肺癌端粒酶活性、p53、PCNA蛋白表达的联合检测及其临床意义

目的 探讨端粒酶活性p53基因和增殖细胞核抗原（PCNA）在肺癌发生发展中的作用，以及端粒酶与临床病理特点及p53,PCNA蛋白之间的关系。方法 TRAP法检测59例肺癌和35例癌旁正常组织中端粒酶活性，采用免疫组织化学法检测44例肺癌组织和35例癌旁正常组织中p53和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达，并对端粒酶活性与临床病理特征以及p53PCNA蛋白表达的关系进行分析。结果 肺癌组织端粒酶活性,p53和PCNA蛋白阳性率分别为81．3％（48／59）、77．2％（34／44）、79．5％（35／44）；癌旁正常组织端粒酶活性,p53和PCNA蛋白阳性率分别为20．0％（7／35）、8．6％（3／35）、14．3（5／35），肺癌组织显著高于癌旁正常组织，P＜0．01，肺癌组织不同的病理类型之间、TNM各期之间以及不同的细胞分化程度之间端粒酶活性的阳性率未发现明显的差异（P＞0．05）；端粒酶活性与p53,PCNA蛋白表达之间无明显相关性。结论 端粒酶活化参与各型、各期和不同分化程度肺癌的发生发展；端粒酶在肺癌组织高表达和正常肺组织低表达的特性，有望使端粒酶成为肺癌诊断的1种标志物；p53和PCNA均参与肺癌的发生发展过程；端粒酶与p53和PCNA无明显相关性，提示肺癌是由多基因参与的疾病。     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的研究

目的：探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的联系。方法：应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、p16基因外显子2缺失、p16蛋白表达。结果：甲状腺癌组端粒酶活性90．48％，高于癌旁组织（P（0．01）；甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％。相应癌旁组未检出（P〈0．01）；甲状腺癌p16蛋白表达缺失率40．48％，高于癌旁组（P〈0．05）；甲状腺癌p16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论：端粒酶激活与p16基因失活以及p16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件．甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

端粒酶与p53、p16基因在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的研究端粒酶与p53、p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其意义.方法应用SP法免疫组化技术和TRAP法分别检测40例肺癌组织中端粒酶和p53、p16基因的表达.结果端粒酶及p53、p16基因在NSCLC中的阳性率分别为92.5%、37.5%和66.7%;p53基因阳性表达率与NSCLC及病理分期显著相关(P＜0.05).p16基因阳性表达率与性别、年龄、病理分期、吸烟史、组织学类型和分化程度无显著相关(P＞0.05).端粒酶活性与年龄呈负相关,并与p53基因表达情况和病理分期有关(P＜0.05).结论端粒酶和p53基因的表达与NSCLC的病期进展有关.     

端粒酶和p53及PCNA蛋白过度表达与胃癌临床病理特征的关系

目的:观察端粒酶活性、p53蛋白和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)在胃癌组织中的表达及其与胃癌分化、浸润和转移的关系。方法:端粒重复序列扩增(telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP)法检测58例胃癌和35例癌旁正常组织中端粒酶活性;采用免疫组化SABC法检测40例胃癌和35例癌旁正常组织中p53和PCNA的表达,并对端粒酶活性与临床病理特征以及p53和PCNA的表达的关系进行分析。结果:胃癌组织端粒酶活性、p53和PCNA阳性率分别为89%(49/55)、77.5%(31/40)和80%(32/40);癌旁正常组织端粒酶活性、p53和PCNA阳性率分别为11.4%(4/35)、8.5%(3/35)和14.2%(5/35),胃癌组织与正常组织相比差异有统计学意义,P=0.0256;胃癌不同分期及分化程度之间端粒酶活性的差异无统计学意义,P值分别为0.1741和0.0852,而且端粒酶活性与p53、PCNA表达之间无相关性,P=0.0859。结论:端粒酶活化、p53和PCNA表达均参与胃癌的发生和发展;端粒酶、p53和PCNA在胃癌分化、浸润中各自起着独立的作用;端粒酶、p53和PCNA同时高表达的患者具有较高的淋巴结转移率。     

端粒酶基因和抗凋亡基因bcl-2在肺组织中的表达研究

 目的　研究肺癌端粒酶基因和bcl 2的关系 ,以期阐明端粒酶基因及抗凋亡基因对端粒酶的调控机理。方法　采用TRAP、RT PCR及LSAB的方法研究了肺癌端粒酶活性、hTR、hTERT及bcl 2的表达。结果　 82 .3%的肺癌组织表达端粒酶阳性 ,38例癌组织中 ,34例表达hTR (89.4 % ) ,36例表达hTERT(94 .7% )。而在相应的癌旁组织中 ,34例表达hTR ,但只有 3例表达hTERT(7.8% )。结论　肺癌组织中具有较高的端粒酶活性 ,在肿瘤组织和正常组织中hTERT的表达有显著的差异 (P <0 .0 5 )。hTR在正常组织和肿瘤组织均有较高的表达 ,bcl 2的表达与端粒酶基因有着较高的相关性。     

卵巢癌及其癌旁正常组织端粒长度、端粒酶活性的测定及意义

目的端粒酶的激活与肿瘤增殖密切相关，本实验旨在评价卵巢癌及其癌旁正常组织端粒长度、端粒酶活性及意义．方法，用Southern印迹杂交法测定卵巢癌及癌旁正常组织端粒长度，TRAP-PCR-银染法测定端粒酶活性的改变、RT-PCR扩增端粒酶基因hTERT的表达．结果：卵巢癌组织与癌旁正常组织中hTERT的mRNA表达与端粒酶活性表达一致，卵巢癌组织中84．0％（42／50）有端粒酶活性表达，而在卵巢癌旁正常组织中只有8．0％（4／50）有端粒酶活性表达。不同卵巢癌组织的端粒长度差异无统计学意义，卵巢癌组织端粒长度短于癌旁正常组织，但差异无统计学意义．结论：检测端粒酶活性可用于卵巢癌临床诊断，端粒的长度不能精确地反映端粒酶活性．     

脑肿瘤p53蛋白和端粒酶活性表达及临床意义的研究

目的：探讨p53基因蛋白产物和端粒酶活性在脑肿瘤中的表达情况及其相关性,和两者与脑肿瘤的病理类型,恶性程度之间的关系。方法：采用免疫组化SABC法和改进的TRAP银染法对48例脑肿瘤及10例正常脑组织中p53蛋白和端粒酶活性进行检测。结果：脑肿瘤中p53蛋白表达检测结果为70．8％（34／48）,端粒酶活性检测结果为77．1％（37／48）,正常脑组织中两者均呈阴性表达,其中29例脑肿瘤端粒酶活性与p53蛋白均有表达,结论：p53和端粒酶参与脑肿瘤的发生发展,p53蛋白和端粒酶活性表达与脑肿瘤的病理类型,恶性程度密切相关,有可能成为恶性肿瘤的重要相关标志物,脑肿瘤中p53蛋白与端粒酶活性表达无相关性。     

子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响

目的探讨子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响。方法用PCR技术检测癌组织中p16基因的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化,用原位杂交法检测端粒酶的表达。结果36例癌组织中,9例发生p16基因缺失,12例发生甲基化,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例;29例内膜癌端粒酶表达阳性,阳性率为80.56%。9例基因缺失标本中均有端粒酶的阳性表达,p16甲基化与否对端粒酶的表达影响无差异,但端粒酶阳性率在p16基因失活组明显高于p16基因未失活组。结论p16基因失活可以导致激活端粒酶端粒,p16基因失活的不同状态端粒酶激活的影响存在差异。     

端粒酶活性表达及p53异常在非小细胞肺癌中表达及临床意义

目的：研究端粒酶活性及 p53异常在非小细胞肺癌 (nonsmall cell lung cancer, NSCLC)中的表达及其相互关系。方法：用端粒重复扩增（ telomeric repeat amplification protocol, TRAP）法检测 NSCLC组织、癌旁非癌肺组织、肺良性病变组织端粒酶活性,用 Western blot印迹法检测 NSCLC组织 p53蛋白表达。结果：端粒酶活性表达率为： NSCLC 93.02％ (80/86),癌旁非癌肺组织 9.33％ (7/75),肺良性病变组织 27.27％ (3/11), NSCLC组织端粒酶活性表达率显著高于癌旁非癌肺组织及肺良性病变,端粒酶活性表达率在不同组织类型、细胞分化、肿瘤大小、病理分期间差别不显著; NSCLC p53异常为 51.42％（ 36／ 70）, p53异常在Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期之间,Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义;端粒酶活性表达与 p53异常无显著关联（ P >0.05）;结论： NSCLC标记物中,端粒酶活性表达较 p53敏感, p53对 NSCLC分期分级有帮助,端粒酶活性表达与 p53异常在 NSCLC发生发展中可能是两个独立的因素。     

非小细胞肺癌端粒酶与p53、bcl-2、PCNA表达相关性

[目的]探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中端粒酶活性和p53、bel-2、增殖细胞核抗原(prolif-erating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的相关性及其临床意义.[方法]采用PCR-ELISA检测端粒酶活性,SP免疫组化检测p53、bel-2、PCNA蛋白表达.[结果]NSCLC中端粒酶活性表达明显高于肺部良性肿瘤,且端粒酶活性与p53蛋白表达显著性相关(P＜0.01),而与bcl-2、PCNA蛋白表达无显著性相关.端粒酶活性与癌细胞分化程度呈显著性相关(P＜0.01),而与患者年龄、性别、吸烟、原发肿瘤大小(T)、淋巴结转移(N)、肺癌组织学类型均无显著性相关.[结论]端粒酶活性可做为NSCLC诊断及判断预后的较理想指标.端粒酶活性与p53基因之间可能存在着相互调控的机制.     

端粒酶活性在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

探讨端粒酶活性在非小细胞肺癌中的表达及其作用为ＮＳＣＬＣ肿瘤标记物和治疗靶点的可能性。方法：采用端粒重复扩增法研究了７４例ＮＳＣＬＣ组织及周围百癌组织、１０例肺良性病变组织端粒酶活性表达。结果７４例ＮＳＣＬＣ组织６９例（９３．２４％）有端粒酶活性表达,７４例周围非癌组织有９例。     

肺癌组织中端粒酶基因与端粒酶活性关系的研究

目的 探讨肺癌组织中端粒酶基因hTR、hTERT与端粒酶活性的表达是否与肺癌的发生发展有关，深入了解端粒酶基因对端粒酶活性的调控是在基因水平还是在转录水平。方法 采用TRAP－PCR和RT－PCR方法分别检测68例肺癌组织及相应癌旁肺组织中端粒酶活性、端粒酶基因hTR和hTERP的表达。结果 68例肺癌组织中端粒酶阳性率为79．4％（54／68）,hTR阳性率为98．5％（67／68）,hTERT阳性率为91．2％（62／68）。68例癌旁组织中无一例表达端粒酶阳性，但大多数癌旁组织均表达hTR(62/68,91.2%)，仅7例hTERT表达阳性（10．3％），与hTR相比，hTERT同端粒酶具有更高的一致性，其一致率为89．0％（121／136），而ThTR与端粒酶的一致率为43．4％（59／136）。结论 端粒酶的活性可能在肺癌发生发展中起重要的作用。hTR与hTERT可能是在转录后或翻译后水平对端粒酶进行调控的。     

Telomerase activity in endoscopically visible lung cancer

To examine the correlation between telomerase activity and clinical features in patients with lung cancer, we examined 86 patients with endoscopically visible lung cancer including 61 with non-small cell lung cancer (NSCLC) and 25 with small cell lung cancer (SCLC). Telomerase activity was detected by using Telomerase ELISA Kit (B?hringer Manheim, Germany). The median and interquartile ranges of telomerase activity in normal lung, NSCLC and SCLC were 65 and 51-75, 106 and 58-349 and 285 and 117-2214, respectively. Normal lung, NSCLC and SCLC had significantly different telomerase activity (p < or = 0.0001). Between NSCLC and SCLC, SCLC exhibited higher telomerase activity than did NSCLC (p=0.0029). A cut-off level of absorbance [A450nm-A690nm] of 86 derived from 90% specificity in normal lung was used; sensitivity for overall lung cancer, NSCLC and SCLC was 62.8%, 54.1% and 84.0%, respectively. There was no significant difference in telomerase activity between each stage in NSCLC (p=0.9243). In SCLC, however, the median and interquartile range of telomerase activity in extensive disease (2128 and 292-2681) was significantly higher than those in limited disease (207 and 97-252) (p=0.0285).     

Telomerase activity in non-small cell lung carcinomas correlates with smoking status.

Human telomerase is a ribonucleoprotein DNA polymerase which maintains the telomeric region of human chromosomes and has been detected in all types of human cancer tested. We used the telomeric repeat amplification protocol (TRAP) assay to examine 71 non-small cell lung carcinomas (NSCLC) and their adjacent normal tissue. Telomerase activity was detected in 61 (86%) of the 71 NSCLC examined but not in any of the matched normal lung tissues. A significant correlation was found between the presence of telomerase activity and current smoking status at the time of diagnosis (p=0. 0076). In addition, a trend was found between telomerase activity and smoking exposure (p=0.06). Our findings demonstrate that telomerase activity is a common phenomenon in NSCLC cases but not in the normal lung. However, certain cases in former smokers may follow a telomerase independent pathway.     

RASSF1A和p16 转录本在非小细胞肺癌中的表达及启动子区甲基化

 目的 研究RASSF1A和p16基因在国人非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的转录及启动子区甲基化情况，探讨其转录失活的机制，为NSCLC的诊断和治疗寻找新的途径。方法 应用半定量RTPCR和甲基化特异性PCR法分析96例NSCLC及远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因mRNA的表达和启动子区甲基化情况。结果 （1）53．12％（51／96）的NSCLC中RASSF1A表达明显下调或缺失；36．46％（35／96）的p16表达下调或缺失，而远癌正常肺组织均表达良好。（2）96例NSCLC中RASSF1A甲基化率48．96％（47／96），该基因表达明显下调或缺失的51例中39例（76．5％）出现甲基化，表达正常的45例中8例（17．8％）出现甲基化，两组对比差异有统计学意义（P〈0．05）；96例NSCLC中33例（34．38％）检测到p16启动予区甲基化，p16基因表达明显下调的35例中20例（57．1％）出现该基因CPG岛的甲基化，而表达正常的61例中13例（21．3％）出现甲基化，两组比较差异显著（P〈0．05）。96例远癌正常肺组织均未检测到此两基因启动子有甲基化。结论 RASSF1A和p16基因mRNA在国人NSCLC中较高比例的表达下调或缺失；甲基化可能是两基因表达失活的主要原因。     

非小细胞肺癌端粒酶活性与端粒酶RNA、端粒酶催化亚单位的相关性及其意义

目的 探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)端粒酶活性（telomerase activity,TA)、端粒酶RNA（telomerase RNA,hTR）端粒酶催化亚单位（telomerase catalytic subunit,hTRT/hEST2)编码基因的表达,彼此间相关性及其预后意义。方法 TRAP－PCR（telomerase repeat amplification protocol PCR)检测TA,RT－PCR检测hTR,原位杂交检测hTRT/hEST2mRNA表达。结果 非小细胞肺癌TA、hTR和hTRT/hEST2 mRNA阳性率分别为68．4％（26／38）、55．2％（32／58）和74．1％（43／58）,TA与hTRT/hEST2阳性相关（r=0.84,P=0.01),与hTR无相关性（r=0.16,P=0.23）。低分化以及有淋巴结或远处转移者TA及hTRT/hEST2阳性率增高;TA及hTRT/hEST2阳性组中位生存期（10．4个月,7．5个月）低于阴性组（13．5个月,14．7个月;P＝0．074,P＝0．01）,hTR阳性组中位生存期（12．9个月）略高于阴性组（11．5个月,P＝0．23）,仅hTRT/hEST2阳性与阴性组生存期差异有显著性;多因素Cox回归分析hTRT/hEST2对生存期有影响。结论 非小细胞肺癌TA、hEST2阳性与阴性组生存期差异有显著性;多因素Cox回归分析hTRT/hEST2对生存期有影响。结论 非小细胞肺癌TA、hTR和hTRT/hEST2表达高于癌旁正常组织;hTRT/hEST2够能反应TA活性,二者为NSCLC恶性表型增高的标志;hTRT/hEST2具有独立的预后意义。     

CT扫描与痰液肿瘤标志物检测对周围型肺癌的早期诊断价值

目的 :研究CT扫描与肺活检后痰液脱落细胞的端粒酶活性和p16甲基化检测对早期周围型肺癌的诊断意义。方法 :用PCR TRAP ELSA半定量及PCR TRAP银染定性法、甲基化相关的PCR法 ,前瞻性检测 5 5例经CT扫描而发现的肺部孤立性结节 (直径≤ 30mm)、并疑诊为早期周围型肺癌的患者 (T1N0 M0 ) ,行CT导向肺活检 (纤维支气管镜肺活检 33例 ,经皮肺针刺活检 2 2例 )后 2 4h内痰液脱落细胞端粒酶活性及p16甲基化状态 ,并将检测结果与组织病理进行对照研究。结果 :CT扫描对周围型肺癌诊断的敏感性为 10 0 % ,但特异性只有 6 1 8% (34/ 5 5 )。端粒酶活性的敏感性为 79 4 % ,特异性为 90 5 % ,准确性为 83 6 % ;p16甲基化的敏感性为 32 4 % ,特异性为 10 0 % ,准确性为 5 8 2 % ,3者联合检测的敏感性为 86 1% ,特异性为 90 5 % ,准确性为 87 3%。对照组端粒酶阳性率 9 5 % (2 / 2 1) ,无1例检测到p16甲基化。结论 :CT扫描与端粒酶活性、p16甲基化联合可弥补痰液的细胞学检查的不足 ,提高肺癌痰检的敏感性 ,有助于周围型肺癌早期诊断和肺部孤立性结节的鉴别诊断