蛋白激酶C在血管平滑肌细胞中的调控作用及其检测

蛋白激酶Ｃ是细胞内诸多信息传递系统相互影响的中心环节。它受胞内钙离子、磷酸肌醇代物产物。ＣＡＭＰ、ＣＡＮＰ等的影响．对血管平滑肌等有调节作用。目前已有５种较稳定的ＰＫＣ检测方法。     

雌激素对大鼠血管平滑肌细胞囊泡素-1基因表达的影响

目的:探讨雌激素对血管平滑肌细胞囊泡素-1基因表达的影响。方法:取Wistar雌性大鼠,分为3组:假手术组,卵巢切除后皮下埋植雌激素组 (OVX+E组)及卵巢切除后皮下埋植安慰剂组(OVX+V组)。用药2周后处死大鼠,剥离主动脉平滑肌组织,提取总RNA进行半定量RT-PCR分析,检测雌激素对囊泡素-1(caveolin-1)基因表达的影响。为进一步明确雌激素是否直接调节血管平滑肌细胞caveolin-1基因表达,又采用100 nmol/L 17β-雌二醇(17β-E₂)处理培养的大鼠血管平滑肌细胞24 h,通过Northern blot分析检测雌激素对细胞caveolin-1 mRNA表达的影响。结果:OVX+E组大鼠主动脉平滑肌组织caveolin-1基因表达量明显高于OVX+V组,17β-E₂处理的培养细胞中caveolin-1基因mRNA表达量高于未用药的培养细胞。 结论:雌激素可促进血管平滑肌细胞caveolin-1基因表达,反映了雌激素心血管作用机理的一个方面。     

雌激素对血管平滑肌细胞中c-fos和增殖细胞核抗原表达的影响

目的：研究并比较雌激素和／或血清对血管平滑肌细胞(VSMC)中c-fos和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法：分别在有或无他莫昔芬(TAM)(雌激素受体ER拮抗剂)预处理的情况下,采用免疫细胞化学和图像分析方法,研究雌二醇(E2)和/或新生小牛血清(NCS)对传代大鼠VSMC中的c-fos和PCNA蛋白表达的影响。结果：E2以及NCS均能上调细胞中c-fos和PCNA蛋白的表达,TAM能阻断其效应。结论：雌激素能促进传代VSMC增生,ER介导其作用。     

药物对血管平滑肌细胞血小板源生长因子及其受体基因表达的影响

采用原位杂交的方法，观察了大鼠主动脉平滑肌细胞中ＰＤＧＦ及其受体基因表达的改变，以及去甲肾上腺素和硝苯吡啶对它们的影响。结果发现老年大鼠ＡＳＭＣ中ＰＤＧＦβ受体的基因表达明显强于青年大鼠；ＮＥ可以加强其表达，而Ｎｉｆ可以抑制ＮＥ的作用。     

雌激素受体在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的研究雌性激素受体(ER)在肝癌组织中的表达和其临床价值。方法采用免疫组化法对59例肝癌患者肝肿瘤组织中雌激素受体(ER)表达情况进行研究。结果 59例肝癌患者ER表达阳性率为72.9%。22～36岁的肝癌患者ER表达阳性率为72.22%(13/18),37～52岁的患者表达阳性率为75.01%(15/20),53～67岁的患者的阳性率为71.42%(15/21);直径≤5 cm的肝癌中ER表达阳性率为33.33%(6/18),直径大于5 cm的癌组织阳性率为90.24%(37/41);分化程度为EdmondsonⅠ级的肝癌组织中表达阳性率为96.97%(32/33),Ⅱ级的阳性率为55.56%(10/18),Ⅲ级阳性率为12.5%(1/8)。年龄组间表达差异无统计学意义(P>0.05),而不同大小肿瘤和不同分化程度组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌具有一定的雌激素依赖性,肝癌发生、发展及预后与肝癌组织中ER表达有关。     

雌激素对血管平滑肌的作用

血管平滑肌细胞是保持血管功能完整性的重要结构和功能单位,在动脉粥样硬化、高血压、冠心病及损伤后再狭窄的发病机制中具有关键性作用。本文对雌激素通过功能性的雌激素受体调节血管平滑肌细胞的结构和功能进行综述。     

雌激素受体与数种血管形成因子在血管瘤和血管畸形中的表达

目的:探讨雌激素受体与数种血管形成因子在血管瘤和血管畸形病理发生中的作用。方法:对35例手术切除的血管瘤及血管畸形标本及5例正常皮肤标本,采用免疫组织化学方法检测雌激素受体以及血管形成有关的血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶和组织蛋白酶D。结果:在血管瘤增生期,ER、VEGF、MMP-2及组织蛋白酶D均有较高表达;在血管瘤退化期,仅ER和组织蛋白酶D有较高表达;在血管畸形和正常皮肤对照中,ER、VEGF和MMP-2表达极弱,组织蛋白酶D有少许表达。结论:雌激素与多种血管形成因子可通过不同途径对血管瘤的病理发生过程发挥作用,对血管畸形则无作用。     

血管紧张素II及其受体在血管平滑肌细胞迁移中的作用

目的:探讨血管紧张素II(AngII)及其受体(ATRs)在局部血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用及其机制。方法:以体外培养VSMC为基础,采用细胞化学和改良Boyden'schamber的方法,观察AngⅡ干预VSMC后AngII受体的表达、VSMC迁移能力的变化、肌动蛋白纤维丝的动态组装变化,并探讨AT₁R拮抗剂、AT₂R拮抗剂对上述观测指标的影响。结果:AngII10^-7mol/L可以刺激VSMC发生迁移,该作用是通过影响VSMC内应力纤维动态组装而实现的;AngII干预VSMC后可使AT₁R表达上调,随着作用时间延长AT₁R表达水平下降。AT₁R拮抗剂可下调AT₁R表达。AngII通过AT₁R的介导发挥其影响VSMC迁移能力的生物学效应。AT₂R对此无明显影响。结论:AngII通过AT₁R介导来调节VSMC内肌动蛋白微丝的动态组装,进而改变VSMC的迁移能力,从而发挥其介导VSMC迁移的生物学效应。     

内皮素-内皮素受体在凝血酶促进血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 :探讨凝血酶引起血管平滑肌细胞增殖是否通过内皮素 内皮素受体途径介导。方法 :在培养的鼠主动脉平滑肌细胞中 ,加入不同浓度的凝血酶培养 2 4h ,放免法观察细胞和培养液中内皮素的浓度 ;然后观察内皮素受体A和B阻滞剂对凝血酶促进平滑肌细胞增殖( 3 H TdR掺入 )的抑制作用。结果 :凝血酶可剂量依赖地引起血管平滑肌细胞培养液中内皮素的含量明显增加 ,内皮素受体A阻滞剂可明显抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖 ,而内皮素受体B阻滞剂无作用。结论 :凝血酶可剂量依赖地引起血管平滑肌细胞内皮素的合成和释放 ,内皮素受体A阻滞剂可部分阻断凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖 ,凝血酶引起血管平滑肌细胞增殖的延迟作用可能与此有一定关系。     

活化激酶C受体1在切应力调控血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 探讨活化激酶C受体1（receptor for actived C kinase 1, RACK1）在内皮细胞（endothelial cells, ECs）感受切应力刺激调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用及其机制。方法 应用平行平板流动腔系统,对联合培养的大鼠ECs和VSMCs施加1.5 Pa正常切应力（normal shear stress, NSS）和0.5 Pa低切应力（low shear stress,LowSS）,应用BrdU ELISA方法检测VSMCs增殖水平,对蛋白质组学研究发现的力学响应分子RACK1表达以及Akt磷酸化,应用Western blot技术进行检测。静态条件下,应用RNA干扰技术特异性抑制VSMCs的RACK1表达,检测其对细胞增殖和Akt磷酸化的作用。应用ECs与VSMCs隔开培养和联合培养模型,检测ECs对VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化水平的影响。结果 血管差异蛋白质组学的结果发现,与NSS组相比,RACK1在LowSS组血管组织的表达水平明显升高。细胞实验结果显示,LowSS诱导了与ECs联合培养的VSMCs增殖,上调VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化。静态条件下,特异性抑制VSMCs的RACK1表达后,VSMCs的增殖水平和Akt磷酸化水平均显著下降。与ECs联合培养VSMCs,其RACK1表达和Akt磷酸化水平较隔开培养组均上调。结论 VSMCs的RACK1表达受细胞接触与切应力的影响,并可能通过PI3K/Akt信号通路参与LowSS诱导的VSMCs增殖的调控。探讨VSMCs增殖功能变化及其力学生物学机制对于认识动脉粥样硬化等疾病发病机理和疾病防治有重要意义。     

血管平滑肌细胞凋亡在血管再狭窄中作用的研究进展

血管平滑肌细胞构成新生内膜增生的重要部分,且在血管腔内治疗术后再狭窄的心血管疾病的发生和发展中具有重要作用。血管平滑肌细胞凋亡能有效抑制血管球囊损伤和血管旁路移植术后新生内膜增生,从而可为血管术后再狭窄提供治疗手段。     

Uterus and endometrium: Endometrial vascular smooth muscle oestrogen and progesterone receptor distribution in women with and without menorrhagia

This study tested the hypothesis that alterations in the expressionof oestrogen and progesterone receptors (ER and PR) in endometrialvascular smooth musde cells (VSMC) may play a role in the increasedblood loss that occurs during menorrhagla. Subject groups were:controls (n±40), those with menorrhagia (menstrual bloodloss >80 ml, n±39) and patients post-endometrial ablation(n±16). The aims of our study were to describe the changingdistribution of VSMC ER and PR during the menstrual cycle andto look for differences between the three groups. Immunohistochemicaldouble-staining results for VSMC and either ER or PR were highlyvaried, with 0–85% of endometrial arterioles in a biopsysection having alpha smooth muscle actinlER positive cells,and 0–70% demonstrating PR. There were no significantdifferences between controls, menorrhagia or post-ablation specimens(analysis of variance for ER P±0.72; for PR P±0.17).There were also no significant differences between the differentstages of the menstrual cycle when all three groups were combined(analysis of variance for ER P±0.11; for PR P±0.13).The high variability found in this study may mask biologicallyrelevant differences in endometrial vascular ER and PR distributionbetween different groups.     

大鼠钙化血管平滑肌细胞血红素加氧酶-CO-cGMP通路的变化

本文旨在观察钙化细胞血红素加氧酶 (HO) -一氧化碳 (CO) -环磷酸鸟苷 (cGMP)系统的改变 ,以探讨血管钙化发生的细胞分子机理。利用 β 甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性及4 5Ca沉积 ;观察HO 1免疫细胞化学染色 ;测定VSMCsHO 1活性、碳氧血红蛋白 (HbCO)的生成及cGMP含量。发现钙化细胞的钙含量、碱性磷酸酶活性及4 5Ca沉积均比正常组显著升高。钙化细胞HO 1的表达不均匀 ,钙化结节中HO 1表达强于正常细胞。与正常平滑肌细胞相比 ,钙化细胞的HO 1活性低 4 2 7% [36 4± 2 8pmol (mgprotein·h)vs 6 3 5± 5 3pmol (mgprotein·h) ,P <0 0 1];CO含量低 39 2 % (3 38± 0 39μmol mgproteinvs 5 5 6± 0 4 8μmol mgprotein ,P <0 0 5 ) ;cGMP含量比正常细胞低 78 1% (4 3± 0 5vs 19 6± 1 2pmol mgprotein ,P <0 0 1)。提示钙化血管血红素 HO CO cGMP途径功能下调     

γ射线辐射对大鼠胸主动脉平滑肌细胞肾上腺髓质素和内皮素生成的影响

为观察^60COγ射线辐射对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）肾上腺髓质素（Adm)内皮素（ET）生成的影响，以探讨辐射防治再狭窄的机制，采用逆转录－竞争性聚合酶链反应观察经0,1,,24,25Gy辐射的培养大鼠血管平滑肌细胞Adm和ET mRNA水平；用放免方法测定相应的Adm和ET的生成。发现1Gy辐射对VSMC Adm和ET的生成及基因表达均无显著影响。14Gy辐射后VSMC生成的Adm较对照组增加270％（P＜0．05），ET的生成较对照组降低27．3％（P＜0．01）；25Gy辐射使VSMC生成的Adm和ET含量分别增加233％（P＜0．05）和降低58．0％（P＜0．01）。14和25Gy辐射分别使细胞Adm mRNA水平较对照组增加82．4％（P＜0．01）和101％（P＜0．01），使ET mRNA水平较对照组降低47．1％（P＜0．01）及40．2％（P＜0．01）。表明^60Coγ射线辐射可以促进Adm的蛋白及基因表达，而抑制ET的蛋白及基因表达，增加了Adm/ET比值。     

Calcium-activated chloride current in rat vascular smooth muscle cells in short-term primary culture

Isolated cells from rat portal vein smooth muscle in short-term primary culture were studied using patch-clamp technique (whole-cell configuration). In order to study a calcium-activated chloride current, the potassium currents were blocked by intracellular cesium diffusion. Without EGTA in the pipette solution, depolarizing voltage pulses from a holding potential of –70 mV to positive potentials activated an early inward and a late outward current. The latter persisted as a long-lasting inward tail current when the membrane was repolarized to –70 mV. The outward current measured at the end of the pulse and the tail current were blocked by extracellular cobalt, after replacement of external calcium with barium, after removal of external calcium, and when the calcium concentration of the pipette solution was less than 0.5 M, suggesting that they were calcium-dependent. The tail current decay was voltage sensitive, becoming faster with hyperpolarization. The reversal potential of the calcium-activated current was near the equilibrium potential for chloride ions, and was shifted as predicted by the Nernst equation when the extracellular or intracellular chloride concentration was changed. The calcium-activated current was blocked by adding micromolar concentrations of niflumic acid or millimolar concentrations of DIDS. This effect of compounds known to interfere with chloride channels together with the data on the equilibrium potential for chloride ions indicated above suggested the existence of a calcium-activated chloride current in vascular smooth muscle cells.     

三氧化二砷抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖并促进细胞凋亡

目的研究三氧化二砷(As2O3)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用。方法经组织块贴壁法原代培养的大鼠VSMCs,应用MTT法、台盼蓝拒染法3、H-胸腺嘧啶胞苷掺入法测定VSMCs的细胞活力、生长及增殖;应用流式细胞仪、DNA梯带法分析细胞周期分布及凋亡;应用Western blot法检测凋亡相关基因产物P53及细胞周期蛋白激酶抑制蛋白P21waf1/cip1。结果1~16μmol/L As2O3对VSMCs细胞活力无明显影响,但可显著抑制细胞生长及DNA合成(P<0.05),并呈时间和剂量依赖性。8μmol/L As2O3可使细胞周期S期减少(P<0.05)、G0G1期增加(P<0.05),并出现sub-G1期凋亡峰。16μmol/L As2O3对VSMCs作用不同时间后出现典型的凋亡梯带样DNA片段。8μmol/L As2O3可显著上调VSMCs的P53及P21waf1/cip1蛋白产物(P<0.05),且呈时间依赖性。结论As2O3对VSMCs具有明确的抗增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用,并且与P53、P21waf1/cip1表达上调密切相关。     

反义大鼠凝血酶受体基因的构建及其对主动脉血管平滑肌细胞增生的影响

凝血酶激活凝血酶受体引起的一系列细胞事件和内源性PDGF-A,bFGF的产生可能是血管病变发生发展过程中平滑肌细胞增生的重要因素。为进一步阐明血管损伤后平滑肌细胞增生的机理及探索有效治疗途径,针对凝血酶受体基因中一段包括转录起始点,翻译起始点,凝血酶结合和切割位点的序列作为靶序列,构建了凝血酶受体反义RNA重组表达载体pLXSN／ATR,并将其导入凝血酶刺激的动脉平滑肌细胞。结果表明重组基因转染能抑制凝血酶对大鼠平滑肌细胞DNA合成的刺激作用。提示序列特异的凝血酶受体反义重组基因的表达可以抑制凝血酶受体介导的血管平滑肌细胞增生。