PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的 研究肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法，动态测定细胞[Ca2 ]i，MTT法测定细胞增殖。结果 血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的升高，并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时，对细胞游离钙却无影响。结论 肾小球系膜细胞[Ca2 ]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联，但[Ca2 ]i的升高并非细胞增殖的唯一途径。     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的研究肾小球系膜细胞[Ca2+]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系. 方法以体外培养的系膜细胞为研究对象,激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法,动态测定细胞[Ca2+]i,MTT法测定细胞增殖. 结果血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高,并促进细胞增殖.钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖.中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时,对细胞游离钙却无影响. 结论肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联,但[Ca2+]i的升高并非细胞增殖的唯一途径.     

芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

血管紧张素Ⅱ及其拮抗剂对鼠系膜细胞内游离钙的影响

目的探讨Losartan拮抗局部肾素-血管紧张系统（RAS）对预防高血压致肾脏靶器官损伤的意义。方法应用细胞培养和Fura－2方法，观察血管紧张素Ⅱ（AugⅡ）和血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1受体）拮抗剂Losartan对自发性高血压大鼠（SHR）和正常血压大鼠（WKY）肾小球系膜细胞内游离钙（[Ca2 ]i）浓度的影响。结果AngⅡ使SHR系膜细胞[Ca2 ]i增高，对WKY无影响；AugⅡ对SHR系膜细胞[Ca2 ]i的作用可被Losartan抑制并呈剂量依赖关系。结论AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞[Ca2 ]i增加是经AT1受体介异并被Losartan拮抗。Losartan可能有细胞水平的肾脏保护作用。     

血小板衍生生长因子对肝细胞游离钙浓度影响

目的观察血小板衍生生长因子（PDGF）对SD大鼠肝细胞内游离钙浓度（[Ca2 ]i）的影响,同时观察钙拮抗剂（Ca－A）对PDGF作用的影响。方法应用Fura－2／AM荧光示踪法检测肝细胞（n=15）内[Ca2 ]i的变化;及PDGF存在下和PDGF、Ca－A同时存在下细胞内[Ca2 ]i变化。结果PDGF可明显升高细胞内[Ca2 ]i,Ca－A具有抑制PDGF的增钙作用。结论PDGF参与SD大鼠肝细胞内Ca2 浓度的转运,Ca－A对肝细胞具有保护作用。     

PDGF-BB引起系膜细胞内游离钙浓度变化的机制探讨

目的 研究血小板衍生生长因子BB(PDGF—BB)引起的肾小球系膜细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。结果 PDGF-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高，细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂硝苯地平均可抑制PDGF—BB引起的细胞内钙浓度变化，但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同。结论 PDGF—BB引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高在初期是通过细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与，而在其后的维持升高阶段主要是通过细胞外钙内流，特别是通过电压依赖式钙通道内流引起。     

糖尿病肾病系膜细胞增殖功能、[Ca~(2 )]i和分泌纤维连接蛋白的研究

目的 :探讨糖尿病肾病系膜细胞功能改变及意义。方法 :采用STZ复制糖尿病模型 ,取肾进行系膜细胞培养 ,3 H -TdR法测定细胞增殖 ,用fluro - 3探针经共聚焦显微镜检测 [Ca2 ]i 变化 ,ELISA法测定纤维连接蛋白 (FN)分泌量。结果 :糖尿病大鼠系膜细胞3 H -TdR掺入率和FN分泌量较正常大鼠增加 ,基础 [Ca2 ]i 两组无差异 ,但糖尿病系膜细胞 [Ca2 ]i 对血管紧张素II反应明显减弱。结论 :糖尿病系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚 ,其 [Ca2 ]i对AngII反应减弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过     

糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖、分泌功能和细胞内[Ca2+]i的研究

目的：探讨糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖、分泌功能和细胞内[Ca^2 ]i改变及意义。方法：链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病模型，取肾进行肾小球系膜细胞培养，^3H-TdR法测定细胞增殖，ELISA法测定纤维连接蛋白（FN）分泌量，用Fluro-3探针经共聚焦显微镜检测[Ca^2 ]i变化。结果：糖尿病大鼠肾小球系膜细胞，^3H-TdR投入率和FN分泌量较正常大鼠增加，基础[Ca^2 ]i两组无差异，但糖尿病肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i对血管紧张素Ⅱ反应明显减弱。结论：糖尿病肾小球系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚，其[Ca^2 ]i对AngⅡ反应减弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过。     

缓激肽对PDGF诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响

[目的]探讨缓激肽（bradykinin,BK）对血小板源生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖的影响及与ERK信号途径相关性。[方法]BK预孵系膜细胞,采用PDGF-BB刺激系膜细胞,应用MTT法测细胞增殖,ELISA法测Ⅳ型胶原,应用Western法检测ERK蛋白表达,并应用BK受体特异性阻断剂HOE-140进一步研究BK对ERK通路的作用。[结果]（1）BK抑制PDGF所致的系膜细胞增殖,与单用PDGF-BB组比较差异有非常显著性意义（P〈0.05）。（2）BK抑制PDGF-BB所致系膜细胞Ⅳ型胶原分泌,与单用PDGF-BB组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。（3）BK抑制PDGF-BB所致的系膜细胞ERK1/2磷酸化表达,与单用PDGF-BB组比较差异有显著性意义（P〈0.01）,HOE-140能阻断BK对于PDGF-BB/ERK1/2途径磷酸化的抑制作用。[结论]BK抑制PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌,该作用可能是通过抑制PDGF诱导的ERK1/2途径激活实现。     

尾加压素Ⅱ对乳鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞内游离钙的影响

目的 观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)对肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和对系膜细胞内游离钙的影响,为防治糖尿病肾病系膜细胞增殖病变提供理论依据.方法 以培养的SD乳鼠肾小球系膜细胞为实验模型,用UⅡ刺激GMCs,应用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,用Fluo3/AM荧光标记细胞内游离钙离子,激光共聚焦显微技术动态测定GMCs内游离钙浓度变化.结果 ①在10-10～10-7 mol/L范围内,随着UⅡ作用浓度的增加,MTT光吸收值逐渐升高.②UⅡ激发GMCs内[Ca2 ];升高作用分2个时相,即瞬时峰值升高和缓慢持久升高,对峰值升高呈剂量依赖方式,在10-10～10-7 mol/L范围内引起峰值升高,且随着剂量增加,幅度增大.结论 UⅡ可以诱导GMCs的增殖,可能与细胞内钙离子浓度的升高有关,且UⅡ对GMCs内[Ca2 ];浓度影响有2个时相.提示UⅡ在糖尿病肾病系膜细胞增殖的发病学中可能发挥重要作用.     

EFFECTS OF PDGF-BB ON INTRACELLULAR CALCIUM CONCENTRATION AND PROLIFERATION IN CULTURED GLOMERULAR MESANGIAL CELLS

Objective To investigate the relationship between the alteration of intracellular calcium concentration and proliferation in cultured glomerular mesangial cells. Methods Rat mesangial cells were cultured. lntracellular calcium concentrations were measured by confocal Laser Scanning Microscopy and Fura-3 fluorescence dyeing techniques. Cell growth was measured by MTT assay. Results PDGF-BB increased intracellular calcium concentrations in a dose-dependent manner, and at the same time promote the proliferation of mesangial cells. After preincubation with calcium channel blocker nifedipine or angiotensin converting enzyme inhibitor captopril, both the increase of intracellular calcium concentrations and cell proliferations induced by PDGF-BB were inhibited. Tripteriglum Wilfordii Glycosides （TMG） significantly inhibited the mesangial cell proliferations, but it had no significant effect on intracellular calcium concentrations. Conclusion There was a positive relationship between the elevation of intracellular calcium concentration and cell proliferation in glomerular mesangial cells, but the increase of intracellular calcium concentrations wasn＇t the only way for proliferation.     

凝血酶诱导人胚胎肾系膜细胞增殖和PAI-1表达的研究

目的 :探讨凝血酶对人胚胎肾系膜细胞增殖和纤溶酶原激活物抑制物 1 (PAI 1 )表达的影响。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)掺入法、Northern杂交和纤维蛋白平板法分别检测不同浓度凝血酶刺激下人胚胎肾小球系膜细胞增殖、PAI 1mRNA表达和PAI 1蛋白质活性的变化 ,并同时用人工水蛭素进行阻断实验。结果 :凝血酶呈浓度依赖性的方式促进人胚胎肾小球系膜细胞增殖、PAI 1mRNA表达和PAI 1蛋白质活性 ,水蛭素能特异地阻断凝血酶的作用。结论 :凝血酶可通过促进系膜细胞增殖、PAI 1的表达和提高其活性而导致肾脏损伤     

凝血酶诱导人胚胎肾系膜细胞增殖和PAI—1表达的研究

目的：探讨凝血酶对人胚胎肾系膜细胞增殖和纤溶酶原激活物抑制物－１（ＰＡＩ－１）表达的影响。方法：采用噻唑蓝（ＭＴＴ）掺入法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和纤维蛋白平板法分别检测不同浓度凝血酶刺激下人胚胎肾小球系膜细胞增殖、ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达和ＰＡＩ－１蛋白质活性的变化,并同时用人工水蛭素进行阻断实验。结果：凝血酶呈浓度依赖性的方式促进人胚胎肾小球系膜细胞增殖、ＰＡＩ－１ ｍＲＮＡ表达和ＰＡＩ－１蛋白质     

三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca2+]i的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响.方法培养人肺腺癌Anip973细胞,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察As2O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响.结果①LSCM显示As2O3 作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内[Ca2+]i显著升高(P<0.001).②As2O3 对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内[Ca2+]i升高作用具有剂量依赖性.③As2O3 能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖.结论 As2O3 可能是通过升高人肺腺癌细胞内[Ca2+]i 来启动细胞凋亡机制,诱导肺癌细胞凋亡,从而抑制其增殖.     

糖肾颗粒对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

[目的]研究糖肾颗粒对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular mesangial cells,GMC)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)防治中的意义.[方法]将常规体外培养的GMC分为正常对照组、高糖组、糖肾颗粒高、中、低剂量组及贝那普利组,分别进行相应处理后收集细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同作用时间(24h、48h、72h)下细胞增殖程度.[结果]高糖(30.0mmol· L-1)能明显刺激体外培养的GMC增殖.糖肾颗粒及贝那普利两种药物含药血清对高糖刺激下的GMC增殖有抑制作用,其中糖肾颗粒血清对GMC的抑制作用优于贝那普利血清,且呈一定的时间、剂量依赖性关系.[结论]高糖可促进GMC增殖,糖肾颗粒能明显抑制高糖条件下GMC增殖,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展.     

缓激肽促进大鼠肾系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达

目的:观察缓激肽(BK)对大鼠肾系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达的影响。方法:采用体外培养的大鼠肾系膜细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖情况;应用Westernblotting观察肾系膜细胞纤维连接蛋白的表达。结果:缓激肽促进肾系膜细胞增殖,且具有剂量依赖性。缓激肽和转化生长因子-β1皆显著增加系膜细胞纤维连接蛋白表达,并具有协同效应。结论:缓激肽可能直接促进体外培养的系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达,从而加重对肾小球的损伤。     

三七总皂苷对HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用研究

目的：观察三七总皂苷对肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,以400ng／mL三七总皂苷和100ng／mLHB-EGF为干预因素,实验分对照组、100ng／mLHB-EGF纽和400ng／mL三七总皂苷＋100ng／mLHB-EGF组,刺激系膜细胞24、36、48h,采用MTT方法,观察三七总皂苷对重组HB-EGF诱导系膜细胞增殖的作用情况。结果：HB-EGF刺激36h时,系膜细胞明显增殖,与对照组比较,P〈0．05;三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞的增殖,与HB-EGF组比较,P〈0．05。随着刺激时间的延长,三七总皂苷对HB-EGF诱导系膜细胞增殖的抑制作用增强,但36h与24h比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;与48h比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用,且作用随着刺激时间延长而增强。三七总皂苷可能通过抑制HB-EGF对系膜细胞增殖作用而延缓肾小球硬化。     

海昆肾喜对肾小球系膜细胞增殖及表达PDGF-BB mRNA的影响

目的:探讨海昆肾喜对体外培养的肾小球系膜细胞增殖及表达血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)mRNA的影响。方法:制备大鼠含药血清,MTT比色法检测海昆肾喜对脂多糖诱导下肾小球系膜细胞(GMCS)增殖的影响,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海昆肾喜对GMCS表达PDGF-BB mRNA的影响,设苯那普利为对照组。结果:MTT实验各时间点海昆肾喜组OD值均显著低于LPS组(P<0.05),RT-PCR实验海昆肾喜组PCR产物电泳条带较脂多糖组明显减弱(P<0.05),且均呈量效依赖关系,海昆肾喜大剂量组作用优于小剂量组。结论:海昆肾喜抑制脂多糖诱导的肾小球系膜细胞增殖并显著下调肾小球系膜细胞表达血小板源性生长因子-BB mRNA,可能是其防治肾小球硬化的作用机理之一。