不同方法转染人前列腺癌PC-3细胞pEGFP-N1基因的体外实验研究

目的:探讨转染人前列腺癌PC-3细胞pEGFP-N1基因的最佳转染方法。方法:以超声微泡造影剂、超声辐照、脂质体转染及其相互结合的方法,将质粒pEGFP-N1基因转染人前列腺癌PC-3细胞,24h后以荧光显微镜观察前列腺癌PC-3细胞中的绿色荧光蛋白表达情况,并用流式细胞仪测定转染率。结果:以超声+微泡+脂质体组基因转染效率最高,与其他组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:超声联合微泡与脂质体结合能明显提高pEGFP-N1基因在人前列腺癌细胞中的转染率,是一种较理想的基因转染方法。     

雄激素剥夺条件下阻断自噬增加LNCaP细胞凋亡

目的 探讨雄激素剥夺条件下阻断自噬后LNCaP细胞凋亡变化与半胱天冬酶(caspase)激活的关系.方法 应用激光共聚焦显微镜、RT-PCR方法观察雄激素剥夺致细胞自噬增加后,利用DAPI染色观察细胞凋亡变化及药物抑制caspase后对凋亡的影响.结果 ①雄激素去除后LNCaP细胞自噬体增加,标准培养基(CM)培养下LNCaP细胞自噬体数量为1.90分;无血清培养基(SF)中细胞自噬体数量增高为2.64分;加入双氧睾酮(SFA组)后细胞自噬体下降至1.85分(P<0.01).CM中LNCaP细胞LC3 mRNA表达率为23%,血清饥饿12 h后,LC3表达量上调至100%,而SFA组LC3 mRNA表达量为86%;血清饥饿24 h后,SF组LC3 mRNA表达量为62%,SFA组为35%.②SF组和SFA组LNCaP细胞基础凋亡率分别为(3.19±1.09)0A和(3.01±0.33)%,加入3-甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬24 h后,SF组凋亡率为(10.90±2.91)%,SFA组为(4.63±1.69)%.SF+3-MA组中加入Z-VAD-FMK后,细胞凋亡减至(1.16±0.52)%.组间差异有统计学意义(P<0.01).结论 剥夺雄激素后LNCaP细胞中自噬明显增加,阻断自噬后凋亡发生率增加.     

地高辛联合姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3生长的影响

目的 观察地高辛联合姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3生长作用的影响及可能机制.方法 地高辛、姜黄素及两药联合作用PC3细胞,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western Blot法检测PC3细胞中抑制低氧诱导因子-1(hypoxia-induc-ible factor-1α,HIF-1α)、血管生成因子(VEGF)蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,联合用药组显著抑制PC3细胞的增殖(P＜0.05);地高辛、姜黄素联合较单独用药可升高PC3细胞凋亡率(P＜0.05);蛋白印迹法检测提示地高辛组、姜黄素组、联合用药组中HIF-1α、VEGF表达明显下调,联合用药组效果更显著(P＜0.05).结论 地高辛联合姜黄素可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3的增长并诱导其凋亡,并可能与下调HIF-1α、VEGF表达有关.     

低频超声微泡增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬的作用及机制

目的 探讨低频超声微泡增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬的作用及机制。方法 将MDA-MB-468细胞分为对照组(不进行处理)、紫杉醇组(6μg/ml紫杉醇)、低频超声组(低频超声+6μg/ml紫杉醇)和低频超声微泡组(低频超声+6μg/ml紫杉醇+微泡),检测各组MDA-MB-468细胞增殖情况,凋亡情况,自噬情况,Bcl-2、Bax、Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况。结果 与0μg/ml相比,1、3、6、12、24μg/ml紫杉醇处理下MDA-MB-468细胞增殖抑制率均升高(P 0. 05)。与对照组相比,紫杉醇组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,细胞中Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05);与紫杉醇组相比,低频超声组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,细胞中Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05);与低频超声组相比,低频超声微泡组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05)。结论 低频超声微泡可通过上调Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达及下调Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞的凋亡、自噬反应。     

自制纳米级超声微泡造影剂与脂质体基因转染效率的比较

目的 以GFP为目的 基因,比较自制纳米级超声微泡造影剂和脂质体的转染效率,探讨自制纳米级超声微泡造影剂作为基因载体的可行性.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测超声微泡浓度对HepG2的细胞毒性;取安全浓度的超声微泡造影剂和脂质体分别与4、8、16μg的PShut-tle-IRES-hrGFP-1质粒结合后转染HepG2细胞,24 h后利用荧光显微镜和流式细胞术检测并比较两者的GFP转染效率.结果 MTT法显示超声微泡造影剂浓度≤5%时对HepG2细胞生长无明显影响(P＜0.05);超声微泡造影剂能将GFP基因成功转运到HepG2细胞内并高效表达,微泡造影剂+8μg质粒组转染效率达(32.61±3.42)%;脂质体+4 μg质粒组的转染效率为(34.12±8.06)%,两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 自制纳米级超声微泡造影剂能成功转运外源DNA进入细胞内,其转染效率与脂质体无明显差异.     

低强度超声联合载HSV1-TK/GCV自杀基因阳离子微泡对高强度聚焦超声不完全消融后残余肝癌细胞的抑制作用

目的探讨载单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶/更昔洛韦(HSV1-TK/GCV)自杀基因的阳离子微泡联合低强度超声对高强度聚焦超声(HIFU)辐照后残留肝癌SMCC-7721细胞的抑制作用。方法以低功率HIFU辐照肝癌SMCC-7721细胞,选取最佳残存细胞亚系并稳定培养。通过低强度超声辐照载TK基因的阳离子微泡转染细胞。分为对照组(残余癌)、残余癌+超声+TK/GCV组、残余癌+微泡+TK/GCV组及残余癌+微泡+超声+TK/GCV组。以Western Blot法检测TK基因是否成功转入并稳定表达。采用流式细胞仪观察并检测基因转染效率。筛选适宜前药GCV浓度,并检测各组别相同条件下细胞存活率。以流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率。结果HIFU功率为5 W,频率为10.20 MHz,持续辐照40s,可获得残癌稳定模型。前药GCV的最适浓度为100μg/ml。相同条件下残余癌+微泡+超声+TK/GCV组癌细胞存活率最低(P0.05),仅为(43.16±3.18)%,且TK蛋白的表达明显高于其他各组(P均0.05)。结论低强度超声联合载HSV1-TK/GCV自杀基因阳离子微泡对高强度聚焦超声不完全消融肝癌细胞有明显抑制作用。     

微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染防治移植静脉再狭窄

目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性.方法 重组真核表达载体pcDNA3.1-eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导体外转染大鼠颈外静脉,再将静脉段间置植入颈总动脉,建立SD大鼠颈外静脉-颈总动脉移植模型.于术后4周取移植静脉标本分别进行苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学染色及Western blot法分析,观察eNOS基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生.结果 Western blot法分析表明微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染组的移植血管桥内eNOS表达最明显;增殖细胞核抗原( PCNA)检测阳性率为(21.04±3.51)％,细胞凋亡指数为(12.11±1.23)％,新生内膜厚度(25.0±3.5) μm,内膜/中膜比值为0.43,均明显低于其他组(P＜0.05).结论 微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染可以有效抑制移植静脉桥新生内膜的增生.     

特拉唑嗪体外诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨特拉唑嗪诱导前列腺癌细胞株PC 3凋亡的作用。方法 :以不同浓度的特拉唑嗪体外作用于雄激素非依赖性前列腺癌PC 3细胞 ,细胞的生长抑制效应采用MTT检验。细胞凋亡指数采用双免疫荧光染色 (AnnexinV/PI)和流式细胞仪技术 ,凋亡细胞的形态学研究采用AO/EB双染色和激光共聚焦显微镜技术。结果 :经特拉唑嗪作用后的前列腺癌细胞通过诱导凋亡而被抑制了细胞的活性 ,这结果与药物浓度呈正相关 (r=0 .998,P <0 .0 5 )。细胞被阻滞于G0 ～G1期。结论 :特拉唑嗪通过诱导凋亡而抑制前列腺肿瘤的生长 ,具有治疗前列腺癌潜在的功能。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞系HepG-2自噬及其机制研究

目的:测定不同浓度三氧化二砷(As2O3)诱导前后HepG-2细胞自噬水平改变,并初步探讨机制。方法:常规细胞培养,按As2O3不同浓度分组;采用MDC染色,荧光显微镜观察自噬囊泡,流式细胞术检测其荧光强度;RT-PCR检测Bcl-2基因转录,免疫组织化学检测细胞Bcl-2蛋白阳性百分率,并分析同自噬的关系。结果:经不同浓度As2O3作用后,HepG-2细胞生长明显受到抑制;荧光显微镜可观察到自噬囊泡的出现;Bcl-2基因表达降低;经相关性分析,HL-60细胞自噬水平与Bcl-2基因表达呈负相关。结论:As2O3可诱导HepG-2细胞自噬,v诱导HepG-2细胞自噬的机制可能与下调Bcl-2基因表达有关,自噬和凋亡存在交叉。     

端粒酶hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

目的:探讨hTERT基因的两端部分硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)抑制前列腺癌细胞PC3端粒酶活性后,肿瘤坏死因子α(TNF-α)对PC3凋亡的增敏作用。方法:采用端粒重复序列扩增法及TRAP-PCR-ELISA法检测前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用MTT比色试验观察hTERTAS PS-ODN与TNF-α共同作用对前列腺癌细胞PC3生长活力的影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪测定凋亡细胞的百分率。结果:hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制,与正义寡核苷酸组及空白对照组相比差异有显著性(P<0.05)。hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48h,PC3细胞的抑制率与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比有统计学差异(P<0.01)。hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48h,细胞出现典型的凋亡形态变化。hTERT ASPS-ODN作用于PC3细胞后加入4μg/ml TNF-α作用48h,凋亡细胞的百分率分别与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:hTERTAS PS-ODN能降低前列腺癌细胞PC3端粒酶活性;hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌细胞PC3凋亡有增敏作用。     

超声针联合微泡干预尿激酶溶解体外血凝块

目的 观察超声针联合微泡干预尿激酶溶解体外血凝块的效果。方法 以10 ml牛全血制备体外血凝块,将40个血凝块随机分为5组（每组8个）：对单纯超声组以超声针治疗8 min;对单纯尿激酶组注射2 ml尿激酶溶液（5 000 IU/ml）;对超声针+尿激酶组予以超声针治疗8 min+注射2 ml尿激酶溶液;对超声+生理盐水组予超声针治疗8 min+注射2 ml生理盐水;对超声针+尿激酶+微泡组于超声针+尿激酶组基础上向尿激酶溶液中加入0.01 ml自制微泡。以称重法计算各组血凝块溶解质量（W₀）及溶解率;观察大体标本溶解情况,并于扫描电镜下观察血凝块微观变化。另取9个血凝块随机分为3组（每组3个）：对照组,仅注入2 ml细胞膜特异性橙红色荧光染料1,1''-双十八烷基-3,3,3'',3''-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐（DiI）溶液;超声组,超声针治疗8 min,同时注射2 ml DiI溶液;超声+微泡组,在超声组基础上于DiI溶液中额外加入0.01 ml自制微泡。于荧光显微镜下观察DiI渗透情况。结果 干预前各组血凝块质量（W_before）差异无统计学意义（P>0.05）;干预后各组血凝块溶解质量（W₀）及溶解率差异均有统计学意义（P均<0.01）,超声+尿激酶组与超声+尿激酶+微泡组W₀及溶解率均显著高于其余3组（P均<0.05）,但该2组间差异均无统计学意义（P均>0.05）。相比单纯超声组和单纯尿激酶组,超声+尿激酶组和超声+尿激酶+微泡组血凝块明显破坏,后者更为显著。超声组和超声+微泡组血凝块组织疏松,DiI渗透深远,满视野荧光,针道扩大,表面破坏,以超声+微泡组更显著。结论 超声针能显著提高尿激酶对体外血凝块的溶解能力;联合应用微泡后溶解质量未见显著增加。     

载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2肝癌微血管的作用

目的探讨载多西紫杉醇脂质微泡（DLLM）联合超声靶向微泡破裂（UTMD）对兔VX2肝癌微血管的抑制作用。方法建立60只兔VX2肝癌动物模型,将其随机分为6组（n=10）：单纯药物组（Doc组）、单纯载药微泡组（DLLM组）、药物＋超声组（Doc＋US组）、单纯微泡＋超声组（PLM＋US组）、载药微泡＋超声组（DLLM＋US组）及对照组,比较各组动物肿瘤组织的血管密度（MVD）、CD34及VEGF的表达。结果处理后DLLM＋US组的CD34表达水平低于其他各组,MVD明显降低,与其他各组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;DLLM＋US组的VEGF表达水平明显低于其他各组（P〈0.01）。结论 DLLM联合UTMD能抑制兔VX2肝癌的微血管生成,从而抑制兔VX2肝癌的生长。     

超声靶向微泡破裂增强恩度凝胶抑制裸鼠乳腺癌移植瘤血管生成

目的探讨超声靶向微泡破裂对瘤体内注射恩度凝胶抑制裸鼠乳腺癌移植瘤血管生成作用的影响。方法制备载恩度的PLGA-PEG-PLGA温度敏感型凝胶,检测恩度凝胶体外释放及超声辐照对药物释放的影响;建立荷人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,分为模型组、恩度凝胶瘤体内注射组、超声靶向微泡破裂组、恩度凝胶联合超声靶向微泡破裂组,每7天治疗1次,连续3次后行肿瘤CEUS,测定肿瘤组织微血管密度,评价各种处理对肿瘤血管生成的抑制作用。结果恩度凝胶在体外平稳释放约1周,超声辐照可提高恩度凝胶的释放速率;恩度凝胶瘤体内注射联合超声靶向微泡破裂处理具有明显的抑制肿瘤血管生成作用,肿瘤CEUS峰值强度及微血管密度均明显低于模型组及恩度凝胶治疗组(P0.05)。结论超声靶向微泡破裂可阻断荷人乳腺癌裸鼠移植瘤微循环,并有效控制恩度凝胶的药物释放速率,使之释放更多药物作用于血管内皮细胞,具有明显的抑制肿瘤血管生成作用。     

氧葡萄糖血清剥夺/再恢复诱导PC12细胞凋亡模型的建立

目的明确氧葡萄糖血清剥夺/再恢复(oxygen-glucose-serum deprivation/restoration,OGSD/R)诱导PC12细胞凋亡的变化趋势,建立稳定的细胞凋亡模型,为体外模拟脊髓缺血再灌注损伤导致神经细胞凋亡的研究提供实验工具。方法常规培养高分化PC12细胞,取对数生长期的细胞进行实验。以低糖不含血清的DMEM培养基于三气培养瓶(体积分数:95%N_2+5%CO_2,O_21%)培养12 h,然后换成高糖含血清DMEM培养基和普通培养箱继续培养,诱导PC12细胞凋亡。于复氧复糖复血清后0~6 h进行DAPI染色、CCK-8细胞活性检测及流式细胞术分析并检测相关凋亡蛋白caspase-3、caspase-12水平,比较不同时间点细胞凋亡的差异。结果 DAPI染色显示,OGSD 12 h/R 1 h细胞凋亡最重,凋亡细胞核固缩,形成较多颗粒光斑,凋亡严重的细胞破裂形成碎片,核解体。CCK-8活性检测表明在OGSD 12 h/R 1 h细胞活力最低。流式细胞术分析表明OGSD 12 h/R 1 h细胞凋亡率达到最大。凋亡蛋白检测结果提示在正常的PC12细胞中caspase-3、caspase-12含量极低,而在给予OGSD刺激后细胞内caspase-3、caspase-12的表达增强,复氧复糖复血清后2种凋亡蛋白表达进一步增强,caspase-12于OGSD 12 h/R 1 h时表达最强,caspase-3于OGSD 12 h/R 2 h表达最强。结论 OGSD可以诱导PC12细胞凋亡,且在复氧复糖复血清后细胞凋亡进一步加重;OGSD/R诱导PC12细胞凋亡具有时间依赖性,能有效模拟神经细胞缺血再灌注损伤病理生理过程,为脊髓缺血再灌注损伤的进一步研究提供实验模型。     

经导管注射微泡介导的体外超声溶栓实验

目的探讨经导管血栓内注射微泡对体外超声溶栓的增强作用。方法取新鲜人血血栓40份分为4组,每组10份,实验1组:血栓内注射尿激酶和微泡+超声,对照1组:血栓内注射尿激酶和微泡+超声假照;实验2组:经外周循环注射尿激酶和微泡+超声;对照2组:经外周循环注射尿激酶和微泡+超声假照,比较4组的溶栓率。超声频率1.0MHz,声压512kPa。另用超声激励MBDiO释放,观察治疗后血栓内荧光分布与强度。结果实验1组的溶栓率(37.70%±3.17%)显著高于实验2组(11.67%±1.13%)、对照1组(14.37%±2.22%)及对照2组(7.90%±0.68%,P0.05)。血栓内注射微泡后,内可见大片强回声后伴声影,治疗后强回声区在血栓内有扩散。激光共聚焦显微镜观察实验1组治疗后血栓内可见大量明亮荧光信号分布,而实验2组治疗后的血栓内部基本无荧光信号。结论血栓内注射微泡和尿激酶介导的超声溶栓率显著高于经静脉给药方法。     

The effects of modified RNA-binding proteins HuR on the biological behavior of the bladder cancer T24 cell line

BackgroundIn tumors, the role of human antigen R (HuR) includes regulating tumor cell proliferation, differentiation, apoptosis, angiogenesis, and lymphangiogenesis. Previous studies have revealed that the expression of HuR can be detected in bladder cancer, and is related to the biological behavior of malignancy.MethodsT24 cells were transfected by HuR overexpression and HuR knockdown vectors, and divided into the control group, the overexpression-HuR group, and the cas9-HuR group. Cell viability was detected after 48 h by methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay, apoptosis was detected by Annexin V-allophycocyanin (APC)/7-aminoactinomycin D (7-AAD) double staining, cell migration was detected by Transwell assays, and the expression levels of HuR, cyclin D1, and apoptosis-related factors [i.e., B-cell lymphoma 2 (Bcl-2)] were detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR) and Western blot.ResultsCompared to the control group, cell viability after 48 h increased significantly in the overexpression-HuR group, and decreased significantly in the cas9-HuR group (P<0.05). The number of migrating cells increased significantly in the overexpression-HuR group, and decreased significantly in the cas9-HuR group (P<0.05). The apoptosis rate was significantly decreased in the overexpression-HuR group, and significantly increased in the cas9-HuR group (P<0.05). The messenger ribonucleic acid and protein expression levels of HuR, cyclin D1, and Bcl-2 were significantly increased in the overexpression-HuR group, and significantly decreased in the cas9-HuR group (P<0.05).ConclusionsHuR promotes the proliferation and migration of T24 cells, and inhibits cell apoptosis. The mechanism may be related to the expression of cyclin D and the apoptosis-related protein, Bcl-2.     

超声定位辐照载血卟啉微泡治疗兔肝VX2肿瘤的实验研究

目的探讨超声定位辐照载血卟啉微泡介导药物靶向释放技术治疗兔VX2肝移植瘤的效果。方法利用35只新西兰大白兔建立肝VX2移植瘤模型,并随机均分为超声定位辐照载血卟啉微泡组（US＋LMLH组）、超声定位辐照血卟啉组（US＋HP组）、超声定位辐照空白脂质微泡组（US＋MB组）、单纯载血卟啉微泡组（LMLH组）、单纯血卟啉组（HP组）、单纯超声辐照组（US组）和生理盐水对照组（C组）。治疗前后用二维超声、CDFI及CEUS观察肿瘤大小、回声及血流灌注情况,计算肿瘤体积大小及生长抑制率;同时观察不同处理组肝内转移及远处转移情况;并用透射电镜观察肿瘤细胞的超微结构。结果US＋LMLH组肿瘤内部呈混合回声,CDFI及超声造影显示肿瘤的滋养血管明显减少,生长抑制率高于其他各组;在肝内及远处转移方面,US＋LMLH组较少转移,明显优于其他各组;超微结构显示US＋LMLH组细胞膜破坏,线粒体明显肿胀。结论超声定位辐照载血卟啉微泡能有效激活血卟啉,具有较强的体内抑瘤效果。     

氯胺酮复合咪达唑仑对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 探讨氯胺酮复合咪达唑仑对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的影响.方法 诱导分化4 d的神经元样PC12细胞随机分为5组:对照组(c组);谷氨酸组(Glu组)加入20 mmol/L谷氨酸;氯胺酮组(K组)、咪达唑仑组(M组)、氯胺酮+咪达唑仑组(K+M组)均加入20 mmol/L谷氨酸后,分别加入50 μmol/L氯胺酮、1μmol/L咪达唑仑、50 μmol/L氯胺酮+1 μmol/L咪达唑仑.各组细胞继续培养24 h后采用MTT法检测细胞活力,Hoechst33258核染色法及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡细胞.结果 与C组比较,Glu组细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);与Glu组比较,K组和M组细胞活力升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);与K组和M组比较,K+M组细胞活力升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);K组和M组细胞活力及细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05).结论 氯胺酮复合咪达唑仑可更有效地抑制谷氨酸诱导PC12细胞凋亡.     

淫羊藿苷对破骨细胞活性的影响

目的:观察淫羊藿苷对破骨细胞骨吸收及凋亡的影响,探讨淫羊藿苷的抗骨质疏松作用机制。方法:体外分离、培养兔破骨细胞,与玻片及骨磨片共同培养,用10-7、10-6、5×10-6、10-5mol/L浓度的淫羊藿苷刺激破骨细胞,倒置相差显微镜下观察活体细胞、HE染色、TRAP染色及骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色,鉴定破骨细胞,并进行骨吸收陷窝计数和面积测量,吖啶橙染色观察凋亡破骨细胞所占的比例。结果:与空白对照组比较,10-6、5×10-6、10-5mol/L浓度的淫羊藿苷组破骨细胞凋亡率均明显增高,骨吸收陷窝数目、面积明显减少,随浓度增加抑制作用增强,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可诱导破骨细胞凋亡,抑制骨吸收,并随浓度增加抑制作用增强。