克拉霉素抑制血管生成及肿瘤转移的实验

目的　研究克拉霉素对血管生成的影响并在此基础上观察其抗肿瘤转移的作用 ,为其临床应用提供实验依据 .方法　采用 b- FGF诱导小鼠腹壁 Matrigel种植体方法进行血管生成实验 ,比较克拉霉素处理组和对照组 Matrigel种植体内血红蛋白含量和微血管面积的差异 .采用 L ewis肺癌C5 7BL /6小鼠模型 ,观察比较克拉霉素对肿瘤组织内微血管密度、移植瘤体积、肺脏转移和实验小鼠存活时间的影响 .结果　克拉霉素剂量大于或等于 4 0 mg· kg- 1· d- 1时 ,Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积开始明显减少 ,并具有剂量 -效应关系 .克拉霉素能够明显降低肿瘤组织内的微血管密度 [(2 7± 10 ) vs (14± 7) ,P=0 .0 4 2 ],肺脏转移瘤数量 [(10± 5 ) vs (17± 9) ,P=0 .0 39]并明显延长荷瘤小鼠的存活时间 [(2 7± 10 ) d vs(19± 8) d,P=0 .0 2 2 ].结论　克拉霉素对 b- FGF诱导和肿瘤组织内的血管生成均具有明显抑制作用 ,能够有效减少荷瘤小鼠的肿瘤转移并延长存活时间 ,在肿瘤的综合治疗中具有一定的应用价值     

低相对分子质量透明质酸的促血管生成作用

目的 研究低相对分子质量透明质酸(LMWHA)的促血管生成作用.方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成模型,观察不同相对分子质量(Mr)的LMWHA及不同给药剂量对血管生成的影响.结果 Mr低于10×103的LMWHA对CAM血管生成的影响与溶剂对照组相比,差异有非常显著性意义(P＜0.01);随着给药剂量的增大,新生血管总数明显增多(Mr6 000,r=0.992 9;Mr6 240,r=0.994 4).结论 Mr低于10×103的LMWHA具有促进CAM血管生成作用,且呈剂量依赖性.     

替米沙坦对肾脏的保护作用

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )受体拮抗剂 (ARB)替米沙坦和血管紧张素转换酶抑制剂 (A CEI)苯那普利对负鼠近端小管上皮细胞 (OK细胞 )增殖和Na+ K+ ATP酶活性的影响。方法　培养的OK细胞采用低渗方法制备细胞膜悬液 ,以BCA 10 0蛋白质定量测定试剂盒测定膜蛋白 ;Na+ K+ ATP酶活性采用孔雀绿比色分析法测定释放的无机磷 (Pi)含量 ,培养液中分别加入AngⅡ、AngⅡ +替米沙坦、AngⅡ +苯那普利 ,观察其对OK细胞Na+ K+ ATP酶活性的影响。结果　①对照组Na+ K+ ATP酶活性为 (0 .0 896± 0 .0 0 6 6 )μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,1× 10 -10 mol/LAngⅡ组为 (0 .0 972± 0 .0 0 81) μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,活性明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;培养液中同时加入 1× 10 -10 mol/LAngⅡ和 1× 10 -9mol/L替米沙坦时为 (0 .0 6 2 3± 0 .0 0 5 3) μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,较 1× 10 -10 mol/LAngⅡ组明显降低 (P <0 .0 5 ) ;培养液中同时加入1× 10 -10 mol/LAngⅡ和 1× 10 -9mol/L苯那普利为 (0 .10 2 7± 0 .0 0 17) μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,与 1×10 -10 mol/LAngⅡ组的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。②AngⅡ对OK细胞DNA合成有刺激作用 ,随着浓度的升高(1× 10 -10 ～ 1× 10 -6mol/L)作用     

铁对白细胞介素-2舒血管效应的调制作用

目的 :研究微量元素铁对白细胞介素 - 2 (IL- 2 )舒血管效应的调制作用及其机理。方法 :采用离体主动脉环灌流模型 ,在苯肾上腺素 (1μmol/ L)预收缩基础上 ,测定经柠檬酸铁胺 (FAC)处理后 IL- 2对血管张力的变化 ;用分光光度法测定血管一氧化氮合酶 (NOS)活性。结果 :FAC(0 .1～ 10μmol/ L )孵育 30 min后对血管的张力无影响 ,却能浓度依赖性的抑制 IL - 2 (1～ 10 0 0 U/ ml)的舒血管效应 (P<0 .0 5～ 0 .0 1)。 IL - 2 (1、10、10 0、10 0 0 U/ ml)单独作用后的血管张力分别为加药前的 (78.4 7± 4 .31) %、(6 6 .86± 5 .5 5 ) %、(5 2 .6 2± 4 .5 1) %和 (4 2 .39± 4 .2 7) %。10 μmol/ L FAC预处理后再加 IL- 2 ,血管张力为 (89.81± 1.94 ) %、(86 .13± 3.11) %、(77.16± 5 .6 6 ) %和 (6 8.76± 5 .6 9) %。L-精氨酸 (1mmol/ L)孵育取消了 FAC对 IL- 2舒血管效应的抑制作用。IL- 2 (10 0 0 U/ ml)使 NOS的活性从 (9.86± 0 .5 4) U/ ml prot显著增高为 (2 2 .10± 1.87) U/ ml prot。FAC(10 μmol/ L)单独孵育 30 min NOS的活性为 (10 .5 9± 0 .5 9) U/ ml prot,但是 FAC预处理再加 IL - 2后 ,NOS活性显著降低为 (15 .71± 0 .89) U/ ml prot;高钙 (2 .5 mmol/ L )预处理 ,不改变 FAC对     

血管生成抑制因子1对胶质母细胞瘤的治疗作用及其机制的实验研究

目的探讨脑组织特异性血管生成抑制因子1(BAI1)对胶质母细胞瘤的治疗作用及其作用机制。方法采用COS-TPC法进行BAI1-腺病毒载体的构建,病毒重组子的成功构建和对肿瘤细胞的转染通过RT-PCR来验证。采用立体定向的方法将胶质母细胞瘤细胞U87MG接种于裸鼠脑内,待肿瘤形成后向瘤内注射病毒重组子AdeBAI1(AdeBAI1组)或AdeLacZ(Mock)(AdeMock组),两组均为6只裸鼠。观察裸鼠的存活时间。用AdeBAI1或AdeMock转染3个胶质母细胞瘤细胞系SW1783、U87MG和U373MG,48h后收集细胞,用MTT方法进行活细胞计数。用Trizol试剂提取总RNA。用RT-PCR方法研究BAI1及其他血管生成相关因子的mRNA的表达。结果BAI1mRNA的表达仅见于AdeBAI1转染的细胞中。颅内胶质母细胞瘤治疗结果显示,AdeBAI1组平均生成期为(26·0±4·6)d,AdeMock治疗组为(17·3±2·3)d,两组比较P<0·05。AdeBAI1组转染后细胞计数为(2·12±0·18)×105、AdeMock组为(4·23±0·18)×105,两组比较P<0·05。提示胶质母细胞瘤细胞的增殖可被BAI1抑制。AdeBAI1转染后血管生成相关因子Angiostatin和VEGF的表达降低,而VEGF-B和TSP1的表达升高。结论肿瘤内注射AdeBAI1可以抑制胶质母细胞瘤的生长。BAI1的表达升高可以影响其他血管生成相关因子的表达。BAI1的表达升高可以抑制肿瘤细胞的增殖作用。BAI1的抗肿瘤作用可能来自于抑制血管生成以及抑制肿瘤细胞的增殖两个方面。     

降钙素基因相关肽对缺氧状态下培养的血管内皮细胞的影响

目的　观察不同浓度的降钙素基因相关肽 ( CGRP)对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞的影响 .方法　用培养的人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧模型 ,观察血管内皮细胞在缺氧状态下细胞膜流动性 ,5 1铬释放率 ,台芬蓝摄取率和细胞内钙 ,镁含量的变化以及 1× 10 - 9,1× 10 - 8,1× 10 - 7mol.L- 1 CGRP对血管内皮细胞的影响 .结果　 1× 10 - 9,1×10 - 8,1× 10 - 7mol.L- 1 CGRP可降低缺氧 12 0 min时细胞膜流动性 ,5 1 铬释放率 ,台芬蓝摄取率及减少细胞内镁的丢失 ,1× 10 - 8mol.L- 1 CGRP的效果最好 .结论　 CGRP对血管内皮细胞缺氧损伤具有直接保护作用 ,在一定范围内存在浓度效应关系     

奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用

目的　探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用。方法　采用人肝癌LCI D2 0裸鼠角膜微囊移植模型 ,利用体视显微镜和显微数码摄像系统 ,动态观测奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成能力的影响。应用人肝癌LCI D2 0皮下移植瘤模型 ,采用CD34免疫组织化学SP法检测肿瘤标本微血管密度 (MVD) ,观察奥曲肽对人肝癌诱导的肿瘤血管生成和皮下移植瘤生长的影响。结果　LCI D2 0肝癌组织移植裸鼠角膜微囊能够诱导角膜新生血管形成 ;与对照组相比 ,奥曲肽组动物角膜新生血管芽生延迟 ,新生毛细血管网稀疏、生长缓慢 ;术后第 7、9、12、15、18、2 1天 ,奥曲肽组人肝癌诱导的角膜新生血管积分比对照组减少 (P <0 0 5 )。奥曲肽对LCI D2 0皮下肿瘤生长具有抑制作用 ,免疫组化研究表明 ,治疗组肿瘤内MVD(2 1 7± 4 2 7)比对照组MVD(31 8± 3 87)减少 (P <0 0 1)。结论　生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成具有抑制作用 ,可能为肝癌的治疗提供一个新的途径。     

氟尿嘧啶抗血管生成作用的实验研究

目的：探讨氟尿嘧啶(5-FU)的抗血管生成作用。方法：以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代培养模型，MTT法测定5-FU对HUVEC增殖的影响；采用鸡胚尿囊膜血管形成模型(CAM模型)，观察5-FU对鸡胚尿囊膜新生血管的抑制作用。结果：5-FU在非细胞毒浓度下可在体外抑制HUVEC的增殖，在体内抑制鸡胚尿囊膜新生血管形成。结论：5-FU在非细胞毒浓度下具有抗血管生成作用。     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨胰岛素对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响 .方法　体外进行大鼠血管平滑肌细胞的培养 ,以 5～ 10代细胞为实验对象 ,随机分成空白对照组和胰岛素组 ,胰岛素组又按浓度 1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6 mol· L- 1分为 4小组 ,在加药后 2 4 h、4 8h和 72 h用 MTT法分析细胞增殖活力 ,免疫细胞化学观察细胞核增殖抗原 (PCNA)的表达 ,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口末端标记法检测 H2 O2 诱导的细胞凋亡 .结果　加药 4 8h后 ,1× 10 - 9mol· L- 1胰岛素组的 MMT A值 (0 .4 2± 0 .0 4 )高于空白组(0 .30± 0 .0 2 ) ,P<0 .0 5 ,低于 1× 10 - 6 mol· L- 1 胰岛素组(0 .5 2± 0 .0 5 ) ,P<0 .0 5 ;1× 10 - 9mol·L- 1胰岛素作用 4 8h后细胞的 MMT A值比空白组增加 4 0 % ,高于 2 4 h细胞的MMT A值增加率 (2 7% ) ,P<0 . 0 5 ;1× 10 - 9～ 1× 10 - 6mol· L- 1 胰岛素作用 4 8h后细胞 PCNA的表达率 (5 0 %～80 % )均高于空白对照组的 (30 % ) P<0 .0 5 ;加药 2 4 h后 ,1× 10 - 6 mol· L- 1胰岛素组细胞凋亡率 (30 % )低于空白组(70 % ) P<0 .0 5 .结论　胰岛素有明显促 VSMC(vascularsmooth m uscle cells)增殖的作用 ,并且这种作用时间和浓度依赖性 ;同时胰岛素     

益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞VEGF及MMP2表达的影响

目的观察益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2表达的效应。方法制备接种肿瘤细胞的绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）模型,采用血清药理学方法制备益气养阴方含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与9．0g／L氯化钠注射液（normal saline,NS）血清组对照。另外,用U14子宫颈癌细胞悬液经肌肉接种小鼠,观察小鼠实体瘤质量、抑瘤率、肺部转移率、肺部转移瘤生长情况。应用免疫组织化学及其组织形态学定量分析方法对VEGF和MMP2在肿瘤细胞中的表达进行研究。结果益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成,与NS组比较差异具有显著性。益气养阴方组肺部转移结节较模型组明显减少,VEGF和MMP2的表达均明显低于对照组,差异有显著性。结论益气养阴方对肿瘤血管形成有明显抑制作用,降低VEGF和MMP2的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。     

白藜芦醇与半边旗二萜类化合物5F对活体血管生成的影响

目的:观察白藜芦醇(Res)、半边旗二萜类化合物5F(以下简称5F)对活体血管生成的影响。方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验,检测Res和5F对活体血管生成的影响。结果:与对照组相比,Res用药组(11.4μg/egg、45.7μg/egg)的血管生成抑制率分别为(32.2±3.6)%、(53.7±4.2)%,5F用药组(8.3μg/egg、33.2μg/egg)血管生成抑制率分别为(19.7±4.0)%、(36.5±3.0)%。结论:Res和5F可抑制活体血管生成,对肿瘤和其他病理情况下的抗血管治疗可能具有重要应用价值。     

替代激活的单核细胞促进人乳腺癌细胞SKBR3的生长侵袭

目的 研究不同激活状态的单核细胞在乳腺癌发展中的作用,探索肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌中的作用机制.方法 体外分离培养人外周血单核细胞,分为经典激活、替代激活、空白对照3组,分别采用细菌脂多糖IL-4、培养基进行相应激活.48～72 h后,采用RT-PCR、与人乳腺癌细胞株SKBR3共培养、建立鸡胚尿膜囊血管生成模型等方法检测各组TNF-α、AMAC-1、β-actin mRNA表达的差异,观察3种不同活化状态的单核巨噬细胞对乳腺癌细胞生长的影响以及对肿瘤诱导新生血管形成的影响.结果 经典激活组高表达TNF-α,替代激活组则高表达AMAC-1,3组间分子标志物的表达差异具有统计学意义(P＜0.05).共培养实验显示经典激活的单核细胞呈现出明显抑瘤效应,3 d后效应明显高于其他两组(P＜0.05),替代激活的单核细胞则在第5天开始呈现出明显促肿瘤效应(P＜0.05).在鸡胚尿囊膜血管生成模型中,替代激活的单核细胞可以明显促进肿瘤新生血管的生成(5733±14.82),与经典激活(20.44±6.50)及未激活组(32.22±8.33)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-4可以促进人外周血单核细胞向替代激活的方向分化并高表达替代激活的分子标志物AMAC-1,而替代激活的单核巨噬细胞在与肿瘤细胞的共培养中可以促进肿瘤细胞的生长以及刺激肿瘤新生血管的生成.提示肿瘤相关巨噬细胞在体内很可能主要以替代激活的方式存在,从而直接或间接地促进了肿瘤的进展.     

椿皮对鸡胚尿囊膜血管生成的影响

目的:研究收涩中药椿皮对鸡胚尿囊膜血管生成的影响。方法:建立鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,观察椿皮含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果:椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用。结论:椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成具有抑制作用。     

过表达VEGF对垂体瘤血管生成的作用研究

目的探讨过表达血管内皮生长因子(VEGF)对垂体瘤微血管生成的影响。方法用携带VEGF165基因的腺病毒质粒转染垂体瘤MMQ细胞,并建立稳定的过表达VEGF165的MMQ细胞株。制备鸡胚尿囊膜血管生成模型(CAM),观察过表达VEGF165 MMQ细胞的上清液对CAM血管生成的影响。分别接种过表达VEGF165 MMQ细胞、空载体细胞和正常MMQ细胞于裸鼠皮下并形成皮下移植瘤。CD31免疫荧光法检测过表达VEGF基因对裸鼠皮下MMQ细胞移植瘤微血管密度的影响。结果大部分转染组细胞镜下呈现绿色荧光,RT-PCR和Western blot证实转染携带VEGF165基因的腺病毒质粒(Adv-GFP-VEGF165)的MMQ细胞中目的基因能够有效表达。VEGF过表达能够诱导CAM局部血管生成,并显著增加MMQ细胞裸鼠皮下移植瘤的微血管密度。结论 VEGF在垂体瘤血管生成过程中起重要作用。     

一种新的检测鸡胚尿囊膜血管生成的方法

目的：建立一种利用高铁氰化钾法检测鸡胚尿囊膜（CAM）血管生成的方法.方法：分离发育期鸡胚尿囊膜并将其匀浆,加入高铁氰化钾溶液,用紫外分光光度计测量A值,通过标准品计算样品中血红蛋白的含量.结果：采用该方法测定了发育7及9d的鸡胚尿囊膜血红蛋白含量,以及中等强度静磁场对不同发育阶段新生血管的抑制效应,而且与体视显微镜结果一致.结论：高铁氰化钾法是一种实用的可定量检测鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的实验方法.     

通心络促血管生成作用的实验研究

目的　探讨中药通心络对鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)模型血管生成作用的影响。方法　运用血清药理学的方法制备药物血清 ,鸡胚随机分为空白血清组、贝复济组及通心络大、小剂量组 ,检测尿囊膜的血管增生程度。结果　通心络大剂量组CAM的血管增生数明显高于空白血清组 (P <0 .0 5) ,而与贝复济组无明显差异 (P >0 .0 5) ;通心络小剂量组与空白血清组相比无明显差异 (P >0 .0 5)。结论　通心络可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生 ,具有一定的促血管新生作用     

龙葵碱对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的：建立人结肠癌鸡胚移植模型,研究龙葵碱对其血管生成的影响。方法将鸡胚分为对照组和低剂量组、中剂量组、高剂量组（均n＝10）,将培养的人结肠癌细胞系HT‐29细胞株接种到鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上,通过立体显微镜、Image‐proplus6．0图像分析软件及免疫组织化学苏木精‐伊红（HE）染色法,观察移植瘤在CAM上血管生成的特点,及不同龙葵碱剂量对血管生成的影响。结果HT‐29细胞接种到CAM第3～5天,大量血管向瘤体集中,长入或跨越瘤体表面,肿瘤迅速生长。给药后第5天进行拍照,图像分析,定量计算血管新生面积明显低于对照组,且呈剂量依赖性,各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。免疫组织化学检测表明不同剂量龙葵碱的微血管密度明显低于对照组,与血管新生面积相一致;ki‐67抗原表达指数逐渐下降,实验组低于对照组,且各组间差异有统计学意义（P＜0．01）。结论龙葵碱能明显抑制人结肠癌HT‐29细胞株诱导的血管生成,从而抑制肿瘤的生长,为抗肿瘤血管生成的治疗方面提供了重要依据。     

FGF10对鸡胚尿囊膜血管形成的影响

目的 研究纤维母细胞生长因子FGF10对鸡胚尿囊膜血管生长作用,探讨FGF10对血管形成的影响.方法 应用胶原蛋白共培养方法,将FGF10(100 ng/ml)单独或与FGF受体拮抗剂SU5402(20μmol/L)作用于鸡胚尿囊膜血管内皮细胞组织块,观察FGF10对新生血管形成的影响.结果 与空白对照组比较,FGF10组新生血管形成面积显著增加(P<0.001).SU5402可抑制FGF10的作用,与空白对照组比较,其新生血管形成面积显著下降(P<0.001).结论 FGF10能促进鸡胚尿囊膜新生血管的形成.     

转人内皮抑素基因双歧杆菌液抑制血管生长的实验观察

目的：研究转人内皮抑素基因双歧杆菌液对血管生长的抑制作用，并观察其对动物移植性肝癌Heps的抑瘤作用。方法：以小鼠移植性肝癌Heps建立肿瘤模型；分别进行灌胃和尾静脉注射给药，同时用转人内皮抑素基因双歧杆菌液做鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验，在解剖显微镜下计数血管条数，用图像分析仪定量分析血管密度。实验动物处死后，称瘤重并计算抑瘤率。结果：转基因双歧杆菌液高、中、低3个剂量组的抑瘤率分别为49.78%、45.81%和30.41%；普通双歧杆菌组抑瘤率为10.9%，尾静脉注射转基因双歧杆菌组抑瘤率为58.3%；CAM实验显示转基因双歧杆菌液可明显抑制血管的生成。结论：转基因双歧杆菌有良好的抑制血管生长和抑制肿瘤生长的作用，且其作用有量效关系。