PPARβ/δ在兔动脉粥样硬化模型中的表达及作用

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome Proliferators-activated Receptor,PPAR）-β/δ在兔动脉粥样硬化模型中的表达水平和作用方式。方法 35只雄性新西兰大白兔分为对照组（5只）、高脂组（15只）和球囊损伤组（15只）,后两组进一步分为6周、8周、10周组,每组5只。实时定量PCR（Real-time Quantitative PCR）用来检测PPARβ/δm RNA的水平,免疫组织化学法（Immunohistochemistry,IHC）和蛋白质印迹法（Western Blotting,WB）检测PPARβ/δ蛋白的表达,酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA）测定兔血清中炎症因子肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α,白介素（interleukin,IL）-6,IL-8和IL-10的水平。结果 高脂组和球囊损伤组的PPARβ/δ蛋白质和m RNA水平与对照组相比显著增加（P〈0.01）。此外,高脂组PPARβ/δ蛋白质水平在6-10周增加显著（P〈0.01）,PPARβ/δm RNA在8-10周组之间有显著性差异,6-8周组之间也有明显差异（P〈0.05）。PPARβ/δ蛋白质和m RNA水平在球囊损伤组各亚组之间差异显著（P〈0.01）,而且,球囊损伤组PPARβ/δ的表达水平比同一时间点的高脂组明显增加（P〈0.01）。高脂组和球囊损伤组,血清TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10的水平与对照组相比明显上升。结论 PPARβ/δ可能参与动脉粥样硬化的进程并发挥重要作用。     

阻断PPARβ/δ途径对阿托伐他汀抑制衰老心肌细胞中MMP-9表达的影响

目的：观察阻断过氧化物酶增殖物激活型受体β/δ（peroxisome proliferator activated receptor β/δ,PPARβ/δ）信号通路对阿托伐他汀抑制老年大鼠心肌细胞基质金属蛋白酶 9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法：分离培养24个月龄大鼠的心肌细胞,将培养的心肌细胞分为空白对照组、溶剂对照组、阿托伐他汀组及PPARβ/δ拮抗剂GSK0660＋阿托伐他汀组,4组细胞依次分别加入细胞培养液、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）、阿托伐他汀及阿托伐他汀＋GSK0660处理。用RT-PCR方法检测各组大鼠心肌细胞中MMP-9 mRNA表达水平,用Western blot方法检测各组大鼠心肌细胞的MMP-9蛋白的含量。结果：①与空白对照组相比,溶剂对照组大鼠心肌细胞中MMP-9 mRNA表达水平和其蛋白含量均无显著差异,阿托伐他汀组心肌细胞中MMP-9 mRNA表达水平和其蛋白含量均显著降低（P〈0.01）;②GSK0660＋阿托伐他汀组心肌细胞中MMP-9 mRNA表达水平及其蛋白含量均显著高于阿托伐他汀组（P〈0.05或P〈0.01）,但仍低于空白对照组（P〈0.05）。结论：阿托伐他汀可激活PPARβ/δ信号通路下调衰老心肌细胞中MMP 9的表达。     

阿托伐他汀通过PPARβ／δ信号通路下调衰老心肌TNF-α表达的研究

目的：观察阿托伐他汀下调老年大鼠心肌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的作用及其与过氧化物酶体增殖物激活型受体β／δ（PPARβ／δ）信号通路之间的关系。方法：分离培养24个月龄大鼠的心肌细胞,将心肌细胞分为空白对照组、溶剂对照组、阿托伐他汀组、阿托伐他汀＋PPARβ／δ拮抗剂GSK0660组。各组细胞分别加入细胞培养液、二甲基亚砜（DMSO）、阿托伐他汀、阿托伐他汀＋GSK0660处理。用RT—PCR方法检测各组大鼠衰老心肌细胞的TNF-αmRNA表达水平,用westernblot方法检测各组TNF-α蛋白含量。结果：（1）与空白对照组相比,溶剂对照组大鼠衰老心肌细胞的TNF-α mRNA和蛋白水平均无显著差异;（2）与空白对照组相比,阿托伐他汀组的TNF-α mRNA和蛋白水平含量均显著降低（P〈0．01）;（3）阿托伐他汀＋GSK0660组的TNF-α mRNA表达水平及蛋白含量均显著高于阿托伐他汀组,但仍低于空白对照组（P〈0．05）。结论：阿托伐他汀可通过激活PPARβ／δ信号通路下调衰老心肌细胞TNF—d的表达。     

阿托伐他汀对冠脉介入治疗术后血清单核细胞趋化蛋白-1和单核细胞受体γ的影响

目的 探讨阿托伐他汀对冠脉介入治疗（PCI）术后血清单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和单核细胞过氧化物酶增殖体激活型受体γ（PPARγ）的影响.方法 接受PCI的96例急性冠状动脉综合征（ACS）患者,随机分为高剂量组和低剂量组各48例;分别给于阿托伐他汀钙片40 mg和10 mg,每晚口服.于术前、术后24小时和术后10天以酶联免疫吸附法测定患者血清MCP-1、MMP-9和PPARγ水平.结果 两组患者MCP-1、MMP-9水平术后24小时较术前升高（P均＜0.01）,术后10天较术后24小时降低（P均＜0.01）,高剂量组下降更显著,恢复到术前水平.两组PPARγ水平术后24小时较术前升高（P均＜0.01）,术后10天进一步升高（P均＜0.01）,高剂量组明显高于低剂量组（P＜0.01）.两组MCP-1/PPARγ比值术后24小时较术前升高（P均＜0.01）,术后10天下降（P均＜0.01）,高剂量组较低剂组下降更显著（P＜0.01）.结论 ACS患者PCI使用大剂量阿托伐他汀促进MCP-1、MMP-9、MCP-1/PPARγ下降和PPARγ水平升高.     

非诺贝特对过氧化物酶体增殖物激活受体α和单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的观察非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法体外培养HUVEC株,第3~5代用于实验。实验分3组:1空白对照组;2ox-LDL组(100 mg/L);3非诺贝特组:先将非诺贝特10、50、100μmol/L分别作用于内皮细胞24 h,然后加ox-LDL(100 mg/L)作用于细胞24 h。采用细胞酶联免疫吸附法分析检测细胞培养上清液PPARα、MCP-1含量;采用四唑盐比色法检测各孔的吸收度(OD),以评价增殖效果。结果与空白对照组比较,100 mg/L ox-LDL促进内皮细胞增殖(PO.01),非诺贝特呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的内皮细胞增殖(P0.01)。100 mg/L ox-LDL促进MCP-1分泌。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC分泌PPARα(P0.01),促进效应呈浓度依赖性。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显抑制ox-LDL诱导的HUVEC分泌MCP-1(P0.01),抑制效应呈浓度依赖性。结论非诺贝特呈剂量依赖性促进ox-LDL诱导的人HUVEC分泌PPARα,抑制人HUVEC分泌MCP-1,抑制内皮细胞增殖,保护内皮功能,从而发挥贝特类调脂外抗动脉粥样硬化作用。     

肿瘤坏死因子α对肾小管上皮细胞PPARγ及辅调节因子表达的影响

目的：探讨在肿瘤坏死因子α（TNF-α）介导的炎症反应中PPARγ及其辅调节因子,包括辅激活因子SRC/p160家族（steroid receptor coactivators/p16family,包括SRC-1、SRC-2、SRC-3）、PGC-1（PPARγcoactivator-1）以及辅抑制因子NCoR（Nuclear receptor corepressor）和单核细胞趋化因子（monocyte chemotactic protein,MCP-1）的表达水平变化,分析其中相互作用机制。方法：体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2）。用TNF-α分别在不同浓度和不同时间点刺激HK-2细胞,收集细胞总mRNA和胞核蛋白。应用Real-time QPCR法和Western蛋白印迹法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测PPARγ及其辅调节因子和单核细胞趋化因子（MCP-1）的表达变化。结果：在不同浓度的TNF-α（0~20ng/ml）刺激24h后,PPARγ、SRC-1、SRC-2、SRC-3和PGC-1均呈总体下调趋势（P〈0.05）,同时NCoR和MCP-1呈显著上调（P〈0.05和P〈0.01）。选择10ng/ml TNF-α为最适刺激浓度,作用不同的时间（0~16h）。发现PPARγ、SRC-1和SRC-2的mRNA在刺激2h后出现显著下调（P〈0.05）,分别是37%、35%和41%（P〈0.05）;而SRC-3和PGC-1mRNA水平仅在刺激1h后就出现显著下调（P〈0.05）,分别是53%和46%（P〈0.05）;NCoR则在刺激16h后出现显著上调（约为对照组的2.16倍,P〈0.01）,之后又缓慢下降;MCP-1在刺激0.5h时出现明显上调（为对照组的2.74倍,P〈0.05）,4h时达到高峰（为对照组的11倍,P〈0.01）。West-ern蛋白印迹法观察到PPARγ和SRC-2在10ng/ml TNF-α刺激4h和2h后出现明显下降。结论：TNF-α可不同程度的抑制HK-2细胞PPARγ及几种辅激活因子（SRC-1、SRC-2、SRC-3、PGC-1）的表达,同时上调辅抑制因子（NCoR）和炎症介质MCP-1的表达。提示PPARγ及其辅调节因子积极参与炎症反应,并且可能在炎症过程中对PPARγ的表达发挥共同的调节作用。     

PPARδ基因过表达对RAW264.7细胞MCP-1及VCAM-1表达的影响

目的:观察过氧化物酶增殖体激活受体δ(PPARδ)基因转染对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的鼠源性单核细胞RAW264.7中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)基因和蛋白表达的影响。方法: 构建表达人PPARδ基因的复制缺陷型腺病毒表达载体(Ad-PPARδ),并培养RAW264.7细胞。实验分为未转染的对照组、PPARδ基因转染组及假转染组。将RAW264.7细胞与ox-LDL(50 mg/L)孵育24 h后,采用RT-PCR及蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞MCP-1及VCAM-1 mRNA及其蛋白的表达。采用单核细胞趋化试验检测人外周血单核细胞在不同条件培养基中的趋化活性。结果: PPARδ基因转染组细胞中MCP-1及VCAM-1的表达明显低于对照组及假转染组(P<0.05);单核细胞移动的距离明显小于对照组及假转染组(P<0.05)。假转染组与对照组比较,MCP-1及VCAM-1的表达及单核细胞移动的距离无显著差异。结论: PPARδ基因转染能抑制ox-LDL诱导的MCP-1及VCAM-1表达,增加PPARδ的表达可能具有防治动脉粥样硬化的作用。     

过氧化物酶体增殖物活化型受体β/δ改善心肌中炎性因子的表达

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体(PPAR)β/δ的特异性激动剂GW0742体外抑制心肌肥厚作用的可能机制。方法取体外用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠的心室肌细胞,建立心肌细胞肥厚模型,以GW0742作用于肥大的心肌细胞,设立正常组、AngⅡ组、AngⅡ+GW0742组,并测量心肌细胞表面积、3H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用RT-PCR半定量测定心钠素、脑钠素及炎性因子的表达变化。结果与正常组心肌细胞比较,AngⅡ组诱导的肥大心肌细胞的表面积、3H-亮氨酸掺入、心钠素、脑钠素表达显著增加(P<0.01);AngⅡ+GW0742组在终浓度为10μmol/L时可明显逆转此改变(P<0.01);同时GW0742抑制肥大心肌细胞的基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9、白细胞介素-1β的mRNA过度表达。结论GW0742抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,其机制可能为通过调控炎性因子所致。     

磷脂酰肌醇3-激酶信号通路在姜黄素诱导肝细胞转录因子Nrf2核转位中的作用

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路在姜黄素诱导人肝细胞Nrf2核转位中的作用。方法用30μmol/L姜黄素和Wortmannin（PI3K抑制剂）干预L02肝细胞12 h,Western blot观察Nrf2核转位水平;将L02肝细胞分为对照组、模型组、干预组和抑制剂组,对照组用RPMI1640正常培养,模型组用100 U/L葡萄糖氧化酶（GO）干预2 h,干预组用30μmol/L姜黄素干预12 h后给予100 U/L GO干预2 h,抑制剂组先用0.1μmol/L Wortmannin预处理1h,余处理同干预组。流式细胞术检测细胞内活性氧簇（ROS）。分光光度法检测细胞MDA、GSH及培养液LDH水平,速率法检测细胞培养液AST的水平。结果姜黄素明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被Wortmannin部分阻断。模型组ROS、MDA、AST、LDH水平较对照组显著升高（P〈0.01）,干预组ROS、MDA、AST、LDH水平较模型组显著降低（P〈0.01）,抑制剂组ROS、MDA、AST、LDH水平显著高于干预组,低于模型组（P〈0.01）。模型组GSH水平较对照组显著降低（P〈0.01）,干预组GSH水平较模型组显著升高（P〈0.01）,抑制剂组GSH水平显著低于干预组（P〈0.01）,高于模型组（P〈0.01）。结论 PI3K信号通路是姜黄素诱导Nrf2核转位的重要信号通路,通过抑制该通路可减弱姜黄素对肝细胞氧化应激损伤的保护作用。     

LncRNA AL110200对脂多糖刺激的应答及其靶基因预测与鉴定

目的炎症反应被认为是动脉粥样硬化的始动环节，也是防止动脉粥样硬化的重要靶点。众多基因参与调控此过程，PPAR β/δ可通过参与炎症反应从而影响动脉粥样硬化。我们通过生物信息学分析发现lncRNA AL110200可能影响PPARB，8的表达，从而我们推测lncRNA AL110200可能通过调节PPAR β/δ表达从而影响动脉粥样硬化炎症反应。本研究旨在通过体外实验研究IncRNA AL110200对炎症刺激物脂多糖的应答并初步验证其靶基因。方法我们首先使用qRT—PCR检测在炎症刺激物脂多糖（LPS）刺激下IncRNA AL110200表达量的改变；然后我们再利用qRT—PCR检测了IncRNA AL110200干扰和过表达后PPAR β/δ mRNA表达水平的改变。结果我们研究发现LPS可上调IncRNA AL110200（1.85倍，P〈0．001）和PPAR β/δ（2．67倍，P〈0．01）表达；但是无论高表达还是低表达IncRNA AL110200都不影响PPAR β/δ的表达。结论综上所述，我们的研究发现，动脉粥样硬化炎症刺激物LPS可以上调lncRNA AL110200及PPAR β/δ表达，但是PPAR β/δ非lncRNA AL110200的靶基因。     

运动训练降低代谢综合征大鼠糖脂代谢的作用及机制

目的观察运动训练对代谢综合征大鼠体质量、尾动脉收缩压、空腹血糖、血脂以及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)β/δ基因表达的影响,探讨运动训练改善代谢综合征大鼠糖脂代谢的机制。方法将50只6周龄、体质量160~200g的SD(Sprague Dawley)大鼠随机分成模型组(n=25)和对照组(n=25),并采用高脂高糖饲料制备代谢综合征大鼠模型,模型组和对照组大鼠随机分成运动组和安静组(4组大鼠分别为模型+安静组、模型+运动组、对照+安静组、对照+运动组)。运动组大鼠在动物跑台上运动8周。检测各组大鼠的体质量、内脏脂肪质量、尾动脉收缩压、空腹血糖、血脂以及骨骼肌、脂肪和肝脏组织PPARβ/δmRNA表达量。结果模型组25只大鼠有19只出现代谢综合征变化,模型成功率76%。模型+运动组大鼠的体质量、内脏脂肪质量、三酰甘油和空腹血糖水平明显低于模型+安静组[三酰甘油:(0.70±0.04)比(1.57±0.43)mmol/L;空腹血糖:(5.05±0.30)比(5.63±0.27)mmol/L,均P0.05]。模型+运动组大鼠的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显高于模型+安静组(P0.05);低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平与模型+安静组差异无统计学意义。模型+安静组大鼠的PPARβ/δmRNA表达量较对照+安静组显著降低(均P0.01)。模型+运动组的PPARβ/δmRNA表达量较模型+安静组上调(P0.05或P0.01)。对照+运动组的PPARβ/δmRNA表达量较对照+安静组上调(P0.01)。结论运动训练能够上调高脂高糖喂食诱导的代谢综合征大鼠的骨骼肌、肝脏、脂肪组织的PPARβ/δ基因表达,这可能是运动训练降低代谢综合征大鼠体质量和改善糖脂代谢的机制之一。     

LX-2细胞中PPARγ对iNOS的影响及其抗肝纤维化作用

目的研究LX-2细胞中PPARγ和i NOS的动态变化及关系,探讨PPARγ抗肝纤维化机制。方法体外培养LX-2细胞,实验分4组:PPARγ激动剂组;PPARγ拮抗剂组;联合干预组;空白对照组。分别加入干预药物培养48小时,采用MTT法检测细胞增殖率;RT-PCR法测各组PPARγ、i NOS m RNA表达;硝酸还原酶法测NO含量;ELISA法测上清液的Ⅰ型胶原、αSMA的含量。结果 1MTT结果示:激动剂组的LX-2增殖抑制作用明显,与联合干预组、抑制剂组及空白对照组相比,具有显著性差异(aP=0.000,bP=0.007,cP=0.003)。2RT-PCR结果示:激动剂组PPARγm RNA的表达较其他3组明显升高(dP=0.005,eP=0.004,fP=0.008);激动剂组i NOS m RNA的表达较其他3组明显降低(aP=0.001,bP=0.003,cP=0.000);且PPARγ与i NOS m RNA表达呈负相关(相关指数为r=-0.8870,P=0.0080)。3硝酸还原酶结果示:激动剂组NO含量(44.89±13.01)μmol/L明显低于其他3组,具有显著性差异(aP=0.001,bP=0.000,cP=0.003)。4ELISA检测结果示:激动剂组Ⅰ型胶原含量(31.807±1.680)ng/ml、α-SMA的表达量(23.351±2.801)ng/ml与其他3组相比,具有显著性差异(aP=0.007,bP=0.009,cP=0.005,dP=0.004,eP=0.003,fP=0.003)。结论 PPARγ激动剂可以上调PPARγ的表达,抑制LX-2增殖,下调i NOS m RNA表达,减少NO产生,降低Ⅰ型胶原及α-SMA分泌,发挥抗纤维化作用;并发现PPARγ与i NOS m RNA的表达具有负相关关系。     

新诊断2型糖尿病患者趋化因子转录和蛋白表达的定量研究

测定了48例无并发症的T2DM和50例正常对照的单核细胞趋化蛋白（MCP-1）和白介素8（IL-8）的mRNA和蛋白质表达量。MCP-1和IL-8的mRNA表达量,T2DM组高于正常对照组 MCP-1的mRNA和蛋白质表达量,口服糖负荷后均比空腹状态升高（P均〈0.05）。血糖与MCP-1水平正相关（P〈0.05）,OGTT2h血糖与IL-8mRNA水平正相关（P〈0.01）。新诊断T2DM患者趋化因子的转录和蛋白表达均升高。     

罗格列酮治疗脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的实验研究

目的：探讨激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）对脂多糖（LPS）诱导小鼠急性肺损伤的保护作用及可能的机制。方法：将6~8周的BALB/c小鼠15只随机分成3组,每组5只。对照组小鼠气管内滴注无菌磷酸缓冲盐溶液60μL,作用24h;LPS模型组小鼠气管内滴注1mg/mLLPS60 μL,作用24h;罗格列酮治疗组小鼠在气管内滴注LPS前24h和0.5h给予罗格列酮（PPARγ激动剂）灌胃(20mg/kg)预处理,再气管内滴注1mg/mLLPS60μL,作用24h。观察各组小鼠肺组织病理组织学变化,支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞总数及中性粒细胞变化, 采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中促炎性细胞因子TNF-α和高迁移率族蛋白-1（HMGB1）的浓度,免疫印迹法（Western Blot）检测肺组织中晚期糖化终产物受体(RAGE)蛋白表达变化。结果：与对照组比较,在LPS诱导的小鼠模型中,组织病理学显示大量炎性细胞浸润,肺组织结构明显被破坏,BALF内细胞总数、中性粒细胞数、促炎性细胞因子TNF-α显著升高(均P＜0.01),而采用罗格列酮预处理小鼠明显抑制LPS诱发的上述改变。与对照组比较,LPS模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中HMGB1水平明显升高(P＜0.01),Western Blot检测肺组织匀浆RAGE的表达明显增加(P＜0.05),而罗格列酮预处理小鼠后,LPS诱发的HMGB1/RAGE的上调被显著抑制。结论：激活PPARγ可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路对LPS诱导急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征起保护作用。     

丹参多酚酸盐对单核细胞分化为泡沫细胞过程中清道夫受体A表达的干预作用

使用佛波醇酯（PMA）诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞，将其分为对照组、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）组、ox-LDL＋丹参多酚酸盐组（低、中、高浓度组），应用流式细胞仪测定巨噬细胞SR-A表达水平。结果镜下观察到单核细胞株THP-1在PMA诱导下转变为泡沫细胞；ox-LDL处理组SR-A蛋白表达水平较对照组明显增加（P〈0.01）；丹参多酚酸盐组较其他两组均明显减弱（P均〈0.01），且随浓度增加SR-A表达明显减弱（P均〈0.01）。认为ox-LDL能够明显刺激巨噬细胞表达SR-A，丹参多酚酸盐能够下调ox-LDL刺激的巨噬细胞表达SR-A，可能是其抗动脉粥样硬化斑块形成的机制之一。     

Oridonin对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素(oridonin)对脂多糖/D-氨基半乳糖氨(LPS/D-Gal)联合诱导的急性肝衰竭(ALF)小鼠肝细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法取25只小鼠,随机分成5组,每组5只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、LPS/D-Gal诱导模型组、LPS/D-Gal诱导和不同剂量oridonin干预组及oridonin处理组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞凋亡,采用real-time PCR法检测肝组织TNF-αm RNA水平,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果模型组小鼠肝细胞凋亡率为(36.4±1.8)%,显著高于两个oridonin干预组的[(19.4±3.3)%和(11.4±0.3)%,P0.01];模型组小鼠肝组织TNF-αm RNA水平显著高于正常对照组(P0.01),而两个oridonin干预组肝组织TNF-αm RNA水平显著低于模型组(P0.01);模型组小鼠线粒体凋亡通路相关的促凋亡蛋白c-Jun氨基末端激酶(JNK)、bax、细胞色素C、cleaved caspase9/3活化水平显著高于两个oridonin干预组(P0.01),模型组小鼠抗凋亡蛋白bcl-xl水平显著低于两个oridonin干预组(P0.01),模型组小鼠死亡受体凋亡通路相关的促凋亡蛋白caspase8活化水平与两个oridonin干预组并无明显差异(P0.01)。结论 Oridonin可抑制LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与下调促凋亡细胞因子TNF-α水平和抑制JNK介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

Orionin对急性肝衰竭小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响

目的探讨冬凌草甲素(Oridonin)对脂多糖/D-氨基半乳糖氨(LPS/D-Gal)联合诱导的急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响。方法取150只小鼠,随机分成5组,每组30只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、Oridonin对照组、LPS/D-Gal诱导模型组和LPS/D-Gal处理及不同剂量Oridonin干预组。采用Real-time PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平。结果模型组小鼠48 h存活率为0.0%(0/30),而两个Oridonin干预组小鼠48 h存活率分别提高至64.5%(19/30)和80.6%(24/30,P0.01);组织病理学检查显示模型组小鼠肝细胞呈大块或/和亚大块坏死,肝小叶结构消失,残存肝细胞肿胀、空泡变性,肝窦肿胀充血,炎细胞浸润。Oridonin干预组小鼠肝细胞坏死、空泡变性和炎细胞浸润等较模型组有明显的改善;模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为(345.3±54.1)U/L和(500.2±53.5)U/L,明显高于对照组的[(42.3±0.6)U/L和(117.1±9.8)U/L,P0.01],两个Oridonin干预组分别为(303.9±39.5)U/L和(340.6±2.8)U/L及[(130.2±38.3)U/L和(209.8±36.2)U/L,P0.05];模型组小鼠肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著高于正常对照组(P0.01),而两个Oridonin干预组肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著低于模型组(P0.01)。结论 Oridonin对LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与降低肝组织细胞因子水平有关。     

PPARγ激动剂抑制脂多糖诱导肾小管上皮细胞分泌趋化因子及机制

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对脂多糖(LPS)诱导的趋化因子表达的影响及可能机制。方法:用15d-PGJ2(5μM)预处理人近端肾小管上皮细胞2h后加入LPS(1μg/ml),与LPS组、15d-PGJ2组及未加任何刺激组进行比较。用Real-time PCR方法检测IL-8和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达水平;用ELISA法检测细胞上清中IL-8和MCP-1蛋白水平;通过RNAi技术沉默肾小管上皮细胞PPARγ,观察15d-PGJ2的作用是否依赖于PPARγ;用间接免疫荧光法观察NF-κB在细胞内的定位;用Western blot法检测胞质中IκB的磷酸化水平。结果:在HK-2细胞中,与对照组相比,LPS刺激4h使IL-8 mRNA及蛋白分别升高(5.67±1.83)和(1.62±0.12)倍,使MCP-1 mRNA及蛋白分别升高(5.24±1.33)和(2.25±0.40)倍,且胞质中IκBα磷酸化水平明显增加(P0.05)。与LPS组相比,15d-PGJ2+LPS组,IL-8和MCP-1表达在mRNA水平分别下降74.23%和79.42%,在蛋白水平分别下降69.03%和49.44%,差异有统计学意义;在PPARγ沉默的HK-2细胞中,与LPS刺激组相比,15d-PGJ2使IL-8和MCP-1表达在mRNA水平分别下降59.21%和44.08%,在蛋白水平分别下降47.11%和39.40%(均P0.05),并明显抑制LPS诱导NF-κB核易位,下调IκBα磷酸化水平。结论:15d-PGJ2可抑制LPS诱导的趋化因子表达,且不完全依赖于PPARγ,可能与抑制IκBα磷酸化有关。     

人参皂苷Rb1通过抑制PI3K/AKT信号通路保护脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应

目的探究人参皂苷Rb1在脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞炎症反应中的作用及分子机制。方法建立LPS诱导的H9C2心肌细胞炎症反应模型。在用1μg/ml的LPS诱导H9C2心肌细胞炎症反应前,使用100μM人参皂苷Rb1或1μM PI3K抑制剂Wortmannin预处理1 h,2 h后收集细胞样本。利用q PCR检测白介素-6(IL-6),白介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的m RNA表达水平;用ELISA试剂盒检测细胞上清IL-6,IL-1β,TNF-α的蛋白表达;用WB实验检测p-AKT和AKT的表达水平。结果人参皂苷Rb1显著抑制LPS诱导的IL-6,IL-1β,TNF-α的m RNA(P0.001)和蛋白(P0.001)表达水平;人参皂苷Rb1显著抑制LPS诱导的PI3K/AKT信号通路的激活(P0.001);PI3K抑制剂Wortmannin也能显著抑制LPS诱导的p-AKT表达水平以及IL-6,IL-1β,TNF-α的m RNA(P0.001)和蛋白(P0.001)表达水平。结论人参皂苷Rb1通过抑制PI3K/AKT信号通路阻止LPS诱导的心肌细胞炎症反应。     

丹酚酸 A 通过调节 Wnt/糖原合酶激酶3β/β－连环蛋白通路保护缺血性脑损伤大鼠

目的：探讨丹酚酸 A（salvianolic acid A, SAA）对缺血性脑损伤大鼠的保护作用及其可能机制。方法54只成年雄性 Sprague－Daw ley 大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和 SAA 组,每组18只。采用线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞模型。 SAA 组在模型制作后0 h和6 h腹腔注射 SAA （3 mg/kg）,其余各组注射等体积生理盐水。模型制作后24 h进行神经功能缺损评分,应用2,3,5－氯化二苯四氮唑染色检测脑梗死体积。采用 TUNEL 染色法检测细胞凋亡,免疫组化染色及蛋白质印迹法检测缺血皮质 Wnt3a、β－连环蛋白和磷酸化糖原合酶激酶3β（phospho－glycogen synthase kinase 3β, p－GSK－3β）表达。结果神经功能缺损评分显示,假手术组未见神经功能缺损（评分为0分）,SAA 组神经功能缺损评分（中位数和四分位数间距）较脑缺血组显著降低[（3（2~3）分对4（3~5）分;Z =－2.679,P =0.007]。假手术组无梗死灶, SAA 组梗死体积较脑缺血组显著缩小[（79.038±10.665）mm3对（212.702±8.029）mm3;t =24.525,P <0.001]。假手术组仅见极少数阳性细胞,SAA组和脑缺血组 TUNEL 阳性细胞数量分别为（29.667±1.366）个/HP和（63.333±0.894）个/HP,前者显著少于后者（t =14.115,P <0.001）。免疫组化染色显示,假手术组、脑缺血组和 SAA 组 Wnt3a 阳性细胞数量分别为（35.500±2.572）个/HP、（18.056±3.765）个/HP和（29.000±2.376）个/HP,3组间存在显著性差异（F =115.972,P <0.001）,而且 SAA 组显著多于脑缺血组（P <0.01）;假手术组、脑缺血组和 SAA 组 p－GSK－3β阳性细胞数量分别为（7.944±2.127）个/HP、（37.444±3.434）个/HP和（11.222±1.734）个/HP,3组间存在显著性差异（F =730.580,P <0.001）,而且 SAA 组显著少于脑缺血组（ P <0.01）;假手术组、脑缺血组和 SAA 组β－连环蛋白阳性细胞数量分别为（26.722±26.722）个/HP、（16.556±1.854）个/HP 和（21.333±1.940）个/HP,3组间亦存在显著性差异（ F =33.385,P <0.01）,而且 SAA 组显著多于脑缺血组（P <0.01）。蛋白质印迹分析显示,假手术组、脑缺血组和 SAA 组 Wnt3a 表达水平分别为1.000±0.190、0.800±0.185和1.198±0.262,3组间存在显著性差异（F =9.621,P <0.001）,而且 SAA 组显著高于脑缺血组（P <0.01）;假手术组、脑缺血组和SAA 组 p－GSK－3β表达水平分别为0.650±0.150、1.290±0.250和1.190±0.250,3组间亦存在显著性差异（F =19.668,P <0.001）,而且 SAA 组显著高于脑缺血组（P <0.01）;假手术组、脑缺血组和SAA 组β－连环蛋白表达水平分别为1.200±0.210、0.500±0.120和1.100±0.220,3组间存在显著性差异（F =33.385,P <0.001）（P <0.01）,而且 SAA 组显著高于脑缺血组（P <0.01）。结论 SAA 对缺血脑损伤大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与上调 Wnt3a 和β－连环蛋白表达以及下调 p－GSK－3β表达有关。