视网膜色素变性患者特异性光感受器细胞核受体基因突变检测分析

目的 观察特异性光感受器细胞核受体(NR2E3)基因在宁夏地区视网膜色素变性(RP)患者中的突变频率及特征,探讨其在RP发病机制中的作用。方法 经检查确诊的120例RP患者纳入研究。其中,常染色体显性遗传RP (ADRP)患者33例,来自18个家系;常染色体隐性遗传RP (ARRP)患者20例,来自15个家系;散发型RP(SRP)患者67例。选取100名健康成年人作为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)和直接测序方法,检测NR2E3基因全编码区和邻近剪切位点的内含子区域序列突变。多因素分析研究NR2E3基因突变位点对RP的作用。结果 120例RP患者NR2E3基因检测出变异位点12个。其中,非编码区5个;第4、6、7外显子上7个。12个变异位点中,新发现变异位点6个。外显子上7个变异位点中,同义突变3个;错义突变4个。统计学分析结果显示,所有变异位点均为NR2E3基因多态性。多因素Logistic回归分析显示,变异位点均与RP发生无相关性。18例ADRP先证者、67例SRP患者和正常对照组中,分别有1、3、2例NR2E3基因第4外显子上发现p.Glu121Lys变异。发生该位点变异的ADRP患者家系（NXRP-1）另外8例患者中,出现p.Glu121Lys位点变异5例,未出现变异3例。出现变异的6例患者发病年龄较未出现p.Glu121Lys位点变异的3例患者早,且较早出现明显的中心视力损害。结论 宁夏地区RP患者NR2E3基因致病突变率小于1％,NR2E3基因的p.Glu121Lys变异发生率较低。     

中国视网膜色素变性相关基因研究现状

目的 分析20年来中国视网膜色素变性(RP)相关基因研究现状。方法 回顾性分析。通过检索中国知网(CNKI)中国学术文献网络出版总库、美国国家生物技术信息中心、人类基因突变数据库、人类基因组变异协会等数据库及查阅1991～2011年发表的相关文献,统计已研究的RP相关基因种类和研究结果,并与国外相关研究进行对比。结果 迄今已发现60个与RP相关的基因。我国自1991年开始开展RP相关基因的筛查。迄今为止,共有29所医院和研究机构,收集300个RP家系和1572例散发型RP患者,对17个RP相关基因进行了研究,发表RP基因突变的文献66篇,发现239个突变,其中致病性突变131个;关于基因治疗的文献有4篇。我国RP患者中,视紫红质(RHO)、特异性光感受器细胞核受体和RP1基因突变的发生率分别为2.0％、2.9％和1.0％。关于RP基因型与临床表型关系的研究较少,发表文献15篇,主要集中在ADRP致病基因RHO、视网膜变性慢(RDS)、RP1和RP三磷酸鸟苷酶调节子(RPGR,又名RP3)的突变热点区域。国外关于RP基因筛查的文献有718篇,发现2000多个突变,其中致病性突变352个;关于RP基因治疗的文献有391篇。RHO、RDS和RP1基因是导致白种人群ADRP最主要的3个基因,基因突变的发生率分别为25％～50％、8％、5％～10％。RPGR基因是导致白种人群XLRP最主要的基因,基因突变的发生率为70％～80％,其中外显子开放阅读框15的突变频率最高,约为50％～60％。结论 我国已对17个RP相关基因进行了研究,发现了131个致病性突变;RP基因治疗尚处于起步阶段。与国外研究相比存在较大差距。     

Usher综合征与USH2A基因的研究进展

Usher综合征(USH)是一种以先天性感音神经性聋和视觉功能进行性丧失为特征的遗传性疾病,具有高度的遗传异质性及临床异质性,目前尚无有效的预防和治愈方法。目前已知USH有14个致病基因,USH2A突变是其最常见的原因。随着对USH2A基因研究的深入,USH2A致病机制、动物模型建立、临床诊断以及基于基因治疗、细胞移植和RNA剪接的治疗等方面研究皆取得了巨大进展。如,USH2A的突变导致参与外周纤毛区运输功能的USH复合体蛋白产生缺陷;基于此致病机制的小鼠及斑马鱼动物模型被建立,但存在其各自局限性;通过成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9系统对患者来源诱导多功能干细胞进行纠正后,将其诱导为视器官以进行临床的功能纠正性移植和基于反义寡核苷酸的RNA剪接治疗在此病的治疗中属于前景性研究。     

常染色体显性遗传视网膜色素变性患者视紫红质基因和视网膜变性慢基因突变检测分析

视网膜色素变性(RP)是一组常见的视网膜感光细胞和色素上皮细胞变性导致夜盲和进行性视野缺损的遗传性眼底病,其发病机制尚未完全明确.RP具有高度的遗传异质性,其遗传方式非常复杂,分为常染色体显性遗传(ADRP)、常染色体隐性遗传(ARRP)、X-连锁遗传(XLRP)和双基因型遗传(Digenic RP),最近报道还有线粒体遗传方式(mitochondrial RP)[1].视紫红质基因(RHO)是最早被识别的RP基因,在ADRP中发病率占30%～40%[2],而盘膜周边蛋白/视网膜变性慢基因(peripherin/RDS)在ADRP中占5%[3].我们对13个ADRP家系进行了RHO和视网膜变性慢基因(RDS)检测分析,观察其突变特征,现将其结果报道如下.     

宁夏地区137例原发性视网膜色素变性的遗传类型及临床表型分析

目的 分析宁夏地区137例原发性视网膜色素变性(RP)的遗传类型及临床表型。方法 137例确诊的RP患者纳入研究。所有患者均经过详细的家系调查以及视力、验光、直接或间接检眼镜、视野、光相干断层扫描(OCT)和视网膜电图等全面的眼科检查。根据家族史及眼底表现进行分型;结合视力、OCT检查结果进行临床特点分析。结果 137例中55例患者有明确家族史,82例为散发型患者。55例患者中29例为常染色体显性遗传(AD)RP,16例为常染色体隐性遗传(AR) RP,10例为X-连锁遗传(XL)RP。有明确家族史及散发的108个家系中,ADRP 8个家系,占7.4％;ARRP 15个家系,占13.9％;XLRP 3个家系,占2.8％;散发型RP 82个家系,占75.9％。其中,15个为近亲结婚家系,占有明确家族史的26个家系的57.7％。患者年龄6～70岁。根据眼底表现分为典型RP和非典型RP。前者102例,占74.5％;后者35例,占25.5％。所有ADRP患者和XLRP患者均表现为典型RP;在ARRP患者中,10例表现为典型RP,占62.5％,6例为非典型RP,占37.5％;散发型RP患者中,53例表现为典型RP,占64.6％,29例为非典型RP,占35.4％。非典型RP患者中,17例为无色素型RP,占48.6％。3例年幼的无色素型RP均被误诊为弱视。最小视角对数(logMAR)最佳矫正视力：ADRP患者≥51岁组平均为1.04±0.51;ARRP和XLRP患者21～30岁组,分别为0.92±0.61和1.70±0.02。屈光状态：123例RP患者有不同程度的近视,占患者总数的89.8％。OCT检查提示黄斑区神经上皮层变薄,ADRP患者≥51岁组平均黄斑中心凹厚度为（185.73±1.23）μm;ARRP及XLRP患者21～30岁组,平均黄斑中心凹厚度为(173.21±0.98)、(170.49±1.15) μm。结论 ADRP、XLRP表现为典型RP,非典型RP均为ARRP或散发型RP。非典型RP中以无色素型RP多见,在儿童期易误诊为弱视。ARRP及XLRP较早累及黄斑区光感受器,21～30岁时即可出现明显的中心视力损害;ADRP较晚出现中心视力损害,51岁后仍能保持一定的中心视力。     

一视紫红质基因突变常染色体显性遗传视网膜色素变性家系的临床特征及其与基因型的关系

视网膜色素变性(RP)是以夜盲、进行性视野损害、视网膜色素沉着、视盘呈蜡黄色萎缩和视网膜电图(ERG)呈熄灭型为主要临床特征的遗传性致盲眼病[1,2].RP遗传方式复杂,以常染色体显性遗传RP(ADRP)为多见[3].在已成功克隆出15个ADRP致病基因中,视紫红质(RHO)基因是引起ADRP的主要致病基因,大约20%的ADRP患者存在RHO基因突变[4-6].RHO突变位点很多,表型各异.为探讨RHO基因型与RP的关系,我们观察了1个RHO基因突变的ADRP家系中RP患者的临床特征.现将结果报道如下.     

视网膜色素变性一家系5′次黄嘌呤核苷磷酸脱氢酶基因突变检测

视网膜色素变性(RP)是一组视网膜感光细胞和视网膜色素上皮细胞变性导致的具有遗传和临床异质性的渐进性视网膜退化性疾病.RP是单基因遗传病,在遗传和表型上均具有较大的异质性.其遗传方式主要为:常染色体显性遗传(ADRP)、常染色体隐性遗传(ARRP)、X-染色体连锁遗传(XLRP)、双基因突变遗传(digenic RP)、线粒体遗传(mitochondrial RP)及不完全显性遗传.无家族史,则称为散发性[1].RP分子发病机制相当复杂.许多基因突变可导致RP,但没有任何一个单独突变可以解释超过10%的散发病例[2].随着分子生物学技术的发展及其在眼科遗传领域的应用,人们已能在DNA分子水平认识RP基因及其分子缺陷.随着克隆技术及人类基因组全序列测定的重大突破,人们对于其分子病理有了一定的了解和认识,极大地加快了人类疾病相关基因的定位克隆.我们对一个苏格兰RP家系进行5'次黄嘌呤核苷一磷酸脱氢酶(IMPDHI)基因突变的检测,并探讨其临床应用价值.现将结果报道如下.志谢本文为第一作者在英国攻读博士学位课题的一部分,导师授权本部分内容在国内报道;本工作得到哈尔滨医科大学傅松滨教授的大力支持,特致谢意     

一个X-连锁隐性遗传视网膜色素变性家系的RPGR基因新突变

目的 研究X-连锁隐性遗传视网膜色素变性(RP)家系RPGR基因突变男性患者和女性携带者的临床表型.方法 家系调查研究.收集RP先证者及其家系资料,完善眼科检查,抽取现存77名家系成员和80名正常对照者外周静脉血,提取DNA,进行聚合酶链反应(PCR),扩增RPGR基因外显子ORF15,扩增产物纯化后直接测序.结果 RP家系中,8例RP患者均为男性,呈隔代传递,不存在男性至男性的传递,患者的母亲及女儿都是致病基因携带者而不发病,符合X-连锁隐性遗传方式.在8例男性RP患者和14例女性致病基因携带者的RPGR基因外显子ORF15+577_578位点发现一个AG缺失突变,引起阅读框架的改变,该基因缺失突变在家系中共分离.AG缺失突变导致男性患者典型的RP改变,但发病时间和进展程度不一.携带有杂合型基因突变的14例女性携带者最具特征性的临床表型是中高度近视眼(-5.00～-22.00 D).结论 该RP家系患者由RPGR 基因外显子ORF15移码突变致g.ORF15+577_578delAG位点缺失.RPGR基因外显子ORF15的新突变可导致男性患者严重的RP表型,但女性致病基因携带者仅表现为中高度近视眼.(中华眼科杂志,2011,47:516-520)

Abstract：

Objective To screen the mutation in the RPGR gene in a large Chinese family with X-linked recessive retinitis pigmentosa (RP) and to describe the phenotype in affected males and female carriers. Methods Ophthalmic examinations were performed in 77 family members of a RP pedigree to identify affected individuals. Polymerase chain reaction (PCR) and direct sequencing were used for screening of mutations in RPGR gene exon ORF15. Results Mutation screening demonstrated a novel mutation, g.ORF15+577_ 578delAG, which caused an open reading frameshift and resulted in premature truncation of the RPGR protein. This mutation was detected in 8 affected male individuals and 14 obligate female carriers in this family and was found to segregate with the phenotype in this family. This mutation led to a severe RP phenotype in male affected individuals with some variability in the age of onset of night blindness and loss of visual acuity, but was recessive in female carriers without a RP phenotype. However the most striking phenotypic feature in female carriers in this pedigree was moderate to high myopia with refractive error ranging from -5.00 D to -22.00 D in 14 female carriers. Conclusions This novel mutation in RPGR ORF15 causes serious RP phenotype in males and no RP phenotype in female carriers. Moderate to high myopia was a particular feature for female carriers in this pedigree. Our finding expands the spectrum of RPGR mutations causing RP and phenotypic spectrum of the disease in Chinese family, which is useful for further genetic consultation and genetic diagnosis.     

Usher综合征一例

患者女,67岁.因双眼视力逐渐下降30年,视物不见20年来院就诊.患者幼年时听力差,4～5岁耳聋,20岁开始出现夜盲.     

视网膜色素变性PRPF-31基因剪接位点突变及其相关表型特征研究

目的 研究一个常染色体显性遗传视网膜色素变性（ADRP）大家系的致病基因及其相关表型特征。方法 应用基因组扫描定位和突变检测法确定该家系的致病基因,并对其进行详细的家系调查,同时选取该家系不同代别中11例有症状的患者和7例无症状的个体,进行视网膜电图（ERG）、多焦视网膜电图（mERG）、心理物理学及荧光素眼底血管造影等检测。结果 在19号染色体PRPF-31基因5号内含子-1处发现一新的剪接位点突变（IVS5—1G→A）。家系中有症状的患者均在10岁以前发病,病情进展快而严重,呈Ⅰ型弥漫性视网膜色素变性（RP）表现。Goldmann视野检查,30岁以上患者动态视野大范围缺损,部分患者仅存颞侧视岛,静态视野阈值无法查出;mERG检测：双眼暗视a、b波振幅极度下降且低平,呈熄灭型;多焦视网膜电图显示双眼黄斑区及其周围视网膜反应密度显著降低;荧光素眼底血管造影显示黄斑中央凹周围色素上皮萎缩,呈“牛眼样”外观。7例无症状者中,1例经mERG、心理物理学及分子遗传学检测,证实其为轻症RP患者,另1例为疾病基因的杂合携带者。结论 PRPF-31基因5号内含子-1剪接位点突变（IVS5—1G→A）是ADRP的一种新的突变位点。该突变所致的ADRP表型主要为Ⅰ型弥漫性RP,同时,还存在基因外显不全和表现度不一的变异性表达。     

Comprehensive screening of the USH2A gene in Usher syndrome type II and non-syndromic recessive retinitis pigmentosa

A screen of the entire coding region of the USH2A gene in 129 unrelated patients with Usher syndrome type II (USH2) and in 146 unrelated patients with non-syndromic autosomal recessive retinitis pigmentosa (ARRP) uncovered 54 different sequence variations, including 18 likely pathogenic mutations (13 frameshift, three nonsense, and two missense), 12 changes of uncertain pathogenicity (11 missense changes and one in-frame deletion), and 24 non-pathogenic rare variants or polymorphisms. Of the 18 likely pathogenic mutations, nine were novel. Among the USH2 patients, 50 (39%) had one or two likely pathogenic mutations. The most common mutant allele in USH2 patients was E767fs, which was found in 29 patients, including one homozygote. Among the ARRP patients, we found 17 (12%) with one or two likely pathogenic mutations. The most common mutant allele in ARRP patients was C759F and it was found in 10 patients. The C759F allele was also found in two USH2 patients; in neither of them was a change in the other allele found. The second most common mutant allele in both patient groups was L1447fs (found in 6/50 USH2 patients and 6/17 ARRP patients). Of the 50+17=67 patients with identified USH2A mutations, only one mutation in one allele was found in 41+12=53 (79%); the reason for the high proportion of patients with only one identified mutation is obscure. Our results indicate that USH2A mutations are found in about 7% of all cases of RP in North America, a frequency similar to the RPGR gene (8%) and the rhodopsin gene (10%).     

散发性视网膜色素变性视紫红质基因突变筛查

目的研究中国人散发性视网膜色素变性（sporadic retinitis pigmentosa，SRP）患者视紫红质（rhodopsin，RHO）基因突变频率及特征，揭示其在SRP发病机制中的潜在作用。方法运用聚合酶链反应一单链构象多态性（polymerase chain reaction—single—strand conformation polymorphism，PCR—SSCP）结合DNA测序技术，对80例SRP患者和80例健康对照者进行RHO基因5个外显子的突变筛查。结果SRP患者RHO基因5个外显子PCR扩增产物经SSCP分析后，发现其电泳带型与对照组一致，均包括2条单链带和1条双链带，且电泳迁移率相同，即在患者和对照组中均未检测到RHO基因突变。结论中国人SRP患者RHO基因外显子的突变率较低；PCR—SSCP分子遗传学方法快速、简单、灵敏，适用于大批量RP患者的基因变异筛查。（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：351—353）     

视网膜色素变性患者视紫红质E341ter基因突变及临床表型分析

目的 探讨常染色体显性遗传视网膜色素变性患者视紫红质基因突变及其与临床表型的关系。方法 应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)和单链构象多态性（single strand conformation polymorphism,SSCP)技术,对13个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系的27例成员,进行视紫红质基因整个编码区的突变筛选,对SSCP检测有变异带的外显子PCR产物进行测序;同时应用裂隙灯、眼底镜、动静态视地和视网膜电流图（ERG）对患者进行临床检测。随机收集30例正常人进行对照检测。结果 发现1个家系患者有视紫红质E341ter突变,呈杂合子,密码子341第一个碱基由G变成T。该家系临床表现为青年期出现夜盲,视力和视野损害较重,ERG检查杆体和锥体无反应或仅有较小的锥体反应。结论 视紫红质基因突变家系的视网膜色素变性病史开始于杆体功能的丢失,进而累及锥体系统,并最终导致视功能严重丧失。视紫红质E341ter突变被认为是该家系的病因。     

原发性视网膜色素变性家系的RDS基因Pro216Leu突变及其表型研究

目的　研究原发性视网膜色素变性 (retinitispigmentosa ,RP)家系中缓慢型视网膜变性(retinaldegenerationslow ,RDS)患者的RDS基因突变与临床表型的关联 ,以探讨RP的发病机制。方法对来自同一家系的 2例RP患者及 2例正常人外周血DNA进行分子遗传学分析 ,采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)及限制性片段长度多态性 (restrictionfragmentlengthpolymorphism ,RFLP)技术 ,筛查RDS基因突变 ,对有突变的RDS基因片段进行克隆测序及分析 ,同时进行家系分析及眼部临床检查。结果　来自同一家系的 2例RP患者均查出有RDS基因 2 16密码突变 ,而 2例正常人未查出上述突变。经测序证实RDS基因 2 16密码子的第 2个核苷酸出现了C→T的突变 (Pro2 16Leu)。RDS基因Pro2 16Leu突变的眼部临床表型为视力损害严重的弥漫型RP ,伴有黄斑部病变。结论　中国人RP患者存在RDS基因Pro2 16Leu突变 ;其眼部表型为弥漫型RP伴有黄斑部病变。     

全外显子组测序检测到一视网膜色素变性家系ABCA4基因致病剪切新突变

目的探讨一个中国视网膜色素变性（RP）家系的致病基因及其位点。方法实验研究。对一个RP家系的成员进行病史采集、视力检查、眼底检查及多焦视网膜电图（mfERG）检查。绘制家系图,对家系成员采血,进行DNA提取、全外显子组测序、数据分析和Sanger测序验证,并在500例健康对照者中进行测序验证。结果共纳入该家系成员5例,含2例患者。患者表现为青少年期发病,夜盲,进行性周边视力受损,逐渐累及中央区。眼底检查显示视网膜色素沉着。mfERG显示a波、b波振幅明显下降甚至记录不到。家系特点为2例患者为姐妹,另一位姐妹正常,父母均正常,符合常染色体隐性遗传模式特征。经外显子组测序、数据分析和Sanger测序验证后,发现ABCA4变异性剪切位点c.1761-2A>G发生纯合突变。另外,在500例健康对照者中,Sanger测序没有发现该位点纯合突变。结论本研究发现了一个新的视网膜色素致病基因突变位点c.1761-2A>G,扩大了ABCA4致病基因位点谱,为临床的诊断和治疗提供了新靶点。     

常染色体显性视网膜色素变性家系基因定位的研究与视紫红质基因突变的检测分析

对一常染色体显性视网膜色素变性 (autosomaldominantretinitispigmentosa ,ADRP)大家系进行基因定位 ,并检测该家系12名患者的视紫红质基因是否存在突变。方法 :采用多个已知位点的遗传标记对该ADRP家系进行连锁分析 ,确定致病基因的大致染色体位置 ;在所定位的染色体区域将RHO基因作为侯选基因进行直接测序检测突变。结果 :连锁分析结果发现遗传标记D3S12 92 ,当θ =0 1时有最大Lod值 =2 732 85 2 ,因此考虑该家系致病基因位于D3S12 92附近。直接测序结果发现该家系中大部分患者在RHO基因的第 3外显子序列 ,第 182密码子的第 2个碱基发生G→A置换突变 ,导致甘氨酸 (Gly)变为天冬氨酸 (Asp) ,命名为Gly -182 -Asp突变 ,而在 2例患者中则未发现突变 ;同时 ,在该家系正常成员以及正常对照者中均未发现此突变。结论 :ADRP存在分子水平的遗传异质性 ,某些ADRP是由于RHO基因突变所致。但是由于本研究所涉及的ADRP家系中尚有2名患者未找到RHO基因突变 ,故不能将Gly -182 -Asp突变认为是该家系的致病原因。在D3S12 92与RHO基因之间可能存在新的基因 ,还需进一步研究证明。     

110例视网膜色素变性患者RP1基因突变的检测分析

背景视网膜色素变性（RP）是一组常见的单基因遗传性、致盲性眼底病变,目前尚无有效的治疗方法。目的研究RP1基因在宁夏地区RP患者中的突变频率及特征,进一步探讨其在RP发病机制中的潜在作用。方法收集宁夏回族自治区110例RP患者,其中包含35例常染色体显性遗传性RP（ADRP）患者和75例散发患者为RP患者组,同时收集100例健康成年人为正常对照组,2组均采集外周静脉血3～5ml,应用聚合酶链反应（PCR）和直接测序法进行RP1基因全编码区及邻近剪切位点内含子区域序列突变的检测。运用多因素Logistic回归方法和基于网络的评分软件PolyPhen、Sorting Intolerantfrom Tolerant（SIFT）对研究结果进行分析。结果RP患者组和正常对照组RPl基因共检测出11个变异位点,P．Lysll52Lys和C．＊247A〉C为新发现的突变。RP患者组第3内含子C．788—92T〉C的突变频率与正常对照组比较差异有统计学意义（χ2=9．12,P〈0．01）;3’-侧翼序列区c．＊247A〉C的突变频率高于正常对照组,差异有统计学意义（χ2=12．77,P〈0．01）,且与RP发生呈显著正相关（r=1．11,P〈0．05）,其余位点突变均证实为RPl基因的多态性。RP患者组P．Gln1725Gin的突变率显著高于正常对照组（χ2=42．09,P〈0．01）,但其与RP的发生无关（r=1．74,P〉0．05）。1例散发患者发现了P．Lysll52Lys的突变。在83例RP患者中发现有P．Arg872His、P．Alal670Thr和P．Serl69lPro突变的同时出现,PolyPhen分析显示,三者均为保护性突变,评分分别为1．11、0．74、0．22;SIFT分析显示,这3个突变均对RP表现为保护作用,评分分别为0．07、0．60、0．22;携带这3个突变的RP患者夜盲出现的平均年龄为30．54岁,27例未携带这3个突变的RP患者夜盲出现的平均年龄为21．06岁;携带这3个突变的RP患者平均最佳矫正视力为0．50±0．38,未携带者的为0．40±0．33,差异有统计学意义（t=2．11,P〈0．05）。结论在宁夏回族自治区RP患者中,RPl基因的致病突变率低于中国其他地区的人群。P．Arg872His、P．Alal670Thr和P．Serl691Pro突变的协同出现可能对RP起到一定的保护作用,同时也可能降低了RPl基因致病突变的发生率。