反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌基因表达的影响

目的探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响.方法用PCR-ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性.用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达.结果该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性,此作用有序列特异性和浓度依赖性.40μM反义寡核苷酸抑制了喉癌细胞PCNA的表达,而对P53表达无明显影响.结论靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达.     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌细胞表达的影响

目的 探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响。方法 用PCR－ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性，用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达。结果 该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特性性和浓度依赖性。40μM反义核苷酸抑制了喉癌细胞PC－NA的表达，而对P53表达无明显影响。结论 靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达。     

降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌

目的：用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法：将端粒酶反义RNA真核表达载体，pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中，采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性，用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，并用电镜观察细胞生长状况。结果：端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论：以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。     

反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的作用

目的：探讨反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对胆囊癌细胞生长增殖的作用。方法：设计针对端粒酶RNA亚基模板序列并经硫代磷酸修饰的反义、正义和随机序列寡核苷酸，并以正常人成纤维细胞作对照，观察其对人胆囊癌细胞(GBC-SD)端粒酶活性和细胞生长增殖的影响以及对正常人成纤维细胞的作用。结果：反义寡核苷酸可有效地抑制GBC-SD的端粒酶活性，呈剂量依赖性，并明显地抑制GBC-SD的生长，对正常人成纤维细胞生长无明显作用。结论：硫代反义寡核苷酸对胆囊癌端粒酶活性有明显的抑制作用。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：检测针对端粒酶的反义寡核苷酸(AS-ODN)对鼻咽癌HNE-1细胞株增殖的影响。方法：用PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性。采用MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。结果：鼻咽癌细胞株HNE-1与5μmol/L，20μmol/L反义寡核苷酸共同孵1d，对其细胞内端粒酶活性抑制率分别为32.9％、61.6％。而同浓度正义寡核苷酸(S-ODN)对细胞端粒酶活性无抑制作用。5μmol/L、20μmol/L反义寡核苷酸与HNE-1细胞共同孵育2d，对细胞增殖的抑制率分别为34.4％，72.9％，同浓度正义寡核苷酸的抑制率为14.4％、15.6％。20μmol/L反义寡核苷酸和20μmol/L正义寡核苷酸对细胞克隆形成能力的抑制率分别为78.39％、23.37％。结论：该反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特异性和浓度依赖性。该反义寡核苷酸明显抑制了鼻咽癌细胞HNE-1的增殖，此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性。     

反义寡核苷酸抑制整合素αv亚基表达对喉癌细胞侵袭和增殖的影响

目的应用反义寡核苷酸体外细胞转染技术抑制喉癌细胞整合素αv(integrin αv,ITGAV)表达,探讨ITGAV表达抑制对喉鳞癌Hep-2细胞侵袭和增殖能力的影响。方法设计合成特异性靶向整合素αv的反义寡核苷酸序列(antisense oligonucleotides sequence,ASONs),用阳离子脂质体包被并转染喉鳞癌Hep-2细胞,免疫荧光技术检测转染前后整合素αv亚基的蛋白表达,MTT法检测转染后Hep-2细胞的增殖情况,Boyden小室法检测转染前后喉癌细胞的侵袭能力。结果靶向整合素αv的ASONs对喉鳞癌细胞株的侵袭和增殖能力具有明显的抑制作用,并具有剂量-时间依从性。结论靶向整合素αv的ASONs能够抑制喉鳞癌细胞株生长,并使其侵袭能力减弱,整合素αv可能成为喉鳞癌基因治疗的新靶点。     

hTERT反义寡核苷酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨hTERT反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用脂质体介导反义寡核苷酸转染MCF-7乳腺癌细胞株,采用TRAP-ELISA法检测转染后细胞端粒酶的活性,观察其前后的变化。MTT法检测细胞活性,流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰,细胞阻滞于S期,正义寡核苷酸则无此作用。结论端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

端粒酶的义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒粒酶反义寡核苷酸对肺癌细胞端粒酶活性的抑制作用.方法脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸转染A549肺腺癌细胞株,采用TRAP-PCR-ELIsA法半定量检测转染后肺腺癌细胞端粒酶活性,观察它们的变化结果端粒酶反义寡核苷酸转染A549细胞72h后,A549细胞端粒酶活性明显下调.结论端粒酶反义寡核苷酸可以有效抑制肺腺癌细胞端粒酶活性.     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞生长的影响

目的检测针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞株生长的影响。方法用PCR—ELISA法检测细胞内端粒酶活性。采用MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。采用电镜观察细胞超微结构的改变。结果端粒酶RNA反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶。结论端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌HNE-1细胞的生长。     

端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响。方法利用脂质体将端粒酶反义寡核苷酸导入SGC7901胃癌细胞。TRAP—ELISA法检测端粒酶活性，噻唑蓝（MTT）法测定端粒酶反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901的抑制；过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测癌细胞凋亡指数。结果经端粒酶反义寡核苷酸处理的胃癌细胞端粒酶活性显著下降，端粒酶反义寡核苷酸明显抑制胃癌细胞的生长和诱导胃癌细胞的凋亡，端粒酶反义寡核苷酸联合顺铂，能增强对胃癌细胞生长的抑制和诱导胃癌细胞的凋亡。结论端粒酶反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞生长，与顺铂协同作用，效果更为明显。     

RNAi靶向人端粒酶逆转录酶对人肝癌细胞的生长抑制作用

目的 利用RNAi技术降低人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,抑制其活性,研究其对人肝癌细胞的增殖和凋亡影响.方法 构建针对hTERT基因的siRNA真核表达载体pLXSN-EGFP-U6-siTERT,制备靶向hTERT的重组逆转录病毒;用重组逆转录病毒感染HepG2人肝癌细胞,以TRAP法检测端粒酶活性变化;流式细胞仅检测细胞凋亡率;MTT法检测肿瘤细胞生长抑制情况.结果 成功制备出hTERT siRNA逆转录病毒表达载体;重组病毒感染HepG2细胞24、48、72 h后端粒酶活性分别下降了23.84%、58.03%和85.01%(P＜0.05);感染后24 h细胞凋亡率29.05%;MTT实验结果显示肿瘤生长受到抑制,并存在一定量效和时效关系.结论 hTERT siRNA能特异性使hTERT基因表达抑制,端粒酶活性下降,肝癌细胞增殖受到抑制.     

短发夹RNA对头颈肿瘤细胞端粒酶活性和增殖的影响

目的:观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的短发夹RNA(shRNA)对喉癌Hep-2细胞株和鼻咽癌NEC细胞株端粒酶活性和生长增殖影响,探讨抑制端粒酶活性途径治疗头颈肿瘤的可行性。方法:根据hTERT cDNA序列构建表达shRNA、含荧光素基因、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒shRNA1和表达shR-NA的、含荧光素基因的、靶向非人类基因的真核表达质粒shRNA2。分别以质粒shRNA1、shRNA2、转染试剂及空白培养液处理体外培养的Hep-2细胞和NEC细胞。转染48 h后以TRAP PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性并行HE染色;倒置显微镜下每天观察细胞形态;MTT法检测细胞增殖活性。结果:①Hep-2细胞和NEC细胞shRNA1处理48 h后与空白对照组比较端粒酶活性下降,P<0.05。②HE染色发现shRNA1处理后Hep-2和NEC细胞胞体缩小、核固缩,同等培养条件下,细胞生长密度变稀,见许多圆形死亡细胞。③与相应时间点空白对照组细胞平均吸光度(A)值比较,shRNA1处理组Hep-2细胞和NEC细胞24,48,72 h A值均减小,P<0.05。结论:靶向hTERT mRNA的小干扰RNA能够显著降低Hep-2细胞和NEC细胞的端粒酶活性,抑制癌细胞生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

针对c-myc mRNA两个不同位点的c-myc反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增殖的比较

目的:研究针对c-myc mRNA不同位点的两种反义寡脱氧核苷酸序列(AS-ODN):myc-AUG AS-ODN,myc-CRD AS-ODN,对类风湿滑膜细胞增殖的抑制作用.方法:培养人类风湿滑膜B型细胞,合成反义寡脱氧核苷酸序列并进行硫代磷酸化修饰,以脂质体Lipofectin为载体,转染滑膜细胞,用MTT法检测细胞的增殖情况.结果:myc-AUG AS-ODN,myc-CRD AS-ODN均能抑制滑膜细胞增殖,使细胞数目减少的最大值分别为40.0%和41.4%.myc-AUG AS-ODN抑制滑膜细胞增殖的起效时间早于myc-CRD AS-ODN.在高浓度时寡脱氧核苷酸具有非序列特异性细胞毒作用.结论:两种AS-ODN序列均可用于抑制滑膜细胞增殖.     

苯丁酸钠对喉癌Hep-2细胞株的体外诱导分化作用

目的:探讨诱导分化剂苯丁酸钠(sodiumphenylbutyrate,PB)在体外对喉癌Hep-2细胞株的生长和分化的影响。方法:应用细胞生长曲线测定法、软琼脂克隆形成试验、细胞形态观察、划痕试验、MTT法、流式细胞术等对在体外经不同浓度PB处理过的Hep-2细胞进行检测,观察细胞分化程度及运动能力的改变。结果:PB在一定浓度范围内能明显抑制Hep-2细胞的生长,作用3d的半数抑制浓度(IC50)为5.32mmol/L,与剂量和时间呈依赖性关系;PB能诱导Hep-2细胞分化,使其克隆形成能力减弱,细胞运动能力下降,细胞突起增长,G1→S期阻滞。结论:PB可以诱导喉癌Hep-2细胞分化,并使细胞的运动能力下降,为其分化治疗喉癌提供了实验依据。     

维生素D衍生物EB1089对人喉癌细胞Hep-2细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨EB1089对人喉癌细胞Hep-2凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,1,10,100nmol／L）EB1089处理24,48,96h对Hep-2细胞的抑制率;TUNEL检测细胞凋亡;分光光度法检测Caspase-3活性．结果：EB1089在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制Hep-2细胞的生长（P〈0．05）,对Hep-2细胞的抑制率为2．6％-70．0％;10,100nmol／LEB1089处理细胞48h,可诱导Hep-2细胞发生凋亡,其凋亡指数分别为22．8±1．6和53．8±3．6,与对照组相比有统计学差异（P〈0．05）;EB1089处理细胞12,24,48,96h后Caspase-3的活性增加,与对照组相比分别增加了2．09,2．72,4．91,5．23倍（P〈0．05）;用Caspase-3活性抑制剂可部分缓解EB1089诱导的Hep-2细胞凋亡．结论：EB1089可能通过诱导Caspase-3活性增加的方式抑制Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

靛玉红对喉癌Hep-2细胞侵袭能力的影响及机制

目的探讨靛玉红甲肟（Indirubin-3＇-monoxime,IRO）对人喉癌Hep-2细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对Hep-2细胞增殖活性的影响。Boyden chamber实验计算各组穿膜的细胞数以比较靛玉红甲肟对细胞侵袭能力的变化。明胶酶谱检测不同浓度靛玉红甲肟处理喉癌Hep-2细胞后细胞MMP-9和MMP-2活性的变化。结果 MTT结果发现IRO对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性（P〈0.01）。Boydenchamber体外迁移和侵袭实验结果显示：靛玉红甲肟可以显著抑制人喉癌Hep-2细胞的侵袭能力（P〈0.05）。明胶酶谱检测发现以靛玉红甲肟处理24h后人喉癌Hep-2细胞MMP-9和MMP-2活性明显降低,不同浓度组间存在显著性差异。结论靛玉红甲肟具有抑制人喉癌Hep-2细胞株增殖和侵袭的作用,其作用机制与显著抑制MMP-9和MMP-2活性有关。     

核酶对肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的:观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine介导,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染肝癌SMMC-7721细胞,采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果:重组质粒pBBS212Rz转染的肝癌SMMC-7721细胞的端粒酶活性明显下降,细胞生长速度明显变慢,凋亡加速。结论:端粒酶核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,可望成为肝癌基因治疗的方法。