低氧肺动脉高压时血红素氧合酶基因表达状况的研究

目的 探讨血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)基因在低氧肺动脉高压大鼠肺动脉组织中的表达及一氧化碳(carbon monoxide,CO)对其的影响.方法 60只Wistar大鼠随机分为5组:常氧组;低氧肺动脉高压组;血晶素组;锡原卟啉组;低浓度CO组(n=12).采用紫外分光光度计、逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学染色和原位杂交进行检测.结果 ①HO-1活性:低氧组、血晶素组、低浓度CO组肺动脉组织HO-1活性以胆红素生成量计算,均升高,其中血晶素组最高,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01).②逆转录-聚合酶链反应:各组大鼠肺动脉HO-2 mRNA表达没有明显变化,均保持稳定.缺氧组、血晶素组、锡原卟啉组和低浓CO组HO-1 mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质均明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质 明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加     

CO作用后大鼠肺血管细胞增殖和凋亡状况的研究

目的：通过研究CO和低氧作用后大鼠肺血管细胞增殖和凋亡状况，探讨低氧肺动脉高压的发病机制及防治措施。方法：应用免疫组织化学，原位末端标记及Western杂交等方法检测常压低氧大鼠肺血管壁细胞增殖，凋亡及c-myc基因的表达状况。结果：正常组，低氧和锡原卟啉组，低浓度CO和血晶素组大鼠肺动脉均存在增殖和凋亡的阳性细胞，两类细胞在肺内呈不均匀散在分布，低氧和锡原卟啉组大鼠肺血管增殖细胞数显著升高而凋亡细胞数显著减少，细胞增殖凋亡比值分别为对照组的5倍或4倍，而低浓度CO和血晶素组肺血管增殖细胞和凋亡细胞系数均显著增加，细胞增殖凋亡比值均为1．2，c-myc在低氧和锡原卟啉组大鼠肺内表达显著增加，在低浓度CO和血晶素组大鼠肺内表达减少。结论：增殖和凋亡现象共存在于正常和处理大鼠的肺血管细胞中，也许c-myc等基因的异常表达导致了细胞增殖和凋亡的失衡，进而调节了慢性低氧肺血管结构的改建。     

穴位敷贴对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡及其调控基因的影响

目的探讨穴位敷贴治疗哮喘的机理。方法将40只豚鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、穴位敷贴治疗组、地塞米松治疗组,每组10只。处理结束后采用TUNEL法检测支气管肺泡组织EOS凋亡;免疫组化法检测凋亡相关基因Fas、Fas配体(FasL)、bcl-2表达。结果模型组豚鼠支气管肺组织EOS凋亡指数及Fas、FasL、bcl-2表达与正常对照组比较差异均无显著性。穴位敷贴组和地塞米松组EOS凋亡指数及Fas、FasL表达明显高于模型组(P<0.01);地塞米松组和穴位敷贴组之间有显著性差异,前者明显高于后者(P<0.01)。穴位敷贴组bcl-2表达低于模型组(P<0·05);地塞米松组和模型组之间差异无显著性。结论穴位敷贴可以上调支气管肺泡组织促凋亡基因Fas及其配体FasL表达、下调凋亡抑制基因bcl-2表达、促进哮喘主要炎性细胞EOS凋亡。这可能是其治疗哮喘的作用机理之一。     

bcl-2/bax表达在左向右分流型肺动脉高压肺血管重构中的作用

目的 研究bel-2、bax蛋白表达与左向右分流型肺动脉高压肺血管重构的关系.方法 建立左向右分流肺动脉高压大鼠模型.比较肺血管重构指标,原位杂交和Western blot检测bel-2和bax分布及表达,TUNEL法检测肺血管细胞的凋亡.结果 分流12周和16周组大鼠的平均肺动脉压力(mPAP)、右室肥大指数(RVHI)、肺小动脉中膜厚度百分比(MT%)明显高于正常大鼠(P<0.05),肺小动脉新生内膜比率显著增加(P<0.01).bci-2蛋白表达在分流12周后明显增强,分流至16周时表达最高峰(P<0.01),而bax蛋白表达显著降低(P<0.01).bcl-2/bax呈上升趋势.结论 bcl-2和bax在肺动脉上均有表达,随着bcl-2和bax比值的上调,肺血管发生重构,bcl-2/bax比值失衡可能是大鼠左向右分流PAH形成的机制之一.     

凋亡相关基因bcl-2、bax、Fas及FasL在乙型肝炎病毒相关性肝癌组织中的表达

目的 探讨原发性肝癌中乙型肝炎病毒感染与凋亡基因bcl-2、bax、Fas及FasL表达的关系。方法 采用免疫组化技术分析40例原发肝细胞癌组织中乙肝病毒表面抗原(HBsAg) 阳性组和HBsAg阴性组bcl-2、bax、Fas及FasL的表达。结果 癌组织中HBsAg阳性率为30%(12/40),癌旁组织中HBsAg阳性率为62.5%(25/40)。12例HBsAg阳性的癌组织中bcl-2和bax的阳性率比值为1：1.5(2/12: 3/12),28例HBsAg阴性的癌组织中bcl-2和bax阳性率比值为1:1.25(4/28: 5/28);25例HBsAg阳性和15例HBsAg阴性的癌旁肝细胞中bcl-2和bax的阳性率比值分别为1:3.2 (5/25：16/25) 和1:3(3/15: 9/15)。12例HBsAg阳性和28例HBsAg阴性的肝癌中Fas 和FasL阳性例数分别为6、5和1、1;25例HBsAg阳性和15例HBsAg阴性的癌旁肝细胞Fas和FasL阳性例数分别为17、5和4、3。两组间比较均有明显差异(P<0.05)。结论 肝癌组织中HBV感染与bcl-2和bax阳性表达比率无明显关系,而与Fas和FasL的表达有关。     

Survivin在先天性心脏病肺动脉高压发生机制中的作用

目的 研究抗凋亡因子存活素(survivin)在左向右分流性先天性心脏病肺动脉高压的致病过程中的作用和凋亡因素的作用机制.方法 应用免疫组化及原位缺口末端DNA标记技术,检测肺组织细胞凋亡情况.用免疫组化及Western blot检测凋亡相关蛋白survivin、bcl-2和bax的表达.结果 中、重度肺动脉高压患者肺组织血管的结构发生明显改建;先天性心脏病肺组织都有凋亡的细胞,但中、重度肺动脉高压患者凋亡细胞明显减少.Survivin、bcl-2在中、重度肺动脉高压组中表达强度明显增高,而bax表达明显减少.Survivin与凋亡及肺血管组织结构重构有明显的相关性.结论 在左向右分流血流作用下,Survivin等基因表达发生变化,使肺组织细胞凋亡减少,造成细胞堆积,参与肺血管结构改建,是肺动脉高压形成机制之一.     

兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas/FasL表达的变化

目的:观察兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas及FasL蛋白表达的变化,探讨肺损伤的可能机制.方法:健康新西兰白兔30只,雌雄不拘,运用5F Berman球囊堵塞左下肺动脉,然后球囊放气,复制肺动脉栓塞缺血再灌注模型,随机分为5组(n=6):假手术组,肺动脉栓塞1 h组、肺动脉栓塞2 h组,肺动脉栓塞2 h再灌注1 h组、肺动脉栓塞2 h再灌注2 h组;另设6只正常未手术白兔为对照组.实验结束取肺组织,测定肺组织湿/干重比,采用流式细胞分析法检测肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肺上皮细胞Fas及FasL蛋白表达的变化.结果:与对照组、假手术组相比,肺动脉栓塞1、2 h组兔肺组织细胞凋亡率明显增加,再灌注后凋亡细胞进一步增多,并随着再灌注时间延长而逐渐增多(P＜0.05或0.01);Fas及FasL蛋白表达在肺动脉栓塞及再灌注后明显上调(P均＜0.01).肺泡上皮细胞凋亡指数与肺组织湿干比、Fas及FasL蛋白表达呈显著正相关(r分别为0.769,0.820,0.820;P＜0.01).结论:肺动脉栓塞缺血/再灌注可能通过激活Fas/FasL系统,诱导肺组织细胞凋亡,从而导致肺损伤的发生.     

丹参诱导大鼠肝星状细胞凋亡作用的研究

目的 利用体外培养大鼠传代星状细胞为模型，观察丹参对星状细胞凋亡相关蛋白FasL、Fas、bax和bcl—2表达的调节作用，以进一步阐明丹参诱导星状细胞凋亡的机理。方法 大鼠星状细胞的分离采用胶原酶原位循环灌流法。星状细胞经20g／L丹参作用48h后，用免疫细胞化学法检测FasL、Fas、bax和bcl—2，用Western blot法检测bcl—2表达。结果 免疫细胞化学结果表明：星状细胞经丹参作用后FasL表达明显增强，Fas稍增加，bax明显增强，bcl—2减少；用Western blot法未能检出bcl—2。结论 丹参通过Fas途径及增加bax表达和减少bcl-2诱导肝星状细胞凋亡。     

低氧诱导因子-1β在低氧性肺动脉高压大鼠肺内表达的研究

目的 观察低氧诱导因子-1β(HIF-1β)在低氧性肺动脉高压大鼠肺内的表达，探讨HIF-1在低氧性肺动脉高压发病机制中的作用。方法 建立低氧性肺动脉高压大鼠模型，采用地高辛标记的HIF-1β cRNA探针进行大鼠肺组织的Northern杂交和原位杂交。结果 低氧4周后大鼠肺动脉压增高，肺血管壁增厚，右心室重量增加。Northern杂交和原位杂交显示：对照组肺组织偶见微弱HIF-1β mRNA表达，低氧组HIF-1β mRNA强阳性，其主要部位为支气管上皮细胞(强阳性)、支气管周围增生淋巴组织(弱阳性)和肺泡壁细胞(弱阳性)，肺动脉上皮细胞和平滑肌细胞未见阳性反应。结论 慢性低氧可导致肺动脉高压和肺血管重建；HIF-1β在低氧性肺动脉高压大鼠肺内高水平表达，可能参与了低氧所致肺动脉的病理生理改变和肺动脉高压的形成。     

凋亡相关基因在非小细胞肺癌组织中表达的研究

据《中华结核和呼吸杂志》1999年11月22卷第11期报道 廷边大学医学院附属医院魏卫等,为探讨bcl-2、bax、Fas、FasL凋亡相关基因在非小细胞啼癌组织中的表达及与肿瘤临床病     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺动脉一氧化氮合酶的实验研究

目的：研究大鼠肺动脉中一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）的含量及分布变化与慢性缺氧性肺动脉高压（ｈｙｐｏｘｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ, ＨＰＨ）发生的关系。方法：采用ｅＮＯＳ多克隆抗体,对慢性ＨＰＨ 大鼠的肺组织进行免疫组织化学分析,观察缺氧组及对照组大鼠各级肺动脉中ｅＮＯＳ含量及定位;同时应用分光光度计测定缺氧组及对照组大鼠血浆中ＮＯ的间接浓度。结果：正常大鼠肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞均含有较高的ｅＮＯＳ表达,且各级肺动脉中ｅＮＯＳ含量差异无显著性;缺氧组大鼠各级肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞ｅＮＯＳ含量均较对照组显著减少;缺氧组大鼠血浆ＮＯ间接浓度较对照组明显降低。结论：大鼠肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞ｅＮＯＳ含量下降及血浆ＮＯ浓度下降参与慢性ＨＰＨ 的形成。     

THE ROLES OF bcl-2 GENE FAMILY IN THE PULMONARY ARTERY REMODELING OF HYPOXIA PULMONARY HYPERTENSION IN RATS

Objective. To investigate the roles of apeptosis in the pulmonary artery remodeling of pulmonary hypertension secondary to hypoxia and illustrate the relative genes expression. Methods. Thirty rats were divided into hypoxia group(10%O2, 8h/d) and normal control group. On the 15th day of hypoxia, pulmonary artery pressure and fight ventricular hypertrophy index were measured and pulmonary artery vessels were studied by light microscope. Then terminal deoxynucleotidyl transferase-mediateddUTP nick-end labeling(TUNEL)technique was used to detect nucleosomal DNA fragmentation of apeptotic cells.In situ hybridization and RT-PCR were used to detect the expression level of bel-2 and bax. Results. The pulmonary artery pressure and right ventricular hypertrophy index of hypoxia group were increased significantly, the pulmonary artery wall of hypoxic group become incrassate than control group. Apeptotic cells can be found in lung with hypoxia or without hypexia. Compared with control group, apeptotic index of hypoxic group decreased significantly. Through the methods of in situ hybridization and RT-PCR, we found the expression of bel-2 increased whereas bax decreased significantly in the hypoxic group. Conclusion. The alternation in bel-2 and bax expression induced by hypoxia play an important role in the pulmonary artery remodeling which is the main pathologic change of p~monary hypertension secondary to hypoxia.     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内血管活性物质表达的变化及意义

目的: 观察慢性低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠血浆中心房钠尿肽(ANP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的表达变化.方法: 用低压、低氧的方法复制大鼠慢性HPH模型,放射免疫法检测血浆中血管活性物质ANP和CGRP表达的变化.结果: 慢性HPH大鼠血浆中血管活性物质ANP和CGRP的表达均发生了变化,呈现先降低后增高的表现, 即低氧3 wk＞正常＞低氧2 wk.结论: 在慢性HPH形成过程中,随着肺小动脉壁的增厚,血浆中血管活性物质ANP和CGRP的表达先降低后增高.其变化可能与慢性HPH过程中肺动脉压升高和肺小动脉壁的结构重建有一定关系.     

肾上腺髓质素及其受体mRNAD在低氧性肺动脉高压形成中的动态 …

目的：探讨肾上腺髓质素９ＡＭ）在低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）形成过程中的作用。方法：将大鼠随机分为对照组,低氧１,３,５,７,１０,１４,２１ｄ组。采用常压间断低氧法制作ＨＰＨ模型;放免法测定血浆和肺匀浆ＡＭ及内皮素１（ＥＴ－１）浓度;采用ＲＮＡ印迹法检测肺组织ＡＭ受体ｍＲＮＡ表达情况。结果：（１）低氧第３天,血浆ＡＭ浓度即显著升高（Ｐ〈０．０５）,至第１４天达高峰。（２）ＥＴ－１／ＡＭ比值从低氧第     

凋亡相关基因bcl-2基因族在乳腺癌中的预后作用

探讨癌基因ｂｃｌ－２及其基因族成员ｂａｘ、ｂｃｌｘ的表达水平与乳腺癌生物学行为的关系及对乳腺癌预后的意义。方法运用免疫组化方法对９１例乳腺癌石蜡组织切片ｂｃｌ－２、ｂａｘ蛋白表达水平进行检测,运用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法检测１６例新鲜乳腺癌组织标本ｂｃｌｘｌｍＲＮＡ表达水平。结果９１例乳腺癌病例中,ｂｃｌ２阳性率６５．９％（６０／９１）,ｂａｘ阳性率６４．８％（５９／９１）。ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平与凋亡指数（ＡＩ）、病理组织学分级、腋淋巴结转移情况、术后局部复发与转移相关,ｂｃｌ２表达与雌激素受体（ＥＲ）水平正相关。ＡＩ与ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平相关。对影响乳腺癌术后无病生存率的单因素分析结果显示,ｂｃｌ２、ｂａｘ蛋白表达水平具有预后作用;Ｃｏｘ’ｓ模型多因素分析结果,ｂｃｌ２蛋白表达水平是独立的预后指标。１６例乳腺癌新鲜标本中,５０％（８／１６）ｂｃｌｘｌｍＲＮＡ高表达,其表达水平与ｂｃｌ２蛋白表达、腋淋巴结转移相关。结论凋亡相关基因ｂｃｌ２、ｂａｘ、ｂｃｌｘｌ表达失调可导致乳腺癌细胞凋亡调控的紊乱,使腋淋巴结转移程度增加,ｂｃｌ２蛋白表达水平在乳腺癌中有独立的预后价值     

新型气体信号分子硫化氢对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用.方法:24只Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、低氧组(8只)和低氧 NaHS组(8只).以化学分光光度法测定血浆H2S含量;采用原位缺口末端标记方法(TUNEL)检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡,并行图像分析计算单位面积细胞凋亡率;采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Fas和caspase-3表达,并进行定位和半定量分析.结果:低氧组与对照组比较,低氧组大鼠血浆中H2S含量下降36%,应用TUNEL检测肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率减少52.9%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达增高123.9%,Fas蛋白表达减弱45%,caspase-3表达与对照组差异无显著性;低氧组与低氧 NaHS组比较,低氧 NaHS组大鼠血浆中H2S含量升高65%,应用TUNEL检测到肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率较低氧组增高62.5%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达减弱36.4%,Fas和caspase-3蛋白表达分别增高84.8%、34.5%;结论:低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,H2S可能通过抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达、增加Fas和caspase-3蛋白表达,促进低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡.     

L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将17只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=5)和低氧+L-Arg组(n=5).对大鼠肺血管进行显微形态学观测.通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达.结果:低氧2周后出现大鼠肺血管结构重建.同时,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组(P均＜0.05),平滑肌细胞Fas表达明显降低.然而,L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.低氧+L-Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组(P均＜0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强.结论:L-Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡,从而对低氧性肺血管结构重建有重要的调节作用.