水龙骨体外抗肝癌作用研究

目的 研究水龙骨对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的生长增殖抑制作用.方法 制备水龙骨含药血清,用MTT法观察细胞增殖情况.结果 水龙骨含药血清在体外对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721均有抑制作用,对HepG2的最高抑制率为87.4%,对SMMC-7721的最高抑制率为85.9%,抑制肝癌细胞的效果优于含5-氟尿嘧啶血清.结论 水龙骨对肝癌细胞的体外增殖有明显的抑制作用.     

健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对VEGF表达的影响

目的:探讨健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用体外培养SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-FU组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,荧光定量PCR检测VEGF-mRNA在细胞中的表达。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,抑制VEGF-mRNA的表达;而以化疗药5-FU组作用最强,健脾柔肝汤中、高剂量含药血清组次之,且作用相当。结论:健脾柔肝方含药血清可有效诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,其作用机制可能是通过抑制VEGF-mRNA的表达而实现的。     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。     

抗癌扶正方及含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用

目的:探讨抗癌扶正方的抗肝癌作用。方法:提取抗癌扶正方,使用药物及含药血清,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养,分光光度计检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响。结果:抗癌扶正方及药物血清,具有良好的抑肝癌细胞生长作用,尤以1、10mg/mL剂量组效果最佳,作用程度与化疗药物类似。结论:抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机制有必要进一步深入探讨。     

小半夏加茯苓颗粒含药血清体外对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响

目的: 采用血清药理学的方法,观察小半夏加茯苓颗粒对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用。 方法: 设空白对照组、环磷酰胺(CTX)组、原方汤剂组及颗粒剂不同剂量组,分别制备成含药血清与体外培养的肝癌SMMC-7721细胞共孵,倒置显微镜观察各组SMMC-7721细胞生长形态变化以及用MTT法检测其细胞增殖抑制率。 结果: 与空白对照组比较,CTX组、原方汤剂组以及颗粒不同剂量组均使SMMC-7721细胞生长形态发生明显改变,细胞生长不良,细胞数量减少;MTT实验结果显示CTX组、汤剂组、颗粒不同剂量组对SMMC-7721细胞作用24 h、48 h、72 h后,细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.05)。各时段内各中药组对细胞的抑制率均低于CTX组(P<0.05),原方汤剂组与颗粒大剂量组无显著差异(P>0.05)。 结论: 小半夏加茯苓颗粒含药血清对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用,且其作用呈现时间-效应关系和剂量-效应关系。     

消癌解毒方诱导人肝癌SMMC-7721细胞miRNA表达变化

目的:探讨消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及微小核糖核酸(microRNA,miR)-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p,miR-182-5p表达谱的影响。方法:将12只雄性大耳白兔随机分为4组,分别为消癌解毒方高、中、低剂量(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)组和空白组,各组分别给予消癌解毒方及生理盐水灌胃4 d。4 d后于颈动脉中取血清并配制培养基。用消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清及空白血清的培养基处理人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖活性、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法验证人肝癌细胞SMMC-7721中miR-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p和miR-182-5p的表达水平。结果:经过12,24,48 h后,消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖均存在抑制作用。随着消癌解毒方含药血清浓度的增加,其对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制率也相应增加。其中高剂量组含药血清的抑制效果最好,其干预12,48 h的吸光度A较同期空白组明显降低(P0.05)。高剂量组干预24 h A比同期空白组显著降低(P0.01),该组抑制率为42.86%。Real-time PCR证实消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清的培养基能诱导miR-25-3p,miR-182-5p表达下调,诱导miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p表达上调。且高剂量组的调控作用较空白组更显著(P0.01)。结论:消癌解毒方可能通过诱导miRNA表达谱的改变而参与抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,但其具体机制仍有待进一步研究。     

蜂王浆冻干粉对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响

目的观察蜂王浆冻干粉对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响。方法体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721,MTT比色法观察蜂王浆冻干粉水溶液及蜂王浆冻干粉含药血清对其增殖的影响。结果蜂王浆冻干粉水溶液能促进人肝癌细胞系SMMC-7721增殖,呈剂量依赖性。而蜂王浆冻干粉含药血清则能抑制该细胞的增殖,其抑制效应亦呈剂量依赖性。结论蜂王浆冻干粉的抗癌效应可能是其代谢产物或刺激机体产生的活性物质所致。     

MTT法检测牛黄参胶囊对HepG2细胞增殖影响的实验研究

观察牛黄参胶囊对体外培养的人肝癌细胞HepG2的影响。方法制备牛黄参胶囊含药血清（NHS）,MTT法检测不同浓度含药血清对肝癌细胞HepG2的影响。结果 20%浓度含药血清能明显抑制HepG2细胞增殖。结论 NHS含药血清对体外培养的人肝癌细胞HepG2具有抑制作用,能促进肝癌细胞HepG2的凋亡。     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

黄连-大黄-肉桂复方及其组分对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞增殖的影响

目的观察黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞增殖的影响,并从PI3K/AKT-FOXO3a通路探讨其作用的分子机制。方法体外培养人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞,采用MTT法分别检测复方和复方中黄连、大黄、肉桂各自主要有效成分小檗碱、大黄素和桂皮醛不同配伍的肝癌细胞增殖;进一步以复方及有效组分最佳配伍(简称"组分")作用肝癌细胞24h,RT-qPCR检测PI3K、AKT和FOXO3a mRNA表达,Western blot检测PI3K p110、AKT、p-AKT、FOXO3a和p-FOXO3a蛋白表达。结果复方、小檗碱、大黄素和桂皮醛对肝癌细胞增殖具有抑制作用,并有较明显的量效和时效关系,小檗碱、大黄素和桂皮醛最佳配伍比例分别为44、23、46μmol/L;与对照组比较,复方和组分均能显著上调人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞FOXO3a mRNA表达,PI3K mRNA表达也呈上调趋势,SMMC-7721细胞AKT mRNA表达显著下调,但组分使HepG2细胞AKT mRNA表达显著上调;复方和组分均可抑制PI3K p110、AKT及p-AKT蛋白表达,显著促进FOXO3a蛋白表达,对p-FOXO3a蛋白表达有抑制趋势。结论复方和组分均能抑制SMMC-7721、HepG2细胞增殖,其抗肝癌作用可能与PI3K/AKT的抑制和FOXO3a的激活有关。     

正交设计优选丹参-人参组分抗肝癌配伍研究

目的:优选丹参-人参活性组分抗肝癌优化配伍并对其作用机制作初步研究。方法:以人肝癌细胞SMMC-7721为研究对象,人正常肝细胞L-O2为对照,采用CCK-8法以对肝癌细胞增殖抑制和正常肝细胞保护作用为筛选指标,正交设计优选丹参-人参活性组分抗肝癌有效组合,确定优化配伍;应用实时细胞分析技术(RTCA DP)检测丹参-人参组分优化配伍对肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞L-O2增殖的影响,并进行时效关系考察;采用Annexin V/PI双染法经高内涵细胞成像系统(HCS)检测丹参-人参组分优化配伍对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。结果:丹参-人参组分配伍抗肝癌SMMC-7721细胞的优化组合为丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖,其配伍剂量分别为10,10,5 mg·L-1;优选的丹参-人参组分配伍能显著抑制肝癌细胞的增殖,呈现时间依赖性,而对正常肝细胞的增殖抑制作用不明显;丹参-人参组分优化配伍能诱导肝癌细胞凋亡,对正常肝细胞的凋亡无显著影响。结论:丹参-人参组分优化配伍具有潜在的特异选择性抗肝癌作用,其机制与抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞凋亡相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯烷基化衍生物合成及其体外抗癌活性

目的:设计合成表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)烷基化程度较高的衍生物,对其进行简单构效分析,并对衍生物抑制肝癌细胞增殖的药理活性进行初步筛选,旨在选出结构较稳定药效较好的EGCG衍生物。方法:以EGCG,(CH_3CH_2O)_2SO_2为原料,通过乙基化反应合成EGCG衍生物,采用噻唑蓝(MTT)法,细胞密度1×10~8/m L,将EGCG衍生物3,4稀释成4个浓度,对SMMC-7721细胞其质量质量浓度分别为60,80,100,150 mg·L~(-1)和30,40,50,60 mg·L~(-1),对Hep G2细胞其质量浓度为60,80,100,150 mg·L~(-1)和20,30,40,50 mg·L~(-1),作为药物组,并设空白组,每个浓度组设4个复孔,加药后继续培养24 h,测定乙基化EGCG对肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2的影响。结果:合成4个EGCG衍生物,其结构通过~1H-NMR,~(13)C-NMR,~2DNMR,质谱等方法进行结构鉴定,均为未见文献报道的新化合物,乙基化EGCG产物3,4对肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2增殖均有抑制作用。结论:乙基化EGCG产物3,4对肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2均有抑制作用,其中4的抑制作用比EGCG明显增强。     

原卟啉钠体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用

目的:研究原卟啉钠(NAPP)体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用。方法:通过对人正常肝细胞株QSG-7701细胞的药物毒性实验筛选出NAPP对人正常肝细胞无明显毒性的最大无毒浓度(TC0)。以TC0为起始浓度,10倍梯度稀释成5个不同的NAPP浓度,作用于体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,通过MTT比色法测定NAPP对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;经倒置光学显微镜和Hoechst33258染色倒置荧光显微镜进行形态学观察,计数凋亡细胞,并计算凋亡指数(AI);采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标流式凋亡检测试剂盒经流式细胞仪检测SMMC-7721细胞凋亡和坏死率。结果:不同浓度NAPP作用后,SMMC-7721细胞的增殖明显受到抑制,A值明显降低(P<0.05或P<0.01),且抑制率呈一定的浓度-时间依赖性;光学显微镜下见细胞个数明显减少,细胞密度明显变稀,细胞形态发生了明显变化,很多细胞间的连接消失,细胞变圆、皱缩或见细胞外形变长呈长梭形;荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变,AI显著升高(P<0.05或P<0.01);经流式细胞仪检测,可见SMMC-7721细胞凋亡和坏死率不同程度升高。结论:NAPP在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有一定的抑制增殖、促进凋亡和坏死的作用。     

镰形棘豆提取物抗肝癌的体内外活性研究

目的：探讨镰形棘豆提取物的体内外抗肝癌活性,并探讨其可能的机制。方法：采用MTT法检测镰形棘豆提取物对SMMC-7721细胞的增殖抑制,采用PI单染法和AnnexinV-FITC／PI双染法进行流式细胞仪检测,测定细胞周期和凋亡率,观察H22荷瘤小鼠的体内肿瘤抑制作用。结果：MTT实验表明,镰形棘豆提取物EOOF和FOF有效抑制肿瘤细胞SMMC-7721的增殖,并呈一定的剂量依赖性,其IC50值分别为0．115和0．097mg·mL^-1。TFOF作用SMMC-7721细胞后可使细胞周期停滞于G1期,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性。镰形棘豆提取物FOF能明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,低、高剂量组的抑制率分别为56．1％和70．8％（P〈0．01）。结论：镰形棘豆提取物FOF能抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,并对H22荷瘤小鼠有肿瘤生长抑制作用。显示镰形棘豆具有较好的发展为抗肝癌药物的前景。     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

槲芪散及其君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响

目的:研究槲芪散及其君药槲寄生对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的槲芪散及其君药槲寄生提取物作用于人肝癌细胞(SMMC-7721)后,用四甲基偶氮唑比色法(MTT)检测SMMC-7721细胞增殖。用实时荧光定量PCR法检测SMMC-7721的端粒酶活性。结果:(1)MTT结果显示槲芪散、槲寄生多糖和总碱能抑制SMMC-7721细胞,随药物作用时间的延长作用增强。(2)槲芪散、槲寄生多糖和槲寄生总碱能明显降低SMMC-7721端粒酶的活性。结论:槲芪散及槲寄生多糖和总碱均能抑制SMMC-7721增殖,降低SMMC-7721端粒酶的活性。