罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡及磷酸化Smad2/3表达的影响.方法 高脂饮食复制SD大鼠高脂血症模型,酶消化法原代提取SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养,取5～8代细胞进行实验.无血清培养24 h后:实验一分为4组:①对照组,②罗格列酮组(本实验所用罗格列酮均为100 μmol/L),③罗格列酮+过氧化物酶体增生激活受体γ(PPAR-γ)阻断剂GW9662组,④罗格列酮+抗转化生长因子β1(anti-TGF-β1)组,分别用Western blot于1 h检测磷酸化Smad2/3水平,24 h后流式细胞学检测细胞凋亡;实验二分2组:①对照组,②100 μmol/L罗格列酮组,分别于0、0.5、1、2,6、12和24 h,用Western-blot检测磷酸化Smad2/3水平.结果 24 h后罗格列酮组细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05),罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+抗转化生长因子β1组细胞凋亡率较罗格列酮组明显降低(P<0.05);罗格列酮处理后0.5 hVSMC p-Smad2/3表达水平明显高于对照组(P<0.05),且1 h迭高峰(P<0.05),p-Smad2/3水平达到高峰后又较快下降(P<0.05);罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+anti-TGF-β1组p-Smad2/3表达水平较罗格列酮组低(P<0.05).结论 罗格列酮可能通过激活过氧化物酶体增生激活受体γ,诱导血管平滑肌细胞磷酸化Smad2/3表达水平上调从而诱导血管平滑肌细胞凋亡.     

罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用

目的 探讨罗格列酮(RGZ)对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用及其机制. 方法 30只雄性新西兰大耳白兔随机分为正常对照组(普通饮食)、模型组(高脂饮食+球囊损伤)和RGZ组(高脂饮食+球囊损伤+RGZ).喂养8周后行髂动脉球囊内膜剥脱术,建立兔髂动脉血管内皮损伤模型,RGZ组从术前3天开始给药,0.5mg·kg~(-1)·d~(-1).术后4周分别测定血脂、血糖、hsC-RP、一氧化氨(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和内皮素1(ET-I),取髂动脉标本行病理形态学观察,免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,TUNEL法检测细胞凋亡. 结果与模型组动物相比,罗格列酮组在术后4周末TC、TG、LDL-C、ET-1等指标均明显降低(P<0.01或P<0.05),HE及PCNA染色提示内膜增殖程度显著减轻(P<0.01),细胞凋亡率明显减少(P<0.05). 结论 罗格列酮对球囊损伤后的血管内皮有保护作用,其机制可能与调脂、抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移并促进其凋亡、影响NOS/ET-1的分泌等途径有关.     

罗格列酮调控沉默信息调节因子1对高糖处理的心肌微血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨罗格列酮对高糖处理的心肌微血管内皮细胞(CMEC)增殖、迁移的影响和分子机制。方法:将大鼠CMEC分为对照组(葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖对照组(葡萄糖33 mmol/L)、实验1组(高糖+罗格列酮5μmol/L)、实验2组(高糖+罗格列酮10μmol/L)、实验3组(高糖+罗格列酮20μmol/L)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blot检测P21、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、沉默信息调节因子1(Sirt1)的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测Sirt1的mRNA表达水平。将Sirt1小干扰RNA(si-Sirt1)转染CMEC,经高糖和罗格列酮20μmol/L处理后,采用上述方法检测细胞增殖和迁移能力。结果:与对照组比较,高糖对照组CMEC增殖和迁移能力降低,P21和E-cadherin表达增加,Sirt1表达降低(P均0.05)。与高糖对照组比较,高糖联合罗格列酮处理后CMEC增殖和迁移能力增加,P21和E-cadherin表达降低,Sirt1表达增加(P均0.05)。与高糖联合罗格列酮处理比较,转染si-Sirt1并经高糖联合罗格列酮处理后CMEC增殖和迁移能力降低,P21和E-cadherin表达增加(P均0.05)。结论:罗格列酮通过上调Sirt1表达促进高糖处理的CMEC增殖和迁移。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及可能的机制.方法 原代培养大鼠血管平滑肌细胞,取第4～8代细胞进行实验.用终浓度为1 μmol/L血管紧张素Ⅱ诱导6 h,随机分成对照组(含10% FBS的DMEM培养基)、1 μmol/L血管紧张素Ⅱ组、不同浓度罗格列酮(20、30、40及50μmol/L) 干预组,30 μmol/L罗格列酮干预不同时间组 (6、12、18及24 h).分别采用MTT和流式细胞术观察血管平滑肌细胞增殖和增殖周期的变化;逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定不同干预条件下血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达水平.结果 血管紧张素Ⅱ组吸光值明显高于对照组(P<0.01),20、30、40及50μmol/L罗格列酮干预12 h及30μmol/L 罗格列酮干预6、12、18及24 h后,吸光值明显降低(P<0.05或P<0.01);血管紧张素Ⅱ组增殖指数和S期细胞分数明显高于对照组(P<0.01).随着罗格列酮干预浓度的增加或干预时间的延长,增殖指数、S期细胞分数及处于S期分数均明显下降(P<0.05或P<0.01).与血管紧张素Ⅱ组相比,不同浓度(20、30及50μmol/L)罗格列酮干预12 h及同一浓度(30μmol/L)干预不同时间(6、12及24 h)显著升高血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结论 罗格列酮至少部分通过上调血管紧张素Ⅱ2型受体表达,阻止血管平滑肌细胞从G0/G1期向S期、G2/M期转化,从而抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖、迁移,发挥血管保护作用.     

罗格列酮抑制高糖诱导的内皮细胞黏附作用

目的 研究罗格列酮对高糖诱导的内皮细胞黏附作用的影响.方法 应用不同浓度葡萄糖处理内皮细胞后,加入不同浓度罗格列酮,用免疫细胞化学法和逆转录聚合酶链反应分别检测血管细胞黏附分子1蛋白及mRNA的表达.同时各处理组行内皮细胞-单核细胞黏附试验.结果 葡萄糖可诱导血管细胞黏附分子蛋白和mRNA的表达明显增加(P<0.05),在16.7 mmol/L时作用最显著;应用罗格列酮后,血管细胞黏附分子1蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.05).葡萄糖可诱导内皮细胞-单核细胞黏附增加,且与葡萄糖浓度呈正相关;罗格列酮可抑制内皮细胞-单核细胞黏附(P<0.05).结论 在一定葡萄糖浓度范围内,罗格列酮可能通过抑制葡萄糖诱导的内皮细胞血管细胞黏附分子1的表达来抑制内皮细胞-单核细胞的黏附作用,这可能是罗格列酮抗糖尿病相关的动脉粥样硬化作用之一.     

生长激素释放肽调控Akt信号通路对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨生长激素释放肽对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响及机制。方法以NIT-1胰岛β细胞为研究对象,分为正常组(正常培养)、高糖组(高糖培养)、实验组(生长激素释放肽预处理后用高糖培养),用Akt信号通路抑制剂处理实验组细胞记为实验组+抑制剂,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化(p)-Akt表达。结果高糖组OD值、p-Akt/Akt明显低于正常组(P0.05),细胞凋亡率明显高于正常组(P0.05);实验组OD值、p-Akt/Akt明显高于高糖组(P0.05),细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。结论生长激素释放肽能够抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡,其作用机制可能与Akt信号通路有关。     

罗格列酮减轻大鼠自体颈静脉移植后内膜增生

目的 观察过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂对大鼠移植静脉内膜增生的影响.方法 建立大鼠颈静脉移植血管模型,16只大鼠被随机分为罗格列酮组和模型组,每组8只,饲养6周.罗格列酮组应用罗格列酮.6周后观察大鼠的体重变化、内膜增生程度,RT-PCR检测移植静脉过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达.结果 术后饲养6周,模型组大鼠体重(521.6±22.3 g)较罗格列酮组(457.3±25.3 g)明显增加,差异有显著性 (P<0.05).与正常静脉相比,罗格列酮组(内膜厚度25.99±3.31 μm)和模型组(内膜厚度35.28±5.76 μm)的移植静脉出现了明显内膜增生,但罗格列酮组内膜增生比模型组明显减轻(P<0.05).RT-PCR检测发现罗格列酮组移植静脉过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达显著高于模型组(1.12±0.28比0.68±0.20,P<0.05).结论 过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂罗格列酮对大鼠移植静脉内膜增生有减轻作用.     

高脂饮食对大鼠血清IL-1β水平的影响及罗格列酮的干预作用

目的观察高脂饮食对大鼠血清白介素(IL)-1β的影响以及罗格列酮的干预作用。方法 40只雄性W istar大鼠随机分为对照组(n=16)和高脂组(n=24),喂养4 w后两组各取8只大鼠行高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验,测葡萄糖输注率(G IR)。高脂组再分为高脂对照组(n=8)、罗格列酮组(n=8)。罗格列酮组给予罗格列酮灌胃。继续喂养4 w再行高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验,同时测定各组大鼠血糖、胰岛素等糖脂代谢指标及血清炎症因子IL-1β水平。结果与正常组相比,第4周高脂组葡萄糖输注率下降(P<0.05),8 w后高脂组葡萄糖输注率继续下降(P<0.05),与高脂对照组相比罗格列酮组葡萄糖输注率升高(P<0.05)。与正常组相比,第8周高脂组IL-1β升高,罗格列酮组IL-1β较高脂组下降,但与NC组无显著差异。结论高脂饮食4 w成功诱导胰岛素抵抗大鼠模型。高脂饮食大鼠血清IL-1β水平增高,提示体内存在炎症反应增强。罗格列酮有可能通过减少IL-1β水平改善高脂饮食大鼠胰岛素抵抗。     

胰腺星状细胞对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响

目的 观察胰腺星状细胞对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞株Ins-1细胞活力及凋亡的影响,探索胰腺星状细胞在糖尿病胰岛功能衰竭进程中的作用.方法 构建Ins-1及胰腺星状细胞共培养系统,细胞分为Ins-1对照组、Ins-1高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、Ins-1高渗组(25 mmol/L甘露醇)、共培养对照组、共培养高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、共培养高渗组(25 mmol/L甘露醇).24 h后采用流式细胞法分析Ins-1细胞早期凋亡水平,48 h后分别采用嚷唑蓝(MTT)法和4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测细胞活力及凋亡细胞形态.使用单因素方差分析进行数据统计.结果 Ins-1高糖组与Ins-1对照组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为7.93%±0.41%、3.73%±0.35%,F=55.68,P<0.05);共培养高糖组与共培养对照组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为11.73%±1.20%、5.03%±0.41%,F=55.68,P<0.05).Ins-1高糖组与Ins-1对照组比较,细胞活力明显下降(分别为2.28±0.13、2.85±0.31,F=97.75,P<0.05);共培养高糖组与共培养对照组比较,细胞活力明显下降(分别为0.62±0.06、1.29±0.19,F=97.75,P<0.05).共培养对照组、共培养高糖组、共培养高渗组与Ins-1对照组、Ins-1高糖组、Ins-1高渗组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为5.03%±0.41%、3.73%±0.35%;11.73%±1.20%、7.93%±0.41%;7.60%±0.72%、5.60%±0.40%;F=55.68,P<0.05),细胞活力明显下降(分别为1.29±0.19、2.85±0.31;0.62±0.06、2.28±0.13;0.65±0.07、2.35±0.12;F=97.75,P<0.05),并可见凋亡细胞典型形态特征.结论 高糖、胰腺星状细胞可致大鼠胰岛β细胞Ins-1活力下降,凋亡增加;胰腺星状细胞可促进高糖诱导的胰岛β细胞凋亡.     

高脂饲料诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌已糖胺通路流量的变化

目的 探讨已糖胺通路(HBP)在高脂饲料诱导胰岛素抵抗形成中的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、高脂组和罗格列酮组.13周后,检测大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、骨骼肌中TG和FFA的含量,胰岛素敏感性采用胰岛素敏感指数(ISI)和高胰岛素正糖钳夹试验稳态时的葡萄糖输注率(GIR)来评估,骨骼肌HBP的流量用谷氨酰胺:6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)mRNA的表达水平、二磷酸尿嘧啶-N-乙酰葡萄糖胺(UDP-GlcNAc)的含量及蛋白O-GIcNAc糖基化水平来衡量.结果 高脂组大鼠与对照组相比,血清TG、TC、FFA以及骨骼肌TG、FFA均升高(均P<0.01);ISI、GIR均降低(均P<0.01),骨骼肌GFAT mRNA的表达(0.51±0.05对0.18±0.02)、UDP-GlcNAc 含量[(6.18±0.86对2.42±0.36)nmol/g]以及蛋白O-GlcNAc糖基化水平均明显升高(均P<0.01).罗格列酮组大鼠与高脂组相比,血清和骨骼肌TG、FFA明显降低(均P<0.01),胰岛素敏感性提高(P<0.05),GFAT mRNA的表达(0.27±0.03)、UDP-GlcNAc含量[(2.62±0.32)nmol/g]以及蛋白O-GIeNAc糖基化水平均明显降低(均P<0.05).结论 高脂饲料诱导大鼠胰岛素抵抗与其增加骨骼肌HBP的流量相关,可被罗格列酮降低.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.