流式细胞仪检测晚期肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的临床意义

目的 检测晚期肺癌患者外周血中CD4+ T细胞、CD4+CD25+ T细胞、CD4+FOXP3+ T细胞亚群,分析其在不同类型肺癌中表达的特点,以探讨在晚期肺癌患者中检测CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞的临床意义.方法 收集我院初次收治的晚期肺癌患者71例(其中鳞癌35例、腺癌33例、腺鳞癌3例)和同期健康查体正常者28例的外周血,采用流式细胞术检测外周血中相应的T细胞亚群.比较其在晚期肺癌患者与正常人之间以及不同类型肺癌中表达的差异及特征.结果 ①晚期肺癌患者CD4+CD25+ T细胞、CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+T细胞的比例分别为24.3%±7.8%和7.9%±2.1%,与对照组(19.1%±3.4%和5.9%±3.5%)相比均明显升高,差异有显著性(P＜0.01).CD4+ T细胞占总淋巴细胞的比例以及CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例与对照组相比,差异无显著性(P>0.05).②鳞癌中CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+ T细胞的比例为6.8%±1.9%,低于腺癌(7.7%±1.1%),差异有显著性(P＜0.05).结论 ①在肺癌患者外周血中,CD4+ T细胞占总淋巴细胞的比例同正常人相比无变化,CD4+CD25+ T细胞和CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+ T细胞均明显增多.②在不同类型肺癌中,CD4+FOXP3+ T细胞比例数是腺癌高于鳞癌.     

恶性胸腔积液患者T淋巴细胞亚群的变化意义

目的:探讨检测恶性胸腔积液(MPE)患者外周血(PB)和胸水(PE)中T淋巴细胞亚群(TLS)的意义及化疗前后TLS的变化. 方法:对比良性胸腔积液(BPE)、MPE患者外周血和胸水及健康正常人外周血中TLS的水平;对比MPE患者外周血和胸水中TLS的水平;对比MPE患者化疗前、后外周血和胸水中TLS的水平. 结果:TLS在胸腔积液患者外周血和胸水中分布相似;MPE患者外周血中CD8 T细胞水平高于正常人(30.6±2.4 vs 20.9±1.8,P＜0.05),CD4 T细胞相仿,CD4 /CD8 低于正常(1.78±0.21 vs 2.71±0.35,P＜0.05);与BPE患者相比,MPE患者外周血和胸水中CD4 T细胞、CD4 /CD8 较低(P＜0.05),而CD8 T细胞较高(P＜0.05);化疗后MPE患者外周血和胸水中CD8 T细胞水平明显降低(30.6±2.4 vs 24.7±2.3,31.6±2.4 vs 21.9±4.1, P＜0.05),CD4 /CD8 明显升高(1.78±0.21 vs 2.19±0.19,1.69±0.30 vs 2.62±0.40,P＜0.05). 结论:检测外周血可以了解胸水中TLS水平;检测外周血和胸水中TLS水平有助于BPE和MPE的鉴别;化疗可部分改善MPE患者的细胞免疫抑制状态.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+ CD39+ T细胞中FOXP3蛋白的表达及糖皮质激素对其影响

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+ CD39+ T细胞中FOXP3蛋白的表达情况,以及糖皮质激素治疗的影响.方法 采用流式细胞术检测47例SLE患者(其中29例为初发未经治疗的活动期SLE)和22名正常人外周血CD4+ CD25+ CD39+ T细胞、CD4+CD25+ FOXP3+ T细胞及CD4+ CD39+ FOXP3+ T细胞百分率以及FOXP3蛋白的表达,分析3组细胞之间的相关性及糖皮质激素治疗的影响.结果 SLE活动组、缓解组、正常对照组外周血CD4+ CD25+ CD39+ T细胞百分率分别为(1.3±0.5)%、(1.9±0.8)%、(2.3±1.0)%,该群细胞在SLE活动组中的表达水平低于缓解组和正常对照组(均P<0.05),而在后2组之间差异无统计学意义(P>0.05);SLE活动组中CD4+ CD25+、CD4+ CD25high及CD4+ CD39+ T细胞表达的FOXP3蛋白百分率分别为(45±12)%、(65±14)%、(70±14)%,FOXP3蛋白在CD4+ CD39+ T细胞和CD4+ CD25highT细胞中的表达水平明显高于在CD4+CD25+T细胞中的表达水平(P<0.01),而在CD4+ CD39+T细胞与CD4+CD25highT细胞中的表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 CD39可能是调节性T细胞较好的表面标记,CD39+ Treg细胞表达异常可能参与SLE的发病机制.     

实时定量PCR分析B-ALL病人TCRζ链表达特点

分析T细胞信号传导分子TCRζ链基因在B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)病人外周血中的表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量检测15例初发B-ALL、5例完全缓解期(CR)患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式(2-△△Ct)分别计算B-ALL初发患者、CR期患者与正常人TCRζ链表达差异倍数等.结果:根据相对定量公式分析显示:与正常人相比,B-ALL初发患者外周血TCRζ链表达存在3种情况,即不表达(20%)、表达下降(53%)和表达上升(27%).TCRζ链表达水平在所有初发B-ALL病人均低于CR期病人.结论:本研究首先报道B-ALL病人中TCRRζ链表达水平的变化特点,TCRζ链基因表达水平以降低为主,可能与T细胞免疫缺陷有一定关系.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在足月分娩发动中的变化

目的 检测足月妊娠孕妇临产前后外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞、单个核细胞Foxp3 基因、蜕膜Foxp3基因及蛋白表达变化,探讨调节性T细胞与足月妊娠分娩发动的关系.方法 根据临产情况将足月妊娠孕妇48例分为足月未临产组(20例)及足月临产组(28例),并设正常未孕对照组(20例)用作外周血检测对照.收集各研究对象外周血及蜕膜组织.流式细胞术检测外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞含量,RT-PCR测定外周血单个核细胞及蜕膜Foxp3 基因表达,Western blot检测蜕膜Foxp3蛋白表达.结果 足月临产组与足月未临产组相比,外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞含量 [(3.58±0.78)% vs(7.26±1.07)%],外周血单个核细胞中Foxp3基因相对表达水平[(0.307±0.052)vs(0.602±0.088)],蜕膜Foxp3 基因及蛋白相对表达水平[(0.249±0.085)vs(0.556±0.09)]、[(0.280±0.078)vs(0.579±0.093)],差异均有统计学意义(P<0.01).结论 足月妊娠孕妇临产后CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞含量,Foxp3基因及蛋白表达下降,提示CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞可能与分娩发动有关.     

皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1mRNA表达及意义

目的:检测活动期皮肌炎(dermatomyositis,DM)患者外周血CD4 T细胞中转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)以及血清磷酸肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4 T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法:收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离法获得CD4 T细胞,通过RT-PCR方法检测出各组TGF-β1表达水平。观察CD4 T细胞中TGF-β1表达与CK含量的相关性。结果:活动期皮肌炎患者外周血CD4 T细胞中TGF-β1相对表达量为0.751±0.107,显著高于健康对照0.438±0.170?P<0.05?。CD4 T细胞TGF-β1表达量与CK含量呈中度正相关?r=0.67,P<0.05?。结论:活动性皮肌炎患者外周血CD4 T细胞中TGF-β1 mRNA表达显著升高,可能与皮肌炎疾病发生有关。     

慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征患者外周血CD4+CD25+T调节细胞功能检测及意义

目的 探讨慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(chronic abacterial prostatitis/chronic pelvic pain syndrome,CAP/CPPS)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量和功能的变化及其临床意义.方法 对45例CAP/CPPS患者和18名正常人采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+,CD4+CD25highT淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率,RT-PCR检测Foxp3mRNA表达,ELISA法检测TGF-β1水平.结果 CAP/CPPS患者外周血CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);CAP/CPPSⅢA、ⅢB组患者外周血单个核细胞(PBMC)中Foxp3mRNA表达水平[(0.69±0.23)、(0.44±0.18)]较对照组(1.37±0.19)明显降低(P=0.035,P=0.014);CAP/CPPSⅢA、ⅢB组患者血清中TGF-β1水平[(18.09±10.45)pg/ml、(14.06±6.22)pg/ml]较对照组[(27.01±13.29)pg/ml]降低(P=0.041,P=0.024).结论 外周血CD44CD25+调节性T细胞数量与CAP/CPPS的发病无明显关联,CD4+CD25+调节性T细胞功能障碍可能参与CAP/CPPS发病机制;Foxp3基因与TGF-β1在CAP/CPPS的发病过程中起重要作用.     

肾综合征出血热患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞检测及其意义

目的 研究CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在肾综合征出血热(HRFS)患者外周血中的比例改变并探讨其在疾病进程中的意义.方法 选取27例HRFS患者,外周血用细胞内染色的流式细胞术及荧光定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3+表达,并与肾活检结果及肾功能进行相关分析.同时取19名正常健康体检者作为正常对照组.结果 HRFS患者各期CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例明显均低于正常对照组(低血压休克期:5.0%±1.2%,少尿期:3.1%±0.8%,多尿期:4.2%±0.9%,恢复期:5.0%±1.1%,正常对照组:6.5%±2.1%,均P<0.01);各期间CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例差异亦有统计学意义,以少尿期为最少(P<0.01).CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例与肾组织损害指数显著相关(r=0.51,P<0.01),但与蛋白尿程度及肾功能损害无显著相关(r=0.11,0.18;均P>0.05).HRFS患者少尿期外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平(503±64)明显低于正常对照组(3102±409)和其他期(低血压休克期:1805±291;多尿期:1869±320;恢复期:2697±420,均P<0.01).结论 HRFS患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了HRFS的病理进程.     

类风湿关节炎患者CD8+IL-17+T细胞升高及其机制

目的 探讨CD8+IL-17+T细胞在类风湿关节炎(RA)的改变及可能的机制.方法 随机采集39例RA患者和40名健康人的外周血.以流式细胞术测定全部RA患者和27名健康人的外周血CD8+IL-17+T细胞的比例;以ELISA方法测定全部RA患者和健康人的血清白细胞介素(IL)6、IL-23和IL-17水平,并分析这些指标可能的相瓦关系.结果 RA患者CD8+IL-17+T细胞在CD8+T细胞的比例中位数为2.7%,95%可信区间为1.55%-3.74%;而正常人中位数为1.61%,95%可信区间为1.25%-2.61%.RA患者外周血CD8+IL-17+T细胞升高(P<0.05).对CD8+IL-17+T细胞功能相关的IL-17水平测定结果为,RA患者为(429±502)ng/L,而正常人仅为(13±30)ns/L(P<0.01).RA患者血清IL-17水平明显升高.对于CD8+IL-17+T细胞分化相关细胞因子的血清测定结果,IL-23水平在RA患者为(157.83±27.07)ns/L,正常人为(21.97±3.52)ns/L(P<0.01);IL-6水平在RA患者为(32.67±34.50)ns/L,正常人为(1.82±1.51)ns/L(P<0.01);RA患者血清IL-6、IL-23水平明显升高.结论 RA患者CD8+IL-17+T细胞数量增多,作用增强,IL-6和IL-23的升高是引起这些改变的可能原因.     

非小细胞肺癌患者血清淋巴细胞肝素酶基因的表达及意义

目的:探讨非小细胞肺癌患者血清淋巴细胞肝素酶基因的表达及意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应技术对70例非小细胞肺癌患者及15例正常人血清淋巴细胞肝素酶基因表达水平进行检测.结果:NSCLC患者血清淋巴细胞中肝素酶基因表达水平明显增高,而正常对照组无阳性表达.T1～T2(0.676±0.202)与T3～T4(0.896±0.188)肝素酶基因表达水平差异有统计学意义(P<0.01);N0～N1(0.656±0.196)与N2(0.792±0.180)、N3(0.914±0.192)比较,三者之间差异有统计学意义(P(0.01或P<0.05);M0与M1比较,前者(0.682±0.205)明显低于后者(0.907±0.182),差异有统计学意义(P<0.01).结论:非小细胞肺癌患者血清淋巴细胞肝素酶基因表达水平与非小细胞肺癌TNM分期有关,它可能成为预测非小细胞肺癌侵袭、转移的指标.     

CD4+CD25+调节性T细胞在晚期肺癌患者中的表达及其免疫抑制作用

目的 探讨晚期肺癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Tr)的变化及其在免疫抑制中的作用. 方法 采用流式细胞术检测45例肺癌患者化疗前后外周血中CD4 CD25 Tr的水平,并与45例健康人进行比较. 结果 ①肺癌患者外周血中CD4 CD25 Tr占CD4 T细胞总数的(14. 2±7.8)%,高于健康对照组的(6.6±2.8)%(P<0.001);②化疗前肺癌患者外周血中CD4 CD25 Tr为(14.2±7.8)%明显高于化疗后的(6.4±3.8)%(P<0. 001); ③CD4 CD25 Tr水平与病理类型无关(P>0.05),与临床分期、组织学分化程度有关( P<0.01). 结论 肺癌患者外周血中CD4 CD25 Tr升高,对机体淋巴细胞有选择性抑制作用,其水平变化可作为评估肺癌患者疗效的指标.     

调节性T细胞检测在浆细胞性乳腺炎患者筛查中的临床价值

目的探讨调节性T细胞检测在浆细胞性乳腺炎(PCM)诊断中的临床价值。方法将2008年5月至2013年5月华润武钢总医院收治的62例PCM患者按照病程分为急性期(18例)、亚急性期(31例)和慢性期(13例);另选择30例乳腺癌患者和30例健康女性作为乳腺癌组和健康对照组;比较各组外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞水平变化。结果健康对照组、乳腺癌组、PCM组外周血CD4+CD25+CD127-T细胞、CD4+CD25+Fox P3+T细胞百分率、转化生长因子β(TGF-β)分别为(4.0±1.8)%、(4.4±1.4)%、(87±16)mg/L;(3.0±0.5)%、(2.4±1.1)%、(53±19)mg/L;(5.8±2.2)%、(5.5±1.0)%、(385±37)mg/L。PCM组显著低于健康对照组(P<0.05);乳腺癌组患者各指标显著高于对照组(P<0.05)。急性期PCM组CD4+CD25+CD127-T细胞、CD4+CD25+Fox P3+T细胞、TGF-β为(2.8±1.2)%、(1.6±0.7)%、(35±11)mg/L,亚急性期分别为(3.1±1.2)%、(2.4±1.0)%、(56±14)mg/L,慢性期为(3.5±1.2)%、(3.3±1.3)%、(70±22)mg/L,急性期显著低于亚急性期和慢性期,亚急性期显著低于慢性期(P<0.05)。相关性分析显示,CD4+CD25+CD127-T细胞与CD4+CD25+Fox P3+T细胞、TGF-β呈正相关(r=0.589,0.724,P<0.05),与C反应蛋白、红细胞沉降率、Ig A、Ig G、Ig M、C3、C4、血小板计数、血红蛋白无明显相关性(P>0.05)。结论 PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T细胞显著降低,可以作为筛查PCM的指标之一。     

类风湿关节炎患者外周血CD+4CD+25调节性T细胞和白介素17及转化生长因子β的表达研究

目的 观察类风湿关节炎(RA)患者外周血CD+4CD+25调节性T细胞比例及血清白介素17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)水平变化及三者的相互关系.方法 选取33例RA患者,其中RA活动期患者22例,RA非活动期患者11例.另选取15例健康体检者作为对照组.RA患者及健康者外周血CD+4CD+25调节性T细胞比例采用流式细胞仪(FCM)检测,血清IL-17、TGF-β水平采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测.结果 RA活动期患者外周血CD+4CD+25调节性T细胞比例[(1.46±0.72)%]显著低于对照组[(2.72±2.07)%],血清IL-17[(384±106)pg/ml]、TGF-β[(23.8±10.0)pg/ml]水平显著高于RA非活动期患者[(245±110)pg/ml与(14.7±7.5)pg/ml]和对照组[(174±50)pg/ml与(9.8±4.0)pg/ml],差异均有统计学意义(P＜0.01).血清IL-17水平与外周血CD+4CD+25调节性T细胞比例呈负相关(r=-0.375,P＜0.05),与血清TGF-β水平呈正相关(r=0.650,P＜0.01).结论 外周血CD+4CD+25调节性T细胞比例及血清IL-17、TGF-β表达水平与RA疾病活动有关,且三者相互联系,相互影响,相互制约,共同参与RA的发生、发展.     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞亚群及Th1/Th2细胞分析

目的通过分析再生障碍性贫血(再障)患者外周血T细胞亚群及Th1和Th2细胞,进一步探讨再障的免疫发病机制。方法①流式细胞术检测再障患者外周血T细胞亚群和T细胞HLADR抗原的表达;②用流式细胞术检测经体外刺激后再障患者外周血单个核细胞(PBMNC)中Th1、Th2细胞。结果①再障患者CD3 CD4 细胞、CD3 CD8 细胞、CD8 HLADR 细胞百分率及CD4 /CD8 比值分别为(35.05±9.47)%,(36.29±6.81)%,(18.36±2.07)%,1.0±0.33;对照组为(52.84±4.03)%,(24.69±3.90)%,(11.13±1.14)%,2.14±0.24;再障患者CD3 CD4 细胞和CD4 /CD8 比值显著低于对照组(P<0.01);CD3 CD8 细胞、CD8 HLADR 细胞显著高于对照组(P<0.01);而CD3 细胞与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。②再障患者外周血中Th1细胞百分率和Th1/Th2比值分别为(20.62±2.98)%和14.63±4.81,均显著高于对照组(11.13±1.48)%和9.33±2.82(P<0.01);而Th2细胞百分率与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。③Th1细胞与CD3 CD8 细胞呈正相关(r为0.678,P<0.01),与网织红细胞相对值、中性粒细胞绝对值(ANC)呈负相关(r分别为-0.590和-0.503,P值均<0.05)。结论再障患者的T淋巴细胞亚群失衡,Th1细胞增多可能是导致再障造血衰竭的重要环节。     

哈萨克族食管癌外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与TGF-β1、IL-10的相关性研究

目的探讨哈萨克族食管癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+regulatory Tcells,Treg)的变化,及与转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平的相关性。方法采用流式细胞术检测40例食管癌患者及26例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例;采用ELISA法检测血清中TGF-β1、IL-10表达水平。结果哈萨克族食管癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例、TGF-β1和IL-10表达水平分别为(7.50±1.94)%、(46.41±11.12)μg/ml、(48.10±13.49)pg/ml,高于对照组(5.04±0.92)%、(35.21±7.46)μg/ml、(33.78±7.31)pg/ml(P<0.05)。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期者与Ⅲ~Ⅳ期者Treg细胞比例及TGF-β1、IL-10表达水平差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1、IL-10表达水平与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例明显相关(P<0.01)。结论检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比例对于判断食管癌的病期有一定价值。TGF-β1、IL-10的表达水平明显升高,可能参与Treg细胞对机体的免疫负调节机制。     

再生障碍性贫血患者外周血淋巴细胞亚群和调节性T细胞的检测及临床意义

目的 研究再生障碍性贫血(AA)患者外周血淋巴细胞亚群和调节性T细胞水平的变化及临床意义.方法 采用流式细胞仪对40例AA患者(AA组)及40例正常人(正常对照组)外周血淋巴细胞亚群及调节性T细胞水平进行检测.结果 与正常对照组相比,AA组CD4+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值及CD16+/56+自然杀伤(NK)细胞百分比明显降低(P＜0.05),CD8+T淋巴细胞百分比明显升高(P＜0.01),CD3+T淋巴细胞与CD19+B细胞百分比与正常对照组比较,无统计学差异(P＞0.05).AA患者外周血中CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25high调节性T细胞比例均明显低于正常对照组(P＜0.01).结论 AA患者细胞免疫功能明显异常,调节性T细胞减少可能与AA免疫发病机制有关.淋巴细胞亚群及调节性T细胞水平检测在评价AA疗效及判断预后方面具有一定的临床价值.     

寻常型天疱疮患者外周血调节性T淋巴细胞数量及Foxp3基因表达

目的 研究寻常型天疱疮(PV)患者外周血调节性T淋巴细胞(Treg),即CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的数量及其Foxp3mRNA的表达水平,探讨其在PV发病机制中的作用.方法 收集15例PV患者(PV组)和15名健康人(对照组)外周抗凝静脉血,分离外周血单个核细胞.分别用FITC标记抗CIM单抗,APC标记抗CD25单抗,PE标记抗Foxp3单抗,流式细胞仪检测分析PV患者外周血Treg在CD4+ T细胞中的百分率及CD4+ T细胞在淋巴细胞中的百分率;荧光定量PCR检测外周血单个核细胞Foxp3 mRNA表达情况.结果 PV组外周血Treg在CD4+ T细胞中百分率为(6.99±1.86)%,CD4+ T细胞在淋巴细胞中的百分率为(32.78±8.33)%,对照组分别为(7.95±1.68)%和(33.45±7.32)%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);荧光定量PCR检测结果显示,PV组与对照组Foxp3 mRNA相对表达量分别为8.80±5.53和8.47±5.46,两组比较无显著差异(P＞0.05).结论 调节性T细胞可能不直接参与PV的发生.     

溃疡性结肠炎患者调节性T细胞及Foxp3基因的研究

目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞数量、相关细胞因子的水平以及Foxp3基因的表达,分析它们在UC发病机制中的作用。方法收集UC患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记的抗CD4单抗,FITC标记的抗CD25单抗,作双色流式细胞术,分析UC患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞百分率,ELISA法检测血清中相关细胞因子IL-10、TGF-β1的水平,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA的表达。结果与正常对照组相比,UC患者外周血CD4 T、CD25 T细胞百分率作及CD4 CD25 T/CD4 T均显著下降(P均<0.05),细胞因子IL-10、TGF-β1的水平也显著降低(P<0.05),T细胞Foxp3 mRNA的表达也明显降低(P<0.05)。结论UC患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4 CD25 调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T细胞耐受机制的破坏可能与UC的疾病活动状态和发病机制有关。     

Runx3对银屑病患者Th1/Th2细胞平衡的影响及其作用机制

目的检测Runx3在银屑病患者和健康人外周血CD4~+T细胞中转录水平的表达,分析其对Th1/Th2细胞平衡的影响及在银屑病发病中可能的作用机制。方法选取40例银屑病患者(银屑病组)和35例健康人(健康对照组),应用密度梯度离心法分离其外周血CD4~+T细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Runx3转录水平的表达。将体外培养的银屑病患者的CD4~+T细胞随机分为空白对照组(未经任何处理组)、阴性对照组(对照siRNA转染组)和Runx3 siRNA组(Runx3 siRNA转染组)。采用Western blot检测沉默效果,流式细胞仪分析Th1、Th2细胞数目,酶联免疫吸附试验检测Th1和Th2细胞相关特异性分泌因子的表达水平,同时采用qRT-PCR和Western blot检测Runx3对Th1/Th2细胞转录因子表达的影响。结果银屑病组患者CD4~+T细胞Runx3 mRNA的表达水平显著高于健康对照组(P<0.01)。与阴性对照组比较,Runx3 siRNA组银屑病患者CD4~+T细胞中Runx3蛋白表达水平下降(P<0.01),同时Th1细胞数目下降(P<0.05),而Th2细胞数目上调(P<0.05),且Th1/Th2细胞比值显著降低(P<0.05);白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平显著下降(P<0.01),IL-4、IL-10表达水平显著升高(P<0.05);Th1型特异性转录因子T-bet的表达显著降低(0.73±0.06 vs 0.96±0.17)(P<0.01),同时Th2型特异性转录因子GATA3的表达显著升高(1.27±0.11 vs 1.01±0.14)(P<0.05)。结论 Runx3在银屑病患者外周血CD4~+T细胞中表达上调,并且可能通过调控Th1/Th2细胞相关特异性转录因子的表达引发Th细胞失衡,从而参与银屑病的病理发病进程。     

氮杂胞苷对SLE患者外周血T淋巴细胞表达CD70的影响

目的探讨DNA甲基化抑制剂氮杂胞苷对正常人外周血T淋巴细胞表达共刺激分子CD70的影响,以及CD70分子在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的表达。方法分别用流式方法、RT-PCR方法、ELISA方法检测10例健康人外周血T细胞以及10例经氮杂胞苷处理过的健康人外周血T细胞以及20例SLE患者的CD70+CD4+T细胞阳性率、T细胞的CD70mRNA转录水平及血清中的CD70分子分泌水平。结果与健康人相比,活动期、非活动期SLE患者外周血T细胞CD70mRNA表达水平、CD70+CD4+T细胞的阳性率以及血清中CD70蛋白水平均显著升高(P0.05)。且经氮杂胞苷处理过的健康人外周血淋巴细胞CD4+CD70+T细胞阳性率、CD70mRNA转录水平、血清中CD70分子水平较健康人也明显增高(P0.01)。结论SLE患者外周血T淋巴细胞过度表达CD70分子,而且DNA甲基化可能是调控外周血T淋巴细胞的CD70表达的一种基因表达调控机制。