延迟复苏对烫伤大鼠小肠上皮细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：探讨延迟复苏对烫伤大鼠肠粘膜上皮细胞凋亡百分率（ap%）及凋亡相关基因表达的影响。方法：Wistar大鼠30只，随机分为立即复苏组（ER）和延迟复苏组（DR）；30％体表面积Ⅲ度烫伤，采用DNA片段百分率测定、电泳和RT-PCR 观察伤后小肠粘膜上皮细胞ap%和ICE、bcl-2基因表达。结果：大鼠烫伤后小肠上皮ap%显著高于伤前（P＜0.01）；DR组肠上皮ap%显著高于ER组（P＜0.05-0.01）。DNA电泳可见明确梯形条带。烫伤后肠上此ICE基因表达明显增强，DR组ICE基因表达显著高于ER组（P＜0.01）。Bcl-2基因伤前在肠粘膜不表达，伤后极弱表达，两组比较无显著性差异。结论：烫伤延迟得苏后小肠上皮凋亡显著增加；促凋亡基因ICE和抑凋亡基因bcl-2的表达失衡可能是其凋亡剧增的重要原因之一。     

高压氧对急性运动大鼠腓肠肌细胞凋亡的影响

目的:探讨高压氧对急性运动大鼠腓肠肌Caspase 3、Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡的影响。方法:选用32只健康成年雄性大鼠,随机分为安静对照组、安静高压氧组、急性力竭运动组和急性运动高压氧恢复组4组。安静高压氧组于采样前应用高压氧治疗60 min;急性力竭运动组与急性运动高压氧恢复组进行坡度为10%、速度25 m/min的跑台运动至力竭,其中急性运动高压氧恢复组运动后应用高压氧恢复60 min。对4组大鼠腓肠肌进行HE染色,应用免疫组化技术测定Bcl-2蛋白与Caspase 3蛋白表达。结果:急性力竭运动组大鼠腓肠肌细胞出现凋亡的形态结构改变,急性运动高压氧恢复组细胞凋亡现象较急性力竭运动组明显减少;急性力竭运动组和急性运动高压氧恢复组Bcl-2蛋白阳性率显著高于安静对照组,急性运动高压氧恢复组Bcl-2蛋白阳性率高于急性力竭运动组;急性力竭运动组和急性运动高压氧恢复组大鼠腓肠肌Caspase 3蛋白阳性率显著高于安静对照组,急性运动高压氧恢复组Caspase 3蛋白阳性率显著低于急性力竭运动组。结论:高压氧疗法能促进急性力竭运动大鼠腓肠肌Bcl-2蛋白表达,抑制Caspase 3蛋白表达,减少腓肠肌的细胞凋亡。     

高压氧治疗对大鼠脑挫裂伤后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响

目的探讨高压氧(HBO)对创伤性脑损伤的治疗作用与对细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响之间的关系。方法制作SD大鼠自由落体脑挫裂伤动物模型,设立HBO治疗组和对照组,分别应用透射电镜、原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞技术对各组动物脑挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况进行检测;使用WesternBlot和免疫组化方法,检测bcl-2和Bax蛋白在脑组织中的表达情况。结果脑外伤后存在细胞凋亡,细胞凋亡的发生在伤后24h达到高峰,HBO治疗组在伤后24h和48h细胞凋亡发生率低于相应的对照组(P<0.05);脑挫裂伤灶和海马结构bcl-2蛋白的表达均增强,HBO治疗组bcl-2的表达强于对照组(P<0.05),而Bax的表达在各组间差异无统计学意义。结论HBO治疗对创伤性脑损伤后细胞凋亡的发生及凋亡相关蛋白的表达有影响,抑制细胞凋亡很可能是HBO对创伤性脑损伤治疗作用的重要机制。     

高原大鼠严重烧伤后氧化应激反应对小肠凋亡相关基因Bax,Bcl-2表达的影响

高原地区严重烧伤具有不同于平原地区的病理生理特点,在缺氧性损害的基础上加上再灌注损伤可造成机体各器官组织损伤加重。作者以海拔3840m（甘肃马晗山）和1517m（兰州）为背景,以大鼠为研究对象,建立大鼠严重烧伤后即时复苏与延迟复苏模型,检测不同海拔高度肠黏膜组织匀浆液中丙二醛（MDA）和总巯基（TSH）含量的变化,并采用免疫组化法观察肠黏膜上皮细胞Bax,Bcl-2基因表达情况,旨在探讨高海拔地区严重烧伤延迟复苏后氧化应激反应对肠黏膜Bax基因表达的影响,探讨有关高原地区严重烧伤延迟复苏后肠黏膜屏障损伤的防治对策。选取Wistar大鼠132只,雌雄各半,体质量（200±20）g。将其分为兰州组（1517m）和高原组（3840m）,兰州组包括兰州即时复苏组（LIFR,n=30）、兰州延迟复苏组（LDFR,n=30）、假伤组（LCG,n=6）,高原组包括高原即时复苏组（HIFR,n=30）、高原延迟复苏组（HDFR,n=30）、假伤组（HCG,n=30）。大鼠背部30%TBSA（总体表面积）Ⅲ度烫伤后,立即或伤后6h液体复苏,观察伤后肠黏膜中MDA和TSH变化及凋亡相关基因Bax,Bcl-2表达变化。     

大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗对细胞凋亡和Caspase-3、Fas表达的影响

目的　研究大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗后肿瘤细胞凋亡的时程变化和Caspase 3、Fas的表达。方法　立体定向法制作C6大鼠脑胶质瘤模型 6 0只 ,分为治疗组和对照组 ,治疗组于肿瘤接种后 14d行伽玛刀治疗 ,治疗后不同时间点行流式细胞学检查测定肿瘤细胞的凋亡率以及Caspase 3和Fas基因蛋白表达情况 ,分析凋亡率与两种蛋白的相关性。结果　与对照组相比 ,治疗组肿瘤细胞的凋亡率明显增高 (P <0 0 5 ) ,治疗后 4 8h肿瘤细胞凋亡率达高峰 ,然后逐渐下降 ;Caspase 3和Fas的表达情况与凋亡率的变化呈正相关 (r1 =0 92 8,r2 =0 916 )。结论　肿瘤细胞的凋亡为伽玛刀治疗胶质瘤疗效之一 ,Caspase 3和Fas基因可能参与和调节伽玛刀照射后肿瘤细胞凋亡。     

红芪多糖诱导肺腺癌细胞凋亡与Bax/Bcl-2表达的研究

目的:探讨红芪多糖对A549细胞凋亡及Bax/Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:MTT法检测红芪多糖对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测红芪多糖对A549细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测红芪多糖对A549细胞Bcl-2、Bax mRNA表达的影响。结果:不同浓度的红芪多糖对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关;不同浓度红芪多糖均可诱导A549细胞凋亡,并呈现浓度依赖性;不同浓度红芪多糖均可降低Bcl-2蛋白的表达,相应提高Bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:红芪多糖可抑制A549细胞生长,并诱导其凋亡,且可能通过调节细胞内Bax和Bcl-2的表达从而诱导A549细胞凋亡。     

模拟失重对大鼠小肠黏膜紧密连接蛋白表达的影响

目的 研究尾吊模拟失重大鼠小肠黏膜紧密连接(TJ)蛋白的表达.方法 24只Wistar大鼠随机分为3组:对照组(Con),悬吊14 d组(TS-14d)和悬吊21 d组(TS-21 d).测定空肠Ti蛋白Occludin,Zonula Occludens-1(ZO-1)的免疫组化、实时荧光定量表达;透射电镜下观察TJ和...     

三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导HepG2细胞凋亡及其机制。方法采用MTT法、形态学观察及流式细胞术方法检测As2O3对HepG2细胞的生长抑制、凋亡作用的影响,用Western blot检测As2O3处理后HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果As2O3对HepG2细胞有明显的抑制增殖作用,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈典型的凋亡形态学改变,As2O3呈时间依赖性诱导HepG2细胞凋亡。As2O3处理不同时间后,Bcl-2蛋白表达水平下调,caspase-3蛋白表达水平升高。结论As2O3具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,促进caspase-3活化有关。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠细胞凋亡及Caspase-3 mRNA表达的影响

目的　探讨高压氧 (HBO)对缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生大鼠细胞凋亡及半胱天冬酶 -3m RNA(Caspase- 3m RNA)表达的影响 ,并探讨其可能的机制。方法　健康新生 7d龄 SD大鼠随机分为正常对照组 (CON组 ,n=8) ,左颈总动脉结扎 HIBD组 (n=8)及 HIBD+HBO治疗组 (简称 HBO组 ,n=8)。用免疫组化及原位杂交方法检测各组细胞凋亡及 Caspase- 3m RNA的表达情况。结果　TU NEL 免疫组化结果显示 :CON组的左脑及 HIBD组的右脑未见或偶见阳性细胞 ,HIBD组大鼠左脑组织各个部位均可见到阳性凋亡细胞 ,经 HBO治疗者左脑阳性细胞比未治疗者减少 [(2 5 2 .96± 6 8.5 9)vs(342 .2 4± 74 .16 ) ],差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。Caspase- 3m RNA原位杂交检测结果显示 :CON组无或仅少量阳性细胞出现 ,HIBD组和 HBO组脑皮质、纹状体及海马均可见 Caspase- 3m RNA阳性细胞表达 ,但 HBO组信号明显减少。结论　与 CON组比较 ,HIBD组病变侧脑组织阳性凋亡细胞数增多及Caspase- 3m RNA的表达增强 ;经 HBO治疗后 ,与不经 HBO治疗的 HIBD组比较 ,病变侧脑组织阳性凋亡细胞明显减少 ,Caspase- 3m RNA的表达明显减弱 ,提示 HBO可能通过抑制 Caspase- 3m RNA的表达 ,起到减少细胞凋亡、保护神经元的作用。     

烧伤血清对培养大鼠肠上皮细胞间黏附连接的影响

肠黏膜屏障中机械性屏障最为重要 ,其结构基础是肠黏膜上皮细胞的完整性及其相邻肠黏膜上皮细胞间连接。严重烧伤后肠黏膜缺血、缺氧及再灌注导致肠黏膜上皮完整性受损 ,是肠黏膜屏障功能降低的主要原因[1,2 ] 。在维护肠黏膜机械性屏障完整性结构中 ,肠上皮细胞形态结构和功能的完整起着重要的作用。为了深入和系统地了解烧伤后肠上皮细胞间连接的变化 ,笔者以体外培养的肠黏膜上皮细胞株ＩＥＣ - 6为模型 ,动态观察了烧伤血清对肠上皮细胞间的特有成分Ｅ -钙黏附蛋白 (Ｅ -ｃａｄ ｈｅｒｉｎ ,ＥＣＤ)表达的影响 ,为进一步研究肠黏膜上皮…     

过度训练对大鼠心肌细胞凋亡的影响

为了研究过度训练对大鼠心肌细胞凋亡的影响 ,通过对大鼠进行力竭性游泳训练建立大鼠过度训练模型 ,用DNA原位末端标记法检测心肌细胞的凋亡 ,并用免疫组化的方法检测心肌细胞中bcl- 2和Fas蛋白的表达情况。结果发现 :①过度训练时 ,大鼠心肌细胞凋亡显著增加。心肌细胞凋亡可能是过度训练影响心血管功能的病理生理机制。②过度训练时 ,大鼠心肌细胞中bcl- 2蛋白的表达显著下降 ,Fas蛋白的表达轻度增加。因此 ,过度训练抑制bcl- 2蛋白的表达而促进Fas蛋白的表达 ,这可能是过度训练时大鼠心肌细胞凋亡发生的基因调控机制。③过度训练时 ,大鼠心肌组织和血清中SOD活性显著下降 ,MDA含量显著增加。因此 ,过度训练时机体抗氧化能力下降 ,导致氧自由基生成增多。这可能也是心肌细胞凋亡的调节机制。     

补充L-赖氨酸对急性力竭运动大鼠肾细胞凋亡及凋亡调控基因蛋白表达的影响

目的:探讨补充L-赖氨酸对急性力竭运动大鼠肾细胞凋亡及凋亡调控基因蛋白表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠24只,随机分成3组:安静对照组、运动组和运动给药组。安静对照组不运动,运动组和运动给药组进行一次力竭运动。安静对照组和运动组在力竭运动前均灌胃一次生理盐水,而运动给药组灌胃L-赖氨酸一次。运动后即刻处死大鼠,取肾组织,HE常规染色观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax、bcl-2和p53蛋白表达。结果:与安静对照组相比,运动组和运动给药组大鼠细胞凋亡发生率和凋亡指数显著增加(P<0.01);与运动组相比,运动给药组凋亡指数显著下降(P<0.05)。与安静对照组相比,运动组和运动给药组bax、bcl-2和p53蛋白表达的阳性细胞平均光密度值(MOD)、阳性物质表达面积和阳性指数PI差异显著增高(P<0.01,P<0.05);与运动组相比,运动给药组bax和p53显著降低,bcl-2显著增高(P<0.05)。与安静对照组相比,运动组bcl-2/bax显著降低(P<0.05),运动给药组显著增加(P<0.05);且运动给药组显著高于运动组(P<0.05)。结论:(1)一次力竭运动前补充L-赖氨酸使力竭运动诱导的肾细胞凋亡显著减少;(2)一次力竭运动前补充L-赖氨酸可使p53蛋白表达显著降低,使bcl-2蛋白表达显著增高,并使bcl-2/bax比值增高,从而起到抑制细胞凋亡的作用。     

As2O3治疗急性早幼粒细胞白血病的作用机制

目的：研究三氧化二砷（As2O3）治疗M3型急性早幼粒细胞白血病（APL）的作用机制。方法：将培养的NB4细胞加入不同浓度（0．5μM,1μM,1．5μM,2μM,3μM）的As203作用48h后,采用MTT比色法观察不同浓度As2O3对NB4细胞活力的影响,用流式细胞术及Caspase-3活性检测试剂盒检测As2O3引起NB4细胞凋亡情况,用westernBlot检测As203对Caspase-3蛋白的作用。结果：MTT比色法结果显示,As2O3明显抑制NB4细胞增殖,且呈浓度依赖性,2μMAs2O3孵育48hNB4细胞活力下降约50％;流式细胞术结果显示,2μMAs2O3作用48h后,NB4细胞凋亡率显著增加,且以早期凋亡率增加为主（P〈0．01）;同时As2O3处理后的NB4细胞Caspase-3活性明显增加,为对照组的2．2倍（P〈0.01）;WesternBlot结果显示,As2O3显著增加Caspase-3总蛋白及其激活型cleaved—Caspase-3（p17）蛋白表达量。结论：As2O3可诱导NB4细胞凋亡,此作用与激活依赖Caspase-3的细胞凋亡通路相关,但是具体是通过何种凋亡通路,以及参与其中的信号分子需要进一步验证。     

Nrf2调控自噬对于宫颈癌发生发展的作用及机制研究

目的研究宫颈癌组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及细胞自噬人蛋白的表达情况,探讨Nrf2调控自噬对宫颈癌发生发展的作用机制。方法收集2018年1月－12月在新疆医科大学第一附属医院妇产科就诊的50例宫颈癌标本及癌旁组织,免疫组化检测组织标本中Beclin1、LC3、p62、Nrf2的表达情况;在宫颈癌SiHa细胞株内分别转染Nrf2 siRNA及p62 siRNA后,Western Blot检测Nrf2、p62、Bcl2、Bax蛋白表达情况,MTT检测细胞增殖情况。结果免疫组化结果显示Beclin1、LC3在宫颈癌组织内显著低表达,分别为18.0%（9/50）和20.0%（10/50）,而p62和Nrf2在宫颈癌组织内显著高表达,分别为78.0%（39/50）和86.0%（43/50）,差异有统计学意义（P<0.05）。分别在宫颈癌SiHa细胞株内转染Nrf2 siRNA及p62 siRNA后,细胞内Nrf2与p62表达呈正相关,且均能显著促进细胞凋亡,差异有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖在Nrf2 siRNA和p62 siRNA组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论宫颈癌细胞内,Nrf2与p62存在环形正向调控作用,且抑制Nrf2和p62的表达后可以显著促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

人参皂苷Rg1对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用研究

目的研究人参皂苷Rg1（GinsenosideRg1,Rg1）对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetra—hydropyrldine,MPTP）致帕金森病小鼠黑质（substantla nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神经元变性的保护作用及其可能机制。方法C57BL6小鼠随机分为对照组（NS,ip）、MPTP组（30mg·kg^-1×5d,ip）及Rg,（5mg·kg^-1×8d,ip）预处理组。应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）、免疫组织化学染色等技术观察了SN Caspase-3mRNA、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）mRNA的表达水平和黑质致密带（substantia nigra zona compacta,SNzc）TH免疫反应阳性细胞数量等多项指标的变化,用高效液相色谱法检测小鼠纹状体（stfiatum,Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（dihydroxyphenylaceti cacid,DOPAC）和高香草酸（homovanillic acid,HVA）含量。结果MPTP组SN内TH阳性细胞数量、Str内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显减少,应用Rg1后可逆转上述改变（P〈0．01）。MPTP组SN Bcl-2、THmRNA的表达明显降低（P〈0．01）;Caspase-3、Bax mRNA的表达明显增加（P〈0．01）。应用Rg1后可逆转上述改变（P〈0．05）。结论Rg1对MPTP致帕金森病小鼠SNDA能神经元具有明显的保护作用,其机制可能与抗凋亡过程有关。