冬虫夏草核磁特征指纹图谱建立及鉴别研究

目前冬虫夏草市场伪品泛滥,鉴别困难。本文采用核磁共振技术对3个不同产地的21批野生冬虫夏草、30批冬虫夏草野生抚育品和4种冬虫夏草伪品的水提物及醇提物进行了测定,比较分析之后确定了9组特征峰作为量化标准,建立了冬虫夏草的核磁特征指纹图谱。对野生冬虫夏草、冬虫夏草野生抚育品和冬虫夏草伪品的核磁特征指纹图谱进行比较分析发现,野生冬虫夏草和冬虫夏草野生抚育品具有高度的相似性,4种冬虫夏草伪品的核磁特征图谱与野生冬虫夏草及冬虫夏草野生抚育品的核磁指纹图谱均存在不同程度的差异。比对结果也显示,冬虫夏草的核磁指纹图谱具有很强的特征性和专属性。野生冬虫夏草与冬虫夏草野生抚育品核磁指纹图谱具有良好的一致性,表明两种冬虫夏草的化学成分基本相同。     

韩信草UPLC指纹图谱及LC-MS化学成分分析

目的:建立韩信草UPLC指纹图谱,并采用LC-MS技术对韩信草中化学成分进行结构推断。方法:采用UPLC法,运用Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm),以0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱;检测波长275 nm;流速0.4 m L/min;柱温35℃;进样量2μL。采用Triple TOF 5600检测器,运用ESI源,在正、负离子模式下确定质谱参数为:质量范围m/z 50~1 250 Da;源温度500℃;雾化气55 psi;辅助气55 psi;气帘气35 psi;离子扫描电压5 500 V(正离子模式)、-4 500 V(负离子模式)。结果:运用12批韩信草样品建立了UPLC指纹图谱,并标定32个共有峰。结合对照品、文献报道以及根据对应的碎片进行裂解规律推断,标定出27个黄酮类成分。结论:建立了韩信草的UPLC指纹图谱并进一步通过高分辨质谱对化学成分进行鉴别,从定性角度控制韩信草质量。     

蓬莪术药材醇提取物LC-MS指纹图谱的研究

目的：建立蓬莪术药材醇提取物的LC-MS指纹图谱评价方法。方法：以四川中药材规范化种植基地的蓬莪术药材为研究对象，采用甲醇冷浸法提取蓬莪术有效成分，用液相色谱-质谱联用法测定其指纹图谱(LC-MS-FPS)，并采用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004版)对测定结果进行评价。结果：四川种植的蓬莪术药材醇提取物的指纹图谱有良好的相似度，生成的指纹图谱，有14个共有特征峰。通过与对照品的保留时间、紫外光谱及LC-MS所得分子量信息比较，4～6号峰和9号峰分别鉴定为姜黄素、脱甲氧基姜黄素、莪术烯醇和莪术酮。结论：建立的蓬莪术醇提取物的LC-MS指纹图谱，为其质量控制提供科学依据。     

冬虫夏草离子液体高效液相指纹图谱分析

目的建立冬虫夏草绿色环保的高效液相指纹图谱分析方法。方法通过单因素考察确定最佳的离子液体种类、浓度、提取时间、料液比,得到经优化的提取方法后,建立高效液相指纹图谱分析方法对25批冬虫夏草及其常见伪品的离子液体-水超声提取液进行分析,所得到的色谱图数据用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)"和SPSS 26.0统计软件进行相似度计算、主成分分析和聚类分析。结果建立了离子液体提取冬虫夏草指纹图谱分析方法,确定了9个共有峰,相似度评价结果显示14批冬虫夏草正品的相似度均大于0.9,而其他冬虫夏草伪品的相似度在0.11～0.78之间;主成分和聚类分析结果显示,14批冬虫夏草正品与11批冬虫夏草常见伪品能进行很好的区分。结论建立的方法绿色环保、稳定可靠,为冬虫夏草的真伪鉴别技术提升提供了依据。     

康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比较研究

目的:用RAPD方法对康定虫夏、人工虫草及虫草发酵菌丝体进行指纹图谱的研究,为不同虫草的品质和药效差异提供分子依据。方法:从65个随机引物中筛选出7个引物,以这7个引物进行PCR扩增,电泳得到其指纹图谱。结果:没有发现任何两个样本拥有完全相同的RAPD标记,康定冬虫夏草和人工虫草具有较高的遗传多态性,而与虫草发酵菌丝体相比差异较大。结论:来自不同产地冬虫夏草群体均表现出其独特的RAPD标记,其差异可能系虫体的不同所致。随机扩增的DNA片段的差异是否预示其药效的不同,有待进一步研究。康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比…     

冬虫夏草与虫草发酵菌丝体的HPLC指纹图谱比较研究

目的:研究冬虫夏草与虫草发酵菌丝体的高效液相指纹图谱。方法:利用高效液相色谱法,梯度洗脱,测定冬虫夏草与虫草发酵菌丝体样品,色谱条件为:Agilent C18色谱柱(4.6mm×25mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速0.5mL/min,检测波长260nm。结果:测定冬虫夏草与虫草发酵菌丝体指纹图谱中共有6个峰为共有峰,并确定其中的3个色谱峰分别为尿嘧啶、腺苷、虫草素。结论:本研究所建立的方法可作为虫草发酵菌丝体质量标准制定的参考依据。     

康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比较研究

目的用RAPD方法对康定虫夏、人工虫草及虫草发酵菌丝体进行指纹图谱的研究,为不同虫草的品质和药效差异提供分子依据。方法从65个随机引物中筛选出7个引物,以这7个引物进行PCR扩增,电泳得到其指纹图谱。结果没有发现任何两个样本拥有完全相同的RAPD标记,康定冬虫夏草和人工虫草具有较高的遗传多态性,而与虫草发酵菌丝体相比差异较大。结论来自不同产地冬虫夏草群体均表现出其独特的RAPD标记,其差异可能系虫体的不同所致。随机扩增的DNA片段的差异是否预示其药效的不同,有待进一步研究。     

冬虫夏草中核苷类成分含量测定及HPLC指纹图谱研究

目的:建立冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷4种核苷类成分含量测定及HPLC指纹图谱分析的方法。方法:采用Grace Prevail C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-甲醇,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长260 nm,柱温25℃。结果:测定了不同产地冬虫夏草药材中4种核苷类成分的含量,并建立了该药材的HPLC指纹图谱,在指纹图谱中共有13个共有峰,并指认了尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷,指纹图谱的相似度均大于0.95,各色谱峰分离效果良好,符合指纹图谱要求。10个不同产地冬虫夏草样品指纹图谱的聚类分析和主成分分析结果相似。结论:该方法较好的反映了冬虫夏草药材中的化学成分信息,重复性好,样品间的相似性良好,说明这一药材所含的核苷类化学成分分布及比例较稳定。将指纹图谱与主成分分析、聚类分析运用于不同来源冬虫夏草的质量鉴别,可为药材特征评价方法的建立提供依据。     

冬虫夏草及其混淆品HPLC指纹图谱研究及共有成分鉴定

目的建立冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,为冬虫夏草的真伪鉴别及质量评价提供依据。方法采用HPLC法建立冬虫夏草及其主要混淆品(凉山虫草、古尼虫草、蛹虫草)水溶性成分的指纹图谱,标记了16个共有峰,并通过超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)技术对指纹图谱中16个共有峰进行鉴定。结果建立了冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,该方法能区分冬虫夏草及其混淆品,鉴定出其中12个共有峰,分别为胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤+鸟嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷和虫草素。结论该方法简便易行,为冬虫夏草的真伪鉴别提供了科学依据。     

达立通颗粒的HPLC指纹图谱研究及其LC-MS化学成分分析

目的:建立达立通颗粒的HPLC指纹图谱,并对达立通颗粒的化学成分进行鉴定。方法:采用Hypersil ODS-BP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%乙酸溶液,梯度洗脱;检测波长为323 nm;柱温为30℃;流速为1.0 mL/min;进样量为10μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行相似度分析。采用Triple TOF 5600+型检测器,运用ESI源分别在正、负模式下对达立通颗粒进行分析检测,并对达立通颗粒的12味原药材进行成分归属。结果:建立了达立通颗粒的HPLC指纹图谱,标定了16个共有峰,指证了其中4个共有峰分别为绿原酸、咖啡酸、芦丁和橙皮苷。10批达立通颗粒HPLC指纹图谱的相似度均大于0.990,通过LC-MS技术对达立通颗粒中的35个化学成分进行了鉴定。结论:该方法简单、快捷、稳定,可用于达立通颗粒的质量控制。     

冬虫夏草繁育品与野生品红外指纹图谱一致性评价

目的:建立冬虫夏草的红外指纹图谱检测方法,对冬虫夏草野生品、繁育品以及伪虫草(蝉花、虫草花、中华被毛孢菌丝粉、蝙蝠蛾拟青霉菌丝粉)进行红外测试。方法:根据红外平均图谱、一阶导数图谱、二阶导数图谱和标准偏差图谱,判断这3种虫草的一致性。结果:在3000~2800 cm-1、1800~1000 cm-1、1000~800 cm-1,30批冬虫夏草繁育品和21批野生品的红外光谱图谱的指纹图谱具有较好的一致性,相似度均大于0.90;与伪虫草不一致,相似度均小于0.90。结论:该方法具有良好的专属性、重复性、稳定性和精密度,可用于冬虫夏草红外指纹图谱分析。     

麦冬指纹图谱研究

目的 建立中药麦冬的指纹图谱,为麦冬药材及其制剂的质量控制提供依据.方法 采用HPLC梯度洗脱、紫外检测的方法,分别对产于四川绵阳的川麦冬和浙江慈溪的杭麦冬各10批药材进行检测,用国家药典委员会颁布的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版",计算各药材样品的相似度,并生成麦冬药材对照指纹图谱.结果 来源于两个不同产区的药材,产区内样品间相似度多数大于0.95,但产区间样品相互比较,则相似度多数小于0.80,有的竟小于0.50.结论 川麦冬和杭麦冬的指纹图谱相差明显,不仅可用于区别两个不同产区的药材,也可用于区别用两个不同产区的药材生产的中成药制剂.     

败酱草指纹图谱研究

目的 建立败酱草的HPLC指纹图谱。方法 采用Orca C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);检测波长230 nm;柱温35℃。体积流量1 mL/min,以乙腈-0.05%磷酸溶液系统进行梯度洗脱,测定了败酱草药材的HPLC指纹图谱。结果 在选定的色谱条件下,得到败酱草的HPLC指纹图谱,标定出8个共有峰,且方法学考察符合规定。聚类分析表明,I类药材BJ1、BJ2、BJ3、BJ4、BJ5、BJ6、BJ7、BJ8、BJ9、BJ10、BJ13、BJ14各批败酱草药材与对照指纹图谱间的相似度为0.987~0.907,表明各批次药材之间具有较好的一致性;II类药材BJ11、BJ12、BJ15批败酱草药材与对照指纹图谱的差异较大。结论 该方法准确可靠、简便快捷,可作为评价不同产地、不同品种的败酱草药材质量的有效手段。     

胃癌脾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型研究

目的研究建立胃癌脾虚证唾液蛋白质指纹图谱新型分子诊断模型。方法采集未经手术和放化疗治疗的57例胃癌患者(脾虚证组40例,非脾虚证组17例)、45例健康志愿者(正常对照组)的唾液标本,用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术进行检测,获得各组标本的蛋白指纹图谱。比较各组唾液蛋白质质谱数据,找出胃癌脾虚证组与正常对照组、胃癌脾虚证组与胃癌非脾虚证组之间具有统计学意义的差异表达蛋白质峰;采用决策树算法计算出多个变量即质荷比(m/z)变化对两组样本的判别价值,确定最优化的诊断模型。结果胃癌脾虚证组与正常对照组唾液蛋白质质谱比较共有106个差异蛋白质峰有统计学意义,胃癌脾虚证组与胃癌非脾虚证组唾液蛋白质质谱比较共有6个差异蛋白质峰有统计学意义(P0.05或P0.01)。筛选建立了由m/z为5439.67、2411.67、3619.18共3个主要差异蛋白峰组成的胃癌脾虚证诊断模型;临床回代检验该模型的灵敏度和特异度分别达100%和93%;交叉验证法进一步验证诊断模型的灵敏度和特异度分别为87%和89%。结论基于WCX纳米磁珠结合MALDI-TOF-MS技术建立的胃癌脾虚证唾液蛋白质组无创性分子诊断模型敏感性高、特异性强,对胃癌脾虚证的诊断具有良好效率。     

冬虫夏草水提液和醇提液HPLC指纹图谱分析

目的:建立冬虫夏草水提液和醇提液的高效液相指纹图谱。方法:采用高效液相色谱对20批冬虫夏草和2批发酵冬虫夏草菌粉的水提液和醇提液进行分析;并对所获得的色谱数据进行相似度计算和聚类分析。结果:建立了冬虫夏草水提液和醇提液指纹图谱,水提液指纹图谱确定了7个共有峰,醇提液指纹图谱确定了8个共有峰;冬虫夏草水提液和醇提液指纹图谱相似度评价结果均显示20批冬虫夏草样本的相似度系数大于0.9,2批发酵冬虫夏草菌粉的相似度系数小于0.9;冬虫夏草水提液和醇提液共有峰聚类分析结果均显示,20批冬虫夏草与2批发酵冬虫夏草菌粉分别聚为不同类。结论:本文所建立的方法稳定可靠,可以对冬虫夏草质量进行综合评价,为其提高产品质量控制提供了依据。     

LC-MS/MS法确认生脉注射液指纹图谱的特征峰

目的:确认生脉注射液指纹图谱的特征峰。方法:应用LC-MS/MS法,以Waters symmetryshield TMRP18(4.6mm×250mm;5.0μm)色谱柱为分析柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱;检测波长为203nm。离子阱质谱。结果:对生脉注射液20个特征峰进行确认,使其中的10个特征峰得到了确认。结论:本方法共确认了生脉注射液指纹图谱的特征峰,方法简单准确,具有实用价值。     

白鲜皮药材指纹图谱研究

目的：采运用反相高效液相色谱法，研究并建立白鲜皮药材的指纹图谱。方法：用Kromasil 100 C18色谱柱，乙腈-水梯度洗脱；流速1．0mL／min；检测波长228nm。结果：运用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好，达到指纹图谱的要求。结论：采用HPLC指纹图谱可有效控制白鲜皮的质量。     

白附子的指纹图谱研究

本研究采用HPLC分析方法对不同产地、不同来源、不同规格、不同储存年限的白附子样品进行了分析,确定了禹白附子的指纹图谱,为白附子的鉴别提供了有效的方法。1仪器与试药SHIMADZU液相色谱仪:SPD-M10 AVP二极管振列检测器、LC-10ATvp泵、CTO-10ASVP柱温箱、SCL-10 AVP系统控制器。FA-1104电子天平,上海天平仪器厂产品。离心机,北京医用离心机厂产品。色谱柱:氨基酸专用柱,尺寸4.6 mm×200 mm,C18预柱,大连依利特分析仪器有限公司提供。色谱甲醇,中国上海陆忠试剂厂产品。桂皮酸,由中国生物制品鉴定所提供。白附子采自各产区。2方法与结果2.1色谱条件的选择色谱柱为HYPERSIL C18(4.6 mm×200 mm),流速1 mL/m in,柱温25℃,检测波长280 nm,流动相:甲醇-0.1%磷酸水(梯度洗脱)。理论塔板数(n)为5.54×(保留时间/半峰高宽)2=5.54×(55.88/1.19)2=12206。故规定其理论塔板数不低于12000。2.2对照品溶液的制备精密称取桂皮酸对照品10 mg,置10 mL的量瓶中,加甲醇溶解并稀释刻度;摇匀。取此液1 m...     

急支糖浆指纹图谱鉴别方法研究

目的：建立急支糖浆成品指纹图谱,为完善该制剂的质量标准打下基础。方法：采用高效液相色谱技术,Zorbax Sb C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),1%冰醋酸(含0.2%三乙胺)-乙腈梯度洗脱,检测波长为280 nm,柱温为30 ℃,流速为1.0 mL·min^-1。结果：指纹图谱研究的各项参数均符合有关规定,10批样品有21个共有峰,与对照图谱相比较,样品指纹图谱相似度均在0.99以上。同时,10批样品中检出6个有效成分:原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸、柚皮苷和新橙皮苷。结论：本方法为完善急支糖浆质量标准打下了基础。     

红参HPLC指纹图谱研究

目的:建立红参的HPLC指纹图谱,为红参药材的质量控制提供方法依据并为其制剂提供基本的指纹图谱。方法:利用反相HPLC法分析红参乙醇提取物,采用大连江申CenturySIL C18AQ柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为0.1mol/L NaH2PO4水溶液-乙腈溶剂系统,梯度洗脱,检测波长203nm,柱温(30±0.15)℃,进样量20μL。结果:以腺苷峰为参照物峰,确定30个共有峰,测定了10个不同产地红参HPLC指纹图谱的相似度。结论:所建立的指纹图谱特征性及专属性强,适用于红参药材的质量控制。