三叶青调节Th17/Treg平衡抗类风湿性关节炎的作用及机制研究

目的:探讨三叶青治疗类风湿性关节炎的可能机制。方法:采用大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备类风湿性关节炎模型大鼠,灌胃给予不同剂量三叶青提取物连续3周。检测大鼠关节肿胀度、关节炎指数、关节热度、抓力;ELISA检测血浆中白介素(IL)-6、IL-17、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及类风湿因子(RF)水平;全自动血液流变仪检测血液流变学指标;流式细胞术测定全血中辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)比例;HE染色观察踝关节组织形态学;Western blot法检测关节滑膜组织中IL-6、RORγt、Foxp3、STAT3及p-STAT3蛋白表达。结果:三叶青能有效降低类风湿性关节炎模型大鼠关节肿胀度、关节炎指数及关节热度,升高抓力;降低Th17/Treg比例及血浆IL-6、IL-17、TNF-α、RF水平,升高IL-10水平;下调关节滑膜组织中IL-6、STAT3、p-STAT3、RORγt蛋白表达,上调Foxp3蛋白表达,改善踝关节组织形态学改变。结论:三叶青具有明显的抗类风湿性关节炎作用,其机制可能与调控IL-6/STAT3/IL-17轴调节Th17/T...     

慢性阻塞性肺病稳定期患者外周血Th17/Treg失衡情况及与预后的关系

目的：观察慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）稳定期患者外周血中Th17与Treg细胞的水平.方法：选取本院2010年1月-2012年12月间确诊的40例COPD稳定期患者,选取同期40例健康体检健康人群作为对照组,收集两组人群的外周血后采用流式细胞术检测各个人群Th17与Treg细胞亚群的比例,采用ELISA法检测血清中的IL-17、TGF-β水平,采用RT-PCR检测转录因子RORγT与Foxp3 mRNA水平.结果：COPD稳定期患者外周血中Th17比例为（3.14±0.31）％,显著高于对照组人群的（1.23±0.24）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;COPD稳定期患者外周血中Treg比例为（6.27±0.32）％,显著高于对照组人群的（3.43±0.32）％,差异有统计学意义（P＜0.01）;COPD稳定期患者外周血中IL-17水平为（89.36±4.13） pg/mL,显著高于对照组的（30.35±2.53） pg/mL,差异有统计学意义（P＜0.05）;COPD稳定期患者外周血中TGF-β水平为（681.45±41.65） pg/mL,显著高于对照组人群的（519.36±30.43） pg/mL,差异有统计学意义（P＜0.01）;COPD稳定期患者外周血转录因子Foxp3与RORγT mRNA水平均显著高于对照组人群,差异有统计学意义（均P＜0.01）.COPD稳定期患者Th17、Treg比例高水平的住院天数和病死率均高于对应低水平亚组（P＜0.05）.结论：Th17、Treg细胞及IL-17、TGF-β水平在COPD稳定期患者外周血表达增加,且转录因子Foxp3与RORγT mRNA水平表达增加,提示其与COPD患者的预后有关,其外周血中Th17与Treg细胞的不平衡可能参与了COPD发病和病程的进展.     

银甲片通过纠正外周血Th17/Treg平衡改善慢性输卵管炎大鼠不孕

目的 探讨银甲片是否通过纠正外周血Th17/Treg平衡改善慢性输卵管炎大鼠不孕。方法 100只雌性Wistar大鼠,其中82只构建慢性输卵管炎大鼠模型,造模成功后,取80只随机分为模型组、左旋氧氟沙星组(20 mg·kg^-1)、银甲片低剂量组(0.38 g·kg^-1·d^-1)、银甲片中剂量组(0.76 g·kg^-1·d^-1)、银甲片高剂量组(1.52 g·kg^-1·d^-1),每组16只,另取16只设为空白对照组。治疗组分别按不同剂量灌胃给药,模型组与空白对照组灌服等量生理盐水(20 mL·kg^-1·d^-1),每日1次,灌胃7 d后停药1 d,7 d为1个周期,共灌胃3个周期。给药结束后,观察大鼠受孕情况,采集血样和输卵管组织。采用HE染色观察输卵管组织病理变化;透射电镜观察输卵管组织超微结构变化;ELISA检测血清中TNF-α、IL-6含量;流式细胞术检测外周血Treg、Th17细胞比例;RT-qPCR和Western blotting检测输卵管组织IL-17、IL-10、Foxp3、RORγt mRNA及蛋白表达。结果 与空白对照组相比,模型组大鼠输卵管纤毛、微绒毛稀疏,线粒体肿胀;且TNF-α、IL-6含量、Th17细胞比例及输卵管组织IL-17、RORγt mRNA和蛋白表达明显升高,大鼠受孕率、IL-10、Treg细胞比例及Foxp3 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,银甲片高剂量组改善大鼠输卵管结构;明显降低模型大鼠TNF-α、IL-6含量、Th17细胞比例及输卵管组织IL-17、RORγt mRNA和蛋白表达;明显升高大鼠受孕率及IL-10、Treg细胞比例和Foxp3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论 银甲片可有效地调节Th17/Treg平衡,进而调节Treg和Th17细胞介导的炎性反应,提高慢性输卵管模型大鼠受孕率。     

外源性LTB4对CIA小鼠Treg/Th17脾细胞分化的作用

目的探讨外源性白三烯B4(LTB4)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠脾细胞调节性T细胞(Treg)和Th17细胞分化的调节,进一步阐明LTB4在类风湿关节炎(RA)发病中的作用机制。方法建立CIA小鼠模型,取造模d28的脾细胞,体外实验分析外源性LTB4对Treg和Th17细胞分化的影响。应用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+细胞的数量,荧光定量PCR技术检测调控Treg和Th17细胞分化的特异性转录因子Foxp3和RORγt的mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测培养细胞上清IL-17的含量。结果成功建立CIA小鼠模型;造模d28分离小鼠脾细胞,体外培养加入鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)共同孵育,随着LTB4浓度增加(0.01、0.1、1μmol·L-1),CD4+CD25+Foxp3+细胞数量相应减少,Foxp3 mRNA的表达相应降低;相反,IL-17的含量相应增加,RORγt mRNA的表达相应升高。结论LTB4抑制CIA模型脾细胞Treg细胞的分化,促进Th17细胞的分化,提示LTB4在CIA发病过程中具有一定的促炎活性。     

Tet调控Th17/Treg细胞分化参与自身免疫性疾病发病的研究进展

CD4⁺ T细胞是人体免疫重要的一部分,其中辅助性T细胞17（T helper cell 17,Th17）和调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）两个新近发现的CD4⁺ T细胞亚群在自身免疫疾病的发生发展中也起关键作用。Th17细胞能够引起自身免疫和炎性反应,而Treg细胞抑制疾病发生并维持免疫稳态;10～11易位蛋白（ten-eleven translocation,Tet）作为DNA去甲基化的关键因子,当其缺失时能够影响Th17/Treg免疫平衡。本文针对Tet调控Th17/Treg细胞分化参与自身免疫疾病发生发展的研究进展作一综述。     

桑色素抑制Th17/Treg失衡改善小鼠胶原关节炎

本研究主要考察桑科植物活性成分桑色素对小鼠胶原关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)的影响,并从恢复免疫平衡的角度初步展开机制探讨。以胶原为诱导剂建立小鼠CIA模型,灌胃给予桑色素,测定关节炎指数(arthritis index, AI)评分,考察足趾、踝关节影像学和组织病理学变化情况,测定血清中炎症因子、炎性介质和IgG类抗体水平。此外,测定淋巴结/脾脏中辅助性T细胞17 (T helper 17, Th17)和调节性T细胞(regulatory T, Treg)比例及其转录和功能相关因子水平及血清中白细胞介素-17A (interleukin-17A, IL-17A)和IL-10水平。结果显示,桑色素经由灌胃给药可显著降低关节炎小鼠AI评分,改善足趾关节肿胀和骨损伤,降低组织病理学评分,下调血清中炎症因子[肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、IL-6和IL-1β]、炎性介质[前列腺素E₂(prostaglandin E₂,PGE₂)、基...     

黄芩苷对大鼠胶原诱导性关节炎JAK/STAT3信号通路及Th17/Treg免疫平衡的影响

摘要：目的:探讨黄芩苷对大鼠胶原诱导性关节炎（CIA） Janus激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子3（STAT3）信号通路及Th17/Treg免疫平衡的影响。方法:SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性对照组(甲氨蝶呤,1 mg·kg-1)、黄芩苷低(50 mg·kg-1)、中(100 mg·kg-1)、高(200 mg·kg-1)剂量组,每组12只。除正常对照组外,其余各组建立CIA大鼠模型。各给药组腹腔注射给药,正常对照组和模型组给予等量生理盐水。对大鼠进行关节炎症评分,检测各组大鼠关节肿胀度;采用HE染色检测大鼠关节病理变化;流式细胞技术检测大鼠脾脏Th17、Treg亚群比例;酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子-β（TGF-β）水平;免疫印记法检测大鼠关节滑膜组织JAK/STAT3通路相关蛋白JAK、p-JAK、STAT3、p-STAT3的表达。结果:与模型组相比,黄芩苷组和阳性对照组大鼠关节上述病理损伤症状减轻,关节肿胀度、炎症评分、脾脏Th17亚群比例及Thl7/Treg比值、血清TNF-α、IL-6及IL-17水平、关节滑膜组织p-JAK/JAK及p-STAT3/STAT3显著降低（P<0. 05）,脾脏Treg亚群比例、血清TGF-β水平显著升高（P<0. 05）,且黄芩苷组呈剂量依赖性（P<0. 05）。黄芩苷高剂量组与阳性对照组相比差异无统计学意义（P>0. 05）。结论:黄芩苷可调控CIA大鼠Th17/Treg免疫平衡,使其向Treg偏移,改善大鼠关节炎症状,抑制JAK/STAT3信号激活。     

滋肾通络方对胶原性关节炎小鼠Th17/Treg细胞分化及平衡的影响

目的观察滋肾通络方(ZTF)对胶原性关节炎(CIA)小鼠Th17/Treg细胞分化平衡的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法 DBA/1小鼠随机分为正常对照组、模型组和ZTF组(8.4 g生药·kg~(-1)),造模21 d后每日灌胃给药,连续4周。检测关节炎指数、关节病理改变、血浆IL-10和IL-17水平、外周血和脾脏Th17/Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10、IL-17 mRNA水平。结果 CIA小鼠踝关节病变明显,血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达明显升高;血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA表达明显降低。ZTF能明显减轻CIA小鼠关节病变,降低血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达;升高血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA水平。结论 CIA小鼠存在Th17/Treg细胞失平衡,ZTF可调节Th17/Treg细胞比例,重构Th17/Treg细胞平衡,调节相关细胞因子释放,这可能是ZTF治疗类风湿关节炎的机制之一。     

Regulatory effect of daphnetin, a coumarin extracted from Daphne odora, on the balance of Treg and Th17 in collagen-induced arthritis

Daphnetin extracted from Daphne odora Var. marginata contains coumarin compounds, which possess properties of analgesic and anti-inflammatory effects. In this study, we investigated the therapeutic effect of daphnetin on anti-arthritis and its role on the balance of Tregs and Th17, using a collagen-induced arthritis rat model. Collagen-induced arthritis rats were treated with daphnetin for 21 days. The therapeutic effects of daphnetin were evaluated by clinical symptoms and histopathology. The levels of Th17-, Treg-, Th2-, Th1-type cytokines in serum were determined by ELISA. The expression levels of related receptors RORγt, NF-κB, Foxp3 and CD77 in joint tissues were detected by immunohistochemistry. Our results showed that administration of daphnetin significantly alleviated the severity of the arthritis, as evidenced by the reduction of arthritis scores, suppression of the infiltration of inflammatory cells and prevention of synovial hyperplasia, thereby resulting in the joint destruction in the arthritis rats. Additionally, daphnetin treatment reduced the serum level of Th17-, Th2- and Th1-type in collagen-induced arthritis rats. Correspondingly, the expression of RORγt, NF-κB and CD77 in joint tissue of collagen-induced arthritis rats was remarkably decreased, while the expression of Foxp3 and IL-10 was remarkably increased after being administered with daphnetin. Collectively, this study demonstrated that administration of daphnetin attenuated the clinical symptoms and pathological destruction of arthritis joints. The therapeutic effects were associated with the up-regulation of Tregs, down-regulation of Th17-, Th2- and Th1-type cell responses. The results provide novel evidence that daphnetin has therapeutic effects on autoimmune arthritis through modulating the balance of Tregs and Th17.     

青蒿治疗难治性类风湿关节炎患者的疗效及对TH17/Treg细胞因子的影响

目的：探讨青蒿治疗难治性类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者的疗效及是否可纠正Th17/Treg失衡及对细胞因子的影响。方法：病例来源于某院风湿免疫科,64例难治性RA患者纳入,17例难治性RA患者继续应用MTX为对照组,23例难治性RA患者应用青蒿为青蒿治疗组,24例难治性RA患者应用TNFi拮抗剂+MTX为阳性对照组。予观察3组第0,4,8,12周疗效,ELISA法检测患者血清细胞因子水平IL-10、IL-17和TNF-α表达情况;多参数流式细胞术检测各组患者外周血Treg和Th17细胞表达水平。结果：（1）青蒿治疗组和阳性对照组第8周起疗效比MTX对照组对比有统计学意义;阳性对照组第4周起比青蒿治疗组效果有统计学意义;（2）青蒿治疗组和阳性对照组患者第8周血清IL-10浓度显著高于MTX组;青蒿治疗组和阳性对照组患者血清IL-17浓度显著低于MTX组。此外,青蒿治疗组和阳性对照组患者TNF-α、ESR和CRP浓度显著低于MTX组;（3）流式细胞仪检测示青蒿治疗组和阳性对照组患者Treg细胞百分比显著高于MTX组;青蒿治疗组和阳性对照组患者血清Th17细胞百分比显著低于MTX组。结论：青蒿治疗难治性类风湿关节炎患者效果明显优于MTX,但效果较TNFi拮抗剂+MTX差,其抑制炎性因子的机制可能通过纠正RA患者的TH17/Treg失衡达到治疗目的。     

青蒿素对变应性接触性皮炎小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

目的探讨青蒿素(Art)在变应性接触性皮炎(ACD)中对Th17和Treg的影响及机制。方法以DNFB致敏和激发制作小鼠ACD模型,局部外涂Art进行干预,采用RT-PCR和ELISA检测Treg/Th17细胞特异性核因子及相关细胞因子的表达与含量,流式细胞术检测Treg细胞数量,West-ern blot方法检测信号转导子和转录激活子STAT3的磷酸化活性表达。结果与正常组相比,模型组IL-6、IL-17含量、ROR-γt及STAT3的活性表达明显升高,同时Foxp3表达降低。Art明显降低ROR-γt表达、下调IL-6及IL-17水平,同时增加Foxp3表达并促进Treg产生,减弱STAT3的磷酸化活性。结论 Art可能通过调节Treg/Th17免疫平衡,对DN-FB诱导的ACD小鼠发挥免疫治疗作用。     

Th17/Treg及其相关细胞因子在阿霉素肾病大鼠血清及肾组织中的表达水平及意义

目的 探讨阿霉素(ADM)肾病大鼠Th17相关的IL-17和Treg相关的IL-10表达水平及意义.方法 采用一次性尾静脉注射阿霉素的方法制备大鼠ADM模型,对照组注射等量的生理盐水,ADM组20只大鼠在造模后尿蛋白均达到50mg/24 h以上,表明造模成功,采用流式细胞术检测外周血中Th17细胞和Treg细胞数量及比例;ELISA法检测各组血清和肾组织中Th17相关的IL-17和Treg相关IL-10水平.结果 ADM模型组大鼠在第14天出现蛋白尿,随着时间的推移,蛋白尿的量持续升高,在第56天达到峰值,各时间点(14,28,42,56 d) ADM组大鼠的蛋白尿水平明显高于同时间的对照组(P＜0.001);ADM组和对照组Th17细胞百分率分别为(3.13±0.09)％、(0.88±0.05)％,ADM组较对照组明显升高(P＜0.001);ADM组和对照组Treg细胞百分率分别为(1.94±0.15)％、(5.02±0.15)％,ADM组明显低于对照组(P＜0.001);ADM组Th17/Treg细胞比例较对照组高(P＜0.001),ADM组大鼠(14,28,42,56 d)的血清及肾组织IL-17表达水平明显高于对照组(P＜0.001);IL-10表达水平明显低于对照组(P＜0.001).结论 Th17/Treg为主的免疫失衡在ADM发病中起重要作用,可通过抑制或中和内源性IL-17的表达和提升Treg的表达纠正失衡的Th17/Treg,此方法可能成为儿童原发性肾病(PNS)治疗的新途径之一.     

LncRNA XLOC_003810 modulates thymic Th17/Treg balance in myasthenia gravis with thymoma

Imbalance of T helper 17 (Th17)/regulatory T (Treg) cells is involved in the pathogenesis of myasthenia gravis with thymoma (MG-T). Long non-coding RNAs (lncRNAs) are implicated in the regulation of Th17/Treg balance. This study was designed to explore the role of XLOC_003810, a novel lncRNA, in regulating the Th17/Treg balance in MG-T. The thymic CD4⁺ T cells were isolated from control subjects and MG-T patients. The Th17/Treg balance was evaluated by determining proportions of Th17 and Treg cells and expression of Th17- and Treg- associated molecules. Lentivirus-mediated silencing and overexpression of XLOC_003810 in CD4⁺ T cells were performed. The results showed that XLOC_003810 expression was higher in MG-T thymic CD4⁺ T cells than that in the control group. Furthermore, the ratio of Th17/Treg cells, proportion of Th17 cells and levels of Th17-associated molecules were significantly increased, whereas the proportion of Treg cells and levels of Treg-associated molecules were decreased in MG-T thymic CD4⁺ T cells. Importantly, the Th17/Treg imbalance in MG-T thymic CD4⁺ T cells was aggravated by XLOC_003810 overexpression, whereas it was attenuated by XLOC_003810 silencing. Collectively, XLOC_003810 modulates thymic Th17/Treg balance in MG-T patients, providing the scientific basis for the clinical targeted therapy of MG-T.     

他克莫司对白癜风小鼠Th17/Treg细胞平衡及黑素细胞丢失的影响

目的 探究他克莫司对白癜风小鼠辅助性T17（Th17）/调节性T （Treg）细胞平衡和黑素细胞丢失的影响。方法 将小鼠随机分为对照组、模型组和他克莫司低、中、高剂量组（涂抹10、50、100 mg 0.03%他克莫司软膏）,使用松香/蜡混合物对小鼠背部相同位置进行去毛,大小为2 cm×2 cm,将其分为两部分：用药区域与非用药区域,面积1：1。除对照组外,于小鼠背部用药区均匀涂抹50 mg 40%莫诺苯宗软膏,每天1次,连续90 d,制备白癜风模型。莫诺苯宗涂抹30 d后开始于相同位置涂抹他克莫司软膏,2种药膏涂抹时间间隔7 h,他克莫司软膏每天早晚各涂抹1次,连续用药60 d。肉眼观察小鼠皮毛脱色情况并进行脱色评分,通过反射式共聚焦显微镜（RCM）观察小鼠皮肤黑素细胞和黑色素的分布,取小鼠皮损进行苏木精-伊红染色（HE）和马松染色（MF）对基底层黑素细胞和含黑色素的毛囊进行计数,通过流式细胞术测定小鼠外周血中Th17和Treg淋巴细胞的比例,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血白细胞介素-17（IL-17）、IL-22和叉头型基因p3（Foxp3）的含量。结果 与对照组比较,白癜风模型组小鼠用药区皮毛明显脱色,脱色评分显著升高（P<0.05）,皮损处色素明显缺失;含黑色素的毛囊和黑素细胞显著减少（P<0.05）;Th17/Treg淋巴细胞比例显著升高（P<0.05）;血清IL-17、IL-22水平显著上升,Foxp3水平显著降低（P<0.05）。与模型组比较,他克莫司各组小鼠皮毛脱色情况明显改善,脱色评分显著降低（P<0.05）,皮损处可见色素分布及黑素细胞;含黑色素的毛囊和黑素细胞显著增多（P<0.05）;Th17/Treg淋巴细胞比例显著降低（P<0.05）;IL-17、IL-22水平显著降低,Foxp3水平显著升高（均P<0.05）。结论 他克莫司可调控白癜风小鼠Th17/Treg淋巴细胞平衡,抑制其黑素细胞丢失。     

甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎对Th17细胞甲基化的影响及其机制

目的： 探讨甲氨蝶呤片（MTX）治疗类风湿关节炎（RA）对Th17细胞DNA甲基化的影响及其机制。方法： 将2018年3月至2019年3月在某院住院治疗的67例使用MTX口服治疗的RA患者作为观察对象。采集患者治疗前后静脉血检测红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、血小板计数（PLT）及白细胞介素-17（IL-17），分离外周血单个核细胞（PBMC）测定Th17细胞比例，分析PBMC中维甲酸相关孤核受体-γt（ROR-γt）、DNA甲基转移酶1（DNMT1）、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA表达水平，并检测ROR-γt基因甲基化程度，分别对患者Th17细胞比例与ESR、CRP、PLT及IL-17水平和ROR-γt基因甲基化程度与IL-17水平进行相关性分析。结果： 患者治疗前Th17细胞DNA甲基化程度低，ESR快，CRP及PLT水平高，Th17细胞比例及IL-17水平高，DNMT1基因mRNA表达水平低，ROR-γt基因mRNA表达水平高，ROR-γt基因甲基化比例低；治疗后ESR、CRP及PLT水平显著降低（P<0.05），Th17细胞比例及IL-17水平显著降低（P<0.001），DNMT1基因mRNA表达水平显著升高（P<0.001），ROR-γt基因mRNA表达水平显著降低（P<0.001），ROR-γt基因甲基化比例显著增加（P<0.05）；Th17细胞比例与IL-17水平呈正相关，ROR-γt基因甲基化程度与IL-17水平呈负相关（P<0.05）。结论： 甲氨蝶呤可通过提高类风湿关节炎患者Th17细胞ROR-γt基因甲基化程度抑制体内IL-17分泌改善和延缓疾病进程，同时此过程有DNMT1酶参与。