W nt／β-连环蛋白信号通路在诱导气道平滑肌细胞外基质蛋白沉积中的作用

目的探讨Wnt／β‐连环蛋白信号通路在TGF‐β1诱导人气道平滑肌细胞（HASMC）细胞外基质（ECM ）蛋白沉积中的作用。方法将原代培养的 HASMC用于实验。用Western blot的方法来分析蛋白表达量,用实时荧光定量PCR的方法来分析ECM蛋白的基因表达。结果用TGF‐β1刺激体外培养的 HASMC ,可以引起胶原蛋白Ⅰα1（P＜0．01）及ECM 蛋白mRNA （包括胶原蛋白Ⅰα1、纤连蛋白、多功能蛋白聚糖、层粘连蛋白α2及核心蛋白多糖）表达增加（P＜0．01）。TGF‐β1可以引起β‐连环蛋白（P＜0．05）及其mRNA表达显著增加（P＜0．01）。TGF‐β1通过抑制糖原合酶激酶3（GSK3）β活化（P＜0．01）而引起非磷酸化的β‐连环蛋白表达增加（P＜0．01）。此外,用Wnt信号通路药理学抑制剂PKF115‐584可以明显抑制TGF‐β1诱导的胶原蛋白Ⅰα1（P＜0．01）及ECM蛋白（包括胶原蛋白Ⅰα1、纤连蛋白及多功能蛋白聚糖）的基因表达（P＜0．01）。结论 HASMC中Wnt／β‐连环蛋白信号通路的活化,参与了TGF‐β1诱导的ECM蛋白沉积。     

MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶（ILK）表达变化的关系。方法体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng／mlTGF-81处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1（0．1、1．0、10、100ng／m1）处理细胞,或以同一浓度的MCP-1（1ng／ml）在不同时间点（0h、12h、24h、36h、48h、72h）处理细胞。用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α—SMA mRNA的表达,Western blot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达。在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂（PD98059,10μmol／L）,p38MAPK抑制剂（SB203580,5／μmol／L）和ROCK抑制剂（Y27632,500μmol／L）对HKC细胞ILK表达的影响。结果MCP-1（0．1、1．0ng／m1）作用后HKC细胞α-SMA mRNA和α—SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组（P＜0．01）,但低于阳性对照组（P＜0．01）;其中以1．0ng／ml MCP-1组作用后α—SMAmRNA和α—SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著（P＜1．001）。1．0ng／ml MCP-1作用后细胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达在0-48h内逐渐增加,48h达最高峰（P＜0．01）,72h时呈下降趋势。分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异（P＞0．05）。结论MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38MAPK、ROCK途径有关。     

α-胞衬蛋白siRNA对人涎腺导管细胞的影响

目的：观察α‐胞衬（α‐Fodrin）蛋白小干扰RNA（siRNA）对人涎腺导管（HSG）细胞的影响,探讨α‐Fodrin siRNA治疗干燥综合征（SS）的作用。方法实验分对照组、空载体组、α‐Fodrin siRNA1组及α‐Fodrin siRNA2组,将成功构建的10μg α‐Fodrin siRNA1和α‐Fodrin siRNA2表达载体分别采用脂质体法转染 HSG细胞,空载体组 HSG细胞转染等剂量的pGFP‐V‐RS空载体。转染后24、48、72和96 h观察细胞转染效率,实时荧光定量（RT ）‐PCR法检测4组HSG细胞中α‐Fodrin mRNA的表达水平;细胞荧光免疫法检测4组细胞中α‐Fodrin蛋白的表达水平;ELISA法检测4组细胞上清液中IFN‐γ、IL‐10的表达水平。结果转染后48 h HSG细胞转染效率最高;转染后48 hα‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组 HSG细胞中α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组（P＜0．05）,且α‐Fodrin siRNA2组中α‐Fodrin mRNA的表达水平低于α‐Fodrin siRNA1组的表达水平（P＜0．05）;α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清液中IL‐10的水平明显升高,较对照组和空载体组差异有统计学意义（P＜0．05）,α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组比较差异无统计学意义（P＞0．05）;α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清中 IFN‐γ的水平低于对照组和空载体组,但4组之间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 HSG细胞转染α‐Fodrin siRNA载体后,α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平下降,同时细胞上清中IL‐10的水平升高、IFN‐γ水平下降,提示α‐Fodrin siRNA可以减轻炎性反应,为SS的治疗提供实验依据。     

全反式维甲酸对高糖环境下HK-2细胞转分化的影响及其可能机制

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对高糖环境下正常人肾小管上皮 HK‐2细胞株转分化的影响及其可能机制。方法将体外培养的 HK‐2细胞按随机数字表法分为以下7组：空白组、高糖组、高渗组、高糖＋低浓度ATRA组、高糖＋中浓度ATRA组、高糖＋高浓度ATRA组、Rho激酶抑制剂Y27632干预组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT‐PCR）检测各组细胞RhoA及ROCK1 mRNA表达水平,采用细胞免疫荧光检测高糖环境下 HK‐2细胞α‐平滑肌肌动蛋白（α‐SMA）及E‐钙黏蛋白的表达变化。结果 RT‐PCR结果显示：空白组与高渗组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平较空白组、高渗组高,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后, RhoA及ROCK1 mRNA表达较高糖组减少,差异均有统计学意义（P＜0．05）,且呈现ATRA浓度依赖性。相关性分析示,高糖组及各ATRA干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达水平呈正相关（P＜0．05）。细胞免疫荧光检测结果显示：空白组与高渗组α‐SMA及E‐钙黏蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组α‐SMA表达水平较空白组高,E‐钙黏蛋白表达水平较空白组低,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后,α‐SMA表达明显减少,E‐钙黏蛋白表达明显增多,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 ATRA可部分逆转高糖环境下 HK‐2细胞转分化的过程,其机制可能与抑制RhoA／ROCK信号通路有关。     

皮肤黑色素瘤细胞中TGF-βRⅠ型和Ⅱ型受体表达的研究

目的：探讨转化生长因子β受体（TGF‐βR）Ⅰ、Ⅱ型在皮肤黑色素瘤细胞中的表达情况。方法应用反转录‐实时荧光定量PCR（RT‐PCR）和蛋白免疫印迹（Westernblot）方法,对TGF‐βRⅠ、Ⅱ型的mRNA及其蛋白在人皮肤黑色素瘤A375细胞和人正常黑素细胞中的表达进行检测。结果A375细胞中TGF‐βRⅠ、Ⅱ型的mRNA和蛋白表达均显著低于正常人黑素细胞。结论在黑色素瘤细胞的TGF‐β／Smad信号通路中出现TGF‐βR表达的下调,可能是皮肤黑色素瘤发病机制之一。     

肝癌患者外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg与IL-2IL-10TGF-β表达的动态观察及临床意义

目的：了解CD4＋CD25＋ FOXP3＋ Treg、IL‐2、IL‐10和 TGF‐β在肝癌患者外周血中的表达并探讨其临床意义。方法应用流式细胞术测定32例原发性肝癌（HCC组）和17例继发性肝癌（S HC组）患者治疗前、治疗后1、3、6个月外周血CD4＋CD25＋ FOXP3＋ Treg占CD4＋ T淋巴细胞百分比,用ELISA法测定IL‐2、IL‐10和TGF‐β的水平,并与18例对照者进行比较。结果 HCC和SHC患者治疗前和治疗后外周血CD4＋CD25＋ FOXP3＋ Treg占CD4＋ T细胞的比例、IL‐10和TGF‐β水平均显著高于对照组（P＜0．01）;IL‐2显著低于对照组（P＜0．01）;治疗后各时间点（治疗后1、3、6个月）CD4＋CD25＋ Foxp3＋ Treg占CD4＋ T淋巴细胞百分比、IL‐2、IL‐10和TGF‐β差异均无统计学意义（P＜0．05）。结论 CD4＋CD25＋ FOXP3＋ Treg、IL‐10和TGF‐β在肝癌患者外周血中表达水平明显升高,IL‐2明显降低。检测它们的表达水平对肝癌的辅助诊断及治疗具有重要临床意义。     

脂多糖对气道上皮细胞分泌炎症因子的影响

目的：检测不同浓度脂多糖（LPS）刺激气道上皮细胞不同时间后炎症因子[转化生长因子（TGF）‐β、单核细胞趋化蛋白‐1（MCP‐1）、肿瘤坏死因子α（TNF‐α）、细胞间黏附分子（ICAM）‐1、ICAM‐2]分泌量的变化,从而探索LPS在调节气道上皮细胞炎症因子分泌中的作用。方法用培养贴壁细胞的方法,培养具有气道上皮细胞特性的A549细胞株,用不同浓度的LPS（0、0．1、1．0、10．0、20．0、30．0、50．0、100．0μg／mL ）刺激饥饿24 h后的同等数量的A549细胞,分别在刺激2、4、8、24、30 h以后收集细胞上清液;用ELASA方法检测A549细胞各炎症因子分泌量,分析不同时间点的变化。结果（1）LPS能够干预气道上皮细胞分泌TGF‐β、MCP‐1、TNF‐α、ICAM‐1和ICAM‐2;当LPS干预浓度为20．0μg／mL ,干预时间为4 h和8 h时,ICAM‐1的分泌量达到峰值;当LPS干预浓度为50．0μg／mL ,干预时间为4 h时,MCP‐1的分泌量达到峰值。（2）TGF‐β、MCP‐1、TNF‐α、ICAM‐1和ICAM‐2的分泌量与LPS的干预浓度和干预时间有一定关系,在各个时相点,TNF‐α、MCP‐1和ICAM‐1分泌量达到最大时与空白对照组相比,差异有统计学意义（P＜0．01）;在干预时间为30 h时,TGF‐β分泌量下降,ICAM‐2的分泌量与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0．05）;在其余各时相点,TGF‐β和ICAM‐2分泌量最大时也需要一个最佳的LPS干预浓度,且与空白对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论 LPS对气道上皮细胞TGF‐β、MCP‐1、TNF‐α、ICAM‐1和ICAM‐2分泌量的影响与L PS的干预浓度和干预时间相关,特定的干预浓度和干预时间可使相应的炎症因子分泌达峰值。     

血液灌流联合血液滤过对有机磷农药中毒患者疗效及炎症状态的影响

目的：探讨血液灌流（HP）联合血液滤过（HF）在有机磷农药中毒患者中的应用及对机体炎症状态的影响。方法将68例急性有机磷农药中毒（AOPP）患者按随机数字表法分为对照组及观察组,对照组采用血液透析（HD）联合HP进行血液净化,而观察组则采用HP联合 HF进行血液净化。观察并比较两组患者生存率、生存时间、全血胆碱酯酶活力、血清转化生长因子‐β1（TGF‐β1）、血清肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）以及血清白细胞介素‐6（IL‐6）的水平。结果与治疗前相比,所有患者血清 TGF‐β1、TNF‐α、IL‐6水平均显著下降（P＜0．05）;与对照组相比,观察组生存时间显著延长（P＜0．05）,治疗后血清 TGF‐β1、TNF‐α以及IL‐6水平下降更为显著（P＜0．05）。结论血液净化疗法治疗AOPP疗效肯定,以 HP联合HF方案疗效更佳。     

胃癌组织中TGF-β1、Smad2与CyclinD1的表达及其相关性的研究

目的：探讨胃癌组织中转化生长因子β1（TGF‐β1）、Smad2与细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达及三者之间的相关性。方法选择2007年1月至2012年1月腔镜活检正常胃黏膜20份（正常胃组织）作为对照组,手术切除胃癌标本60份（高‐中分化、低分化）作为胃癌组,用免疫组化法检测TGF‐β1、Smad2、CyclinD1正常胃组织及胃癌组织中的表达。结果TGF‐β1及CyclinD1在胃癌组织中的表达高于对照组,Smad2在胃癌组中的表达低于对照组;TGF‐β1及CyclinD1在低分化胃癌组中的表达高于高‐中分化胃癌组;TGF‐β1及CyclinD1在无淋巴结转移的胃癌组中的表达低于有淋巴结转移的胃癌组;TGF‐β1、CyclinD1在胃癌组中的表达随着TNM分期的提高而升高,高‐中分化胃癌组Smad2较低分化胃癌组表达升高,Smad2的表达在无淋巴结转移的胃癌组中的表达高于有淋巴结转移的胃癌组;Smad2在胃癌中的表达随TNM分期的提高而降低,TGF‐β1、Smad2及Cy‐clinD1的表达与患病年龄、性别无关;TGF‐β1与Smad2呈负相关,TGF‐β1与CyclinD1呈正相关,CyclinD1与Smad2呈负相关。结论TGF‐β1、Smad2与CyclinD1的表达与胃癌的发病有关。     

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞上皮-间质转化作用的研究

目的：研究GANT61对人肺癌细胞 H1703和 A549的上皮‐间质转化（EMT）的影响,并初步探讨其作用机制。方法以二甲基亚砜（DMSO）作为对照（DMSO组）,用GANT61处理H1703和A549细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR法检测Gli‐1、Gli‐2、E‐cadherin和Vimentin基因变化;蛋白质印迹法（Western blotting）观察GANT61作用于 H1703和A549细胞后对E‐cadherin和Vimentin蛋白表达的影响,划痕愈合实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果与DMSO组比较,实时荧光定量PCR结果显示GANT61可下调H1703和A549细胞Gli‐1、Gli‐2及Vimentin mRNA的表达,升高E‐cadherin mRNA的表达（P＜0．01）;Western blotting显示,GANT61可以下调H1703和A549细胞Vimentin蛋白表达,升高E‐cadherin蛋白表达（P＜0．01）;划痕愈合实验显示,GANT61处理组 H1703和A549细胞的侵袭能力明显下降（P＜0．01）。结论肺癌的EMT与 Hedgehog信号转导通路中Gli‐1和Gli‐2的异常激活有关,GANT61通过下调Gli‐1和Gli‐2的表达影响肺癌细胞的EM T能力,Gli可能成为抑制肺癌细胞转移的新的分子靶点。     

脂氧素 A4的抗结肠纤维化作用及其机制

目的：观察脂氧素A4（LX A4）的抗结肠纤维化作用,并探讨其机制。方法将32只BALB／C雄性小鼠随机分为4组,每组8只。对照组不造模,仅给予生理盐水灌肠;模型组、CS组、CS／LX A4组建立结肠炎结肠纤维化模型后,分别给予生理盐水、壳聚糖纳米粒、壳聚糖／LX A4纳米粒灌肠。10 d后取结肠组织检测疾病活动指数（DAI）,HE染色法光镜下观察结肠组织组织学损伤指数（HI）,免疫组化法检测结肠组织转化生长因子－β1（ TGF－β1）和Smad3蛋白表达量。结果实验第10天,与对照组比较,其余3组大鼠DAI显著升高（ P＜0．01）;CS／LX A4组大鼠DAI低于模型组,但差异无统计学意义（ P＞0．05）。无论是结肠炎症程度、病变深度,还是隐窝破坏,其余3组结肠组织HI均显著高于对照组（P＜0．05,P＜0．01）,CS／LX A4组均显著低于模型组和CS组（P＜0．05,P＜0．01）。模型组结肠组织TGF－β1、Smad3表达量均较对照组显著升高（P＜0．01）;与模型组比较, CS／LX A4组和CS组结肠组织TGF－β1、Smad3表达量均明显降低（ P＜0．05）,但均显著高于对照组（ P＜0．05）。结论 LX A4可以通过下调TGF－β1和Smad3的表达,减轻炎症反应,进而遏制结肠纤维化的进展。     

内脂素在糖尿病大鼠肝组织的表达及其对肝糖代谢的作用

目的：检测糖尿病大鼠肝组织内脂素（visfatin）的表达,探讨内脂素在肝糖代谢的作用。方法雄性 SD 大鼠,分为5组：正常对照组（NC 组）、肥胖组（DIO 组）、糖尿病组（DM 组）、胰岛素治疗组（INS 组）、二甲双胍治疗组（MET 组）。检测大鼠空腹血糖（FPG）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、游离脂肪酸（FFA ）、空腹胰岛素（Fins）水平;RT‐PCR 测定大鼠肝组织 visfatin 、葡萄糖6磷酸酶（G‐6‐Pase）mRNA 的水平,Western blot 检测 visfatin 、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶‐α（p‐AMPKα）和腺苷酸活化蛋白激酶‐α（AMPKα）蛋白表达量。结果 DM 组 FBG 较 NC 组、DIO 组均显著升高（P＜0．01）;INS 组、MET 组 FBG 较 DM 组显著下降（P＜0．01）。 DIO 组、DM 组 HOMA‐IR 均较 NC 组显著升高（P＜0．01）;DM 组 HOMA‐IR 较 DIO 组显著升高（P ＜0．01）。DIO 组、DM 组 ISI 均较 NC 显著降低（P＜0．01）,DM 组 ISI 较 DIO 组显著降低（P＜0．01）。 DIO 组 TG 较 NC 组显著升高（P＜0．01）;INS 组、MET 组 TG 较 DM 组显著降低（P＜0．05）,DM 组、INS 组、MET 组 TG 、TC 均较 NC 组升高（P＜0．05）。 DM 组、MET 组、INS 组 FFA 均较 NC 组明显升高（P＜0．05）;DM 组 FFA 较 DIO 组明显升高（P＜0．05）。 DM 组 visfatin mRNA 表达较NC 组、DIO 组显著升高（P＜0．05）;INS 组、MET 组 visfatin mRNA 较 DM 组显著降低（P ＜0．01）。 DM 组、MET 、INS 组 G‐6‐Pase mRNA 较 DIO 组显著升高（P＜0．05）,MET 组 G‐6‐Pase mRNA 较 DM 组显著降低（P ＜0．05）。 DM 组、INS 组、MET 组visfatin 蛋白表达较 NC 组显著升高（P＜0．05）;DM 组、MET 组、INS 组 AMPKα蛋白表达较 NC 组显著降低（P＜0．05）,DM 组AMPKα蛋白表达较 DIO 组显著降低（P ＜0．05）;DIO 组、DM 组、INS 组、MET 组 p‐AMPKα蛋白表达较 NC 组显著降低（P＜0．01）。结论大鼠肝组织 visfatin 表达可能与肝糖脂代谢有关联,visfatin 可能未参与到二甲双胍激活 AMPK 降低血糖的机制中。     

T-cadherin 蛋白与基因在混合细胞型霍奇金淋巴瘤中表达和临床意义

目的：探讨 T‐cadherin 蛋白与基因在混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者中的表达情况及其临床意义。方法分别采用免疫组化法和 RT‐PCR 同时检测45例混合细胞型霍奇金淋巴瘤和20例淋巴结反应性增生淋巴结组织及其骨髓 mRNA 中 T‐cadherin 的表达情况,分析其与患者临床病理特征和预后的关系。结果 T‐cadherin 蛋白在混合细胞型霍奇金淋巴瘤阳性表达率31．1％（14／45）显著低于淋巴结反应性增生90．0％（18／20）;T‐cadherin mRNA 的相对表达量在混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者显著少于淋巴结反应性增生患者（P＜0．05）。混合细胞型霍奇金淋巴瘤中 T‐cadherin 表达与患者 TNM 分期和结外累及有关（P＜0．05）,与患者年龄、性别、WBC 、PLT 、Hb 、LDH 和 IPS 评分无相关（P ＞0．05）。多因素 Logistic 回归分析显示,TNM 分期和 T‐cadherin 阴性表达是混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者结外累及的独立危险因素。经过 Log‐rank 检验显示,混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者 T‐cadherin 阴性表达和 T‐cadherin 阳性表达的2年生存率分别是83．9％和92．9％（P＞0．05）;3年生存率分别是71．0％和85．7％（P＞0．05）;5年生存率分别是41．9％和78．6％（P＜0．05）,Kaplan‐Meier 生存分析显示 T‐cadherin 阴性表达5年生存率明显低于 T‐cadherin 阳性表达组（P＜0．05）。结论 T‐cadherin 表达减少和混合细胞型霍奇金淋巴瘤患者 TNM 分期和结外累及有相关性,T‐cadherin 可能成为评价混合细胞型霍奇金淋巴瘤预后相关的一种新型分子标记物。     

Six1、TGF-β、VEGF-C在人喉鳞癌中的表达及相关性分析

目的：检测Six1、转化生长因子‐β（TGF‐β）及其共同诱导的血管内皮生长因子（VEGF）‐C蛋白在人喉鳞癌中的表达,探讨三者在喉鳞癌发生、发展、转移及预后中的意义。方法收集病理学确诊的96例手术后喉鳞癌患者的临床资料和留存石蜡标本。采用免疫组织化学和Western blot法检测喉鳞癌组织中Six1、TGF‐β及VEGF‐C蛋白的表达情况,并分析上述蛋白表达与喉鳞癌患者临床特征的关系。结果96例喉癌组织标本中,Six1、TGF‐β、VEGF‐C的阳性表达率分别为84．4％（81／96）、89．6％（86／96）和91．7％（88／96）。Six1阳性表达率在低分化、有淋巴结转移的喉鳞癌患者中较高;TGF‐β阳性表达率在有淋巴结转移的喉鳞癌患者中较高,同分化程度无关;V EG F‐C阳性表达率在低分化、有淋巴结转移的喉鳞癌患者中较高;人喉鳞癌组织中Six1的表达与VEGF‐C表达呈正相关。结论 Six1、TGF‐β、VEGF‐C的高表达可能促进了喉鳞癌的淋巴转移,Six1的表达可能是VEGF‐C表达变化的重要影响因素之一。联合检测Six1、TGF‐β、VEGF‐C对判断人喉鳞癌的转移及预后有重要临床意义。     

EMT在大肠癌细胞奥沙利铂耐药中的作用及分子机制研究

目的：探讨上皮‐间叶转化（EMT）在大肠癌耐药中的作用及分子机制。方法采用药物浓度递增的方法建立大肠癌LOVO细胞奥沙利铂（L‐OHP）耐药细胞株LOVO／L‐OHP,免疫荧光和蛋白质印迹法（Westernblot）检测LOVO和LOVO／L‐OHP细胞E‐cadherin和Vimentin表达;Westernblot检测核转录因子Snail、Twist表达;噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖。结果与LOVO细胞比较,LOVO／L‐OHP皮表型消失,细胞膜E‐cadherin表达减弱（22．63±3．25）％（P＜0．01）,获得间叶细胞表型,表达Vimentin（475．42±58．36）％（P＜0．01）。LOVO／L‐OHP细胞株Twist表达轻度增加（116．42±18．36）％（P＞0．05）,Snail表达显著增加（382．18±41．33）％（P＜0．01）。siSnail上调E‐cadherin表达（246．82±31．57）％（P＜0．01）,下调Vimentin表达（28．75±3．96）％（P＜0．01）;siSnail显著增强LOVO／L‐OHP细胞株L‐OHP化疗敏感性,对照组和siSnail组的IC50分别为23．75μg／mL和12．42μg／mL。结论EMT在大肠癌细胞L‐OHP耐药中可能起重要作用,抑制EMT可恢复耐药细胞化疗敏感性。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞影响机制的研究

观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）细胞外基质的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠Mes细胞株,分低糖组、高糖组、甘露醇组、乙醇对照组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）、高糖＋苯那普利组,分别作用12h、24h、48h,免疫细胞化学法检测细胞Col1V蛋白的表达,RT—PCR检测TGF—β1及Smad7mRNA的表达。结果：（1）c01Ⅳ表达的变化：与低糖组比较,高糖组colⅣ表达显著增加（P〈0．01）;与高糖组比较,EDS组及苯那普利组Col1V表达显著减少（P〈0．01）,EDS组与苯那普利组无显著差异（P〉0．05）;（2）TGF—p1及Smad7mRNA的表达：与低糖组比较,高糖组24hSmad7基因表达明显增加（P〈0.01）,24h、48hTGF—B1基因表达均显著增加（P〈0．01）;与高糖组比较,24h、48hEDS组及苯那普利组Smad7基因表达均明显增加（P〈0．01）,TGF—B1基因表达均显著减少（P〈0．01）,EDS组与苯那普利组之间Smad7、TGF—B1基因表达无显著差异（P〉0．05）。结论：（1）蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。（2）蜕皮甾酮能下调TGF—β1 mRNA的表达、上调Smad7 mRNA的表达,从而发挥对肾脏的保护作用。     

老年COPD患者Treg与TGF-β1的变化及其意义

目的：通过观察老年慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重期、稳定期患者和健康老年人外周血中CD4＋ CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）比例变化及COPD患者血清中转化生长因子‐β1（TGF‐β1）水平的相关性,探讨Treg、TGF‐β1在老年COPD发病中的作用。方法选择2012年3月至2014年2月在该院老年科的COPD急性加重期患者26例（急性期组）、稳定期患者23例（稳定期组）,选择同期20例健康体检者为对照组,用流式细胞仪检测外周血中T reg表达比例,用ELISA法检测血清TGF‐β1。结果3组受检者外周血Treg比例,各病例组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01）,急性期组与稳定期组比较差异有统计学意义（P＜0．05）;TGF‐β1水平,急性期组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01）;各组Treg与TGF‐β1均无相关性（P＞0．05）。结论 Treg细胞在老年COPD急性加重过程中有重要作用,但 Treg与 TGF‐β1无明显相关性,老年患者体内存在免疫功能紊乱或异常。     

丙泊酚对高糖诱导的肾小球系膜细胞转化生长因子－β和核转录因子－κB 表达的影响

目的：观察丙泊酚对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子－β（TGF －β）和核转录因－κB （NF －κB）表达的影响。方法在体外培养的系膜细胞上进行研究。设立正常葡萄糖对照组（糖浓度为5．6 mmol／L）、高糖组（30 mmol ／L）以及 PDTC 干预组（100μmol／L）和分别含丙泊酚12．5、50、100μmol／L 的干预组。用 ELISA法检测培养细胞上清中 TGF －β蛋白,以实时荧光定量 PCR 检测 TGF －βmRNA 的表达,Western blot 方法检测系膜细胞内磷酸化 NF －κBp65（p －NF －κBp65）蛋白的表达。结果高糖诱导系膜细胞24 h 后,TGF －β蛋白分泌明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚（12．5、50、100μmol ／L）对高糖诱导的系膜细胞分泌的 TGF －β的抑制作用随浓度的变化而变化;系膜细胞在低浓度葡萄糖水平下可低水平表达 TGF －βmRNA,高糖作用24 h 后,TGF －βmRNA 表达明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚可明显下调高糖诱导的 TGF －βmRNA 的表达（P ＜0．01）;在高糖作用1 h 后,系膜细胞内的 p －NF －κBp65蛋白表达增强（P ＜0．05）,丙泊酚能够部分抑制高糖诱导的系膜细胞 p －NF －κBp65蛋白增多（P ＜0．05）。结论在体外含高糖培养条件下,丙泊酚可以抑制 TGF －βmRNA 及蛋白在系膜细胞的表达,部分逆转高糖诱导的系膜细胞 NF －κB 的活化,提示丙泊酚对糖尿病肾病可能有抗炎、抗纤维化作用。     

川芎嗪对TNF-α诱导的人腹膜间皮细胞t-PA和PAI-1表达的影响

【目的】探讨川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMCs）在肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）诱导后组织型纤溶酶原激活物（t‐PA）和纤溶酶原激活物抑制因子‐1（PAI‐1）表达的影响。【方法】应用胰蛋白酶消化法分离HPMCs进行原代培养并传代,分为5组（每组设3个样本）：正常对照组（完全培养液）、单纯TNF‐α（1μg／L）诱导组和TNF‐α诱导加低、中、高剂量川芎嗪（10、20和40 mg／L）组。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT‐PCR）法检测细胞内t‐PA和PAI‐1 mRNA表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中t‐PA和PAI‐1的蛋白质水平。【结果】与正常组比较,TNF‐α诱导组上清液中 t‐PA的含量减少和PAI‐1含量显著升高,且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．01）;与TNF‐α诱导组比较,低、中、高剂量川芎嗪组上清液中t‐PA的含量增加,PA I‐1的含量显著降低,且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．05或 P ＜0．01）。与正常组比较,单纯TNF‐α诱导组 HPMCs t‐PA／β‐actin mRNA 下降（87＆#177;5）％和 PAI‐1／β‐actin mRNA 上升（3．63＆#177;0．12）倍（ P ＜0．01）;与TNF‐α诱导组相比,低、中、高剂量川芎嗪组t‐PA／β‐actin mRNA表达明显增加（ P＜0．05或 P ＜0．01）和PAI‐1／β‐actin mR‐NA表达明显减少（ P＜0．05,P＜0．01）,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】川芎嗪干预后能促进 HPMCs在炎症状态下t‐PA生成增加并抑制PAI‐1的表达,从而减少纤维化的发生。     

基于CD8＋CD28－调节性T细胞免疫功能调节的替比夫定抗乙肝病毒效价研究

目的：从CD8＋CD28－调节性T 细胞（T reg ）角度探讨替比夫定抗乙肝病毒的效价。方法：收集93例慢性乙型肝炎（C H B ）患者作为观察对象,以106例健康志愿者作为标本对照;将C H B患者分为观察组（n＝45）及对照组（n＝48）,分别给予替比夫定及拉米夫定治疗,比较治疗前后第20周的 Treg及其细胞因子白介素10（IL‐10）及转化生长因子β1（TGF‐β1）百分含量,比较乙肝病毒拷贝数（HBV‐DNA）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）及总胆红素（TBIL）含量变化,并分析 Treg及其细胞因子与BV‐DNA及肝功能的相关性。结果：CHB患者CD8＋ CD28－ Treg、IL‐10及 TGF‐β1均显著高于健康志愿者（P＜0.05）。治疗后观察组HBV‐DNA、ALT、AST 及TBIL均显著低于对照组（P＜0.05）。治疗后观察组CD8＋CD28－Treg、IL‐10及TGF‐β1均显著低于治疗前,且治疗后CD8＋ CD28－ Treg、IL‐10两者显著低于对照组（P＜0.05）。CD8＋CD28－Treg、IL‐10及TGF‐β1三者当中任意一者均与 HBV‐DNA、ALT、AST及TBIL当中任意一者呈显著正相关性（r＞0.75,P＜0.05）。结论：CD8＋ CD28－ Treg、IL‐10及TGF‐β1异常增高是CHB 患者的一个重要免疫学特征,替比夫定对以上三者的下调效价优于拉米夫定。