结直肠癌MMP-2的表达与血液微转移的关系

目的从肿瘤的临床病理学和分子病理学角度对结直肠癌组织中MMP-2的表达与肿瘤外周血微转移的关系进行探讨。方法收集了2003年6～12月行根治手术的结直肠癌患者中的30例，行MMP-2免疫组化染色并应用RT-PCR方法检测外周血的转移肿瘤细胞，比较不同MMP-2表达量与血液微转移的关系。结果76．67％结直肠癌患者的肿瘤细胞表达MMP-2（23／30），定位于胞浆，其中弱阳性13例，阳性4例，强阳性6例；MMP-2的表达与肿瘤分期、淋巴转移相关（P〈0．05）。外周血CK20 mRNA表达率为36．7％，外周血CK20 mRNA与结直肠癌分期相关（P=0．004），与肿瘤部位，大体类型，恶性程度无关。结直肠癌组织中MMP-2的表达与结直肠癌患者外周血CK20 mRNA密切相关，随着MMP-2表达的增强外周血CK20 mRNA的阳性率也增加（P=0．002）。结论结直肠癌组织中MMP-2表达的程度不仅能够反映肿瘤的分期，而且能够反映肿瘤血液中微转移的情况。     

RT-PCR检测外周血CEA和CK20 mRNA对结肠癌肿瘤微转移的预测价值

目的 检测结肠癌患者外周血CEA和CK20mRNA的表达水平及评估其对肿瘤转移的预测价值.方法 分别采用RT-PCR和传统定性PCR技术,检测结肠癌患者(85例)和健康志愿者(45例)外周血CEA和CK20mRNA的表达水平.结果 85例结肠癌患者外周血CEA和CK20mRNA的水平分别为(920±104)copies/ml和(532±91)copies/ml,健康志愿者未检测到CEA和CK20 mRNA表达;CEA和CK20 mRNA水平与Dukes分期、细胞分化程度相关,Logistic回归分析得随Dukes分期进展,肿瘤转移率逐渐增加(与A期相比OR值分别为1.087、1.983、2.876);RT-PCR检测灵敏度明显高于定性PCR.结论 RT-PCR检测结肠癌患者外周血CEA和CK20 mRNA表达水平灵敏度高,CEA和CK20 mRNA具有较好的肿瘤微转移预测价值.     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法检测结直肠癌患者外周血CEA-mRNA表达研究

目的建立检测CEA mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（VQ-PCR）方法，探讨外周血CEA mRNA表达在结直肠癌患者中的应用价值。方法应用SYBR Green J作为荧光染料，以GAPDH作为内对照，建立检测CEA mRNA的FQ-PCR方法，并对56例结直肠癌患者外周血中CEA mRNA的表达水平进行了检测。结果56例结直肠癌患者中有33例外周血CEA mRNA表达为阳性，表达水平为1．07±2．99，阳性表达率为66．1％（37／56），30例结直肠良性疾病患者中有2例外周血CEA mRNA表达为阳性，表达水平为0．13±0．07，阳性表达率为6．7％（2／30），30例健康成人外周血CEA mRNA表达均为阴性；结直肠癌患者外周血CEA mRNA在不同病理分化程度中表达水平无明显变化（P〉0．05），但在Dukes C＋D期表达水平（1．73±2．15）及表达阳性率82．8％（24／29）均显著高于Dukes A＋B期表达水平（0．39±0．87）及表达阳性率48．1％（13／27）（P〈0．01）。结论该VQ-PCR方法简便、特异、可靠；检测外周血CEA mRNA表达水平，对诊断结直肠肿瘤病变比血清CEA蛋白具有更高的敏感性，可提高早期结直肠癌诊断符合率；在发生转移的Dukes C＋D期其表达水平及表达阳性率均显著高于未发生转移的Dukes A＋B期，可作为鉴别结直肠癌患者发生微转移的有力证据之一，动态观察其水平变化对判断结直肠癌患者的预后有重要价值。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法检测结直肠癌患者外周血CEA-mRNA表达研究

目的 建立检测CEA mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,探讨外周血CEA mRNA表达在结直肠癌患者中的应用价值.方法 应用SYBR GreenⅠ作为荧光染料,以GAPDH作为内对照,建立检测CEA mRNA的FQ-PCR方法,并对56例结直肠癌患者外周血中CEA mRNA的表达水平进行了检测.结果 56例结直肠癌患者中有33例外周血CEA mRNA表达为阳性,表达水平为1.07±2.99,阳性表达率为66.1%(37/56),30例结直肠良性疾病患者中有2例外周血CEA mRNA表达为阳性,表达水平为0.13±0.07,阳性表达率为6.7%(2/30),30例健康成人外周血CEA mRNA表达均为阴性;结直肠癌患者外周血CEA mRNA在不同病理分化程度中表达水平无明显变化(P＞0.05),但在Dukes C+D期表达水平(1.73±2.15)及表达阳性率82.8%(24/29)均显著高于Dukes A+B期表达水平(0.39±0.87)及表达阳性率48.1%(13/27)(P＜0.01).结论 该FQ-PCR方法简便、特异、可靠;检测外周血CEA mRNA表达水平,对诊断结直肠肿瘤病变比血清CEA蛋白具有更高的敏感性,可提高早期结直肠癌诊断符合率;在发生转移的Dukes C+D期其表达水平及表达阳性率均显著高于未发生转移的Dukes A+B期,可作为鉴别结直肠癌患者发生微转移的有力证据之一,动态观察其水平变化对判断结直肠癌患者的预后有重要价值.     

外周血STC-1mRNA测定及其在结直肠癌诊断中的价值

目的比较斯钙素（STC-1）mRNA在结直肠癌患者和健康人外周血中表达水平的差异,初步探讨STC-1mRNA作为循环肿瘤标志物的临床意义。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测37例结直肠癌患者、18名健康人外周血STC-1mRNA的表达水平,并对其中30例患者的癌胚抗原（CEA）和糖链抗原199（CA199）等血清肿瘤标志物进行比较分析。结果结直肠癌患者与健康人的外周血STC-1mRNA表达水平差异有统计学意义,患者组高于健康组;以受试者工作特征（ROC）曲线分析,发现STC-1mRNA作为结直肠癌诊断指标具有较高的敏感性和特异性,其曲线下面积为0．730;以0．5为表达阳性界值,STC-1mRNA检出结直肠癌的效能优于血清肿瘤标志物CEA和CA199的联合应用。结论应用荧光定量RT—PCR检测结直肠癌患者外周血STC-1mRNA表达水平具有较高的诊断价值,其可能成为新的用于结直肠癌诊断的循环肿瘤标志物。     

RT-PCR检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20 mRNA的表达

目的：检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达．并探讨其临床价值。方法：应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应，检测59例结直肠癌患者、12例原发性肝癌患者和26例对照者外周血中CK20mRNA的表达。结果：对照者及原发性肝癌患者外周血中CK20mRNA均为阴性表达。结直肠癌患者外周血中CK20mRNA阳性表达率为5913％。结直肠癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达率在不同肿瘤病理分化程度中差异无显著性，而在不同Dukes分期和有无淋巴结转移及远处转移患者间差异有显著性（P〈0.05）。结论：检测结直肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达可作为预测肿瘤微转移的评估指标，可监测患者病情变化，识别高危人群，并有助于结直肠癌微转移的判断及鉴别原发性肝细胞肝癌和结直肠癌肝转移。[著者文摘]     

细胞角蛋白19、20 mRNA定量在检测结肠癌患者外周血微转移中的应用

目的探讨细胞角蛋白19、20（CK19、20）mRNA表达在诊断结肠癌患者外周血微转移中的作用。方法随机选择和收集36例结肠癌患者、34例结肠良性疾病患者及32名健康献血员外周血,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）测定CK19、20mRNA含量。结果CK19、20mRNA在结肠良性疾病组外周血均未见表达。在健康献血员组只有1例CK19表达阳性,CK20均为阴性。在结肠癌组,CK19检测阳性率为58．3％（21／36）;CK20阳性率为36．1％（13／36）;CK19、20联合检测阳性率为77．8％（28／36）。结肠癌组与结肠良性疾病组或献血员组之间比较,CK19、CK20在外周血表达差异均有显著性（P〈0．05）。结合临床资料分析,结肠癌患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达和淋巴结转移、Dukes分期关系密切（P〈0．05）,而与肿瘤类型及分化程度无关（P〉0．05）。结论CK19、20mRNA可作为检测结肠癌外周血微转移的标志物,两者联合检测可提高检出率。     

RT-PCR检测结肠癌患者外周血CEA mRNA的意义

目的　了解结肠癌患者外周血CEAmRNA的水平。方法　采用荧光定量RT PCR技术 ,检测结肠癌患者 73例 ,健康志愿者 30例外周血CEA mRNA的水平。结果　 73例结肠癌患者外周血CEAmRNA的水平为 (10 6 0 0 .0± 2 0 6 6 7.5 )copies/ml,其中38例阳性 ,阳性率为 5 2 .1%。健康志愿者未检测到CEAmRNA。CEAmRNA水平与肿瘤病理分期和分化程度相关 ;血清CEA阳性组中CEAmRNA的阳性率显著高于CEA阴性组 (P <0 .0 1) ;结论　外周血CEA mRNA可作为结肠癌辅助诊断指标 ,定量检测外周血CEA mRNA有助于结肠癌微转移的监测     

子宫内膜癌患者外周血CK20 mRNA的表达及临床意义

目的：探讨子宫内膜癌患者外周血CK20 mRNA的表达对子宫内膜癌微转移诊断的价值。方法：采用RT-PCR方法对40例子宫内膜癌患者及20例子宫良性病变患者外周血CK20 mRNA的表达进行检测。并以子宫内膜癌组织和健康女性外周血为对照。结果：子宫良性病变患者及健康女性外周血中均无CK20 mRNA表达；子宫内膜癌组织均有CK20 mRNA表达。40例子宫内膜癌患者术前外周血中，11例检出CK20 mRNA阳性表达，阳性率27．5％。CK20 mRNA阳性检出与临床分期存在显著性相关（P〈0．05），随着临床分期的进展，CK20 mRNA阳性率明显增加。CK20mRNA阳性表达与病理分级无关（P〉0．05）。结论，子宫内膜癌早船可能已出现微量癌细胞的血行播散，CK20可作为子宫内膜癌血行转移的分子标志之一，检测子宫内膜癌患者外周血癌细胞可能成为改进分期、评估预后、提供治疗的参考指标。     

血清肿瘤标志物联合检测诊断直肠癌价值

目的探讨血清癌胚抗原（carcino-embryonic antigen,CEA）、糖蛋白抗原（carbohydrate antigen,CA）199和CA242联合检测诊断结直肠癌的价值。方法分别采用间接酶联免疫吸附法、电化学发光法、酶免疫荧光法检测健康体检者32名（正常对照组）、良性肠病患者43例（良性对照组）和结直肠癌患者106例（结直肠癌组）血清CEA,CA199,CA242水平,比较3组不同发病部位、不同Dukes分期血清CEA,CA199,CA242水平,并比较3种肿瘤标志物单独或联合检测诊断结直肠癌的阳性率。结果结直肠癌组血清CEA,CA199,CA242水平高于正常对照组和良性对照组（P〈0．01）;结肠癌患者CA19-9水平高于直肠癌患者（P〈0．05）,CEA及CA242水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）;Dukes分期D期血清CEA,CA199,CA242水平高于Dukes分期A,B,C期（P〈0．01）;3项肿瘤标志物单项检测诊断结直肠癌阳性率低于联合检测阳性率（P〈0．05）。结论CEA,CA199,CA242联合检测可提高结直肠癌诊断准确率。     

大肠癌外周血循环肿瘤细胞数的检测及临床意义

目的 检测大肠癌（CRC）患者外周血循环肿瘤细胞（CTCs）数,探讨其临床意义.方法 58例CRC患者术前静脉采血,使用多重聚合酶链式反应（PCR）结合荧光定量PCR（RTFQ PCR）方法检测外周血细胞角蛋白20（CK20）及癌胚抗原（CEA） mRNA表达,比较CTCs细胞阳性率与临床病理参数的关系.结果 58例CRC患者外周血中CK20及CEAmRNA表达的阳性率为93.1％.CTCs的阳性检出率与Ducke＇s分期及淋巴结转移相关（P＜0.05）.结论 多重RTFQ PCR方法可应用于CRC患者外周血中CTCs检测,对预后判断有着重要的临床意义.     

大肠恶性肿瘤外周血微转移的检测及其临床意义

目的　研究大肠癌患者外周血CK19mRNA的表达 ,并探讨其临床意义。方法　采用RT PCR方法检测 4 1例大肠癌患者和 8例胃肠道非恶性病变手术患者的外周血CK19mRNA的表达。结果　 8例胃肠道非恶性病变手术患者、8例健康志愿者的外周血CK19mRNA无阳性表达 ;4 1例大肠癌患者外周血CK19mRNA阳性表达率分别 :单次外周血采样CK19mRNA阳性表达率为 4 1 5 % ;两次采样总阳性率大肠癌患者为 6 5 9% ,外周血重复采样阳性率高于单次采样 (P <0 0 1)。DukeC、D期患者CK19mRNA阳性表达率高于DukeB期 (P <0 0 5 )。结论　大肠癌患者外周血CK 19mRNA是一种敏感、特异的检测方法 ,可以作为检测大肠癌微转移的指标并指导其治疗和预后。     

乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血CK20的检测与其临床病理分期相关性研究

目的 :检测乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血中细胞角蛋白 2 0 (cytokeratin2 0 ,CK2 0 )并分析其临床病理联系。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血CK2 0mRNA ,并以 6 0例健康者作为对照。结果 :6 0例健康对照组外周血CK2 0mRNA均为阴性。实验组 138例CK2 0mRNA表达阳性为 5 3/ 138,其中CK2 0mRNA表达阳性分别为乳腺癌 16 / 4 4 ,胃癌 2 2 / 5 7及大肠癌 15 / 37。CK2 0mRNA表达阳性在TNM及Dukes(大肠癌 )分期中分别为 :I期 (乳腺癌 1/ 6 ;胃癌 2 /11) ,II期 (乳腺癌 2 / 12 ;胃癌 4 / 19) ,III期 (乳腺癌 10 / 18;胃癌 12 / 2 1)及IV期 (乳腺癌 3/ 8;胃癌 4 / 6 ) ,(P <0 .0 5 ,I,IIvsIII,IV) ;大肠癌A期 (1/ 7) ,B期 (4 / 16 ) ,C期 (7/ 10 )及D期 (3/ 4 ) ,(P <0 .0 5 ,A、B及C、D期间 )。胃癌及大肠癌病理改变在低未分化及中高分化癌间经 χ2 检验有显著差异。结论 :RT -PCR方法检测乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血中CK2 0mRNA表达与其临床及病理分期相关     

CK20 mRNA和hTERT mRNA在大肠癌围手术期血行微转移中的转录特征

目的 探讨细胞角蛋白20(CK20)mRNA和人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA作为大肠癌围手术期血行微转移标志物的价值.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例大肠癌患者术前、术中及术后外周血CK20 mRNA和hTERTmRNA的表达,并对不同分化程度、不同Dukes分期的大肠癌患者CK20 mRNA和hTERT mRNA的表达进行比较.结果 40例大肠癌患者外周血CK20 mRNA和hTERT mRNA的表达率,术前分别为47.5%(19/40)和45.0%(18/40),术中为70.0%(28/40)和70.0%(28/40),术后为10.0%(4/40)和32.5%(13/40).除术后hTERT mRNA阳性率与术前无显著差异(P＞0.05)外,术中外周血CK20 mRNA、hTERT mRNA阳性率和表达强度(与内参照β-actin比值)均显著高于术前(P＜0.01,P＜0.05),术后明显低于术前和术中(P＜0.01).hTERT mRNA在低分化肿瘤的表达明显高于高、中分化组(P＜0.05),而CK20mRNA在低分化肿瘤的表达强度低于高、中分化组(P＜0.01).大肠癌围手术期Dukes B期和C D期之间CK20 mRNA和hTERT mRNA均无显著性差异(P＞0.05).结论 大肠癌患者围手术期血行微转移的发生几率较高,病理分化程度低者更易发生,但与Dukes分期无明显相关,CK20 mRNA和hTERT mRNA联合检测对大肠癌血液微转移具有较高的敏感性和特异性,是判断围手术期血行微转移的良好标志物.     

巢式RT-PCR对肺癌外周血中微转移灶的检测和半定量测定

目的对肺癌外周血中微转移灶的检测和半定量测定。方法以CK-19为标记,采用巢式RT-PCR和半定量方法对肺癌患者外周血中微转移灶的检测,比较治疗前后外周血中癌细胞数的相对变化。结果60例肺癌中有29例CK-19阳性,18例健康人中,仅1例检测出CK-19阳性,7例肺良性疾病患者有2例为CK-19阳性。实验组CK-19阳性率48%(29/60)与对照组12%(3/25)相比有极显著差异(P<0.01)。2例肺癌患者化疗前相对癌细胞数分别为25和16个,经1周期化疗后,相对癌细胞数分别为5和1个。结论以CK-19为标记,采用巢式RT-PCR方法检测肺癌患者外周血中的癌细胞有较高敏感性和特异性,半定量RT-PCR法,能早期反映外周血中癌细胞数的相对变化情况,有助于对临床疗效及早做出评价。     

鸟苷酸环化酶C在大肠癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的：探讨鸟甘酸环化酶 C （ GCC ）在大肠癌患者外周血中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR法对32例大肠癌患者、25例大肠良性病变患者、30例健康体检者外周血中GCC表达情况进行检测,并对大肠癌病理指标与GCC mRNA 表达阳性率之间关系进行研究。结果32例大肠癌患者中,GCC mRNA 的阳性检出率为65.63％（21／32）,良性组中 GCC mRNA 的阳性检出率为20.00％（5／25）,而对照组中未见 GCC mRNA 表达;三组外周血中表达阳性率差异具有统计学意义（P〈0.05）。大肠癌患者 GCC mRNA 表达水平与Duke 分期、淋巴结转移和肝转移密切相关（P〈0.05）,与年龄、性别、肿瘤大小等无关（P〉0.05）。结论 GCC mRNA 在大肠癌患者外周血中阳性表达率较高,特别是复发或转移病例,可作为大肠癌术后复发、转移的早期检测指标之一。     

人乳腺癌特异性基因1 mRNA实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测试剂盒的建立及应用

目的建立人乳腺癌特异性基因1(BCSG1)mRNA实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)检测试剂盒,并评价其在乳腺癌循环肿瘤细胞检测中的应用价值。方法优化试剂盒中各组分的浓度、确定试剂盒的稳定性、灵敏度及特异性,并检测外周血样品中BCSG1 mRNA的表达水平。结果优化了试剂盒中的引物、探针,成功制备了定值标准品,通过设立阴、阳性质控品的方法,解决了试剂盒的特异性、灵敏性、准确性及质量控制等关键技术问题,特异度及准确性均为95%以上,灵敏度为100拷贝/ml(全血)。外周血标本中BCSG1 mRNA的检测结果为,12例临床确诊已转移的乳腺癌患者均为阳性,21例临床未确诊转移的乳腺癌患者中12例为阳性,其余9例为阴性,15例乳腺良性疾病患者、10例正常人均为阴性。结论建立的BCSG1 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒具有很高的临床应用价值,可用于检测外周血样品中BCSG1mRNA的表达量,检测结果可作为乳腺癌患者诊疗过程中的重要监测指标。