血小板源生长因子和脂多糖对吸烟大鼠小气道平滑肌细胞凋亡的影响

采用免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法 (ＴＵＮＥＬ)来观察血小板源生长因子 (ＰＤＧＦ)和脂多糖 (ＬＰＳ)对体外培养的吸烟大鼠小气道平滑肌细胞Ｂｃｌ 2、Ｂａｘ和凋亡的影响 ,以探讨其对小气道平滑肌细胞凋亡的调节作用。材料与方法　 (1)主要试剂 :小鼠抗大鼠Ｂｃｌ 2单克隆抗体 ,小鼠抗大鼠Ｂａｘ单克隆抗体 (美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司 ) ,ＴＵＮＥＬ试剂盒 (德国宝灵曼公司 ) ,ＰＤＧＦ(Ｄｒ ＭａｒｓｈａＡ惠赠 ) ,ＬＰＳ(美国Ｓｉｇｍａ公司 ) ,免疫组织化学染色试剂盒和ＤＡＢ显色试剂盒…     

多肽生长因子在大鼠哮喘模型中的表达及地塞米松的影响

近年来的一些研究提示 ,多肽生长因子亦可能在哮喘气道重塑中起重要作用 ,为此我们观察血小板衍生生长因子(ＰＤＧＦ Ｂ)、转化生长因子 (ＴＧＦ β1)在大鼠哮喘模型的表达变化及地塞米松对ＰＤＧＦ Ｂ、ＴＧＦ β1表达的影响。材料与方法　选健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 4只 ,雌雄不拘 ,体重15 0～ 180ｇ ,随机分成三组 :正常组、哮喘模型组、地塞米松干预组 ,每组 8只 ,哮喘模型的制备见参考文献 [1],常规留取肺组织备做免疫组化和逆转录多聚酶链式反应 (ＲＴ ＰＣＲ)。免疫组化ＳＡＢＣ染色 :按武汉博士德公司ＳＡＢＣ免疫组化试剂盒说明操作…     

槲皮素对肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达及大鼠低氧性肺动脉高压的影响

肺血管构型重建是慢性缺氧性肺动脉高压的病理学基础,主要表现为中膜平滑肌细胞增殖及迁移,而平滑肌细胞的增殖依赖于多种生长因子的作用,尤其是血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）。我们通过酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）抑制剂槲皮素（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）来观察ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）酪氨酸磷酸化蛋白的表达及其对大鼠低氧性肺动脉高压的影响。材料与方法　（１）材料：ＰＤＧＦＢＢ,Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ,抗磷酸化酪氨酸（均购自美国Ｓｉｇｍａ公司）,ＡＳＭ６８Ｋ图象分析仪（德国Ｌｅｉｔｅ公司）;流式细胞仪…     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏血小板衍化生长因子-B与肿瘤坏死因子-αmRNA表达影响

我们应用ＲＴ ＰＣＲ技术观察了单肾切除糖尿病大鼠肾皮质血小板衍化生长因子 Ｂ(ＰＤＧＦ Ｂ)、肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)及Ⅳ型胶原的ｍＲＮＡ表达 ,并同时观察了血管紧张素Ⅱ 1型受体 (ＡＴ1)拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏ＰＤＧＦ Ｂ、ＴＮＦ α及Ⅳ型胶原的ｍＲＮＡ表达影响 ,以期为临床应用提供理论依据。　　一、材料与方法　　 1.动物分组 :2 0 0 1年 4～ 7月 ,选择 60只健康雄性成年ＳＤ大鼠 (二级动物 ,体重 180～ 2 2 0ｇ ,由温州医学院实验动物中心提供 )在氯胺酮 (0 1ｇ/ｋｇ)腹腔注射麻醉下接受右侧肾切除术。术后死亡 2 …     

甘氨脱氧胆酸激活大鼠肝细胞磷脂酶A2和对血清磷脂酶蛋白及mRNA水平的表达

实验证实甘氨脱氧胆酸（ｇｌｙｃｏｄｅｏｘ－ｙｃｈｏｌｌｃａｃｉｄ,ＧＤＣ）≥２５０μｍｏｌ／Ｌ可导致大鼠肝细胞坏死,细胞膜流动性降低［１］。磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２,ＰＬＡ２）过量释放和／或激活在多系统器官衰竭的发展中起着关键作用。用ＧＤＣ处理原代培养大鼠肝细胞,以探讨ＧＤＣ对ｓＰＬＡ２酶活性的激活,酶蛋白和基因表达的影响。一、材料与方法１．主要试剂：ｓＰＬＡ２单克隆抗体由美国Ｌｉｓａ．Ａ．Ｍ教授惠赠。ＲＮＡ提取试剂购自德国宝灵曼公司。ｍａｒｋｅｒ：ｐＢＲ３２２ＤＮＡ／ＢＳｔＮ…     

醛脱氢酶基因转移介导的环磷酰胺耐受性研究

醛脱氢酶基因 (ＡＬＤＨ1)能氧化环磷酰胺 (ＣＴＸ)的中间代谢产物醛磷酰胺 ,形成无毒的羧基磷酰胺 ,发挥对ＣＴＸ的解毒作用。我们利用逆转录病毒介导ＡＬＤＨ1转染人造血细胞系Ｋ5 6 2 ,体外实验观察ＡＬＤＨ1基因转移过表达与ＣＴＸ耐受程度间的关系。一、材料和方法1.主要试剂 :Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ转染试剂购自ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司 ;4 氢过氧化ＣＴＸ(4 ＨＣ)由美国Ｄｕｋｅ大学癌症研究中心ＳｕｓａｎＬｕｄｅｍａｎ博士惠赠 ;Ｇ4 18、总ＲＮＡ试剂ＴＲＩｚｏｌ、Ｍ ＭＬＶ逆转录酶为ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ…     

本刊常用缩略语(四)

ＰＡＲＳ　ｐｏｌｙ(ＡＤＰ ｒｉｂｏｓｅ)ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ　聚ＡＤＰ核醣合成酶ＰＣＤ　ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ　程序化细胞死亡ＰＣＲ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ　聚合酶链反应ＰＤＧＦ　ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ　血小板衍化生长因子ＰＥＣＡＭ 1　ｐｌａｔｅｌｅｔｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅ ｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ 1　血小板内皮细胞粘附分子 1ＰＥＴ　ｐｏｓｉｔｒｏｎｅｍｉｓｓｉｏｎｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ　正电子发射体层摄影ＰＦ…     

Na~ /H~ 交换器-1与肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡

本实验探讨Ｎａ /Ｈ 交换器 (ＮＨＥ 1)在缺氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用 ,并观察ＮＨＥ 1特异性抑制剂对经诱导细胞内酸化后的肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响。材料与方法　试剂 :ＢＣＥＣＦ ＡＭ ,Ｎｉｇｅｒｉｃｉｎ ,二甲基氨氯吡咪 (ＤＭＡ) (美国Ｓｉｇｍａ公司 ) ,Ｍ ＭｕＬＶ反转录酶 (美国Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司 ) ,原位细胞凋亡检测试剂盒 (ＴＵＮＥＬ法 ) (德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司 )。方法 :(1)常压缺氧大鼠肺动脉高压模型 :参照薛全福等[1] 方法。雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 0只 ,随机平…     

胃癌细胞株蛙皮素受体的检测

目的 观察胃癌细胞株ＳＧＣ ７９０１细胞蛙皮素受体ｍＲＮＡ和受体蛋白的表达。方法 （１）利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ观察胃癌细胞株ＳＧＣ ７９０１细胞蛙皮素受体ｍＲＮＡ的表达；（２）利用交联剂（ＤＳＳ）化学交联增强化学发光（ＥＣＬ）自显影观察胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１细胞株受体蛋白的表达。结果 （１）ＲＴ－ＰＣＲ产物经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交与预期的蛙皮素受体ｃＤＮ     

日本血吸虫中国大陆株重组脂肪酸结合蛋白(sj-FABPc)的特性和抗原表位的分析

目的 了解重组的日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（ｒＳｊ－ＦＡＢＰｃ）的特性及预测其抗原表位。方法 以ＰＣＲ方法从Ｓｊ－ｃＤＮＡ文库中扩增Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ基因片段,并亚克隆于载体ｐＧＥＭ－Ｔ,对其核苷酸序列进行测定。以ＧＯＬＤＫＥＹ软件和Ｓｗｉｓｓ－Ｍｏｄｅｌ数据库分析Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ的核苷酸序列和其编码的蛋白质特性,预测重组抗原的表位。结果 核酸序列分析证明,克隆基因确为Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ,并由     

人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定

差异显示技术可用于研究多种组织中ｍＲＮＡ的表达差异。荧光差异显示技术 (ＦＤＤ)是在放射性差异显示技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法 ,我们使用此方法用来筛选与胃癌分化过程中相关表达的基因。材料与方法一、细胞系人胃腺癌ＭＫＮ 2 8(高分化 )细胞 ,ＭＫＮ 45 (低分化 )细胞 ,购自日本ＲｉｋｅｎＣｅｌｌＢａｎｋ (ＲＣＢ) ,ＲＰＭＩ 16 40 ,10 %ＦＢＳ常规培养。二、ＲＮＡ提取ＭＫＮ 2 8和ＭＫＮ 45细胞按常规培养至对数生长期 ,待细胞融合约 6 0 %～ 70 %时 ,用Ｔｒｉｚｏｌ试剂 (ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司 )处理 ,…     

SHR血管平滑肌PDGF—A链,TGFβ1及其受体mRNA表达的研究

目的：在自发型高血压和正常血压的Ｖｉｓｔａｒ－ｋｙｏｔｏ大鼠血管壁平滑肌细胞（ＳＨＲ－ＶＳＭＣ和ＷＫＹ－ＶＳＭＣ）,比较几种内源性生长因子及它们受体的表达水平,从ＶＳＭＣ自分泌和旁分泌产生骨源性生长因子的角度,阐述ＳＨＲ－ＶＳＭＣ和ＷＫＹ－ＶＳＭＣ的差异。方法：以定量ＲＴ－ＰＣＲ技术,在二株系ＶＳＭＣ,检测长型ＰＤＧＦ－Ａ ,ＴＧＦβ１及它的受体ｍＲＮＡ的表达水平。结果：（１）在ＳＨＲ－ＶＳＭＣ,     

支气管哮喘患者粒—基噬细胞集落刺激因子mRNA表达的研究

目的 探讨利用无创伤性方法寻找较为特异性地反映哮喘患气道炎症的客观指标。方法 通过研究哮喘患气道粘膜细胞粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ｍＲＮＡ表达,并以此为参照,分析哮喘患诱导痰细胞ＧＭ－ＣＳＦ ｍＲＮＡ变化,利用免疫组化结合逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,分析哮喘组（１０例）气道粘膜细胞ＧＭ－ＣＳＦ ｍＲＮＡ的表达;用３％高渗盐水诱导痰液,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分析哮喘组（     

EGG AS A PHYSIOLOGICAL MARKER OF MOTIONSICKNESSINASIANANDNON＿ASIANSUBJECTS．

ＥＧＧＡＳＡＰＨＹＳＩＯＬＯＧＩＣＡＬＭＡＲＫＥＲＯＦＭＯＴＩＯＮＳＩＣＫＮＥＳＳＩＮＡＳＩＡＮＡＮＤＮＯＮ＿ＡＳＩＡＮＳＵＢＪＥＣＴＳ．ＲｏｂｅｒｔＭ．Ｓｔｅｒｎ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｓｙｃｈｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａＳｔａｔ...     

钙离子信号与肥大细胞RBL～2H3活化

细胞内钙离子浓度 ([Ｃａ2 ]ｉ)的改变是细胞激活非常重要的第二信使途径 ,肥大细胞在受到抗原刺激后 ,可迅速释放组胺等介质。但在其活化过程中 ,钙离子信号是如何改变的 ?我们通过流式细胞仪 (ＦＡＣＳ)和激光共聚焦荧光显微镜分析 ,观察了大鼠肥大细胞系ＲＢＬ 2Ｈ3受抗原活化时钙离子信号的变化。一、材料与方法1 培养板购自Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ公司 ,抗二硝基苯酚 (ＤＮＰ)ＩｇＥ和乙二胺四乙酸 (ＥＤＴＡ)购自Ｓｉｇｍａ公司 ,ＤＮＰ 牛血清白蛋白 (ＢＳＡ )、Ａ2 3187、Ｆｌｕｏ 3/ＡＭ和抗磷酸酪氨酸单抗(Ｍａｂ ＰＴｙｒ…     

细胞色素P-450 4F新基因分离与序列分析

已发现人类细胞色素Ｐ４５０氧化酶４Ｆ的两个基因。现报道从人类肝脏中分离出的新基因。１．材料与方法：应用ＰＣＲ从Ｃｌｏｎ－ｔｅｃｈ公司的ＭａｒａｔｈｏｎＲｅａｄｙｃＤＮＡ中分离出人胎肝一个ｃＤＮＡ克隆，用ＡＢＩ３７７型测序仪对ｃＤＮＡ进行双方向测序。从已知序列中合成一对特异引物，以成人肝组织总ＲＮＡ为模板行逆转录ＰＣＲ，同时用该引物对成人肝脏。ＤＮＡ文库进行筛选。将ｃＤＮＡ重组于ＥＳＰ酵母表达载体中。在ＥＭＭ酵母培养液中合成ＧＳＴ溶合蛋白，纯化后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶电泳、染色。２．结果：ｃＤＮＡ全…     

NORMAL AND DISTURBED MOTILITY OF GALLBLADDERANDSPHINCTEROFODDI．

ＮＯＲＭＡＬＡＮＤＤＩＳＴＵＲＢＥＤＭＯＴＩＬＩＴＹＯＦＧＡＬＬＢＬＡＤＤＥＲＡＮＤＳＰＨＩＮＣＴＥＲＯＦＯＤＤＩ．Ａ．Ｊ．Ｐ．Ｍ．Ｓｍｏｕｔ，Ｇ．Ｐ．ｖａｎＢｅｒｇｅ＿Ｈｅｎｅｇｏｕｗｅｎ，ａｎｄＭ．Ｓａｍｓｏｍ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒ...     

辛伐他汀对大鼠肾间质成纤维细胞的影响

目的：研究３－羟基－３－甲基戊二酰辅酶Ａ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）还原酶抑制剂（辛伐他汀）对大鼠肾间质成纤维细胞（ＲＦＢ）增生，细胞周期及细胞间信号传导的影响。方法：应用ＭＴＴ比色法、流式细胞仪、半定量ＲＴ－ＰＣＲ等技术，分别检测不同浓度辛伐他汀对体外培养的ＲＦＢ的增生、细胞周期以及细胞信号传导中ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达的影响。结果：辛伐他汀可抑制ＲＦＢ的增生活性（Ａ值），尤以无血清组显著，各浓度加药组Ａ组与正常对照组比较差异显著（Ｐ〈０．０５）；各浓度加药组Ｇ０／Ｇ１期细胞比增高，Ｓ期细胞比、ＰＩ值和ＤＮＡ含量则逐渐下降，Ｇ２／Ｍ期细胞比变化不明显；各浓度加药组ＲＦＢ ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ的表达逐渐下降，并呈一定的剂量依赖性，与正常对照组比较差异显著（Ｐ〈０．０５）。结论：辛伐他汀可抑制细胞增生，阻止ＲＦＢ由ＧＩ期进     

辛伐他汀对大鼠肝贮脂细胞血小板衍生生长因子效应的影响

血小板衍生生长因子 (ＰＤＧＦ)在肝贮脂细胞 (ＦＳＣ)激活和增殖中起重要作用[1] 。研究显示 ,3 羟基 3 甲基戊二烯辅酶Ａ(ＨＭＧ ＣｏＡ)还原酶抑制剂能抑制多种细胞增殖 ,阻断生长因子对细胞的促进作用[2 ] 。因此 ,我们选用一种脂溶性ＨＭＧ ＣｏＡ还原酶抑制剂辛伐他汀 ,观察其对ＰＤＧＦ诱导培养大鼠肝ＦＳＣ增殖、胶原合成和细胞内Ｃａ2 + 变化的影响。一、材料和方法1.药物和试剂 :辛伐他汀 (默沙东公司 ) ;链酶蛋白酶Ｎｙｃｏｄｅｎｚ、甲羟戊酸 (ＭＶＡ)、碘化丙啶 (ＰＩ)、ＰＤＧＦ ＢＢ和Ｆｕ ｒａ 2 /ＡＭ (Ｓｉｇｍａ公司 ) …     

日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达,纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达，纯化，鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ，抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ其片段长度均为６５４ｂ