脂多糖干预气道上皮细胞细胞因子及蛋白激酶C的表达

目的 探索脂多糖(lipolysaccharide,LPS)干预气道上皮细胞细胞因子的分泌及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的表达.方法 培养A549细胞株,0、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0、50.0、100.0 μg/mL的LPS干预A549细胞2、4、8、24、30、48 h以后收集细胞上清液及细胞质总蛋白,ELASA法检测A549细胞IL-1、IL-6、IL-8、IL-11的分泌,Western blot 法检测相应的PKC的表达.结果 不同浓度LPS干预A549细胞相同时间后细胞因子IL-1、IL-6、IL-8、IL-11的分泌量及PKC的表达量之间的差异均有统计学意义(P＜0.01);PKC的表达和IL-11的分泌之间具有相关性(P＜0.05).结论 LPS干预细胞因子IL-1、IL-6、IL-8、IL-11的分泌及PKC的表达,且LPS干预细胞因子IL-11的分泌可能和PKC信号通路有关.     

脂多糖对人肺泡上皮细胞一氧化氮分泌的影响

目的探讨脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导人肺泡上皮细胞（A549）一氧化氮（Nitric oxide，NO）分泌的影响。方法对A549给予不同浓度的LPS，分别收集其培养上清液，用硝酸还原法检测NO浓度。结果不同浓度LPS诱导A549，NO分泌量高于未经LPS诱导的对照组，且具有浓度、时间依赖性。结论LPS诱导A549NO的分泌，提示LPS具有诱导肺泡上皮细胞急性炎症和氧化应激的作用。     

睾酮对3T3-L1脂肪细胞炎症因子生成的影响及其机制研究

目的 探讨睾酮对3T3-L1成熟脂肪细胞炎症因子生成的影响及分子机制.方法 3T3-L1前脂肪细胞诱导成熟,采用不同浓度睾酮(10-9、10-7、10-5mol/L)分别处理10～30 min及12、24及48 h后,提取上清液用ELISA法检测炎症因子白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度;RT-PCR检测细胞内IL-6、MCP-1mRNA的生成;免疫印迹检测核因子-κB(NF-κBp65)的磷酸化及表达.随后再用10-4mol/L NF-κB的抑制剂吡咯二烷二硫氨基甲酸(PDTC)预处理2 h,再加入睾酮,再观察上述结果的变化.结果 (1)与无睾酮组相比,睾酮3种浓度处理组3T3-L1脂肪细胞上清液IL-6、MCP-1的含量均明显增多(P<0.05),以10-5moL/L睾酮处理24 h时上清液两种因子含量较其他处理组明显增多(P<0.05).与无睾酮组相比,睾酮3种浓度处理组3T3-LI脂肪细胞12 h时,IL-6、MCP-1 mRNA的水平明显增加(P<0.05),以10-5moL/L睾酮处理12 h时两种因子的mRNA水平较其他组明显增加(P<0.05);(2)睾酮3种浓度短时间(10～30 min)处理3T3-L1脂肪细胞时,与无睾酮组相比,均可使NF-κBp65的磷酸化增加(P<0.05),其中以10-5mol/L的作用最明显(P<0.05);睾酮处理3T3-LI脂肪细胞12 h时,NF-κB p65的磷酸化明显增加(P<0.05),其中以10-9和10-5mol/L组较其他组作用明显(均P<0.05);(3)用NF-κB的抑制剂PDTC预处理2 h后,再用睾酮处理,上清液两种因子含量及其mRNA水平明显降低(均P<0.05).结论 睾酮可通过NF-κB途径促进成熟脂肪细胞炎症因子的分泌.     

双黄连对呼吸道合胞病毒感染的气道上皮细胞炎症因子释放的影响

目的：探讨双黄连及其含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的气道上皮细胞(A549)的炎症因子释放的影响及其药物作用机理。方法：以ELISA法测定炎症介质的含量，观察复方双黄连及其含药血清以不同的给药方式(Ⅰ组：感染前给药、Ⅱ组：感染时给药、Ⅲ组：感染后给药)对RSV刺激A549细胞引发的炎症介质IL-8、IL-6、TNF-α释放的作用。结果：RSV刺激气道上皮细胞A549后IL-8的分泌水平增加，而对IL-6、TNF-α影响不大；双黄连复方及其含药血清均能显降低RSV诱导A549释放的IL-8水平，并以感染前给药的途径下调IL-8的作用最为明显。结论：RSV能诱导气道上皮细胞释放炎症因子IL-8，双黄连可通过抑制RSV引起的IL-8释放，并在病毒感染的气道炎症控制中起着一定的作用。     

miR-140-5 p对炎症模型支气管上皮细胞炎症因子分泌的影响

目的:研究miR-140-5p对呼吸道合胞病毒(RSV)感染诱导的炎症模型支气管上皮细胞炎症因子分泌的影响和机制.方法:①利用生物信息学软件TargetScan分析miR-140-5p和TLR4的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证.②人支气管上皮细胞16-HBE分成空白对照组、RSV组、miR-NC+RSV组、...     

肿瘤自分泌生长抑制因子的抗肿瘤作用研究

采用^3H-TdR掺入法，检测人肺腺癌细胞（A549）无血清萃取培养上清液（ATI）。结果发现ATI在体外能明显抑制部分肿瘤细胞株DNA合成，尤以A549细胞及小鼠黑色素瘤细胞（B16）明显（P＜0．01和0．05）。且这一作用较为稳定，耐热，无种属特异性，提示ATI中含调节A549细胞生长的物质，对A549细胞的生长起重要的调节作用。     

脂氧素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症相关因子的影响及机制

目的：研究脂氧素（1ipoxin A4）对脂多糖（1ipopo-lysaccharide,LPS）诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7中相关炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）、环加氧酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、血红素氧化酶-1（HO-1）和白介素-10（IL-10）的影响,并进一步探讨其内在分子机制。方法：以1mg／L LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型,分别用脂氧素A4或脂氧素A4和ZnPPIX干预LPS刺激的RAW264.7细胞24h后,收集培养上清并提取细胞总蛋白,酶联免疫法测定上清中TNF-α,IL-10和PGE2浓度,免疫印迹法检测细胞COX-2和HO-1的蛋白表达量,分光光度计分析HO-1的活性。结果：1mg／L LPS明显诱导TNF-α,COX-2和PGE,的生成,也适度增加IL-10及HO-1的产生;脂氧素A4可抑制LPS诱导的TNF-α（P〈0.01雠LPS组）,COX-2和PGE2（P〈0.01伽LPS组）的生成,却进一步增加IL-10（P〈0.01 vs LPS组）和HO-1表达量和活性（P〈0.01 vs LPS组）;ZnPPIX可减弱脂氧素A。对LPS诱导TNF-α（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）,COX-2和PGE2（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）的生成抑制作用,同时也下调IL-10的生成量。结论：脂氧素A4可抑制LPS诱导的巨噬细胞中致炎介质TNF-α,COX-2及PGE2的生成,同时也促进IL-10的产生,这种效应在一定程度上是通过上调HO-1表达和活性实现。     

低氧条件下气道上皮细胞增加巨噬细胞趋化和炎症因子的分泌

目的：探讨低氧条件下气道上皮细胞对巨噬细胞趋化和炎症因子表达的影响。方法：将0,100,200, 400,800 μmol/L氯化钴(CoCl2)处理或转染缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α siRNA的人支气管上皮细胞 HBE与人单核细胞THP-1诱导分化的M1或M2巨噬细胞共培养,采用Transwell小室趋化实验记录巨噬细胞趋化数量, ELISA法检测巨噬细胞上清中TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-13,IL-10浓度,RT-qPCR检测HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA的表达。结果：共培养8和12 h,HBE细胞诱导巨噬细胞趋化,并且呈时间和CoCl2浓度依赖性;转染HIF-1α siRNA的HBE相对于未转染组对共培养的M1或M2巨噬细胞趋化诱导明显减弱(P<0.01),在相同培养条件下,M2巨噬 细胞趋化性高于M1巨噬细细胞。巨噬细胞上清中TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-13,IL-10水平呈时间和CoCl2浓度依赖性升 高,共培养8和12 h,TNF-α和IFN-γ浓度增加较IL-4,IL-13,IL-10浓度增加更明显;共培养24 h,IL-4,IL-13,IL-10浓 度增加程度高于TNF-α和IFN-γ。与转染HIF-1α siRNA的HBE共培养的巨噬细胞上清中各细胞因子水平较未转染组均明 显降低(P<0.05或0.01),其中TNF-α,IFN-γ降低更明显。共培养8和12 h,HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA表达 均呈CoCl2浓度依赖性增加;转染HIF-1α siRNA后,HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA表达量均明显减少。结论： 低氧环境下气道上皮细胞可增加巨噬细胞趋化因子和致炎因子的表达,HIF-1α和Cav-1可能是这些过程的重要介质。     

血管活性肠肽对肺炎支原体诱导的人肺上皮细胞分泌TNF-α的影响

目的:观察肺炎支原体(Mp)体外诱导A549细胞(人肺腺癌上皮细胞株)产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平以及血管活性肠肽(VIP)对TNF-α产生水平的影响。方法:将A549细胞与不同感染复数和不同刺激时间的Mp共同孵育,用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α的含量;用不同浓度的VIP预处理A549细胞,然后再以Mp诱导,测定细胞培养上清液中TNF-α的含量。结果:A549细胞经Mp刺激后,TNF-α的产生水平明显高于正常细胞对照组(P<0.05),且TNF-α的产生水平与Mp的感染复数和感染时间具有依赖性。VIP不同浓度的干预,A549细胞TNF-α的分泌浓度较无VIP干预组有不同程度的降低(P<0.05)。结论:Mp可诱导A549细胞产生TNF-α,VIP可有效降低Mp诱导的TNF-α的产生,提示VIP对肺上皮细胞有直接抗炎作用。     

烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的作用

目的 研究烟曲霉菌菌丝片段和孢子对气道上皮细胞的作用。方法 烟曲霉菌菌丝片段和照射灭活的孢子分别与气道上皮细胞系A549共培养，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测A549细胞释放到培养液内的白细胞介素（IL）-6和IL-87结果菌丝片段刺激A549细胞产生有限的IL-6、IL-8；孢子抑制A549释放IL-6。结论 烟曲霉菌菌丝片段和孢子被吸入气道后，致少量细胞因子甚至抑制细胞因子产生，不能使足够的炎症细胞向局部趋化，逃避吞噬，长期存活、芽生、释放大量过敏原。     

青石棉诱导A549细胞ERK1/2、MEK1/2的表达

目的:了解细胞内信号传导在石棉致肺部疾患过程中的作用。方法:用Western免疫印迹法检测石棉刺激的A549细胞裂解液中MEK1/2、:ERK1/2的表达。结果:以0.1 g/L浓度的青石棉刺激A549细胞后,ERK1/2、MEK1/2磷酸化蛋白快速高表达,与空白对照比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:磷酸化的信号蛋白可能在石棉致病中起重要作用。     

大肠杆菌脂多糖对皮肤成纤维细胞数量及增殖周期的影响

目的:观察大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,皮肤成纤维细胞数量和增殖周期的变化规律。方法:体外培养正常人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度(0.005~1.0μg/m l)的大肠杆菌LPS(E.coli055:B5),通过细胞计数法连续观察1~9 d细胞数量的变化;于LPS加入后第6天细胞处于对数生长期时,采用流式细胞术观察细胞增殖周期。结果:LPS刺激浓度在0.005~0.1μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高,且呈浓度依赖性;当LPS浓度为0.5μg/m l时,上述作用开始降低,但仍高于对照组;当浓度达到1.0μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例均低于对照组。结论:在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖,而过高浓度LPS则呈现抑制效应。     

蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用

目的 观察蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用及对血液白细胞数目的影响。方法 MTT法检测不同浓度的LX01对肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制率;A549细胞接种BALB/C裸鼠,观察给药后肿瘤的生长情况,高、中、低剂量LX01对荷瘤小鼠的生存时间、瘤重及血液白细胞数目的影响。结果 LX01对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,IC50为56.85mg/L,与阴性对照组比差异有显著性(P<0.01);LX01能剂量依赖性的抑制A549接种瘤的生长;LX01中、高剂量可明显延长A549荷瘤小鼠生存时间,高剂量组荷瘤瘤重明显减轻,与阳性对照药环磷酰胺相似,明显高于阴性对照组(P<0.01);与5-FU治疗组相比,LX01各剂量组对A549荷瘤小鼠血白细胞数目无降低作用。结论 蚌肉提取物LX01能显著抑制肺癌细胞株A549接种BALB/c裸鼠后的生长,且对免疫系统无明显抑制作用。     

miRNA-34c对肺腺癌A549细胞的辐射增敏效应

目的研究肺腺癌A549细胞中miRNA-34e的辐射增敏效应。方法单独转染miRNA．34e序列或单独照射或转染和照射联合处理细胞后,采用MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,藻红B染色法观察细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白的表达。结果转染联合照射处理组的抑制率及凋亡率都较单独转染或单独照射组明显增高（均P〈0．05）,且随miR-34e转染浓度的增加而增高（均P〈0．05）。细胞周期检测结果显示,细胞明显阻滞于G1／G0期（P〈0．05）。联合处理的细胞p53蛋白表达量较单独照射组增加,且呈miRNA．34c浓度依赖性增加（P〈0．05）。结论miRNA-34c对肺腺癌细胞A549有辐射增敏效应,可强化p53蛋白的表达,诱导细胞G1／G0期阻滞和凋亡。     

A549细胞免疫抑制因子及香菇多糖对T细胞增殖的影响

目的;研究Ａ５４９人肺腺癌细胞产生的免疫抑制因子及香菇多糖对Ｔ细胞转化的影响。方法：以ＭＴＴ法测定加Ａ５４９细胞免疫抑制因子及香菇多糖后Ｔ细胞的转化率。结果：Ｔ细胞的转化受该免疫抑制因子抑制,且抑制程度与免疫抑制因子深度优正相关。适当浓度的香菇多糖能有效地损坏抗此抑制。结论：Ａ５４９细胞产生的免疫抑制因子可抑制Ｔ细胞转化,香菇多糖能拮抗该抑制。     

JNK通路对周期性机械牵拉刺激人肺泡上皮A549细胞ICAM-1表达的影响

目的 探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在周期性机械牵拉刺激人肺泡上皮A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)中的作用.方法 建立离体A549细胞机械牵拉刺激模型:以大小为1 000 μstrain的牵拉力刺激细胞,机械牵拉刺激前(0 min)和机械牵拉刺激后5、15、30、60 min时间点进行观察.选用JNK特异性阻断剂SP600125,实验分空白对照组(0 min),机械牵拉5、15、30、60 min组,阻断剂预处理组,阻断剂预处理+机械牵拉5、15、30、60 min组,共10组,每组3皿细胞.采用Western blot检测细胞内JNK、磷酸化JNK、ICAM-1蛋白的表达变化.采用RT-PCR检测ICAM-1的mRNA表达变化.结果 与空白对照组比较,A549细胞经单纯机械牵拉刺激后,磷酸化JNK蛋白水平增加,以30 min时间点最为明显(P＜0.05);随着机械牵拉刺激时间的延长,在60 min时间点磷酸化JNK蛋白水平下降至约基线水平,与基线水平差异无统计学意义(P＞0.05).单纯机械力作用后,ICAM-1蛋白及其mRNA水平在60 min时间点有较明显增加(P＜0.05).阻断剂SP600125预处理后再经机械刺激磷酸化JNK蛋白的表达水平升高不明显(P＞0.05),同时ICAM-1蛋白及mRNA水平在60 min时间点增加亦不明显(P＞0.05).结论 机械牵拉刺激通过激活A549细胞JNK蛋白信号通路,从而引起细胞ICAM-1的表达变化,提示JNK信号通路有可能参与了A549细胞的机械力信号转导过程.     

复方菝葜颗粒诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的通过中药血清药理学方法，观察复方菝葜颗粒（compound rhizoma smilacinus granule，CRSG）对非小细胞肺癌（NSCLC）A549凋亡的影响，探讨CRSG抑制非小细胞肺癌的作用机理。方法雄性SD大鼠30只，随机分为两组，每组15只。一组灌服复方菝葜颗粒，2次／d，另一组灌服等剂量的蒸馏水，第6次灌胃后的2h提取血清。A549细胞株随机分为中药实验组、西药对照组、正常对照组，分别加入10％的含药血清、顺铂3μg／mL（DDP）、10％的SD大鼠血清，培养48h后收集细胞，电镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果各组细胞培养48h后中药实验组、西药对照组细胞数与正常对照组比较明显减少，差异均有显著性（P＜0．01）；电镜下中药实验组、西药对照组均可见到凋亡小体，正常对照组细胞形态正常；中药实验组、西药对照组细胞凋亡率明显高于正常对照组，相比差异有显著性（P＜0．01），中药实验组与西药对照组的凋亡率差异无显著性（P＞0．05）。结论复方菝葜颗粒具有减慢细胞增殖速度，并诱导A549细胞凋亡的作用，这可能是其对非小细胞肺癌发挥抑瘤作用的机制之一。     

酵母菌多聚糖对呼吸道上皮细胞系A549的作用

目的　探讨酵母菌多聚糖(zymosan)对气道上皮细胞系A549作用以及气道上皮细胞参与呼吸道疾病的可能机制。方法　通过培养获得持续传代的A549细胞,并将A549细胞与相应刺激物共培养 24或 48h后,收获培养悬浮液,检测其中白细胞介素(IL 6)和IL 8水平。结果　A549细胞可以自发释放IL 6和IL 8;A549细胞接受酵母菌多聚糖刺激后释放的IL 6和IL 8显著性增多,并且随刺激物剂量增加而增加。刺激时间延长也可增加IL 6和IL 8的表达。在接受同样酵母菌多聚糖刺激后TNF α预刺激的A549细胞释放的IL 6(P<0 001)和IL 8较未预刺激的A549细胞显著性增多。结论　在接受酵母菌多聚糖刺激时,呼吸道上皮细胞可能通过激活IL 6和IL 8信号通路释放IL 6和IL 8,从而参与气道疾病的发生。