Anti-proliferative effects induced by anti-CD4 human/murine chimeric antibody and murine anti-CD4 monoclonal antibody

Summary The effects of chimeric anti-CD4 human/murine chimeric antibody and murine anti-CD4 monoclonal antibody (McAb) on the proliferation induced by anti-CD3 McAb, phytohemagglutinin (PHA), IL-2, and allogeneic cells were studied. The results showed that chimeric anti-CD4 antibody and murine anti-CD4 McAb could inhibit the proliferation induced by the above inducers and the inhibitory effects were related to the dosage of the antibodies. This project was supported by a grant from the National Sciences Foundation of China (Serial No. 39370628).     

抗CD42—鼠嵌合抗体的生物学特性及作用机理探讨

目的 比较抗ＣＤ４人－鼠嵌合抗体与鼠源性单抗在单向混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）和兔皮内移植物抗宿主反应（ＧＶＨＲ）中的作用，及嵌合抗体的抗体依赖性细胞介导的细胞毒（ＡＤＣＣ）和补体依赖细胞毒（ＣＤＣ）活性，以进一步探讨抗ＣＤ４嵌合抗体的增殖抑制作用机理。方法 用四甲基偶氮唑盐比色分析法检测抗ＣＤ４抗体在单向ＭＬＲ中的抑制作用。以免疫抑制剂处理后的大白兔作为ＧＶＨＲ的动物模型，对抗体的增殖抑制作用进行     

CD4~ T Cell Apoptosis Induced by Anti-CD4 Antibodies

One of the mechanism of AIDS caused by human immunodeficiency virus (HIV) is that HIV caninduce CD4 T cells apoptosis[" 2]. Various HIV pramteins mediated CD4 molecular' cross--linking can induce CD4 T cell apoptosis and the change of multifold cell surface molecules. The effect on,CD4 Tcells induced by anti--CD4 chimeric antibodies mediated CD4 molecular cross--linking need to be furtherverified. In this study, we investigated the apOPtosisof different target cells induced by a…     

CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤活性研究

为研究CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤作用,作者采集正常人外周血分离单个核细胞(PBMC),先用抗CD3的单克隆抗体(CD3McAb)和rIL-2诱导和激活,使之成为CD3McAb激活的杀伤细胞(CD3AK),再制备CD3AK的冻融提取液,然后进行体内、外抗肿瘤实验.结果:低剂量的CD3McAb和rIL-2能明显诱导PBMC的活化和增殖;激活后的CD3AK细胞冻融提取液可抑制小鼠肝癌实体瘤细胞H22在小鼠体内生长,其抑瘤率达68.20%(肿瘤局部注射)和60.38%(腹腔注射);在体外实验中,该提取液能有效杀伤K562和Raji瘤细胞,其杀瘤活性分别为83.32%和66.83%.以上研究说明CD3AK细胞冻融提取液有可能成为肿瘤生物治疗的一种新型制剂.     

抗HBsAg鼠/人嵌合抗体基因的构建、表达及鉴定

用抗体工程法构建抗乙肝表面抗原(HBsAg)鼠/人嵌合抗体的嵌合基因,并在哺乳动物细胞中成功地表达。分离鼠McAb 2H1(抗HBsAg)轻、重链可变区基因,并连接到含有人轻链(Kappa)及重链(Gamma 1)恒定区基因的哺乳动物细胞表达载体中;用电穿孔法将嵌合基因导入小鼠SP2/0细胞,得到高效表达。2H1嵌合抗体能特异性地与HBsAg结合,并能有效地与亲代McAb竞争;与血源性多克隆乙肝免疫球蛋白(HBIG)比较,其具有特异性好、节约血源、价廉、质纯、无其他病毒,如HIV等污染制品的可能等优点,可用于阻断乙肝母婴传播及在意外感染时被动免疫。     

供体特异性输注对异基因小鼠皮肤移植的影响

为研究抗CD3单抗和供鼠骨髓细胞输注对小鼠皮肤移植存活的影响 ,在抗CD3单抗作用下 ,从供鼠C57BL/ 6中分离提取骨髓细胞液 ,移植术后注入受鼠BALB/C中 ,观察对异基因皮肤移植存活的影响。结果 :骨髓组移植皮肤平均存活时间 (MST)为 1 5.6d ,抗CD3单抗组为 1 0 .1d ,正常对照组为 7.7d。结果提示 ,在免疫抑制下供鼠骨髓输注可促进移植物的存活     

抗乳腺癌人鼠嵌合抗体的构建

目的：构建抗人乳腺癌单克隆抗体人鼠嵌合抗体，降低鼠源性抗体应用于人体的免疫排斥反应。方法：采用RT－PCR技术，从分泌抗人乳腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株CDI315B分离克隆抗体轻重链可变区基因，对其进行序列分析，将连接组建人鼠嵌合轻链和人鼠嵌合重链，然后分别将它们克隆到真核细胞表达载体pcDNA3。结果：构建的人鼠嵌合抗体基因克隆在真核细胞表达载体上。结论：人鼠嵌合抗体的构建为它的表达和临床应用打下基础。     

Cd4+ T cell apoptosis induced by anti-CD4 antibodies

Summary To explore the inhibitory effects of anti-CD4 human/murine chimeric antibodies on lymphocyte proliferation, CD4⁺ T cell apoptosis induced by anti-CD4 antibodies was examined. Annexin-V-FITC and PI double stain method was employed to qualitatively and quantitatively determined CD4⁺ T cell apoptosis induced by anti-CD4 antibodies. Our results showed that anti-CD4 chimeric antibodies could specifically induce CD4⁺ T cell apoptosis. The ability of anti-CD4 chimeric antibodies to induce CD4⁺ T cell apoptosis was related with the presence of monocytes. It is concluded that the further cross-linking of anti-CD4 antibodies is important for inducing CD4⁺ T cell apoptosis. This project was supported by grant from the National Sciences Foundation of China (No. 39370628).     

分离小鼠腹水中抗HBs/a单克隆抗体杂交瘤细胞制备小鼠腹水

探讨利用从小鼠腹水中分离获得的单克隆抗体杂交瘤细胞,大量制备小鼠单克隆抗体腹水的方法收集已接种单克隆抗体杂交瘤细胞的小鼠腹水,用淋巴细胞分离液离心分离腹水中的杂交瘤细胞;再将此分离出的杂交瘤细胞,注入其他小鼠腹腔又制得腹水。每只小鼠分离得到的杂交瘤细胞可供5只小鼠腹腔注射,平均每只小鼠产腹水3.97ml。此法可规模制备大量高效价的单克隆抗体腹水。     

CD28、CD40通路共刺激对淋巴细胞增殖反应的影响及CsA的抑制作用

目的：探讨CD28、CD40通路共刺激后淋巴细胞增殖反应的变化及免疫抑制剂环孢素A(CsA)、抗CTLA4单克隆抗体对共刺激通路激活后淋巴细胞增殖反应的影响。方法：采用单克隆抗体与淋巴细胞表面CD3、CD28及CD40L分子结合产生相应刺激信号,根据刺激条件不同设组为：①抗CD3单抗单刺激(A组)(剂量为10μg／L、100μg／L、1000μg,／L);②抗CD3单抗 抗CD28单抗(B组);③抗CD3单抗 抗CD40L单抗(C组);④抗CD3单抗 抗CTLA4单抗(D组)共刺激(A、B、C、D组中抗CD3单抗剂量固定为100μg／L,其余3种单抗各设10μg／L、100μg／L、1000μg／L3种剂量);⑤抗CD3单抗 抗CD28单抗 抗CD40L单抗(E组);⑥抗CD3单抗 抗CD28单抗 抗CTLA4单抗(F组)共刺激(E、F组中抗CD3单抗和抗CD28单抗的剂量固定为100μg／L,抗CD40L单抗和抗CTLA4单抗的剂量各设10μg／L、100μg／L、1000μg／L);⑦CsA干预组：抗CD3单抗 CsA(G组);⑧抗CD3单抗 抗CD28单抗 CsA(H组);⑨抗CD3单抗 抗CD28单抗 抗CD40L单抗 CsA(I组),G、H、I组中所有单抗浓度均固定为100μg／L,CsA浓度设为10μg／L、100μg／L、1000μg／L。采用[^3H]-TdR同位素掺人法测定淋巴细胞增殖水平,液体闪烁计数仪测定放射性计数值。结果：用抗CD3单抗 抗CD28单抗共刺激后,淋巴细胞增殖反应明显高于抗CD3单刺激,而在抗CD3单抗 抗CD40L单抗刺激组,淋巴细胞增殖反应低于抗CD3单刺激组。抗CTLA4单抗所提供的刺激信号可抑制抗CD3单刺激及抗CD3 抗CD28共刺激导致的淋巴细胞增殖反应,并且随着抗CTLA4单抗剂量的增加,抑制作用增强。CsA对共刺激后的淋巴细胞增殖反应有抑制作用,且随着剂量增大其抑制作用也增强,但对单刺激后增殖反应的抑制作用更为明显。结论：CD28共刺激通路在淋巴细胞活化中起着关键作用。抗CD40L单抗的刺激作用可能被其对T细胞与抗原递呈细胞(APC,包括B细胞等)间的阻断效应所掩盖。抗CTLA4单抗及CsA对共刺激后淋巴细胞的增殖反应均有抑制作用。     

99Tcm-抗血栓成分单克隆抗体对动物血栓的放免显像研究

目的　评价９９Ｔｃｍ 标记抗血栓成分（ 血小板和纤维蛋白）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ） ＳＺ－ ５１ 和ＳＺ－ ６３,对实验性动物（ 兔、狗）股动脉和股静脉血栓模型显像的作用。方法　以亚氨基噻吩盐酸盐（２ － ＩＴ） 修饰,９９Ｔｃｍ 标记葡庚糖酸钠（ＧＨ） 配体交换法标记ＳＺ－ ５１ 和ＳＺ－ ６３。狗、兔股动脉和股静脉血栓模型制备完毕后,耳缘静脉注入９９　Ｔｃｍ － ＳＺ－ ５１或９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 进行ＳＰＥＣＴ 显像。９９Ｔｃｍ 标记非特异性鼠ＩｇＧ 作为阴性对照。结果　９９Ｔｃｍ － ＳＺ－５１ 和９９Ｔｃｍ － ＳＺ－５１／６３ 对狗新鲜血栓均显示清晰,其最佳显像时间分别为注射后２ ～４ｈ 和０．５ ～２ｈ,而陈旧血栓未见显像。９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 兔陈旧血栓显示清晰,其最佳显像时间为注射后２ ～４ｈ。结论　９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ５１ 和９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 具有活体内血栓定位导向能力,显像时间短,用于血栓性疾病的放免显像有一定的可行性。     

半乳糖基抗CD3单抗-TIL体外趋肝性研究

为增强肝癌肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的趋肝性,制备了半乳糖基抗ＣＤ３单克隆抗体－ＴＩＬ（Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ－ＴＩＬ）,将其与肝细胞共同孵育,在倒置显微镜下观察两者通过无唾液酸糖蛋白受体介导的作用情况。测定了半乳糖基抗ＣＤ３单抗（Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ）的糖密度以及Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ与ＴＩＬ的结合率。结果发现,Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ－ＴＩＬ与肝细胞有明显粘附现象。Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ的糖密度为６２．１８,Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ与ＴＩＬ的结合率为９７．９％。结果表明,Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ－ＴＩＬ在体外有良好的趋肝性,６２．１８的糖密度和９７．９％的结合率保证了ＴＩＬ的有效利用。     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

激发型抗CD40单抗介导恶性肿瘤细胞凋亡及其机制探讨

目的 探讨激发型CD40单克隆抗体对人B淋巴细胞恶性肿瘤的生物学效应及其机制。方法 将激发型CD40单克隆抗体5C11加入肿瘤细胞的体外培养体系，采用细胞计数，流式细胞仪等方法分析单克隆抗体5C11对不同肿瘤细胞株的作用。结果 5C11能引起CD40表达的多发性骨髓瘤（MM）细胞株XG2和恶性淋巴瘤细胞株Daudi发生同型聚集，抑制其生长并介导凋亡；CD40分子介导的XG2和Daudi细胞凋亡作用与可溶性TNF产生无关。结论 激发型CD40单克隆抗体通过诱导B细胞恶性肿瘤细胞的凋亡。抑制肿瘤细胞的体外生长。     

CD3单抗联合EBV建立人B淋巴母细胞株的方法研究

目的采用国产的CD3单克隆抗体代替环胞菌素A,建立人淋巴母细胞株(LCL)。方法采静脉血用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,分别应用CD3单克隆抗体以及环胞菌素A作为免疫抑制剂,对比LCL建株情况。结果CD3单抗组经过4周的培养CD3 细胞由培养前的59.65%减低到52.78%,而环胞菌素A组升高至61.15%(P>0.05);对CD19 细胞的促进作用由培养前的5.39%提高到12.70%,而环胞菌素A为8.47%,两者的差异有显著性意义(P<0.01)。结论CD3单克隆抗体与环胞菌素A同样能够促进B淋巴样细胞株生成,防止体外B细胞的退化。     

单克隆抗体制备技术及应用的研究进展

单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具,其在基因和蛋白质的结构与功能研究方面有着不可或缺的作用。近年来,随着分子生物学和细胞生物学的发展,出现了抗原特异性的B淋巴细胞杂交瘤技术、人-鼠嵌合抗体制备技术、噬菌体展示技术、核糖体展示技术和转基因小鼠技术制备单克隆抗体,这些技术有效地解决了单克隆抗体鼠源性等问题,使单克隆抗体凭借自身高度特异性和均一性的特点在治疗肿瘤、自身免疫性疾病和器官移植等方面显出了独特的优势和良好的应用前景,故单克隆抗体制备技术的发展也就显得尤为重要。     

α－CD_3单克隆抗体对肿瘤特异性T细胞的扩增和杀瘤活性的影响

为寻找更有效的肿瘤过继性免疫治疗的方案，用α－ＣＤ３单克隆抗体（单抗）激活ＦＢＬ－３红白血病肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞获取肿瘤特异性Ｔ细胞，并观察α－ＣＤ３单抗对肿瘤特异性Ｔ细胞的增殖、杀瘤活性及表型的影响。体外实验结果显示，免疫小鼠脾细胞经α－ＣＤ３单抗激活后，采用低剂量ＩＬ－２即可维持其长期高度的、持续的增殖；又培养过程中α－ＣＤ３单抗持续存在可大大促进其对肿瘤的特异性杀伤。细胞分型分析结果也支持了α－ＣＤ３单抗的持续存在对维持肿瘤特异性Ｔ细胞的抗瘤活性具有很重要的意义，是肿瘤过继免疫疗法中颇有前景的治疗方案。     

抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达

目的:构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体,并实现其真核表达.方法:从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中,转染 CHO细胞,实现其真核表达,并对抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定.结果:成功构建抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体,并实现其真核表达. 初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力.结论 :构建的抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想.     

中国恒河猴CD8+T细胞缺失模型制备

目的 测试用抗-HuCD8+T细胞单克隆抗体方法 去除中国恒河猴体内CD8+T细胞效果,为建立CD8+T细胞缺失恒河猴模型提供实验依据.方法 抗-HuCD8+T抗体cM-T807在0、3、7 d注射2只中国恒河猴,不同的时间取外周血,腹股沟和腋下淋巴结.制备CD3/CD4/CD8标记的外周血和淋巴细胞悬液,流式法测定恒河猴外周血和淋巴结中CD8+T细胞的去除效果.结果 注射了cM-T807的中国恒河猴,24 h后,外周血中的CD8+T细胞缺失99.9%,持续27 d;168 h后,淋巴结中CD8+T细胞缺失约90.0%,持续21 d. 结论 首次证实抗-HuCD8+T细胞抗体cM-T807能有效去除中国恒河猴体内CD8+T细胞,为建立CD8+T细胞缺失动物模型(CD8+T Cells del)奠定基础.     

153Sm标记DTPA-抗CEA单克隆抗体的研究

目的研究153Sm通过二乙三胺五乙酸(DTPA)环酐(cDTPAa)为双功能络合剂标记抗CEA单抗的方法。方法　确定cDTPAa与抗体偶联的最佳条件,并测定偶联物的免疫活性及在体外的稳定性。结果　153Sm标记抗CEA单抗的方法简便、快速,且抗体与cDTPAa偶联后其免疫活性无明显丧失。在抗体浓度为20mg／ml时,最佳偶联条件为抗CEA单抗与cDTPAa的摩尔比为1∶20,偶联反应中pH为7～8。在最佳偶联条件下,用高比活度的153Sm(22．2GBq／ml),CEAMcab-DTPA的标记率可达60％。结论　通过DTPA环酐法将153Sm标记到单抗上所制备的放射免疫偶联物可作为一种有希望的放射免疫治疗剂。