结缔组织生长因子在人视网膜色素上皮细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变中的作用

目的　研究结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）在人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）中的作用。方法　采用ＣＣＫ-８细胞计数试剂盒测定４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理后的ＡＲＰＥ-１９细胞以及稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞的增生情况。采用细胞划痕实验评估ＣＴＧＦＲＮＡｉ对ＡＲＰＥ-１９细胞迁移的影响,同时测定稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞中ＣＴＧＦ、ＦＮ、ＭＭＰ-２和α-ＳＭＡ的表达水平以评估ＣＴＧＦ对于ＴＧＦβ１诱导的ＥＭＴ作用。结果　４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理组ＡＰＲＥ-１９细胞与未接受ＣＴＧＦ处理组细胞之间以及ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照ｓｉＲＮＡ组之间的细胞倍增时间均存在显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。正常培养ＡＲＰＥ-１９细胞组修复划痕的时间（≤４８ｈ）显著少于ＣＴＧＦＲＮＡｉ靶向干扰处理组（≥７２ｈ）。以ＴＧＦ-β１诱导ＥＭＴ,ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照组比较,ＣＴＧＦ、α-ＳＭＡ、ＦＮ和ＭＭＰ-２表达均显著下调。此外,外源性ＣＴＧＦ可单独诱导ＡＲＰＥ-１９细胞α-ＳＭＡ表达增加。结论　ＣＴＧＦ能够促进ＡＲＰＥ-１９细胞增生,而ＣＴＧＦＲＮＡｉ不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ＡＲＰＥ-１９细胞的迁移。此外,ＣＴＧＦ可通过上调α-ＳＭＡ表达水平而增强ＡＲＰＥ-１９细胞对于ＴＧＦ-β１的反应,ＣＴＧＦＲＮＡｉ可使ＴＧＦ-β１诱导的ＥＭＴ减弱。     

三磷肌醇,环磷酸腺苷对视网膜色素上皮功能影响的研究进展

视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）胞膜上具有特异性受体，能辨认视细胞外节膜盘（ｒｏｄｏｕｔｅｒｓｅｇｍｅｎｔ，ＲＯＳ）上的特异性配体，受体与配体相互作用，ＲＰＥ细胞内三磷肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＩＰ３）的水平增高，可促使ＲＰＥ对ＲＯＳ的吞噬。另外，ＲＰＥ胞膜上的毒蕈碱受体与其激动剂作用后也可促使ＲＰＥ细胞内ＩＰ３的增高及对ＲＯＳ吞噬的增强。环磷酸腺苷（ｃｙｃｌｉｃａｄｅｎｙｌａｔｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｃＡＭＰ）则作用相反，ＲＰＥ细胞膜上存在β２肾上腺素能受体，其受体激动剂可刺激ＲＰＥ细胞内ｃＡＭＰ浓度的迅速升高，抑制ＲＰＥ的吞噬功能。ＩＰ３和ｃＡＭＰ之间是否有拮抗作用目前尚不清楚。ｃＡＭＰ还抑制ＲＰＥ细胞的趋化、迁移、和增殖，其机制不明。另外，ｃＡＭＰ通过促进ＲＰＥ胞膜上ＮＡ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶的活性及抑制ＣＬ－由视网膜向脉络膜的转运而抑制视网膜下液的转运。     

生长因子对培养人眼视网膜色素上皮细胞增殖的调控作用

目的探讨生长因子对人眼视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞增殖的调控作用。方法建立人眼ＲＰＥ细胞培养体系，利用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和细胞计数观察表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ－ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂ－ＦＧＦ）、胰岛素样生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＩＧＦ－Ｉ）对培养ＲＰＥ细胞的作用。结果（１）ＥＧＦ，ｂ－ＦＧＦ，ＩＧＦ－Ⅰ与对照组比较，可明显增强人眼ＲＰＥ细胞ＤＮＡ合成６．６～１２．２倍，增强能力为ＥＧＦ＞ｂ－ＦＧＦ＞ＩＧＦ－Ⅰ。（２）当生长因子联合作用时，可数倍明显增强３Ｈ－ＴｄＲ掺入，能较单一因子更有效地刺激人眼ＲＰＥ增殖。结论结果提示，生长因子的协同作用可能是增殖性视网膜病变发生的重要机理之一。     

转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的　探究转化生长因子-β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β２,ＴＧＦ-β２）诱导人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）层细胞上皮-间质转分化中ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达变化及意义。方法　使用不同浓度ＴＧＦ-β２刺激ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ,ＦＮ）、神经钙粘连蛋白（ｎｅｒｖｅｃａｌｃｉｕｍａｄｈｅｓｉｏｎｐｒｏ-ｔｅｉｎ,Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达。采用ＲＴ-ＰＣＲ检测不同浓度ＴＧＦ-β２及不同时间ＴＧＦ-β２（５μｇ·Ｌ－１）刺激ＲＰＥ细胞后ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达。结果　ＴＧＦ-β２刺激后的ＲＰＥ细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内（１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１）,随着ＴＧＦ-β２浓度的增加ＦＮ、Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ及相应ｍＲＮＡ随之增加,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ-β２在一定浓度范围内（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,在ＴＧＦ-β２浓度为５μｇ·Ｌ－１时ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达量最低。ＴＧＦ-β２在一定时间范围内（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ）以时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ组与０ｈ相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　一定范围内ＴＧＦ-β２以剂量和时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达,为进一步研究ｍｉＲＮＡ-２９ｂ与ＴＧＦ-β２在ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。     

EGF促进RPE细胞β2肾上腺能受体诱导的cAMP形成：受体间交互作用分析

研究证实表皮生长因子(EGF)不影响培养人眼视网膜色常上皮(RPE)细胞cAMP的基础水平，但促进异丙肾上腺索激活β₂受体后诱导cAMP水平升高的效应，井呈量效信赖关系。EGF对腺嘌呤核苷A₂受体激动剂NECA诱导cAMP水子升高的效应没有明显影响．细胞增殖分析表明，EGF刺激人眼RPE细胞增殖，而DibutyrylcAMP和异丙肾上腺素抑制RGF刺激增殖的效应。结果提示，在人眼RPE细胞EGF和β₂受体之间存在受体间交互作用． （中华眼底病杂志，1995，11：25-27）     

培养大鼠视网膜色素上皮细胞5－HT_2受体分析

利用培养大鼠视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞，我们观察了多种受体激动剂／拮抗剂对ＲＰＥ细胞内第二信使磷酸肌醇（ＩｎｓＰｓ）水平的影响。结果表明，５－羟色胺（５－ＨＴ）及５－ＨＴ２受体激动剂如α－甲基－５－羟色胺、Ｑｕｉｐａｚｉｎｅ、和ＤＯＩ（１－［２．５ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ－４－ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ］－２－ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｃ）均刺激大鼠ＲＰＥ细胞［３Ｈ］－ＩｎｓＰｓ形成，５－ＨＴ刺激［３Ｈ］－Ｉｎｓｐｓ形成的效应可被５－ＨＴ２受体拮抗剂Ｋｅｔａｎｓｅｒｉｎ完全阻断，而５－ＨＴ３，拮抗剂ＭＤＬ７２２２２对之无阻断作用。５－ＨＴ的效应还可被蛋白激酶Ｃ激活剂ＰＭＡ（４β－ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｃ１３－ａｃｅｔａｔｅ）部分抑制。结果清晰表明，在大鼠ＲＰＥ细胞存在着与Ｉｎｓｐｓ信使通路相偶联的５－ＨＴ２受体。     

8—氯腺苷对生长因子诱导的视网膜色素上皮细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨８氯腺苷（８ｃｈｌｏｒｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ,８ＣＬＡ）对生长因子诱导的视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞增殖的抑制作用。方法通过ＲＰＥ细胞培养,采用３ＨＴｄＲ掺入测定８ＣＬＡ对肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦα）、白细胞介素１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ,ＩＬ１β）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）诱导的ＲＰＥ细胞ＤＮＡ合成的抑制作用。结果三种因子单独使用均可使ＲＰＥ细胞３ＨＴｄＲ掺入每分钟计数（ｃｏｕｎｔｐｅｒｍｉｎｕｔｅ,ＣＰＭ）值明显增高（Ｐ＜０．０５）,８ＣＬＡ在其终浓度为２～１６μｍｏｌ／Ｌ时可使三种因子刺激的ＲＰＥ细胞３ＨＴｄＲＣＰＭ值明显降低（Ｐ＜０．０５）。在ＴＮＦα、ＩＬ１β、ｂＦＧＦ和８ＣＬＡ组,分别于１６、８、２μｍｏｌ／Ｌ时,ＣＰＭ值与基础值相近（Ｐ＞０．０５）。结论８ＣＬＡ可抑制生长因子诱导的ＲＰＥ细胞增殖,为抗增殖药物提供了新的途径     

PD98059和LY294002对非酶糖基化终产物诱导人RPE细胞表达VEGF的影响

目的　观察ｐ４４／４２ＭＡＰＫ激酶抑制剂ＰＤ９８０５９和ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ激酶抑制剂ＬＹ２９４００２对非酶糖基化终产物（ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃａｔｉｏｎｅｎｄ-ｐｒｏｄｕｃｔｓ,ＡＧＥ）诱导的人视网膜色素上皮细胞株ＡＲＰＥ-１９细胞表达血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的影响。方法　分别用不同浓度ＡＧＥ和ＡＧＥ作用不同时间干预ＡＲＰＥ-１９细胞,ＥＬＩＳＡ方法检测ＡＲＰＥ-１９细胞外ＶＥＧＦ蛋白表达水平,免疫细胞荧光法检测磷酸化ｐ４４／４２和Ａｋｔ的表达;以ＰＤ９８０５９和（或）ＬＹ２９４００２预处理ＡＲＰＥ-１９细胞后再用ＡＧＥ干预,并测定ＡＲＰＥ-１９细胞外ＶＥＧＦ水平、磷酸化ｐ４４／４２和Ａｋｔ活性。结果　随着ＡＧＥ浓度或作用时间增加,ＡＲＰＥ-１９细胞表达ＶＥＧＦ外增加,ＡＧＥ浓度为１００ｍｇ?Ｌ－１或作用８ｈ时达高峰,表达水平分别为（３０４．５５±２０．５１）ｎｇ?Ｌ－１、（２９３５４±１３．９８）ｎｇ?Ｌ－１,同时ｐ４４／４２和Ａｋｔ信号分子激活。使用ＰＤ９８０５９或ＬＹ２９４００２预处理后,ｐ４４／４２和Ａｋｔ低表达,ＡＧＥ诱导的ＡＲＰＥ-１９细胞外ＶＥＧＦ表达也降低,并与ＰＤ９８０５９和ＬＹ２９４００２呈剂量依赖性,当使用２０μｍｏｌ?Ｌ－１ＰＤ９８０５９和３０μｍｏｌ?Ｌ－１ＬＹ２９４００２时,ＶＥＧＦ的表达最低,分别为（５７．３５±５．２９）ｐｇ?Ｌ－１、（８１．５１±８．１０） ｐｇ?Ｌ－１,但ＶＥＧＦ的表达量仍与ＡＧＥ浓度和作用时间呈正相关（Ｐ＜０．０１）;同时使用ＰＤ９８０５９和ＬＹ２９４００２预处理,ＡＧＥ诱导的ＶＥＧＦ表达与ＡＧＥ的作用时间无关（Ｐ＞０．０５）。结论　ｐ４４／４２ＭＡＰＫ和ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路是ＡＧＥ诱导ＡＲＰＥ-１９细胞表达ＶＥＧＦ的重要细胞内信号通路,ＰＤ９８０５９和ＬＹ２９４００２可抑制ＡＧＥ诱导的人ＲＰＥ细胞外ＶＥＧＦ表达。     

低温冷冻对培养的人视网膜色素上皮细胞内cAMP及Ca^2＋浓度的影响

目的通过冷冻培养人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞,测定冷冻前、后细胞内ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋浓度的变化,明确冷冻对ＲＰＥ细胞内ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋浓度的影响。方法在－７０℃条件下,培养的人ＲＰＥ细胞被冷冻０、１５、３０、４５、６０秒后,应用Ｆｕｒａ２／ＡＭ荧光负荷技术及内源性蛋白结合的方法测定细胞内Ｃａ２＋和ｃＡＭＰ的浓度。结果冷冻１５秒ＲＰＥ细胞的ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋水平与冷冻前比较,差异无显著性（ｔ检验,Ｐ＞０．０５）。冷冻３０、４５、６０秒与冷冻前比较,ｃＡＭＰ浓度明显下降,细胞内游离Ｃａ２＋浓度明显增高,二者呈拮抗关系。结论冷冻降低ＲＰＥ细胞内ｃＡＭＰ的浓度,使游离Ｃａ２＋浓度升高。     

BAMBI过表达抑制缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和迁移

目的　探讨过表达激活素膜结合抑制剂（ｂｍｐａｎｄａｃｔｉｖｉｎｍｅｍｂｒａｎｅ-ｂｏｕｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＢＡＭＢＩ）对缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）增殖和迁移的影响。方法　将ＲＦ／６Ａ细胞分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧＋ｐＦＬＡＧ组和缺氧＋ＢＡＭＢＩ组。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＢＡＭＢＩ的表达,倒置显微镜观察各组细胞形态和密度,ＣＣＫ-８法和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和周期情况,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞的迁移,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达。结果　与对照组相比,缺氧组细胞数目明显增多,增殖增加,培养１２０ｈ后,对照组细胞增殖倍数为５．００±０．２８,缺氧组为７．６４±０．３２（Ｐ＜０．００１）;缺氧组Ｓ期进程显著加快,占（１０．４４±２．６１）％,对照组Ｓ期占（２０．７９±２．２３）％（Ｐ＜０．０５）;细胞迁移增加,缺氧组细胞数目为３３．８０±４．２０,对照组为８．３５±２．５０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显增加（Ｐ＜０．０５）。缺氧＋ＢＡＭＢＩ组:缺氧处理的细胞转染ｐＦＬＡＧ-ＢＡＭ-ＢＩ后,与缺氧组相比,ＢＡＭＢＩ蛋白表达显著上调,细胞数目明显减少,增殖显著降低,培养１２０ｈ后,增殖倍数为５．５３±０．２７（Ｐ＜０．００１）,细胞Ｓ期受到阻滞,占（１８．７５±２．９２）％,迁移显著下降,数目为１３．００±２．８０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显下调（Ｐ＜０．０５）。结论　过表达ＢＡＭＢＩ可抑制缺氧诱导的ＲＦ／６Ａ细胞的增殖和迁移,进而有望抑制视网膜血管新生。     

EGF促进RPE细胞毒蕈碱受体诱导的磷酸肌醇形成：受体间交互作用分析

对培养人眼视网膜色素上皮（RPE）细胞磷酸肌醇（InsPs）水平的分析表明，Carbachol显著刺激RPE细胞InsPs水平的升高，且该效应可被阿托品所阻断，表明在人眼RPE细胞存在毒蕈碱受体。去甲肾上腺素、5-羟色胺、表皮生长因子（EGF）、异丙肾上腺素和NECA对InsPs基础水平无明显影响。异丙肾上腺素和NECA对Carbachol刺激InsPs的效应也无明显影响；但EGF显著促进Carbacol刺激人眼RPE细胞InsPs水平升高的效应。提示在人眼RPE细胞EGF与毒蕈碱受体之间存在有受体间交互作用。 （中华眼底病杂志，1994，10：220-222）     

增殖性视网膜病变玻璃体切割物的细胞学及免疫组化研究

目的探讨不同视网膜增殖性疾病细胞增殖的特征及其异同。方法采用３种特异性抗原，即抗人细胞角蛋白（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ，ＣＫ），抗胶质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌａｒｙａｃｉｄｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ），抗肌动蛋白（Ａｃｔｉｎ）对２８例临床上不同的视网膜疾病的增殖膜及玻璃体切除液样本进行免疫细胞化学研究。结果增殖性玻璃体视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ，ＰＶＲ）的增殖特征以胶质细胞和视网膜色素上皮细胞（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）为主，二者在ＰＶＲ发病中作用不同。增殖性糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎａｏｐａｔｈｙ，ＰＤＲ）玻璃体内出现ＲＰＥ细胞可加剧增殖膜收缩。增殖膜血管壁上肌动蛋白含量增多可能对周细胞脱落起促进作用。结论玻璃体内细胞增殖与生长因子水平升高可能是增殖性病变日益加剧的重要机制和原因之一。     

转化生长因子-β（TGF-β）影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的研究

目的　本研究探讨转化生长因子-β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ-β）体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓ-ｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）的表达。方法　原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,ＭＴＴ法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入２０ｎｇ·ｍＬ－１ ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ＴＧＦ-β３,分别于１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ,Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ检测α-ＳＭＡｍＲＮＡ,Ｗｅｓｔｅｒｎ-ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果　与对照组相比,ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）,其中ＴＧＦ-β１促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强（Ｐ＜０．０５）;ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２和ＴＧＦ-β３均增加α-ＳＭＡ的表达（均为Ｐ＜０．００１）,ＴＧＦ-β３促进α-ＳＭＡ表达作用最强（Ｐ＜０．００１）。结论　ＴＧＦ-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。     

Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞转分化的抑制作用

目的　观察Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（贝伐单抗）对转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ）-β２诱导下的人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞转分化的抑制作用,探讨抗新生血管药物抑制青光眼术后滤过泡瘢痕化的机制。方法　用含体积分数１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ高糖型培养基对人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞株进行体外常规培养和传代。实验分为空白对照组、ＴＧＦ-β２处理组（加入终浓度为１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２ＤＭＥＭ完全培养基）及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组（加入１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２和１．０ｇ?Ｌ－１的ＢｅｖａｃｉｚｕｍａｂＤＭＥＭ完全培养基）,置于３７℃、体积分数５％二氧化碳培养箱中培养４８ｈ,并分别应用细胞免疫荧光染色技术和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验检测Ｂｅｖ-ａｃｉｚｕｍａｂ对ＴＧＦ-β２刺激下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）表达的影响。结果　α-ＳＭＡ蛋白主要表达在细胞质中,免疫荧光染色结果显示ＴＧＦ-β２处理组可以见到α-ＳＭＡ的荧光表达,而Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白表达受到抑制。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示空白对照组、ＴＧＦ-β２ 处理组及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量分别为０．６３０±０．０３８、１．１３０±０．０７１和０．３４０±０．０３３,Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量低于空白对照组和ＴＧＦ-β２处理组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ可明显抑制ＴＧＦ-β２诱导下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-ＳＭＡ蛋白的表达,抑制成纤维细胞表型转化。     

生长因子与视网膜色素上皮

一、ＲＰＥ细胞的生长因子受体随着分子生物学技术的不断发展，目前的研究已证明ＲＰＥ细胞有多种生长因子受体表达，这些受体包括ｂＦＧＦ受体〔１１〕，Ｉｎｓｕｌｉｎ、ＩＧＦ－Ⅰ和ＩＧＦ－Ⅱ受体〔１５、４１〕，ＰＤＧＦ受体〔２１〕，ＩＬ－１受体，ＩＬ－２受体，...     

血管内皮生长因子与视网膜新生血管性疾病

血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）是新近确定的一种特异性刺激血管内皮细胞增殖及新生血管形成的生长因子。视网膜血管内皮细胞存在ＶＥＧＦ高亲和受体，而且受体数目较其它组织内皮细胞多。ＶＥＧＦ的特点是它的表达受局部氧浓度的调节。视网膜血管内皮细胞、色素上皮细胞、周皮细胞、Ｍüｌｅｒ细胞均能合成并分泌ＶＥＧＦ，缺氧可上调其基因表达。ＶＥＧＦ既可刺激视网膜血管内皮细胞增殖及移行，也可诱导视网膜新生血管形成。视网膜新生血管性疾病患者玻璃体ＶＥＧＦ含量增高。组织学定位表明ＶＥＧＦ的表达主要在内核层、神经节细胞层、ＲＰＥ细胞及Ｍüｌｅｒ细胞。阻断ＶＥＧＦ的产生及生物活性，有助于治疗视网膜新生血管性疾病     

组织激肽释放酶在糖尿病视网膜病变患者血清中的变化及其调节血管新生机制

目的　检测组织激肽释放酶（ｔｉｓｓｕｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ,ＴＫＬＫ）、血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）和可溶性细胞间黏附分子-１（ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｎｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌ-１,ｓＩＣＡＭ-１）在糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）患者血清中的变化,观察ＴＫＬＫ在低氧条件下对人视网膜微血管内皮细胞（ｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＨＲＭＥＣｓ）中ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１表达的影响。方法　收集２型糖尿病患者６０例,按照ＤＲ分期标准将患者分为糖尿病无ＤＲ组（ＤＭ组）、非增生性ＤＲ组（ＮＰＤＲ组）和增生性ＤＲ组（ＰＤＲ组）,收集同期在本院体检的志愿者作为对照组,每组２０例。ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１的水平。体外ＨＲＭＥＣｓ分别进行常氧和低氧培养,不同浓度重组ＴＫＬＫ处理后,检测细胞增殖、凋亡以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达。结果　ＤＭ、ＮＰＤＲ和ＰＤＲ组患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平明显高于对照组,４组总体差异有统计学意义（Ｆ＝２８．８０５,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝３２．０４１,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝２６．１６９,Ｐ＝０．００１）;ＰＤＲ患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平显著高于ＤＭ和ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．００１）。ＴＫＬＫ与ＶＥＧＦ（ｒ＝０．６２３,Ｐ＜０．０１）和ｓＩＣＡＭ-１水平（ｒ＝０．５９８,Ｐ＜０．０１）均呈正相关。１０μｇ?ｍＬ－１ｒｈＴＫＬＫ可显著抑制低氧诱导的ＨＲＭＥＣｓ增殖以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达,并可促进细胞凋亡（Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＫＬＫ通过与ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１相互作用而影响ＤＲ的进展。     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的探索表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞促进ＤＮＡ合成的最佳刺激浓度，并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人ＲＰＥ细胞第６代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，３Ｈ－ＴｄＲ）掺入试验及放射自显影检测ＥＧＦ、ｂＦＧＦ对ＲＰＥ细胞的促ＤＮＡ合成作用。结果ＥＧＦ、ｂＦＧＦ均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含２％血清的培养液中，ＥＧＦ、ｂＦＧＦ作用最佳浓度为１ｎｇ／ｍｌ，明显低于无血清培养液中ＥＧＦ、ｂＦＧＦ作用的最佳浓度（１０ｎｇ／ｍｌ）。联合应用１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦ、１０ｎｇ／ｍｌｂＦＧＦ约提高ＲＰＥ细胞合成ＤＮＡ能力２．９６倍。结论ＥＧＦ、ｂＦＧＦ对培养的人ＲＰＥ细胞具有促进ＤＮＡ合成作用，且两者可产生协同效应。     

视网膜色素变性与血管内皮──血小板功能变化

对６５例视网膜色素变性（ＲＰ）患者和３３例正常人进行血浆血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６－酮前列腺素Ｆ（１α）（６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α））、血浆丙二醛（ＭＤＡ）、红细胞超氧化物歧化酶（ＳｏＤ），全血谷脱甘肽过氧化物酶活性（ＧＳＨ－ｐＸ）等指标的测定，发现ＲＰ患者血浆ＴＸＢ２以及ＴＸＢ＿２和６－Ｋ－ＰＧＦ１α比值Ｔ／Ｋ均较正常人升高（Ｐ＜０．０５）．６－Ｋ－ＰＧＦ１α和ＳＯＤ较正常人降低（Ｐ＜０．０１）。而ＭＤＡ、ＧＳＨ－ＰＸ无明显改变，表明ＲＰ患者病理过程中存在血管内皮──血小板功能改变以及自由基的损伤。但对ＳＯＤ与ＴＸＢ２、Ｔ／Ｋ比值、６－Ｋ－ＰＧＦ１α的相关分析表明，它们之间无相关性（Ｐ＞０．０５），表明ＲＰ患者虽有血管内皮──血小板功能紊乱，但非自由基损伤所致。     

基因重组小鼠凝血栓蛋白—1抑制大鼠内皮细胞增殖观察

目的研究凝血栓蛋白对新生血管的抑制机理。方法在体外培养的大鼠心肌微血管内皮细胞的培养液中加入基因重组小鼠凝血栓蛋白－１（ｒｅｃｏｍｂｉａｎｔｍｉｃｅｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ－１，ｒＴＳＰ１）及表皮生长因子（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃ－ｔｏｒ，ＥＧＦ），以放射性〔３Ｈ〕标记内皮细胞并测定其放射性强度，观察ｒＴＳＰ１对内皮细胞生长、增殖的影响。结果在培养内皮细胞中同时加入ＥＧＦ及ｒＴＳＰ１，细胞生长增殖受到明显抑制，单纯加入ｒＴＳＰ１对细胞生长无影响。结论ｒＴＳＰ１能够特异性地抑制ＥＧＦ诱导的培养内皮细胞的生长及增殖，其抑制作用是通过干扰ＥＧＦ等刺激因子对内皮细胞的诱导作用而实现的。