吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究

目的探讨吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制。方法按常规方法培养γδT细胞;在培养第9天的γδT细胞中加入不同浓度吡罗昔康（分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 mmol/L）诱导,24 h后收集培养上清液用于细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素12（IL-12）检测,沉淀细胞用流式细胞术测定穿孔素、粒酶B和NKG2D及用LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果吡罗昔康浓度为0.04 mmol/L时诱导的γδT细胞穿孔素和粒酶B分别为78.7%和71.8%,明显高于对照组（分别为51.4%和60.9%）。吡罗昔康能显著抑制γδT细胞NKG2D的表达,并随着药物浓度的增加作用越明显。γδT细胞经吡罗昔康诱导24 h后,培养上清液中IFN-γ和IL-12浓度与对照组比较没有明显变化;但能抑制TNF-α的分泌,并且随着药物浓度的增加抑制作用越明显。γδT细胞杀伤胃癌细胞BCG-823的活性在0.04 mmol/L时最高（75%）,明显高于对照组（58%）。结论经吡罗昔康诱导后γδT细胞杀伤BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达较高浓度的穿孔素和粒酶B有关。     

舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞机制研究

目的探讨舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的作用机制。方法常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的舒林酸（1、2、4、8、16、32μmol／L）诱导24h,收集培养上清液用于细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白细胞介素12（IL-12）检测,沉淀细胞用于穿孔素、粒酶B、NKG2D流式细胞测定和用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞株（SGC-7901和BCG-823）活性。每组测试样本和指标均设未加药物诱导的对照组。结果舒林酸浓度在8μmol／L时,γδT细胞穿孔素和粒酶B达最高[分别为（71．5±5．3）％和（78．3±7．1）％],明显高于对照组[分别为（51．4±7．3）％和（60．9±7．1）％]。γδT细胞经不同浓度的舒林酸诱导后培养上清液中IL—12和TNF-α浓度没有差异;舒林酸在8μmol／L时上清液中IFN-γ浓度达最高[（246．1±20．7）ng／L],明显高于对照组[（196．1±13．2）ng／L];当舒林酸浓度达32μmol／L时,γδT细胞分泌的3种细胞因子明显低于对照组,两者比较有显著性差异（P〈0．05）。γδT细胞经舒林酸诱导后杀伤SGC-7901和BCG-823细胞活性在8μmol／L时达到峰值,此时对SGC-7901和BCG-823的杀伤活性分别为（73．6±3．9）％和（76．3±3．9）％,与对照组[（60．1±3．7）％和（59．2±4．5）％]比较有明显差异（P〈0．05）。结论舒林酸诱导后γδT细胞杀伤SGC-7901和BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达穿孔素和粒酶B及分泌的IFN-γ有关。     

白桦脂酸对γδT细胞杀伤胰腺癌细胞功能影响及机制研究

目的:观察白桦酯酸作用前后对人γδT细胞增殖及对胰腺癌SW-1990细胞杀伤活性的影响,探讨其发生的机制。方法:分离健康者外周血单个核细胞(PBMC)在体外经多种细胞因子诱导为γδT细胞,收集培养第7天的γδT细胞,给予不同浓度白桦酯酸诱导48h,CCK8法检测白桦酯酸对γδT细胞增殖的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测胰腺癌SW-1990细胞增殖率;γδT细胞分泌细胞因子的检测;流式细胞术(FCM)检测白桦酯酸作用前后γδT细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)、NKG2D、CD107a的表达变化;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定白桦酯酸对γδT细胞杀伤胰腺癌细胞株SW-1990的活性影响。结果:白桦酯酸浓度在0.013～1.6μg/mL时能促进γδT细胞生长;经白桦酯酸诱导后的γδT细胞PFP、GrB、CD107a、NKG2DIFN-γ和TNF-а的表达显著高于对照组(P<0.05),对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性亦显著高于对照组(P<0.05)。结论:白桦酯酸在一定浓度范围内能够促进γδT细胞增殖,并增强其对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性,其机制可能与上调γδT细胞表面PFP、GrB、CD107a、NKG2D的表达和增加γδT细胞IFN-γ和TNF-а分泌有关。     

HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者外周血中TCR γδT细胞促炎细胞因子的产生及与临床指标的相关性分析

目的探讨HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者(HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)外周血中TCRγδT(γδT)细胞的比例及产生IFN-γ、TNF-α及IL-17等促炎细胞因子的能力,分析它们与临床指标间的相关性。方法入选26例HBV-ACLF患者、40例慢性HBV感染患者(CHBV)、25例健康对照者,用流式细胞仪方法检测外周血中γδT细胞的频率及产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17细胞的比例,采用SPSS 13.0统计软件分析各组间各细胞比例的差异及细胞比例与临床指标的相关性。结果 HBV-ACLF患者外周血中γδT细胞占总T细胞的比例的中位值为4.8%,低于CHB患者(10.7%)与健康对照者(10.3%),差异有统计学意义(P<0.01)。在体外经刺激后,IFN-γ阳性的γδT细胞在HBV-ACLF组的比例中位值为73.9%、CHBV组为70.9%,高于健康对照组(45.3%,P<0.01);HBV-ACLF患者中TNF-α阳性的γδT细胞中位值为26.7%,显著高于CHBV患者(11.5%)及健康对照组(11.7%,P<0.01);产生IL-17因子的γδT在HBV-ACLF组中中位值为0.7%,高于CHBV组(0.3%)及健康对照组(0.3%,P<0.01)。经Spearman Correlation相关性分析,HBV-ACLF组中TNF-α+γδT细胞的比例与ALT或AST水平呈负相关。结论虽然HBV-ACLF患者外周血中总的γδT细胞比例降低,但产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17的能力显著增强,可能参与了HBV-ACLF发病过程中炎症因子急剧升高的过程。     

CTX与MMF对伴蛋白尿过敏性紫癜性肾炎患儿 PBMCs内γδT细胞及相关因子水平的影响

目的 探究环磷酰胺(CTX)与霉酚酸酯(MMF)对过敏性紫癜性肾炎患儿伴蛋白尿外周血单个核细胞(PBMCs)内γδT细胞及相关因子水平的影响。方法 回顾性分析2019年2月至2020年12月期间我院收治蛋白尿过敏性紫癜性肾炎患儿共116例,根据治疗方法的不同将患儿分为CTX组(n=62)与MMF组(n=54),CTX组接受环磷酰胺联合激素治疗,MMF组接受霉酚酸酯联合激素治疗,治疗结束后,比较两组患儿临床疗效、γδT细胞抗原受体(γδTCR)、粒酶B以及穿孔素水平;干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及不良反应发生率。结果 MMF组的治疗总有效率为94.44%,显著高于CTX组的80.64%(P<0.05);两组接受治疗后,γδTCR、粒酶B以及穿孔素相比治疗前均出现显著下降(P<0.05),其中观察组下降更加显著(P<0.05);IFN-γ、IL-10以及TNF-α相比治疗前均出现显著下降(P<0.05),观察组下降更加显著(P<0.05),MMF患者治疗后不良反应发生率显著低于CTX组(P<...     

IL-6、IFN-γ、TNF-α、NKG2D在晚期肺癌患者中的表达及意义

目的探讨晚期肺癌患者血清白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、自然杀伤细胞活化受体2D(NKG2D)的表达及意义。方法选择2011年1月—2013年12月收治的晚期肺癌患者52例为研究对象。另选择健康者50例为健康对照组。检测受试者血清IL-6、IFN-γ、TNF-α、NKG2D水平,并对其与年龄、烟龄、病程、肺癌分期、病理类型、体质量指数(BMI)进行相关性分析。结果肺癌组患者血清IFN-γ、NKG2D水平低于健康对照组(t=10.098、8.726,P<0.01),IL-6、TNF-α水平高于对照组(t=7.262、8.978,P<0.01);不同类型肺癌之间血清IL-6、IFN-γ、TNF-α、NKG2D水平等无明显差异(t=1.272、0.098、0.978、1.079,P>0.05);不同肺癌分期血清IL-6、IFN-γ、TNF-α、NKG2D水平存在显著差异(F=6.762、9.218、10.977、11.033,P<0.01)。随着肺癌分期的增加,血清IFN-γ、NKG2D水平呈下降趋势,Ⅳ期、Ⅲ期比较差异均有显著性(P<0.01);随着肺癌分期的增加,血清IL-6、TNF-α水平呈上升趋势,Ⅳ期、Ⅲ期比较差异均有显著性(P<0.01);血清IFN-γ、NKG2D与肺癌分期呈负相关(r=-0.251、-0.315,P<0.05),血清IL-6、TNF-α表达与肺癌分期呈正相关(r=0.402、0.298,P<0.05),血清IL-6、NKG2D表达之间呈负相关(r=-0.308,P<0.05),血清IFN-γ、TNF-α表达之间呈负相关(r=-0.307,P<0.05)。结论 IFN-γ、NKG2D在肺癌患者血清中呈现低表达,而IL-6、TNF-α在肺癌患者血清中呈现上升趋势,IL-6、IFN-γ、TNF-α、NKG2D与肺癌发病及进展密切相关。     

基于结核杆菌耐热抗原小分子多肽刺激人外周血T细胞产生TNF-α和IFN-γ鉴别肺结核和潜伏性结核感染

目的 研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺结核和潜伏性结核感染的可行性.方法 以超滤离心法获得的Mtb-HAg-10k为刺激剂作用于人外周血单个核细胞(PBMCs),并以Mtb-HAg、植物血凝素PHA作为对照,用多色流式细胞术检测T细胞亚群中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例,酶联免疫斑点法检测肺结核患者和潜伏性感染者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量.结果 流式细胞术检测人外周血Mtb-HAg-10k特异性γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著高于IFN-γ产生细胞比例(P<0.01);与PHA刺激组相比,γδT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例增高(P<0.01),而αβT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例显著降低;酶联免疫斑点法检测Mtb-HAg-10k刺激的健康者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量低于Mtb-HAg刺激组和PHA对照组(P<0.01);肺结核患者IFN-γ产生细胞数量低于潜伏性结核感染者(P<0.01).结论 以Mtb-HAg-10K为刺激剂可使人外周血γδT细胞优势产生TNF-α和IFN-γ,通过酶联免疫斑点法检测PBMCs中IFN-γ产生细胞数量差异有助于鉴别肺结核和潜伏性结核感染.     

人外周血γδT细胞激活后IL-2和IFN-γ表达的特点

目的: 探讨人外周血γδT细胞在不同刺激剂激活后产生Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ的不同特点。方法: 健康成人外周血单个核细胞(PBMC)用佛波醇酯(PMA)、离子霉素(ionomycin)和抗CD28单抗(mAb)以不同组合刺激6~8h后;用流式细胞术胞内细胞因子检测法测定γδT细胞和αβT细胞IL-2和IFN-γ的表达;或用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)刺激γδT细胞加IL-2扩增3~8天后检测γδT细胞IL-2的表达。结果: PBMC经PMA+ionomycin刺激后,与αβT细胞中产生IL-2细胞(14.0%)相比,γδT细胞中极少数细胞(1.1%)表达IL-2;但分泌IFN-γ细胞在γδT细胞中(56.1%)明显多于αβT细胞(8.5%)。如加抗CD28mAb联合刺激后,IL-2产生细胞在αβT细胞中明显增加,但在γδT细胞中未见增加;而IFN-γ表达细胞在两类细胞中均有明显增加;PBMC用Mtb-Ag激活后扩增3天后在γδT细胞中开始检测到IL-2表达,第5~6天时达高峰,第8天时逐渐下降。结论: 多克隆短时刺激对PBMC中γδT细胞表达IFN-γ能力强于αβT细胞,但产生IL-2很少;MtbAg能诱导γδT细胞表达IL-2,但过程较慢。     

多发性硬化患者外周血单个核细胞IL-2、IFN-γ和TNF-α mRNA表达水平

应用逆转录／聚合酶链反应（RT／PCR）和狭缝印迹分子杂交技术，研究17例多发性硬化（MS）患者外周血单个核细胞IL-2、IFN-γ和TNF-α的mRNA表达。结果发现3种细胞因子的mRNA表达均高于健康对照组;治疗后病程处于稳定期的MS患者IFN-γ和TNF-α的mRNA表达恢复到正常水平，但IL-2mRNA仍保持高水平。此结果表明炎性细胞因子（IFN-γ和TNF-α）参与MS发病过程，并可作为MS病情缓解、复发的临床指标。     

自身γ δ T细胞治疗乙型肝炎的临床观察

目的观察γδT细胞和HepG212115细胞共培养后对其HBV复制和HBeAg表达的影响。评估用γδT细胞过继回输治疗乙型肝炎的疗效。方法在体外用异戊希焦磷酸法和IL-2激活人外周血PBMCs,细胞经10 d培养后用流式细胞术检测培养前后γδT细胞含量和Perforin、GranB、NKG2D表达量;将γδT细胞与HepG212115细胞按一定比例共孵育培养后,ELISA法测定上清中HBeAg的表达。将培养10 d的γδT细胞回输给患者;患者一个疗程接受γδT细胞总数在0.8×1010～7.0×1010。结果培养10 d时γδT细胞数为91.27%,其细胞表达的Perforin、GranB、NKG2D分别为和62.8%、72.7%和60.8%。所扩增的γδT细胞能够部分抑制HepG212115细胞中HBeAg的表达。治疗前138例HBeAg阳性者,治疗后有76例HBeAg（55.1%）转阴。总有效率为77.51%。结论γδT细胞能够降低HepG212115细胞中HBeAg表达;用自身γδT细胞过继回输治疗乙型肝炎后患者的HBeAg＋HBV-DNA转阴率达74%。该治疗无毒副作用,对乙型肝炎是一种安全有效的治疗方法。     

肺癌患者血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D的表达及临床意义

目的：探讨肺癌患者血清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、自然杀伤细胞活化受体2D (NKG2D)的表达及其临床意义。方法选择2010年1月至2013年12月期间52例肺癌患者为研究对象,其中肺鳞癌22例,肺腺癌18例,小细胞肺癌12例;肺癌Ⅰ~Ⅱ期20例,Ⅲ~Ⅳ期32例。另选择健康者56例为对照组。检测受试者血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D水平,并对血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D水平与年龄、烟龄、病程、肺癌分期、病理类型、BMI进行相关性分析。结果肺癌组患者血清IL-2、IFN-γ、NKG2D水平均低于对照组,差异均有显著统计学意义(P<0.01),而血清TNF-α水平则高于对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01);不同类型肺癌之间血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D等指标水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）,而不同分期肺癌血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D水平比较则差异均有统计学意义（P<0.05）。随着肺癌分期的增加,血清IL-2、IFN-γ、NKG2D水平呈下降趋势,且三组间两两比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);随着肺癌分期的增加,血清TNF-α水平呈上升趋势,且三组间两两比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);血清IL-2、IFN-γ、NKG2D水平与肺癌分期呈负相关(P<0.05),血清TNF-α与肺癌分期呈正相关(P<0.05);血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D等指标与年龄、烟龄、病程、病理类型、BMI等因素无明显相关性(P>0.05)。结论 IL-2、IFN-γ、NKG2D在肺癌患者血清中呈现低表达,而TNF-α在肺癌患者血清中呈现上升趋势,IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D与肺癌发病及进展密切相关,因此联合检测IL-2、IFN-γ、TNF-α、NKG2D等指标对肺癌的诊断具有重要意义。     

右美托咪定对腹腔镜胆囊切除术患者Th1、Th2、Th17和Treg细胞因子水平的影响

目的 探讨右美托咪定对腹腔镜胆囊切除术患者T辅助细胞(Th)1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)细胞因子水平的影响。方法选取行腹腔镜胆囊切除术的患者共70例,随机分为观察组和对照组。观察组术中使用右美托咪定连续输注,对照组仅采用生理盐水。对比两组麻醉诱导后（T0）、手术结束时（T1）和手术后1 h（T2）的血浆γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素(IL)-4、IL-17和IL-10的表达水平,并检测术前和术后1 h的血清C反应蛋白（CRP）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果观察组T1和T2的 IFN-γ和IFN-γ/IL-4水平均显著高于对照组,而IL-4水平显著低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;观察组T1和T2时间点的IL-17、IL-17/IL-10水平显著高于对照组,而IL-10水平显著低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,T2时间点观察组CRP、IL-6和TNF-α水平均显著低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论右美托咪定可显著增加腹腔镜胆囊切除术患者血浆IFN-γ和IL-17表达水平,减少IL-4和 IL-10的表达水平,促进对Th1/Th2和T17/Treg平衡转向Th1和Th17,从而调节免疫应答。     

滋养层抗原对流产患者PBMC增殖和产生IFN-γ、TNF-α的影响

目的 :探讨滋养层抗原 (TA)对反复自然流产 (RSA )患者外周血单个核细胞 (PBMC)增殖以及产生 IFN-γ、TNF-α的影响及意义。　方法 :通过淋巴细胞转化试验和酶联免疫吸附法 (EL ISA)测定了 2 5例 RSA患者 ,2 2例对照者外周血 PBMC经 TA诱导后的淋巴细胞转化率和培养细胞上清中的 IFN-γ和 TNF-α水平。同时对其中 7例经白细胞免疫治疗患者的 IFN -γ和 TNF-α水平进行了动态观察。　结果 :RSA患者淋巴细胞转化率和 IFN-γ、TNF-α水平显著高于对照组 (P<0 .0 5 )。7例患者治疗后的 IFN-γ和 TNF-α水平明显低于治疗前。　结论 :RSA患者妊娠失败可能与其 PBMC对滋养层抗原的增殖反应和产生 IFN-γ、TNF-α增多有关。     

鸦胆子油乳联合艾迪注射液对非小细胞肺癌化疗患者免疫功能的影响

目的研究鸦胆子油乳联合艾迪注射液治疗晚期肺癌的疗效及对患者血清IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ的影响。方法将在该院治疗的非小细胞肺癌患者纳入研究,采用随机数表法分为两组,对照组患者给予GP化疗方案,观察组患者在GP化疗方案上给予鸦胆子油乳联合艾迪注射液治疗。比较两组患者的疗效以及血清IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平。结果观察组患者的客观有效率和疾病控制率均高于对照组,无进展生存时间和总生存时间长于对照组;观察组患者的IL-6和IL-10水平低于对照组,TNF-α和IFN-γ高于对照组;IL-6和IL-10含量与TNF-α和IFN-γ含量呈负相关。结论 GP化疗方案基础上给予鸦胆子油乳联合艾迪注射液治疗有助于改善治疗效果以及患者Th1/Th2细胞功能平衡。     

不同刺激剂对健康人和结核患者外周血T细胞产生γ干扰素和肿瘤坏死因子-α的影响

目的:检测健康人和结核患者外周血经不同刺激剂刺激后T细胞亚群产生γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。方法:12名健康人和12例结核患者的外周血单个核细胞用佛波醇脂(PMA)+钙离子霉素(IM)、结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)、植物血凝素(PHA)刺激,莫能霉素阻断,流式细胞仪检测产生IFN-γ和TNF-α的T细胞亚群比例。结果:PMA+IM刺激健康人外周血αβ T细胞产生IFN-γ的比例明显高于结核患者(P<0.01);PMA+IM、Mtb-HAg和PHA刺激健康人外周血γδ T细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者(P<0.05~P<0.01)。PMA+IM和PHA刺激健康人外周血αβ T细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者(P<0.05);PMA+IM和PHA刺激健康人外周血γδ T细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者(P<0.05)。结论:经不同刺激剂刺激后,健康人γδ T细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者γδ T细胞产生IFN-γ的比例。经PMA和PHA刺激后,健康人αβ T和γδ T细胞产生TNF-α的比例高于结核患者。     

IVF-ET妊娠母胎界面免疫微环境变化特点的实验研究

目的 探究体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)妊娠母胎界面蜕膜免疫细胞中自然杀伤（natural killer, NK）细胞与γδT细胞的功能变化特征。方法 收取32例接受IVF-ET及12例自然受孕产妇的蜕膜组织,分别纳入IVF-ET组与NP(natural pregnancy, NP)组,取部分组织经石蜡包埋用于HE染色及免疫荧光染色检测;其余组织经消化、Percoll梯度离心分离出蜕膜免疫细胞（decidual immunocytes, DICs）;流式细胞术检测NP组和IVF-ET组中蜕膜NK细胞与γδT细胞的数量及其细胞表面活化标志CD69和NKG2D水平,同时检测功能性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-10以及毒性颗粒granzyme B、perforin、granulysin的表达水平,比较和分析其相关免疫学指标的变化特点。结果 组织切片经HE染色后可见蜕膜组织的典型结构,并显示有较多淋巴细胞富集;免疫荧光染色结果显示：IVF-ET组中蜕膜NK(decidual NK, dNK...     

γ-氨基丁酸及其拮抗剂对γδT细胞的作用

目的研究γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及其A受体拮抗剂印防己毒素(picrotoxin,PTX)对人外周血γδT细胞的增殖、细胞表面受体的表达、杀伤活性的影响及其可能的作用机制。方法在体外用不同浓度的GABA和PTX与人γδT细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人γδT细胞的增殖能力、T细胞表面受体的表达和杀伤活性的变化。结果 GABA能显著地抑制γδT细胞的生长(P<0.01),并具有浓度依赖性,PTX对GABA的抑制细胞增殖有拮抗作用;GABA显著降低γδT细胞表面受体NKG2D的表达,增加γδ-TCR的表达,PTX有轻微的协同作用;GABA抑制了γδT细胞对人胰腺癌细胞株SW1990的杀伤活性,PTX能够拮抗GABA的此项作用。结论这些结果提示GABA可能通过多种途径对γδT细胞发挥作用,其杀伤活性主要由其表面受体NKG2D介导的,并且需要γδT细胞同时表达γδ-TCR和NKG2D两种受体。     

祛喘汤对哮喘患者作用机制及疗效研究

目的：通过祛喘汤对哮喘患者实验组TNF-α、IFN-γ和PEF与对照组之间的比较，评价新组方祛喘汤对哮喘患者的疗效。并探讨其作用机制和理论依据以明确祛喘汤能否达到治疗哮喘之目的，能否作为临床推广应用。方法：严格按照哮喘诊断标准，选择研究对象100名并采用随机分组方法，将100名病人分为实验组50例，对照组50例，实验组采用常规治疗加祛喘汤，对照组采用常规疗。各应用一疗程并观察疗效。用药前后分别抽取100名研究对象的静脉血5ml采用双抗体夹心ELISA法测定TNF-α和IFN-γ，并用微型峰流速仪测定PEF。设计调查问卷询问研究对象的一般情况，疗效采用临床观察，用Excel软件将收集的资料和实验室结果建立数据文件。各组间定性指标比较用X^2检验，定量指标比较用t检验，两组疗效比较用X^2检验。两种疗法治疗前后对TNF-α、IFN-γ、PEF影响的比较用重复测量资料的统计分析方法。各种统计分析采用SAS6．12软件完成。结果：研究发现祛喘汤能改善患者的症状．说明祛喘汤治疗哮喘患者有效。两种疗法在治疗一个疗程后均能引起TNF-α、IFN-γ、PEF的变化。两种疗法对各指标随时间变化的趋势有影响。实验组治疗后引起三种指标的变化程度更大。祛喘汤治疗后TNF-α出现不同程度下降，IFN-γ上升，PEF明显升高，哮喘症状缓解，推测祛喘汤可能通过减轻气道炎症反应，阻断TNF-α、增加IFN-γ等细胞因子释放作用机制起作用。TNF-α由巨噬细胞、淋巴细胞和肥大细胞产生，对白细胞有趋化作用，可诱导血小板活化因子及IL-1、IL-8的释放，促进炎症细胞粘附和浸润，引起组织损伤，这可诱导气道上皮、肺泡巨噬细胞等对一氧化氮合酶表达增强。本研究结果表明TNF-α可能在哮喘气道炎症形成中起重要作用，其浓度与哮喘病情有关，口服祛喘汤后血清TNF-α下降，病情转，说明祛喘汤可抑制其合成和释放。IFN-γ主要来源于TH1细胞是抑制哮喘发病的因子，抑制TH2细胞，IFN-γ抑制IgE生成。本研究发现口服祛喘汤后患者血清IFN-γ明显上升，可能与本组方中某些敏感成分能刺激IFN-γ的生成有关。本研究结果表明TNF-α下降、IFN-γ合成增加、PEF明显增加，症状进一步缓解。结论：研究发现祛喘汤治疗哮喘患者有效。祛喘汤治疗哮喘患者有效的作用机制可能与TNF-α下降、IFN-γ增高、PEF明显增高等机制有关。未见明显的不良反应。本研究有待进一步深入研究及推广。     

环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响

目的探讨环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响。方法异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的环磷酰胺诱导γδT细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测环磷酰胺对γδT细胞增殖率的影响,LDH法检测γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测诱导前后的γδT细胞的凋亡率及NKG2D受体表达水平。结果γδT细胞培养10天时从扩增前4.21%增加到70.35%,当环磷酰胺浓度在0.05~2.0 ng/L时能够促进人γδT细胞的生长,增殖率随着该药物浓度的增高而增高,浓度大于2.0 ng/L时抑制γδT细胞的生长,γδT细胞杀伤活性与对照组比较明显增高,凋亡率与对照组比较明显降低,且γδT细胞表面NKG2D表达水平明显高于对照组。结论环磷酰胺在一定的浓度范围内,促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,抑制γδT细胞的凋亡,增强γδT细胞表面NKG2D的表达水平,为环磷酰胺在肿瘤免疫治疗中提供了一定的理论依据。     

环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响

目的探讨环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响。方法异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的环磷酰胺诱导γδT细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测环磷酰胺对γδT细胞增殖率的影响,LDH法检测γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测诱导前后的γδT细胞的凋亡率及NKG2D受体表达水平。结果γδT细胞培养10天时从扩增前4.21%增加到70.35%,当环磷酰胺浓度在0.05~2.0 ng/L时能够促进人γδT细胞的生长,增殖率随着该药物浓度的增高而增高,浓度大于2.0 ng/L时抑制γδT细胞的生长,γδT细胞杀伤活性与对照组比较明显增高,凋亡率与对照组比较明显降低,且γδT细胞表面NKG2D表达水平明显高于对照组。结论环磷酰胺在一定的浓度范围内,促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,抑制γδT细胞的凋亡,增强γδT细胞表面NKG2D的表达水平,为环磷酰胺在肿瘤免疫治疗中提供了一定的理论依据。