川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭黏附能力的影响

目的观察不同浓度川芎嗪干预后乳腺癌细胞侵袭、黏附能力的改变及MMP-2/MMP-9的表达。方法用细胞黏附实验,检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力的抑制作用;用Transwell小室检测不同浓度川芎嗪干预后MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的改变;用半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞MMP-2/MMP-9 mRNA表达的抑制作用。结果川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力有明显抑制作用,对MDA-MB-231细胞的MMP-2 mRNA的表达有明显抑制作用;但对MMP-9mRNA的表达无明显影响。结论川芎嗪能显著抑制MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭能力,其抑制效应与药物的浓度呈正相关。川芎嗪可能通过下调MDA-MB-231细胞MMP-2mRNA的表达而抑制细胞的黏附、侵袭能力。     

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测5F对HO8910PM细胞粘附能力的影响;用Transwell小室法检测5F对HO8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响;Westernblot法检测5F对HO8910PM细胞NFκB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。结果50μmol·L-1的5F作用细胞6h后能抑制HO8910PM细胞体外侵袭人工基底膜、趋化运动和粘附能力,抑制率分别为(37.57±0.62)%,(28.42±0.67)%,(46.07±4.49)%;5F能明显下调HO8910PM细胞中NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达。结论5F能抑制高转移卵巢癌细胞HO8910PM的侵袭、运动和粘附能力。5F抗肿瘤侵袭转移的作用机制与NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达下调有关。     

没食子酸乙酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其机制

研究狼毒大戟中没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,并对其作用机制进行探讨。采用细胞与Matrigel黏附实验,Transwell小室检测EG对人乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附、侵袭和运动能力的影响。RT-PCR检测EG对MMP-2、MMP-9的m RNA表达的影响;Western blot法检测EG对Akt-NF-κB信号转导通路蛋白表达的变化。结果显示,EG在体外可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭、运动以及黏附能力(P<0.05)。EG可抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平,抑制Akt-NF-κB信号转导通路中的Akt磷酸化和NF-κB蛋白表达。因此认为EG在体外具有一定的抑制乳腺癌细胞侵袭迁移的作用,其机制与抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平、抑制Akt磷酸化过程和NF-κB蛋白表达有关。     

下调 HOX转录反义 RNA对三阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响

目的 研究下调HOX转录反义RNA(HOTAIR)水平对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响.方法 si-HOTAIR对MDA-MB-231细胞转染,实验分为对照组、si-阴性对照组、si-HOTAIR组,实时荧光定量法测定转染后MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平;分别用MTT法、流式细胞仪、Transwell小室实验测定转染后MDA-MB-231细胞活性、周期、侵袭能力;蛋白印迹法(WB)测定转染后MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平.结果 与MCF-10A细胞组相比,对照组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平升高[(1.85±0.21)比(1.06±0.13),P<0.05].与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平(1.34±0.15)、细胞活性(98.04±6.28)％、侵袭能力(35.66±8.04)降低(P<0.05),细胞G0/G1期下调,阻滞在G2/M期;与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、MMP-9、MMP-2表达水平降低(P<0.05).结论 HOTAIR在MDA-MB-231细胞中高表达,下调HOTAIR表达水平可抑制MDA-MB-231细胞增殖、阻滞细胞周期、降低肿瘤细胞侵袭能力.     

多硫代二酮哌嗪类化合物1004体外对MDA-MB-231细胞转移能力的影响及机制研究

摘要：目的 检测多硫代二酮哌嗪类化合物1004体外对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞转移能力的影响,并初步研究其作用机制。方法 利用磺酰罗丹明染色法（SRB）检测1004作用于MDA-MB-231细胞24和72 h的细胞毒活性;细胞粘附实验检测1004对MDA-MB-231细胞外基质粘附的影响;划痕实验和Transwell侵袭实验,分别检测1004对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响;明胶酶谱法检测1004对MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶MMP9活性的影响;Western Blot检测1004对MDA-MB-231细胞N-cadherin、Snail、c-Myc和FGFR1的蛋白表达的影响,检测AKT和ERK表达和活化水平。结果 1004作用于MDA-MB-231细胞72 h的IC50为（6.28±1.25）μmol?L-1,而1004作用于MDA-MB-231细胞24 h的IC50超过100 μmol?L-1。1004作用于MDA-MB-231细胞可增加细胞粘附,并抑制细胞的迁移和侵袭。1004可以显著降低N-cadherin、c-Myc 及Snail 的表达水平,并抑制MMP9 的活性。1004 作用于MDA-MB-231细胞可以浓度依赖性地引起FGFR1的表达下调,并抑制下游ERK和AKT 的活化。结论 1004体外对MDA-MB-231细胞具有转移抑制活性,其机制可能与下调FGFR1的蛋白水平并抑制FGFR信号通路有关。     

延龄草总皂苷抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的作用及机制研究

目的观察延龄草总皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移的影响及相关机制。方法培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入延龄草总皂苷(1.5、3 mg·L~(-1))24 h后,采用细胞侵袭实验、划痕实验观察延龄草总皂苷对MDA-MB-231细胞侵袭与迁移的影响,以Western blot方法检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果延龄草总皂苷能够有效地抑制MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移,降低MMP-2与MMP-9的蛋白表达并呈现浓度依赖性。结论延龄草总皂苷能够有效地抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移,其可能机制与降低MMP-2、MMP-9的表达水平有关。     

Gab2通过PI3K/Akt/ARK5/MMP途径影响乳腺癌的侵袭和转移

目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的相关性,分析浸润性导管癌中Gab2、MMP-2及MMP-9蛋白表达的相关性。采用Western blot检测乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中Gab2蛋白的表达情况。采用RNAi技术将小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,应用Western blot检测转染成功后各组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况,应用Transwell体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭性,用EGF刺激细胞后Western blot检测Akt及ARK5的磷酸化情况。结果浸润性导管癌组织中Gab2蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),浸润性导管癌中Gab2蛋白的表达与ER、组织学分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),且其表达与MMP-2及MMP-9蛋白的表达呈正相关;MDA-MB-231细胞系中Gab2蛋白表达量高于MCF-7细胞系中表达量;转染干扰质粒24 h后,与转染空载细胞组相比,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功。同时,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组穿过Transwell小室人工基膜数量明显减少(P<0.05),并伴有MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。用EGF刺激各组细胞,结果显示:在SiG ab2/MDAMB-231细胞组Akt及ARK5的磷酸化明显受到抑制。结论Gab2通过PI3K/Akt/ARK5信号通路影响MMP-2、MMP-9的表达从而促进乳腺癌的侵袭与转移。     

低分子量肝素联合吉西他滨对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨低分子量肝素(low molecular weight hepa-rin,LMWH)对吉西他滨(gemcitabine,GEM)抗肿瘤作用的影响及其作用机制。方法实验分为对照组、LMWH组、GEM组、LMWH与GEM联合应用组。MTT法测定药物对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞增殖的影响;细胞划痕实验、Tr-answell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达;ELISA法检测乳腺癌细胞培养液中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的表达。结果 LMWH对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞的增殖没有明显影响,亦不能增强GEM的增殖抑制作用。30×104IU·L-1LMWH与2.5 mg·L-1GEM联合作用于MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞24 h的迁移抑制率分别为66.3%、76.5%,较单用GEM的迁移抑制率(MDA-MB-231细胞47.4%,MDA-MB-435细胞52.9%)明显提高。同时LMWH与GEM合用对乳腺癌细胞侵袭的抑制也明显高于GEM单用时的作用。GEM可下调MMP-9和HPA的表达,与LMWH合用时下调更加明显。结论 LM-WH具有增强GEM抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关。     

右旋柠烯对人乳腺癌细胞微丝结构及体外侵袭能力的影响

目的探讨右旋柠烯对乳腺癌细胞微丝骨架机构及体外侵袭行为的影响和Fascin-1相关机制。方法不同剂量右旋柠烯作用于乳腺癌细胞MDA-MB-435,激光共聚焦技术获得F-actin细胞骨架形态morphology改变;利用Transwell小室,以Matrigel和纤维粘连蛋白构建重组基底膜,检测右旋柠烯对乳腺癌侵袭人工基底膜能力的影响;应用Western Blot法检测乳腺癌细胞Fascin-1蛋白表达。结果右旋柠烯作用后乳腺癌细胞间排列较规则,细胞基底少见长而密的微刺结构;微丝结构改变的同时对基底膜的侵袭能力下降。Western Blot结果显示,Fascin-1蛋白表达明显下调(分别为2.9±0.3、12.4±0.7和19.3±0.7),与对照组(28.6±0.5)比较差异显著(P<0.05)。结论右旋柠烯通过下调Fascin-1蛋白表达,调控乳腺癌细胞微丝结构,进而抑制体外侵袭能力。     

丙泊酚下调miR-93-5p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚对miR-93-5p以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的影响。方法:培养对数期MDA-MB-231细胞,进行细胞毒性试验,筛选最佳丙泊酚处理浓度与时间,实验分为空白对照组（0.1%DMSO培养基）、阳性对照组(30μmol·L-1环磷酰胺)、丙泊酚1,2,5 mg·L-1浓度组。CCK8法检测细胞增殖,细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移侵袭情况,免疫印迹法（Western Blot）检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）、侵袭迁移相关蛋白金属机制蛋白酶2（MMP-2）、金属机制蛋白酶2（MMP-9）蛋白表达情况,定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测细胞miR-93-5p表达情况。结果:与空白对照组相比,阳性对照组与丙泊酚各浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率、迁移抑制率显著升高,裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达显著降低（P<0.05）。与阳性对照组相比,1 mg·L-1和2 mg·L-1丙泊酚组MDA-MB-231细胞裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达依次升高,增殖抑制率、迁移抑制率依次降低（P<0.05）。结论:丙泊酚可能通过下调miR-93-5p表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力发挥抗肿瘤作用。     

吉西他滨联合西妥昔单抗对三阴乳腺癌细胞转移相关基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性的影响

目的：探讨吉西他滨联合西妥昔单抗对三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响，并对可能的机制进行初步的探究。方法：将实验分为西妥昔单抗组（150 μg · mL^-1）、吉西他滨联合用药组（西妥昔单抗150 μg · mL^-1，吉西他滨2.8 μg·mL^-1）。通过MTT、Transwell实验检测联合用药对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响，Western blotting实验检测合用药对MDA-MB-231细胞MMP-9、TIMP-1、p-IkB、NF-kB-p65表达水平的影响。结果：吉西他滨联合西妥昔单抗作用MDA-MB-231细胞后，其生长被不同程度的抑制，抑制率随吉西他滨浓度的增加而增高（P<0.05）；联合用药组MDA-MB-231细胞迁移、侵袭数目明显减少（P<0.05），同时MMP-9、p-IkB、NF-kB-p65的表达含量降低，TIMP-1表达含量增加。结论：吉西他滨联合西妥昔单抗对三阴乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移具有抑制作用，并明显抑制MMP-9的表达，其机制可能是通过抑制NF-kB通路实现。     

Inhibitory effect of aloe-emodin on metastasis potential in HO-8910PM cell line

Aloe-emodin (AE) has been demonstrated to have antitumor activity in several tumor cells. However, no information is available on the effect of AE on metastasis in human carcinoma cells. This study was designed to investigate the inhibitory effect of AE on the metastasis potential of HO-8910PM cell line in vitro, and the role of AE in focal adhesion kinase (FAK) expression. Transwell chamber assay was performed to determine the effect of AE on the invasion and migration capacities of the cells. The effect of AE on the adhesion potential of HO-8910PM cells was determined by cell-Matrigel adhesion assay. We found that AE significantly inhibited invasion, migration, and adhesion capacities of HO-8910PM cells, and, furthermore, reduced the protein and mRNA expression of FAK. These findings suggest that the possible mechanistic explanation for the inhibitory effect of AE on metastasis potential in vitro is involved in FAK expression.     

Ophiopogonin D suppresses TGF-β1-mediated metastatic behavior of MDA-MB-231 breast carcinoma cells via regulating ITGB1/FAK/Src/AKT/β-catenin/MMP-9 signaling axis

Ophiopogonin D, a steroidal glycoside extracted from the Traditional Chinese Medicine Ophiopogon japonicus, shows anti-tumor property in several lines of cancers; however, its effect on triple-negative breast cancer (TNBC) has not been investigated. In this study, the anti-metastatic effect of Ophiopogonin D in TNBC cells as well as the underlying mechanism in such process was explored. Ophiopogonin D dose-dependently decreased cell proliferation of MDA-MB-231 cells. Meanwhile, Ophiopogonin D significantly inhibited TGF-β1-induced metastatic behavior of MDA-MB-231 cells, including EMT, anoikis resistance as well as migration and invasion, via suppressing MMP-9 activity. Mechanically, Ophiopogonin D achieved its effect through efficiently abolishing ITGB1 expression, thus reducing the phosphorylation of FAK, Src and AKT, as well as upregulating nuclear β-catenin. ITGB1 overexpression partly recovered Ophiopogonin D's inhibitory effect on metastatic behavior via activating MMP-9. These results demonstrated that Ophiopogonin D could suppress TGF-β1-mediated metastatic behavior of MDA-MB-231 cells by regulating ITGB1/FAK/Src/AKT/β-catenin/MMP-9 signaling axis, which might provide new insight for the control of TNBC metastasis.     

Inhibition of EGF/EGFR activation with naphtho[1,2-b]furan-4,5-dione blocks migration and invasion of MDA-MB-231 cells

Naphtho[1,2-b]furan-4,5-dione (NFD), a bioactive component of Avicennia marina, has been demonstrated to display anti-cancer activity. Activation of epidermal growth factor receptor (EGFR)-induced signaling pathway has been correlated with cancer metastasis in various tumors, including breast carcinoma. We use EGF as a metastatic inducer of MDA-MB-231 cells to investigate the effect of NFD on cell migration and invasion. NFD suppressed EGF-mediated protein levels of c-Jun and c-Fos, and reduced MMP-9 expression and activity, concomitantly with a marked inhibition on cell migration and invasion without obvious cellular cytotoxicity. NFD abrogated EGF-induced phosphorylation of EGF receptor (EGFR) and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt. The specific PI3K inhibitor, wortmannin, blocked significantly EGF-induced cell migration and invasion. Furthermore, the EGFR inhibitor AG1478 inhibited EGF-induced MMP-9 expression, cell migration and invasion, as well as the activation of PI3K/Akt, suggesting that PI3K/Akt activation occur downstream of EGFR activation. These findings suggest that NFD inhibited the EGF-induced invasion and migration of MDA-MB-231 cells via EGFR-dependent PI3K/Akt signaling, leading to the down-regulation of MMP-9 expression. These results provide a novel mechanism to explain the role of NFD as a potent anti-metastatic agent in MDA-MB-231 cells.     

三七总皂苷调控巨噬细胞对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移影响

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)通过调控巨噬细胞对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移的影响。方法:培养MDA-MB-231和Raw264.7细胞,给予不同浓度PNS,采用MTT与流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)分别检测不同浓度PNS对MDA-MB-231与巨噬细胞Raw264.7增殖与凋亡的影响;划痕实验检测不同浓度PNS处理的Raw264.7细胞的条件培养基对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的影响;Transwell实验检测不同浓度PNS与巨噬细胞共同作用对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭的影响;ELISA与流式细胞术检测不同浓度PNS对巨噬细胞相关细胞因子分泌及蛋白表达的影响。结果:PNS可以剂量依赖性地抑制MDA-MB-231与Raw264.7细胞的增殖,高浓度PNS溶液可以显著增加细胞凋亡;低浓度(20,50μg·mL^-1)PNS巨噬细胞条件培养基可以抑制MDA-MB-231的迁移;低浓度(20,50μg·mL^-1)PNS与巨噬细胞共培养可以明显抑制MD...     

亚低温促进大鼠颅脑创伤后海马新生 神经元长期存活及成熟

目的 探讨亚低温（MHT）对大鼠颅脑创伤（TBI）后海马齿状回区（DG）新生神经元长期存活及成熟的影 响。方法 59只健康成年SD大鼠随机分为假手术（sham）组、TBI组及TBI+MHT组,sham组15只,其余两组各22只。 TBI大鼠模型借助液压冲击脑损伤仪建立,打击压力设置为2.0 atm（1 atm=101.325 kPa）。TBI+MHT组大鼠在损伤后 立即接受MHT,降温后直肠目标温度为33.5 ℃,维持4 h,并于1.5 h内缓慢复温至37 ℃。在不同时间点应用Morris水 迷宫试验,mNSS评分比较大鼠神经功能恢复情况,免疫荧光染色等方法检测各组海马新生神经元长期存活及成熟 情况。结果 与TBI组比较,TBI+MHT组大鼠伤后4周的逃避潜伏期明显缩短,平台穿越次数及目标象限停留时间 均显著增加（P＜0.05）。损伤后1、2、4周TBI+MHT组大鼠较TBI组mNSS评分均降低（P＜0.01）。与sham组比较,损 伤后1、4、8周TBI组和TBI+MHT组大鼠损伤侧海马DG区BrdU阳性细胞数及BrdU/NeuN双阳性细胞数均增加（P＜ 0.05）,且TBI+MHT组较TBI组增加更明显（P＜0.05）。此外,与损伤后1周相比,损伤后4周及8周TBI组BrdU/NeuN 双阳性细胞数减少,而TBI+MHT组进一步增加（P＜0.05）。结论 MHT可促进TBI后新生神经元的长期存活及成 熟,促进TBI后神经功能恢复。