脑损伤诱导神经细胞凋亡的动物实验研究

为探讨脑损伤诱导神经细胞凋亡的作用及其机制,应用大鼠液压冲击脑损伤模型,在脑损伤后不同时间段（3h、12h、24h、48h、72h）处死动物,分别应用HE染色、流式细胞仪检测、TUNEL法测定、DNA凝胶电泳分析、免疫组化技术研究神经细胞凋亡的改变。结果显示：动物经中度脑损伤处理后,其受伤各时间段脑组织可见凋亡的神经细胞及TUNEL阳性细胞, DNA呈现“梯状”断裂现象,细胞凋亡百分率为9.8%~14.0%（对照组17%）,凋亡相关基因（cmyc,fas,fasL）表达明显增加。以上研究提示,脑外伤能够诱导神经细胞凋亡,其作用机制可能与其诱导某些凋亡相关基因的表达有关。     

埃托啡诱导神经细胞凋亡的实验研究

应用ＭＴＴ比色法观察埃托啡，吗啡等对神经线细胞细胞株ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞增殖代谢的影响，同时采用ＴＵＮＥＬ原位细胞凋技术，观察上述药物有无诱发ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞凋亡的作用。提示埃托啡诱导神经细胞凋亡的途径可能不通过阿片受体。     

caspase-3在创伤性脑损伤诱导神经细胞凋亡中的作用

目的探讨创伤性脑损伤诱导神经细胞凋亡的机制。方法分别采用流式细胞术和借助caspase-3荧光分析试剂盒检测大鼠头颅打击伤后不同时间(3、12、24h和2、3、7、14d)损伤脑组织的神经细胞凋亡率和cas-pase-3活性的变化。结果损伤脑组织神经细胞凋亡率和caspase-3活性均随着伤后时间的延长而迅速增高,两者均至3d达峰值,分别为(14.6±2.4)%和(0.545±0.024)nmolAFC,然后逐渐下降,伤后14d分别下降到(3.2±0.8)%和(0.128±0.012)nmolAFC,但仍高于正常水平(P<0.01)。加入特异性caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk后神经细胞凋亡率和caspase-3活性均显著降低(P<0.01)。结论caspase-3参与了创伤性脑损伤诱导的神经细胞凋亡。     

神经细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤

为加强对神经细胞凋亡及凋亡相关因子在新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的认识,作者查阅了近年来27篇相关文献,对神经细胞凋亡与HIBD,凋亡相关因子（Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白家族、Caspase-3与Bcl-2、Bax的关系）、神经细胞凋亡的机制（钙超载、线粒体损伤、氧自由基和兴奋性氮基酸的毒性作用）作了介绍。     

大鼠创伤性脑损伤后诱导型NOS阳性表达与神经细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤(TBI)后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和神经细胞凋亡的关系。方法：将健康SD大鼠随机分为假手术组、伤后24h组、伤后72h组、伤后168h组。采用iNOS免疫组化技术，研究大鼠创伤性脑损伤后iNOS的表达变化及其细胞定位，采用凋亡细胞原位缺121末端标记法(TUNEL)，观察大鼠在创伤性脑损伤后不同时点的神经细胞凋亡情况。结果：大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区iNOS活性明显升高，伤后72hiNOS阳性表达最明显，伤后168h仍有表达。大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区神经细胞凋亡明显增多，伤后72h增多最明显，可持续168h。结论：TBI后损伤区周围皮质和伤侧海马的iNOS阳性细胞呈高表达并与神经细胞的凋亡呈同步变化，推测iNOS的表达可能参与了TBI后的继发性神经细胞凋亡。     

亚低温抑制大鼠创伤性神经细胞凋亡的实验研究

目的：研究创伤性脑损伤后神经细胞凋亡机理及其时序空间分布，并探讨亚低温脑保护机理。方法：末端标记法（TUNEL），琼脂糖凝胶电泳，流式细胞技术检测大鼠重度脑损伤后不同脑区神经细胞凋亡的动态变化过程，实验分假手术组，常温脑伤组，亚低温治疗6、12、24h三组。结果：创伤后12h皮层，皮层下，白质，海马等脑区神经细胞凋亡明显增加，其高峰在伤后12-72h，持续可达14d，与对照组相比较，相差显著或非常显著。琼脂糖凝胶电泳显示创伤脑组织DNA出现特异凋亡电泳带，流式细胞检测呈现典型亚二倍体核型峰（AP峰）。亚低温治疗明显抑制创伤性神经细胞凋亡。结论：创伤性脑损伤后存在神经细胞凋亡现象，亚低温对创伤性神经细胞凋亡具有明显抑制作用。     

电针督脉对缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：揭示电针治疗在缺血性脑血管疾病中的分子机制。方法：采用原位标记法,研究电针督脉的大椎、百会经穴对缺血性脑损伤的保护作用。凝闭大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血10h后,选择末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经细胞的凋亡状况,并观察电针对其影响。结果：电针组大脑皮质梗死区内TUNEL染色阳性细胞显减少,与模型组比较,差异有显性意义（P＜0．01）。结论：电针可抑制脑缺血后脑内神经细胞凋亡。     

大剂量甲基强的松龙对创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的探讨大剂量甲基强的松龙对创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的影响。方法SD大鼠70只,随机分为单纯脑损伤组（A组）和脑损伤后应用大剂量甲基强的松龙组（B组）,每组35只。Feeney法致伤,B组伤后静脉注射大剂量甲基强的松龙30mg/kg,分别在伤后1、6、24h和2、3、7、14d处死,每组采集伤灶皮层下白质,应用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡的变化,免疫组化ABC法检测caspase-3蛋白的表达。结果A、B两组中均发现凋亡细胞和caspase-3阳性表达。伤后2d达峰值时,A、B两组TNUEL阳性凋亡神经细胞数分别为41.54±9.93和20.44±7.09,caspase-3阳性细胞数分别为29.03±4.56和15.77±3.04。两组比较,差异均有高度统计学意义（P〈0.01）。结论创伤性脑损伤可导致神经细胞凋亡;大剂量甲基强的松龙能抑制细胞凋亡。     

大鼠液压脑损伤导致皮质神经细胞的早期凋亡

目的:观察大鼠脑损伤后神经细胞的早期凋亡及其动态变化.方法:利用液压脑损伤致伤仪制作SD大鼠左顶叶中度脑损伤模型,对照组埋打击管但不致伤.动物致伤后分别于伤后6 h、24 h和48 h,采用流式细胞仪和电子显微镜,对大鼠液压脑损伤后神经细胞凋亡的动态过程进行观察.结果:流式细胞术检测结果显示大鼠液压脑损伤后6 h左侧顶叶皮质神经细胞即可出现早期凋亡现象.伤后6 h神经细胞的早期凋亡率为21.97%(P＜0.01),伤后24 h达高峰,为65.90%(P＜0.01),伤后48 h与伤后24 h比较无显著性差异.电镜观察发现伤后24 h可出现早期凋亡.结论:大鼠液压脑损伤后6 h即可出现神经细胞的早期凋亡,较以往报道的伤后神经细胞凋亡出现的时间更早.     

慢性脊髓损伤组织学变化及神经细胞凋亡的实验研究

目的：建立慢性压迫性脊髓损伤的动物模型，观察组织病理学变化及细胞的凋亡。方法：自制压迫装置，造成兔L2脊髓的慢性压迫。尼氏染色观察一般组织病理变化，原位末端标记方法（TUNEL）标记凋亡的细胞。结果：实验组压迫区白质神经胶质细胞增生；后索较重，侧索及前索较轻；神经元尼氏小体淡染、消失；神经元萎缩，脱失，Ⅸ板层明显。标记阳性细胞为神经胶质细胞，各索内均可见到，后索及侧索明显。灰质中阳性细胞数量较少，为神经胶质细胞，主要在Ⅰ、Ⅱ板层。相邻段病变次之，远段接近正常。对照组与实验组相比细胞凋亡数大为减少（P＜0.05)，与正常组比较区别不大（P＞0.05)。在各组每段都未观察到阳性标记神经元。结论：机械性压迫是病理变化的主要因素，也是细胞凋亡的主要原因；神经胶质细胞的凋亡可能是继发病变的机制之一。     

超早期高压氧对急性脑外伤大鼠的疗效

目的：研究高压氧治疗大鼠创伤性脑损伤的疗效及其保护机制.方法：健康成年雄性SD大鼠24只,随机分为对照组和高压氧治疗组.采用Feeney法制造局灶性脑创伤模型,在相应的时间点处死大鼠,观察脑组织含水量及脑组织核转录因子κB（NF-κB）表达的变化.结果：高压氧治疗后,对照组的脑组织含水量显著高于治疗组,对照组的NF-κB的表达显著高于治疗组.结论：高压氧单次9h超早期治疗能减轻脑水肿,有显著的脑保护作用,初步显示了其疗效,其机制可能通过降低NF-κB起到脑保护作用.     

FTY720对颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用

目的探讨FTY720对颅脑损伤大鼠海马组织神经细胞凋亡的抑制作用。方法30只大鼠随机分成假手术组、模型组和治疗组,每组10只,采用改进的Feeney自由落体损伤装置建立大鼠颅脑损伤模型,假手术组大鼠切开头皮,颅骨钻孔后缝合头皮,不作外力打击。治疗组大鼠按1mg/kg剂量予FTY720腹腔注射,其他组大鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液1ml。24h后断头处死大鼠,分离海马组织,采用TUNEL法检测凋亡神经细胞,Western-blotting检测pro-caspase3/9蛋白表达,四肽荧光底物法检测caspase-3/9蛋白活性。结果模型组大鼠海马组织凋亡神经细胞比例、pro-caspase3/9蛋白表达和caspase-3/9蛋白活性较假手术组显著升高,而治疗组大鼠海马组织凋亡神经细胞比例、pro-caspase3/9蛋白表达和caspase-3/9蛋白活性较模型组显著下降。结论FTY720可显著抑制颅脑损伤大鼠海马组织神经细胞凋亡,具有脑保护作用。     

甲状腺素对重型颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡、NSE及IL-6的影响

目的 通过观察甲状腺素对重型颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、白细胞介素(IL)-6的影响及血清FT3、FT4的改变,探讨甲状腺素对重型颅脑损伤脑组织的保护作用.方法 90只SD大鼠分为对照组、模型组、左甲状腺素钠片低剂量组、左甲状腺素钠片中剂量组、左甲状腺素钠片高剂量组5组,每组各18只,参照Feeney's自由落体打击造模法复制动物模型;于伤后6h灌胃.灌胃后24、72、168 h分别通过TUNEL法、ELISA法及放射免疫法检测神经细胞凋亡、血清NSE、IL-6及血清FT3、FT4水平.结果 (1)重型颅脑损伤大鼠受伤后血清FT3、FT4水平低于正常水平,FT4在168h降到最低,甲状腺素可使FT3、FT4水平升高.(2)重型颅脑损伤大鼠受伤后出现明显的神经细胞凋亡,这种凋亡持续至168 h.中剂量及高剂量甲状腺素在24 h即可以改善神经细胞凋亡,低剂量甲状腺素在168 h才可以改善神经细胞凋亡.(3)重型颅脑损伤大鼠血清NSE、IL-6于伤后明显升高,一直持续到168 h.中剂量及高剂量甲状腺素在72 h即可以降低血清NSE、IL-6水平.结论 外源性甲状腺素对重型颅脑损伤大鼠脑组织具有保护作用.     

大鼠轻度闭合性颅脑损伤后的氧化应激损伤及病理学改变

目的 :建立清醒状态下大鼠轻度闭合性颅脑损伤模型 ,观察致伤后氧自由基、血糖及病理改变。方法 :用枪击法建立大鼠轻度闭合性颅脑损伤模型 ,采用生化指标脂质过氧化物丙二醛 (MDA)含量和超氧化物歧化酶 (SOD)活力评价其氧化应激损伤 ;用微量法测定血糖水平 ,光镜下观察脑组织形态学改变。结果 :伤后6h脑组织及血清MDA含量均显著升高 (P<0.05) ;血清MDA含量24h达高峰 ,1周后恢复正常 ;伤后脑组织、血清SOD活力及血糖无明显变化 ;光镜下可见脑组织水肿、充血及出血等改变。结论 :轻度闭合性颅脑损伤可导致氧化应激损伤及脑组织病理学改变。     

促红细胞生成素对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的抑制作用

目的：观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的抑制作用并探讨其可能机制．方法：将130只Wistar大鼠随机分为3组：rhEPO治疗组（n=60）,对照组（n=60）,假致伤组（n=10）．120只采用改良的Feeney氏法制作脑外伤模型．rhEPO组大鼠致伤后即刻及每天腹腔内注射rhEPO（5000U／kg）,对照组给予等量生理盐水．在伤后5h,12h,24h,3d,5d,7d六个时间点断头取脑．采用RT—PCR和免疫荧光法分别检测伤侧大脑皮层在不同时间点bcl-2mRNA和蛋白表达变化规律;应用凋亡原位末端标记（Tunel）法观察伤侧大脑皮质凋亡的形态特征．结果：①对照组Bcl-2mRNA在外伤后5h弱表达,12h表达增强,24h达高峰,3d降至基础水平;rhEPO组Bcl-2mRNA在12h达高峰,24h,3d持续高表达;5d,7d表达下调,但仍高于对照组（P〈0．05）．②Bcl-2蛋白主要分布在胞质／胞膜内,在外伤后24h表达增加,3d恢复到基础水平;rhEPO组Bcl-2蛋白在24h达高峰,3d,5d,7d持续高表达（P〈0．05）．③Tunel染色阳性细胞于外伤后5h即已出现,3d达高峰,7d仍有表达;rhEPO组在各时间点凋亡细胞数显著减少,与对照组比较有统计学意义（P〈0．05）．结论：rhEPO可通过上调bcl-2基因表达而抑制神经细胞凋亡,起到脑外伤后神经细胞的保护作用．     

Neuroprotective effect of AG490 in experimental traumatic brain injury of rats

Background Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability in children and young adults worldwide. Therefore, we investigated the role of AG490 in regulating brain oedema, expression of CD40 and neurological function after TBI.

Methods Sprague Dawley rats (n=240) were randomly divided into a sham operation group, TBI+saline group and TBI+AG490 (JAK/STAT inhibitor) group. Members of each group were euthanized at 6, 12, 24 or 72 hours after injury. Neurological severity score (NSS) was used to evaluate the severity of neurological damage. Brain water was quantitated by wet/dry weight method. The expression of CD40 was assessed by flow cytometry.

Results In both the TBI+saline group and the TBI+AG490 group, the brain water content was elevated after TBI, reached a peak at 24-hour and remained high for the rest of the period investigated; the expression of CD40 reached a peak 24 hours after TBI; the NSS was elevated after TBI and then decreased after 6 hours. Elevations in the level of CD40, degree of brain edema and NSS after TBI were significantly reduced in TBI+AG490 group.

Conclusion Inhibition of the JAK/STAT signalling pathway reduces brain oedema, decreases the expression of CD40 and exerts neuroprotective effects after TBI.

     

siRNA沉默水通道蛋白4治疗创伤性脑水肿的实验研究

【目的】应用鼠脑创伤模型观察靶向水通道蛋白4（Aquaporin4,AQP-4）的小RNA干扰（siRNA）技术对脑水肿的治疗效果。【方法】构建沉默AQP-4mRNA表达的siRNA质粒;液压打击法建立大鼠脑创伤（traumaticbraininjury,TBI）模型,分TBI组、空载质粒组和AQP-4siRNA治疗组;提取第1、3、5、7天脑组织总RNA,RT—PCR方法检测AQP-4的mRNA表达;干／湿比重法和Evans蓝测定法观察大鼠TBI后不同时相脑组织含水量和血脑屏障通透性改变;实验动物予以神经功能缺陷综合评分。【结果】RT—PCR结果显示siRNA质粒可有效沉默AQP-4在受损脑组织的表达;与TBI组和空载质粒组比较,AQP-4siRNA治疗组在减少受损脑组织含水量、降低血脑屏障通透性,以及改善动物神经功能方面均有明显好转,各检测时间点与TBI组和空载质粒组比较均存在统计学差异（P〈0．05）。【结论】靶向AQP-4的siRNA技术通过对AQP-4的有效沉默可明显减轻TBI后的脑水肿程度,发挥良好的治疗效果。     

创伤性脑损伤诱导海马细胞凋亡模型的建立

目的 建立用于研究创伤性脑损伤诱导海马细胞凋亡的模型。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠单侧大脑皮质承受不同高度（２、５、和１０ｃｍ）下落的１０ｇ重锤打击（皮质压缩幅度３ｍｍ）,致轻、中、重度脑损伤。观查１￣７ｄ脑含水量,组织病理学变化及原位末端标记法（ＴＵＥＮＬ）检测伤侧海马凋亡细胞的变化。结果 伤侧皮质和海马损伤程度与重锤下落的高度有关,轻、中度损伤各时相点脑含水量无明显变化,重度损伤组３￣７ｄ脑含水量显     

大鼠脑创伤后Bax蛋白表达与神经细胞凋亡

①目的 探讨颅脑创伤后神经细胞凋亡的机制。②方法 采用重型闭合性颅脑创伤模型，将Wistar大鼠204只，随机分为脑创伤组及假手术组，每组又分别划分成伤后3、6、12、24、48、72、168及336小时等8个时相组，每时相组各12只．另12只作为正常时照组。采用免疲组织化学及原位细胞凋亡检测，动态观察大鼠颅脑创伤后皮质、海马、丘脑及齿状回区神经细胞凋亡和Bax蛋白的表达情况。③结果 脑创伤后皮质、海马、丘脑及齿状回区出现神经细胞凋亡，皮质、海马及丘脑出现Bax蛋白表达增加．而齿状回在各时相点均无Bax蛋白表达。④结论 大鼠颅脑创伤后皮质、海马、丘脑及齿状回出现神经细胞凋亡；Bax蛋白表达增加可能参与了脑创伤后皮质、海马及丘脑神经细胞凋亡，而不参与齿状回区的神经细胞凋亡。     

PERK通路对大鼠脑出血继发性脑损伤及神经细胞凋亡的作用

目的:探讨PERK通路对大鼠脑出血继发性脑损伤及神经细胞凋亡的作用.方法:将48只大鼠随机分为6组,构建脑出血(ICH)模型.取其中1组作为对照组ICHsham,其余5组按时间进程编为ICH6h、ICH12h、ICH24h、ICH48h、ICH72h.将48只大鼠随机分为6组,取其原代海马神经元,在体外使用氧血红蛋白(...