结直肠癌组织APRIL表达检测方法的比较

目的 观察结直肠癌组织中增殖诱导配体(APRIL)表达检测方法,实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法的相关性.方法 实时荧光定量PCR法检测29例结直肠癌患者肿瘤组织及自身癌旁组织;免疫组化染色法检测相同29例结直肠癌患者组织及正常结直肠组织12例的APRIL蛋白表达.结果 29例结直肠癌组织中实时荧光定量PCR法检测APRIL阳性率为93.1%(27/29);免疫组化染色法检测APRIL阳性率为89.6%(26/29);两方法比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法检测APRIL的表达方法,能为临床提供有诊断参考价值的信息.     

CpGODN对哮喘小鼠肺组织GITR/GITRL表达的影响

目的 观察CpGODN干预对哮喘小鼠肺组织GITR及GITRL表达的影响.方法 48只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(简称对照组),哮喘模型组(简称模型组),地塞米松治疗组,CpGODN治疗组.以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型.观察肺组织病理;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类及计数;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化检测肺组织中GITR、GITRL的表达.结果 BALF中嗜酸性粒细胞平均((x)±s,下同)计数:CpGODN组为(2.76±0.25)×107/L,地塞米松组为(1.05±1.72)×107/L,均低于模型组的(12.09±2.62)×107/L,差异有统计学意义(P＜0.01),CpGODN组与地塞米松组比较差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR、免疫组化结果:CpGODN组与地塞米松组GITR、GITRL表达高于模型组,差异有统计学意义(P均＜0.05),CpGODN组GITRL mRNA、GITR蛋白表达高于地塞米松组,差异有统计学意义(P＜0.05).相关分析:肺组织GITR与GITRL表达呈正相关(P＜0.01,n=40).结论 CpGODN能改善哮喘小鼠气道炎症,显著增强哮喘小鼠模型中GITR及GITRL在肺组织中的表达.     

PCR检测结直肠癌组织APRIL表达与免疫组化方法的比较

目的观察PCR法、免疫组化染色法检测结直肠癌组织中增殖诱导配体（APRIL）的相关性。方法实时荧光定量PCR法检测29例结直肠癌患者肿瘤组织及自身癌旁组织;免疫组化染色法检测相同29例结直肠癌患者组织及正常结直肠组织12例的APRIL蛋白表达。结果 29例结直肠癌组织中实时荧光定量PCR法检测APRIL阳性率为93.1%（27/29）;免疫组化染色法检测APRIL阳性率为89.6%（26/29）;两方法比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法检测APRIL的表达方法,能为临床提供有诊断参考价值的信息。     

结直肠癌变过程中增殖诱导配体及其受体表达水平分析

目的分析结直肠癌发生各阶段组织中增殖诱导配体(APRIL)及其受体mRNA的表达水平。方法在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量,并以靶基因和内参β2微球蛋白(β2M)mRNA含量比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果批内和批间重复性测定的变异系数(cv)分别为6.52%~12.02%和8.76%~14.16%。APRIL在中、重度异型增生肠组织中的表达水平显著高于正常肠粘膜(P<0.05),在原位癌、浸润癌组织中的表达水平又显著高于正常肠粘膜(P<0.05),而其受体B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)在各种胃粘膜病变之间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论APRIL在结直肠癌病变演进过程中呈现累积和渐进趋势,可能在结直肠癌发生、发展过程中起重要作用。     

结直肠癌组织中miR-195和miR-497的表达差异及临床病理学意义

目的 microRNA(miRNA)通过对基因表达的转录后调节作用而参与调控多种生理和病理活动。研究表明miRNA对抑癌基因/癌基因表达调控的紊乱,促进了肿瘤的发生和发展。文中旨在分析人结直肠癌组织中miR-195和miR-497的表达差异及临床病理学意义。方法选取手术切除的结直肠癌标本57例,以对应正常黏膜为对照,采用RT-PCR方法对miR-195和miR-497作定量分析。结果相对于癌旁正常黏膜组织,miR-195和miR-497在结直肠癌组织中表达均下调,差异有统计学意义(P<0.01)。miR-195低表达与患者淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05);而不同的结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度与miR-195低表达无关。miR-195低表达与预后差有关(P<0.01)。miR-497表达变化与临床病理学特征和预后的相关性无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-195和miR-497在结直肠癌组织中表达均显著减低,其中miR-195对于结直肠癌可能具有潜在的辅助诊断及预后评估意义。     

结直肠癌中NDRG2 基因的表达及临床意义

目的: 探讨NDRG 2 基因在结直肠癌组织中mRNA 的表达情况及其与临床病理特征之间的关系。
方法: 通过实时定量PCR 检测68 例结直肠癌组织及其配对癌旁组织中NDRG 2 mRNA 的表达情况,同时完成5a
随访,进而分析病人临床病理特征与术后生存率之间的关系。结果: ( 1) NDRG 2 在68 例结直肠癌组织中的mＲNA
表达量明显低于其配对癌旁组织( P ＜ 0． 01) ,差异有统计学意义; ( 2) TNM 分期早( TNM 1) 的结肠癌组
NDRG 2 mRNA 的表达量高于分期晚( TNM 2 /3 /4) 的结肠癌组( T1 VS． T2 + 3 + 4,P = 0． 04) ; 而其余临床病理特
征对于结直肠癌组NDRG 2 mRNA 表达量的影响无显著差异性( P ＞ 0． 05) ; ( 3) NDRG 2 表达水平与结直肠癌病
人生存率未见明显相关性( P ＞ 0． 05) 。结论: NDRG 2 基因参与结直肠癌的发生发展过程,但具体机制尚未明
确。NDRG 2 在核酸层面的表达与部位、分化程度、浸润深度、Dukes 分期、淋巴结侵犯、术前干预、复发及转移均
无明显关系,仅与TNM 分期有关,这为进一步探讨结直肠癌的分子诊断及治疗提供理论依据。     

GITR mRNA在变应性鼻炎患者外周血单个核细胞中的表达水平

目的: 探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)与变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的关系.方法: 采用实时荧光定量PCR方法检测变应性鼻炎未治疗组(n=23,男12例,平均年龄34岁)、临床缓解组(n=17,男8例,平均年龄31岁)及正常对照组(n=24,男11例,平均年龄28岁)外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中GITR mRNA的相对表达水平.结果: 变应性鼻炎未治疗组GITR mRNA相对表达水平明显高于变应性鼻炎临床缓解组和正常对照组(P<0.05,P<0.01),而变应性鼻炎临床缓解组GITR mRNA相对表达水平与正常对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论: GITR可能参与了变应性鼻炎的病理过程,具体机制有待进一步研究.     

survivin?cyclin D1 在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨survivin?cyclin D1 在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系?方法:43例结直肠癌组织标本,应用实时荧光定量PCR 对survivin?cyclin D1基因在结直肠癌组织及癌旁正常组织中的mRNA 水平进行定量检测,同时应用蛋白免疫印记(Western blot)检测其在结直肠癌组织及癌旁正常组织中蛋白水平的表达?结果:结直肠癌组织survivin?cyclin D1 mRNA 和蛋白水平的表达均较癌旁正常组织表达显著上调,其差异有统计学意义(P﹤0.05);survivin?cyclin D1 mRNA 和蛋白水平的表达与患者性别?年龄?肿瘤部位?肿块大小?浸润深度无显著相关性(P﹥0.05),而与TNM 分期?淋巴结转移有显著相关(P﹤0.05)?结论:提示survivin?cyclin D1基因在结直肠癌的发生?发展过程及预后中可能具有重要作用,有望成为新的肿瘤标志物或预后因子?     

人乳腺癌组织中增殖诱导配体及受体mRNA水平定量测定

目的:分析乳腺癌组织中增殖诱导配体(APR IL)及其受体mRNA的表达水平。方法:采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)技术检测临床样本中靶基因mRNA准确含量,并以靶基因和内参β2M mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果:RFQ-PCR检测靶基因mRNA含量的线性范围为109~101pg/m l,批内和批间重复性测定的变异系数v分别为3.87%~10.12%和6.86%~12.29%。乳腺癌25例组织样本的检测结果显示乳腺癌及癌旁组织中APR IL的水平均显著高于远端正常组织(P<0.05),而β细胞成熟抗原和穿膜蛋白活化物的表达水平在3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功建立RFQ-PCR检测APR IL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;发现APR IL在乳腺癌组织中高表达,提示APR IL在乳腺癌发生、发展过程中可能起了重要作用。     

肿瘤坏死因子受体-p55在大肠癌中的表达及其意义

目的探讨大肠癌组织中肿瘤坏死因子受体（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｐ５５, ＴＮＦＲ－Ｐ５５）表达的数目与临床病 理因素及肿瘤分期间的关系。方法用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测９１例大肠癌组织、８１例癌旁组织及１３例正常肠粘 膜标本中 ＴＮＦＲ－ｐ５５的表达。结果大肠癌组织中 ＴＮＦＲ－ｐ５５表达比癌旁组织及正常组织显著增高,癌旁组织 ＴＮＦＲ－ｐ５５ 表达亦显著高于正常组织。在大肠癌组织中,ＴＮＦＲ－ｐ５５表达与浆膜浸润程度和淋巴结转移与否呈负相关,即肿瘤侵及 浆膜或有淋巴结转移时 ＴＮＦＲ－ｐ５５表达低。同时,Ｄｕｋｅｓ Ａ期和 Ｂ期患者 ＴＮＦＲ－ｐ５５表达显著高于 Ｄｕｋｅｓ Ｃ期。结论 检测ＴＮＦＲ－ｐ５５的表达对判断大肠癌恶性程度,预测肿瘤浸润深度、淋巴结转移趋势及肿瘤分期有重要价值。     

X线照射对大肠癌细胞株Lovo细胞TNFR-p55表达及释放的影响

目的 研究X线照射在体外培养人大肠癌细胞株LoVo后．其膜TNFR-p55表达及释放sTNFR-p55情况。方法免疫细胞化学检测细胞膜TNFR-p55蛋白的表达．EUSA法检测培养上清中sTNFR-p55水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜观察细胞形态变化。结果x线照射后的细胞膜TNFR-p55蛋白表达显著增强（P〈0．01）;照射后大肠癌Lovo细胞上清sTNFRR-p55水平显著低于照射前sTNFRR-p55水平（P〈0．01）;光镜发现细胞体积缩小、变圆、胞浆浓缩、核固缩深染;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论x线可通过上调细胞膜TNFR-p55蛋白的表达,抑制其脱落释放sTNFRR-p55到上清中,诱导细胞凋亡增强照射肿瘤的杀伤作用。     

Investigation of tumor necrosis factor receptor-p55 expression in human colorectal cancer

Objective: To investigate the clinical significance of tumor necrosis factor receptor-p55 (TNFR-p55) expression and its relationship with the clinical pathology and Dukes‘ classification of human colorectal cancer. Methods: SABC immunohistochemistry method was used to examine TNFR-p55 expression in 91 specimens of colorectal cancer, 81 surrounding mucosas of the tumors and 13 normal tissues. Results: TNFR-p55 expression in colorectal cancer was significantly higher than that in the surrounding mucosa andnormal tissues, and it was significantly higher in the surrounding mucosa than in normal tissue. TNFR-p55 was inversely correlated to serous membrane invasion and lymph node metastasis of colorectal cancers.TNFR-p55 expression in Dukes‘ A and B stages was significantly higher than that of C stage. Conclusion: TNFR-p55 expression was important to determine the degree of malignancy and assess invasion depth, lymph node metastasis and Dukes‘ classification in colorectal cancer.     

叶酸受体α表达量与大肠癌分化程度的相关性

目的 探讨叶酸受体d(folate receptor Alpha,FRα)在大肠癌组织中的表达及其与肿瘤分化程度的相关性.方法 收集35例大肠癌患者的癌组织、癌旁及外周正常组织标本,采用免疫组织化学法及流式细胞仪技术检测大肠癌组织FRα表达情况,分析大肠癌组织FRα表达与临床病理特征的关系.结果 35例患者免疫组化检测正常粘膜组织FRα表达阳性率为8.57%(3/35),癌组织FRα表达阳性率为68.57%(24/35),癌旁组织FRα表达阳性率为14.29%(5/35).流式细胞技术检测癌组织中FRα表达为(53.78±10.37)%,癌旁组织为(19.68±6.22)%,正常粘膜组织为(11.68±5.6)%,癌组织与癌旁组织FRα表达情况比较差异有统计学意义(P＜0.05).同时FRα表达与大肠癌的分化程度呈负相关关系(P＜0.05),分化程度越低,FRα表达率越高.结论 大肠癌组织中FRα高表达,为FRα成为预测大肠癌发生发展的新的肿瘤分子标志物,大肠癌新的靶向基因治疗手段提供了理论基础.     

CXCR7与VEGF在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨趋化因子受体7（chemokine receptor 7,CXCR7）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测73例结直肠癌组织及20例癌旁正常组织CXCR7与VEGF的表达.结果 （1）CXCR7在癌旁正常组织中的阳性表达率为20.00％,癌组织中的阳性表达率为71.23％,其表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关（P＜0.05）.（2）VEGF在癌旁正常组织中的阳性表达率为10.00％,癌组织中的阳性表达率为67.12％,其表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有显著相关性（P＜0.05）.（3）Spearman等级相关分析显示两者在结直肠癌组织中的表达呈正相关（rs=0.629,P＜0.05）.结论 CXCR7与VEGF在结直肠癌发展、侵袭和转移过程中起重要作用,并可能参与肿瘤血管形成为肿瘤进展提供物质基础.     

人重组TRAIL对胆囊癌细胞生长的影响

目的探讨人重组肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant human tumor necrosis factor relat-ed apoptosis inducing ligand,rhTRAIL)对胆囊癌细胞株SGC-996的作用。方法用Western-blot法检测胆囊癌细胞株中TRAIL死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(fas-associated death domain,FADD)的表达状况,生长曲线、相差显微镜和流式细胞仪观测rhTRAIL作用于胆囊癌细胞株后的细胞生长状况。结果胆囊癌细胞株SGC-996中,有死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(FADD)的表达,rhTRAIL作用胆囊癌细胞后,细胞生长受到抑制,作用前后细胞Casepase-3/7活性明显升高,流式细胞仪检测表明rhTRAIL治疗组和对照组细胞的凋亡差异明显(P<0.05)。结论rhTRAIL在体外对胆囊癌细胞株SGC-996有明显抑制作用,可能成为治疗胆囊癌的新途径。     

浸润性乳腺癌SFRP1基因的表达及其启动子甲基化的意义

目的探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-relat-ed protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关。SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达。结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助。     

程序性细胞死亡4 mRNA在结直肠癌组织中的表达及意义

目的  研究腹腔镜结直肠癌根治术癌组织中程序性细胞死亡4（PDCD4）mRNA的表达,以及与结直肠癌临床资料的相关性。方法  收集2012～2014年腹腔镜手术结直肠癌及癌旁正常组织标本54例,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测结直肠标本中PDCD4 mRNA水平;分析PDCD4 mRNA水平与临床资料的相关性。结果  ①结直肠癌组织中PDCD4表达降低甚至不表达,表达降低率为64.8%（35/54）,△Ct值为（4.50±0.60）;正常组织中PDCD4高表达,△Ct值为（3.54±0.52）,差异有统计学意义（P <0.05）。②结直肠癌组织中PDCD4 mRNA水平与分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关,与性别、年龄、肿瘤部位无关;分化程度越低,有淋巴结转移,浸润越深,则PDCD4 mRNA表达更低。结论  结直肠癌中PDCD4 mRNA表达下降,PDCD4 mRNA水平与性别、年龄、肿瘤部位无关,与分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关。

     

人类大肠癌SSTR2 mRNA表达及其与细胞增殖相关性研究

目的了解人类大肠癌组织中生长抑素受体亚型2(SSTR2)mRNA的表达情况,并探讨其与细胞增殖的关系.方法收集60例大肠癌标本,采用多相寡核苷探针原位杂交法检测SSTR2 mRNA表达,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并用图像分析仪进行SSTR2 mRNA相对含量测定.结果SSTR2 mRNA在早期和分化好的大肠癌表达的阳性率和相对含量均明显高于晚期和分化差的病变,并发现大肠癌SSTR2 mRNA表达与PCNA表达呈负相关(P＜0.05).结论SSTR2 mRNA表达与大肠癌的分化程度和临床分期有关;SSTR2 mRNA是阻滞肿瘤细胞增殖的因素之一,对大肠癌具有反映恶性程度及估计预后的价值.