FoxM1通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药

目的探讨FoxM1是否通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药。方法利用骨肉瘤亲本细胞MG-63,采用递增药物浓度筛选建立顺铂耐药细胞MG-63R;运用慢病毒转染FoxM1建立稳定过表达MG-63F细胞及空载体对照MG-63V细胞。MTT法检测细胞对顺铂药物的敏感性。Western blot法检测FoxM1及肿瘤干细胞相关标志物Sox-2、Oct-4、Nanog蛋白水平表达。无血清培养悬浮克隆球实验检测微球形成能力。检测FoxM1抑制剂Thiostrepton处理后对肿瘤干细胞相关标志物表达水平、微球形成能力和对顺铂药物敏感性的影响。结果在2μg/mL顺铂浓度下稳定生长和传代的耐药细胞MG-63R的半数有效抑制浓度IC_(50)由亲本细胞中1.27上升为7.36,FoxM1蛋白水平在MG-63R中表达较MG-63明显增高;MG-63R中肿瘤干细胞相关标志物Sox-2、Oct-4、Nanog蛋白水平表达明显升高,同时平均悬浮克隆球数量明显增多。成功构建FoxM1过表达细胞MG-63F,其FoxM1蛋白表达水平较空载体对照MG-63V明显增高,肿瘤干细胞相关标志物也明显升高,平均悬浮克隆球数量由14增加至25,差异有统计学意义。MG-63F细胞对顺铂耐药性明显升高,IC_(50)由对照组0.96升高为31.23;MG-63F细胞经4μmol/L Thiostrepton处理后,FoxM1蛋白表达明显降低,对顺铂的敏感性明显增加,同时肿瘤干细胞相关标志物表达明显降低,平均悬浮克隆球数目也明显减少。结论 FoxM1过表达可能通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药,FoxM1抑制剂可能通过逆转肿瘤干细胞化而增强骨肉瘤耐药细胞对顺铂的敏感性。     

探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制

目的 探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制。方法 在骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、筛选稳定顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)、慢病毒转染稳定FoxM1过表达细胞株(HOS/FoxM1、U2OS/FoxM1)及空载体对照(HOS/NC、U2OS/NC)中,采用Western blot法检测FoxM1和c-myc蛋白的表达。应用CCK-8细胞增殖实验检测FoxM1抑制剂RCM-1对骨肉瘤细胞顺铂敏感性的影响;采用生物信息学方法分析FoxM1和c-myc表达与患者预后的关系。结果 FoxM1和c-myc在骨肉瘤顺铂耐药细胞中的蛋白表达比亲本细胞明显升高。与空载体对照组中FoxM1(0.26±0.03 vs 0.37±0.02)、c-myc(0.35±0.07 vs 0.59±0.03)相比,FoxM1过表达细胞中FoxM1(0.81±0.13 vs 0.61±0.01)和c-myc(1.19±0.08 vs 1.61±0.13)蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。采用10μmol/L FoxM1抑制剂RCM-1处理后,顺铂耐药细胞(Fo...     

FOXM1与CENP-A在骨肉瘤化疗耐药中的关系及其作用机制

目的 探讨CENP-A是否参与骨肉瘤细胞化疗耐药及与叉头框蛋白M1(forkhead box M1, FOXM1)的调控关系。方法 采用Western blot法检测骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)和稳定FOXM1过表达细胞(HOS/FOXM1、U2OS/FOXM1)中CENP-A蛋白表达。转染siRNA后检测CENP-A蛋白表达;运用CCK-8细胞增殖实验观察siRNA敲低CENP-A后耐药骨肉瘤细胞对顺铂敏感性的影响;FOXM1抑制剂RCM1处理后检测CENP-A蛋白表达。Kaplan-Meier法分析GEPIA数据库中CENP-A表达与患者预后的关系,Spearman相关性分析CENP-A和FOXM1两者之间的关系。结果 骨肉瘤顺铂耐药细胞中CENP-A蛋白表达比亲本细胞明显升高(0.52±0.03 vs 0.92±0.01, 0.33±0.02 vs 1.12±0.01),FOXM1过表达细胞中CENP-A表达较空载体对照亦明显增高;在骨肉瘤顺铂耐药和FOXM1过表达细胞中转染siRNA-CENP-A后,CENP-A蛋白表达均明显降低...     

利用SmartFlare技术进行胶质瘤细胞系U87中Twist1hi亚群分选及其对顺铂耐药性研究

目的 利用特异性SmartFlareTM RNA检测探针在人脑胶质瘤细胞系U87中分选Twist1hi-U87细胞亚群,并研究其对顺铂的耐药性.方法 用SmartFlareTM RNA探针对Twist 1hi-U87细胞亚群进行分选.以未分选细胞作为对照.CCK8法检测Twist1hi-U87亚群和亲代U87细胞对顺铂的化疗敏感性.流式细胞仪检测顺铂作用后细胞凋亡情况.结果 根据细胞核内Twist1的表达量,流式细胞分选所得Twist1hi-U87亚群约占亲代U87细胞的57.9％～ 69.8％.CCK8结果显示,加药后24h和48h,Twist1hi-U87亚群对顺铂的耐药性均高于亲代U87细胞(P＜0.05).经顺铂处理后,Twist1hi-U87细胞凋亡率(14.07％±0.96％)明显低于U87细胞(20.4％±1.29％)(P＜0.05).结论 Twist1基因高表达可以抑制胶质瘤细胞凋亡,进而降低顺铂的杀伤作用.     

反义c-myc对增强顺铂引起骨肉瘤细胞凋亡作用的实验研究

目的：通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达，并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。 方法： 以腺病毒为载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞，降低MG-63细胞c-myc的表达，与不同浓度的顺铂作用后，采用MTT、蛋白免疫印迹（Western blot）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、流式细胞仪（FCM）、透射电镜等检测顺铂对骨肉瘤MG-63细胞体外增殖抑制、凋亡相关基因的表达和凋亡作用。 结果： 构建的Ad-Asc-myc体外转染MG-63细胞48 h后，可明显降低c-Myc蛋白表达，并与浓度为2.0 mg/L的顺铂作用2 h后 ，对MG-63细胞的体外增殖抑制率可达38.0%；转染的细胞Bcl-2表达降低，Bax表达增加，而E2F-1的表达无变化；FCM、电镜等显示Ad-Asc-myc转染后可诱导骨肉瘤细胞凋亡，并增加顺铂对骨肉瘤细胞的凋亡作用。 结论： 降低c-myc表达能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加顺铂对MG-63细胞的促凋亡作用。     

反义survivin联合顺铂抑制裸鼠荷骨肉瘤生长

目的：探讨反义基因治疗与化疗联合应用提高骨肉瘤疗效的可行性及其机制。 方法:通过构建荷骨肉瘤裸鼠模型，采用瘤内注射和腹腔给药方式，以 survivin反义寡核苷酸（ASODN）配合顺铂（DDP）对瘤鼠进行联合干预治疗，并与各单药组进行比较，观测各组裸鼠肿瘤生长情况、评估瘤体病理形态，免疫组织化学法检测瘤组织survivin蛋白表达，DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞凋亡水平。 结果:与各单药组相比，联合治疗组在显著下调survivin蛋白表达同时，肿瘤细胞凋亡坏死更为明显，肿瘤生长受抑效果更强。 结论:ASODN对DDP具有明显增效作用，可弥补DDP耐药缺陷，二者联合可望发挥协同抗瘤效应。     

卵巢癌患者应用紫杉醇-顺铂联合化疗的疗效研究

目的：探讨卵巢癌患者应用紫杉醇-顺铂联合化疗的临床疗效。方法选择2013年01月~2014年05月我院收治的60例卵巢癌患者为研究对象,随机平均分成两组,实验组与对照组,每组各30例。对照组患者单纯给予顺铂化疗,实验组患者给予紫杉醇联合顺铂化疗,比较两组患者的临床治疗效果。结果实施联合化疗的实验组患者完全缓解14例(46.7%),部分缓解9例(30%),病情稳定5例(16.7%),总有效率为93.3%,临床疗效较对照组患者有明显提高,两组比较差异有统计学意义(<0.05)。结论应用紫杉醇-顺铂联合化疗卵巢癌可以有效缓解患者的临床症状,减小肿瘤病灶部位的大小,控制患者肿瘤的发展,安全有效,疗效确切,值得在临床推广。     

大剂量顺铂化疗患者预防肾毒性的护理体会

肾肉瘤术后的治疗主要方法是以大剂量顺铂为主的联合化疗方案，但由于大剂量顺铂的应用，其药物毒性加大，尤其是肾脏毒性的发生率可达100％。作者在多年的护理工作实践中，总结了一套大剂量顺铂化疗预防肾毒性的护理方案，现报告如下。     

肿瘤顺铂耐药相关基因的研究进展

顺铂是一种临床常用化疗药物,可以有效抑制多种人类肿瘤,但常常出现固有耐药或者在治疗过程中获得耐药的现象,是许多肿瘤患者治疗失败的原因.顺铂耐药的机制复杂,涉及多种基因的作用,筛选出顺铂耐药的标志基因对于肿瘤的治疗具有重要的意义.本文综述了现已发现的与肿瘤顺铂耐药相关的基因及其在耐药过程中所发挥的作用,希望为进一步的科学研究以及临床上预防或者逆转肿瘤的顺铂耐药提供帮助.     

Fas过表达逆转胃癌细胞顺铂耐药

目的:探究Fas在胃癌细胞顺铂耐药中的作用及可能的作用机制。方法:Western blot及RT-q PCR检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达情况。构建Fas过表达腺病毒载体,上调胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Western blot法检测Fas、P38/p-P38、JNK/p-JNK、cleaved caspase-8/caspase-8和cleaved caspase-3/caspase-3蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中Fas的mRNA及蛋白表达水平均明显低于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中,Fas的蛋白表达水平随着顺铂的浓度增加不断降低。过表达Fas可抑制胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的细胞活力,并诱导其凋亡;同时上调p-P38、p-JNK、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:胃癌顺铂耐药细胞中过表达Fas可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡并抑制细胞生长,其机制可能与JNK和P38MAPK信号通路的激活有关。     

JAB1过表达增加人肺腺癌细胞对化疗的敏感性

目的通过探讨缺氧诱导因子1（HRE-1）启动子诱导JAB1过表达致人肺腺癌细胞（A549）对化疗敏感性的增加程度,来找到提高肺癌缺氧区肿瘤细胞对化疗敏感性的方法,最终达到逆转肺癌化疗耐药的目的。方法首先成功构建缺氧反应元件启动子所驱动的pUC57-HRE-JAB1真核表达质粒。随后,将该质粒导入A549细胞,化疗药物顺铂（C-DDP）也同时加入处理A549细胞。采用RFPCR和Western blot分别检测转染后A549中JAB1的mRNA和蛋白表达水平。采用流式细胞术检测经pUC57-HRE-JAB1质粒转染后A549细胞周期和凋亡的改变。结果较空白对照组和空载体组,经pUC57-HRE-JAB1真核表达质粒转染后,A549细胞中JAB1的表达明显增加（P〈0.05）。同时,细胞周期被阻滞于G1期,并且转染后顺铂所诱导的细胞凋亡率较单纯顺铂处理明显增加（P〈0.01）。更为重要的是,pUC57-HRE-JAB1导入增加了A549细胞对C-DDP的敏感性。结论缺氧诱导因子1启动子所诱导的JAB1过表达增加了肺癌细胞的化疗敏感性,为逆转肺癌化疗耐药提供了一种可行的治疗策略。     

外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路的初步探讨

目的探讨外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路。方法在原工作基础上,以两种人卵巢癌细胞系A2780(不分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇敏感)和SKOV-3(高分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇耐药)为研究模型,观察外源性IL-8是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对其作用的机制和可能的信号转导通路进行研究。结果①体外经IL-8处理的A2780细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性均明显降低即产生部分耐药(耐药倍数分别为6.07和7.23),其耐药程度均低于IL-8高表达的SKOV-3细胞(耐药倍数分别为8.22和9.03)。②IL-8可以剂量依赖的方式上调A2780和SKOV-3细胞的耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达。③MEK1/2抑制剂和PI3K抑制剂均能阻断IL-8诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药。结论IL-8-很可能通过上调耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达而致卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药。IL-8的上述作用是由Ras/Raf/MEK/MAPK和PI3K/Akt信号通路介导的。     

脂质体紫杉醇联合顺铂对晚期宫颈癌术前化疗的疗效观察

目的探讨脂质体紫杉醇联合顺铂用于治疗局部晚期宫颈癌患者的临床疗效和不良反应。方法选择2005年5月至2009年5月我院收治的局部晚期宫颈癌患者78例,按就诊顺序将患者分为顺铂联合5-氟尿嘧啶组(PF组,39例)和脂质体紫杉醇联合顺铂组(Taoxl组,39例)。PF组患者采用顺铂联合5-氟尿嘧啶化疗方案,Taxol组患者采用脂质体紫杉醇联合顺铂化疗方案。2组患者化疗后均全麻下行广泛子宫切除术和盆腔淋巴结清扫术,评价并比较2组患者的临床疗效、不良反应和术后3年生存率。结果 PF组患者不良反应主要为消化道反应、口腔黏膜炎和骨髓抑制,Taxol组患者的不良反应主要有骨髓抑制、口腔黏膜炎和肾脏毒性。Taxol组患者的化疗后完全缓解率30.77%,高于PF组的10.26%(χ2=5.032,P=0.025)。Taxol组和PF组患者平均生存时间分别是33.5个月和34.7个月,3年生存率分别为59.6%和70.2%,差异无统计学意义(χ2=1.859,P=0.173)。结论 2种化疗方案患者不良反应差别较大,脂质体紫杉醇联合顺铂化疗方案临床疗效优于顺铂联合5-Fu化疗方案。     

下调YAP1基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞的影响及机制探究

目的 观察下调YAP1基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞的影响。方法 子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP分为Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组（转染siRNA-YAP1的细胞）、阴性对照组（转染siRNA-NC的细胞）和空白对照组（未经转染的细胞）,MTT法及癌细胞单克隆形成数目检测细胞增殖,Transwell小室检测侵袭,划痕检测迁移,AnnexinV-FITC/PI双染法检测凋亡,免疫荧光检测自噬现象,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和自噬相关蛋白LC3β、p62。结果 24 h、48 h、72 h,Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组OD值明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）,细胞克隆数明显少于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）;细胞迁移率明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）;细胞侵袭数明显少于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）;免疫荧光结果显示与阴性对照组和空白对照组比较,Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组绿色、红色以及黄色光点明显减少,即自噬小体堆积明...     

Sorcin的表达影响人胶质瘤细胞对顺铂的敏感性

 目的： 研究可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)在人胶质瘤细胞对顺铂敏感性中的作用。方法：构建pSilencerTM 3.1-H1-sorcin siRNA表达质粒;质粒转染人胶质瘤U251细胞;RT-PCR和Western blotting法检测sorcin mRNA和蛋白表达的变化;MTT法检测U251细胞的生存率;Western blotting检测耐药相关蛋白的表达变化。结果：经酶切和测序鉴定,成功构建pSilencerTM3.1-H1-sorcin siRNA表达载体;将该表达载体转染U251细胞,RT-PCR和Western blotting结果显示sorcin mRNA和蛋白表达量降低（P<0.05）;MTT结果显示,抑制sorcin表达可增强U251细胞对顺铂的敏感性（P< 0.05）;同时发现抑制U251细胞的sorcin表达能降低耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的蛋白水平（P< 0.05）。结论：抑制sorcin表达增强U251细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与降低耐药相关蛋白P-gp和MRP1的表达有关,提示sorcin可能与胶质瘤细胞顺铂耐药有关。     

miR-369-3p靶向CTHRC1对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨微小RNA-369-3p(miR-369-3p)是否通过靶向胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)影响宫颈癌细胞顺铂(DDP)耐药性.方法:体外培养人宫颈癌细胞HeLa,采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株HeLa/DDP;实验分组:DDP+miR-NC组、DDP+miR-369-3p组、DDP+si-...     

上调Keap-1抑制Nrf-2核转运和降低卵巢癌细胞Skov3/DPP对顺铂耐药

目的分析Keap-1/Nrf-2通路在耐顺铂(cis-pt)的卵巢癌细胞Skov3/DDP中的活化状态,及其对细胞耐药的影响。方法构建p Flag-CMV-Keap-1过表达载体。细胞分4组:空白、cis-pt、Keap-1过表达及cis-pt联合Keap-1过表达组;Western blot检测Keap-1和Nrf-2蛋白表达及亚细胞定位;流式细胞计量术分析细胞的凋亡;DHE探针检测胞内活性氧簇(ROS)积累效应。结果相比Skov3,Skov3/DDP细胞中Keap-1水平明显下调(P0.05),Nrf-2在细胞核中含量增多(P0.05);过表达Keap-1后,Keap-1水平明显增加(P0.05);细胞核中Nrf-2含量明显减少(P0.05);20 mg/L顺铂能够明显诱导凋亡,24及48 h的凋亡率分别为24.36%和53.81%,显著高于未过表达Keap-1组(P0.05),并激活caspase-3及PARP;DHE过表达Keap-1联合顺铂能够明显诱导ROS在细胞内累积。结论 Nrf-2能够在药物刺激时降低ROS保护细胞,Skov3/DDP细胞中Keap-1表达下调导致Nrf-2活化入核,可能与药物作用时ROS的毒性作用降低及细胞耐药有关。     

下调AFAP-1L2表达增强顺铂对子宫内膜癌细胞的杀伤作用

目的观察AFAP-1L2下调后对顺铂干预的子宫内膜癌KLE细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为子宫内膜癌治疗提供新的靶点。方法以Western blot及q RT-PCR检测不同分化程度子宫内膜癌细胞(KLE,Ishikawa)中AFAP-1L2蛋白及m RNA表达;构建siAFAP-1L2质粒并转染子宫内膜癌细胞,检测转染效率;顺铂干预siNegative Control细胞为对照组(DDP组),对siAFAP-1L2干扰细胞(siAFAP-1L2+DDP组)给予不同浓度顺铂干预或同一浓度不同培养时间下以MTT法观察细胞存活率,流式细胞术观察细胞凋亡率,PI法观察细胞周期。结果 AFAP-1L2蛋白及m RNA在低分化KLE细胞株中表达水平明显高于高分化Ishikawa细胞株。AFAP-1L2下调后能够增加KLE细胞对DDP化疗敏感度,并具有剂量依赖性及时间依赖性。下调AFAP-1L2表达能够促进DDP干预的KLE细胞凋亡,使更多细胞生长停滞。结论 siAFAP-1L2沉默可增强顺铂对子宫内膜癌细胞的杀灭作用,为子宫内膜癌治疗研究的候选靶点。