

应用于激光扫描共聚焦显微镜的活细胞标本制作方法

目的　介绍急性神经元贴壁的简易方法和应用激光扫描共聚焦显微镜观察药物作用后神经元内核酸代谢的方法。方法　以双重荧光染料吖啶橙 (Acridineorange ,AO)进行染色。在 36°C孵育箱内孵育 15分钟。激光扫描共聚焦显微镜对染色后的细胞进行光束扫描 ,以观测细胞内核酸代谢变化的规律。结果　皮层神经元RNA有显著改变。结论　本方法的建立可以成功地应用于激光扫描共聚焦显微镜对胞内核酸代谢变化的研究。     

用茄子秸煎水治疗冻疮

将经过霜冻的茄子秸(未经霜冻亦可,以霜冻者为佳)连根拔出,洗除根上泥土,然后用水煎煮20～30分钟,用其热水及秸皮洗泡患处,以能耐受不致引起烫伤为度。每次洗泡20～30分钟,每晚治疗1次,洗后入睡,直至治愈为止。每次用茄秸水洗泡后即不要再用清水冲洗患处,以免影响疗效。     

低离子抗球蛋白试验

作者通过相容和筛选试验,对7种血清学方法作了评价,认为低离子抗球蛋白试验(LIAGT)明显优于其它方法。材料:冷冻20年以上的抗-RHI血清,以及新鲜和冷冻15年的其它抗血清。方法:1.无花果蛋白酶(Ficin)法:Ficin处理细胞1滴加入同种抗血清1滴或4滴,37℃孵育20分钟,离心分析结果。2.Ficin-聚乙烯吡咯烷酮(PVP)法:Ficin试验完后,离心弃上清液,加1滴PVP-BSV,37℃孵育5分钟,离心后加2滴新鲜盐水,观察凝集。3.Ficin-抗球蛋白试验(AGT)法:观察Ficin-PVP法结果后,细胞经盐     

蛇毒溶血试验实验条件的探讨

目的探讨蛇毒溶血试验的实验条件。方法参考Ｋａｂａｋｃｉ等法，观测蛇毒溶血试剂浓度、血清浓度、孵育温度及时间对阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞溶血度的影响，并作正常对照。结果在一定范围内，蛇毒溶血试剂浓度及血清浓度与ＰＮＨ红细胞溶血度明显正相关；蛇毒溶血试剂浓度为０．５ｍｇ／ｍｌ时，ＰＮＨ红细胞的溶血度基本达到最大值；而血清稀释至１／４时，ＰＮＨ红细胞的溶血度即明显降低，血清稀释至１／１６时，溶血度接近于０。温度对溶血度的影响非常明显，１５℃下ＰＮＨ红细胞溶血度明显降低，而０℃下反应基本中止。３７℃下，随着孵育时间的延长，溶血度也不断增高，但至３０分钟已基本达到最高水平。结论蛇毒溶血试剂的最适浓度为０．５ｍｇ／ｍｌ；由于试验结果受血清中补体浓度的制约，每次试验最好选用同一批血清；整个反应体系必须置３７℃恒温孵育，孵育时间以３０～６０分钟为宜     

印片细胞学在肿瘤诊断中的应用(附415例报告)

印片细胞学检查是介于组织切片和脱落细胞学涂片的一种诊断方法。简易快速(5～15分钟可发报告),对肿瘤“定性”诊断比较可靠,辅助冰冻切片诊断很有价值。现将近年我们积累的病例,总结如下。材料与方法标本取自新鲜未固定的病理送验材料,共415例。将载片于病变中心处直接印附(1—5张),95％乙醇一等量醚混合液立即固定1分钟,水洗后苏木素—伊红染色,封固(制片全过程约5分钟)。