大小剂量纳洛酮对严重颅脑损伤后细胞凋亡抑制作用的实验研究

目的观察纳洛酮对脑外伤的抗凋亡作用,比较大小剂量纳洛酮对实验性脑损伤后神经细胞凋亡的影响.方法选用家兔77只,随机分成正常组、对照组、大剂量组和小剂量组,分别予非颅脑损伤、颅脑损伤、颅脑损伤后大剂量纳洛酮腹腔注射及颅脑损伤后小剂量纳洛酮腹腔注射处理,15天后均断头处死,于致伤处和对侧处分别取材,利用TUNEL法制作切片,观察及比较各组神经细胞凋亡数量.结果致伤处或对侧处,正常组、大剂量组、小剂量组和对照组神经细胞凋亡数量两两之间比较均有显著差异,值从小到大为:正常组、大剂量组、小剂量组、对照组.结论纳洛酮具有抑制严重颅脑损伤后神经细胞凋亡的作用;大剂量纳洛酮应用可以较显著抑制严重颅脑损伤后的神经细胞凋亡.     

大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3、Cathepsin B的表达

[目的]研究大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3、Cathepsin B的表达,并初步探讨Caspase-3、Cathepsin B在脊髓损伤后表达的意义.[方法]将78只成年健康SD大鼠按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8 、T9)急性压迫损伤模型, HE染色观察脊髓组织病理学变化,免疫组化测定各时间点Cathepsin B、Caspase-3 的表达变化,原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP) 标记法(TUNEL 法) 检测神经细胞的凋亡水平.[结果]免疫组化结果显示正常及假手术组大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3,Cathepsin B,TUNEL阳性细胞较少;在脊髓损伤后3 d Cathepsin B阳性细胞数明显增多,5 d达高峰,7 d未见明显衰减.Caspase-3阳性细胞数在脊髓损伤后8 h明显增多,3 d达高峰,7 d表达减弱.TUNEL阳性细胞数也在8 h明显增多,3 d达高峰,7 d表达减弱.Cathepsin B阳性细胞形态及表达的部位均与Caspase-3阳性细胞、TUNEL阳性细胞差别较大.[结论]Caspase-3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节,Cathepsin B则可能通过炎性细胞为媒介参与了脊髓继发性损伤.     

EPO硬膜外途径干预大鼠脊髓损伤后caspase-3及FasL表达与细胞凋亡的相关性研究

[目的]在大鼠急性脊髓损伤后不同时间硬膜外腔注射促红细胞生成素,观察并探讨其对脊髓神经功能的保护作用以及对脊髓神经细胞凋亡的影响.[方法]将48只体重(270±10)g成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=6),假手术组(仅切除椎板,n=6),对照组(1、6、24 h组分别给与等量生理盐水硬膜外注射.n=18),实验组(1、6、24 h组分别给与5 000 u/kg-bw的rhEPO硬膜外注射,n=18).按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;分别采用TUNEL法及免疫组化法检测脊髓神经细胞凋亡指数和Caspase-3,fas-fasl死亡蛋白的表达.光镜下观察统计分析结果.[结果]与对照组相比,脊髓损伤后促红细胞生成素1、6、24 h干预的实验组神经运动功能均有改善,脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降(P＜0.01);实验组中,fas-fasl死亡蛋白较对照组表达减少.2组中神经细胞凋亡数与Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白表达细胞数呈线性正相关(P＜0.01),相关系数分别为r=0.941(Caspase-3)和r=0.929(fas-fasl).[结论]早期应用外源性EPO对脊髓不完全损伤具有保护作用,可明显改善神经运动功能恢复情况,此种保护作用可能与EPO能够阻断Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白途径的神经细胞凋亡有关.     

重组人红细胞生成素治疗脊髓冲击性损伤的实验研究

[目的]研究重组人红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)对脊髓冲击性损伤的治疗效果。[方法]24只新西兰白兔采用重物坠落的方法造成脊髓冲击性损伤。损伤12 h后,对照组静脉给予生理盐水;小剂量组、中等剂量组和大剂量组分别静脉给予rh-EPO 100、500、1000 IU/kg。损伤后24 h、48 h、1周评估下肢神经功能。损伤后1周时处死动物,脊髓标本进行HE和Caspase-3组化染色,电子显微镜评估超微结构损伤。[结果]EPO治疗组的神经功能评分明显高于对照组,HE染色和电子显微镜显示组织和超微结构损伤明显轻于对照组,Caspase-3阳性细胞数明显少于对照组。中等剂量组和大剂量组的治疗效果无显著性差异。[结论]脊髓冲击性损伤后12 h给予人红细胞生成素可减轻脊髓的组织和超微结构继发性损伤,并可对抗神经细胞凋亡,促进脊髓功能恢复。中等剂量EPO是治疗脊髓损伤的适当选择。     

L-丝氨酸对大鼠神经细胞凋亡与内源性神经干细胞增生的影响

目的 观察大鼠急性脊髓损伤(SCI)后L-丝氨酸(L-Ser)抑制神经细胞凋亡与促进内源性神经干细胞(eNSCs)增殖的作用. 方法 健康SD成年雄性大鼠100只,随机分为5组(n=20):假手术组(只行椎板切除,不损伤脊髓)、单纯损伤组(制备SCI模型后腹腔注射生理盐水)、L-Ser治疗组(制备SCI模型后腹腔注射L-Ser)、D-环丝氨酸(DCS)治疗组(制备SCI模型后腹腔注射DCS)和DCS拮抗组(制备SCI模型后腹腔注射L-Ser和DCS).1、3、5、7d观察并记录各组大鼠斜板试验的斜坡角度和BBB运动评分,观察脊髓前角神经细胞数、检测细胞凋亡和Brdu和Nestin双标阳性细胞的表达. 结果 术后3d开始,L-Ser治疗组的斜坡角度和BBB运动评分均大于单纯损伤组、DCS治疗组和DCS拮抗组,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着治疗时间的增加,斜坡角度呈现递增趋势.L-Ser治疗组的脊髓前角神经细胞数和Brdu/Nestin阳性细胞数明显多于单纯损伤组、DCS治疗组和DCS拮抗组,而脊髓前角神经凋亡细胞数明显少于其他3组,差异均有统计学意义(P＜0.05).DCS治疗组、DCS拮抗组和单纯损伤组间的斜坡角度、BBB运动评分、脊髓前角神经细胞数、凋亡细胞数、Brdu/Nestin阳性细胞数比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 L-Ser能抑制SCI大鼠脊髓组织中神经细胞的凋亡,促进SCI大鼠脊髓组织eNSCs增殖.     

牵张性脊髓损伤后神经细胞中Caspase-3表达及其作用的实验研究

目的:观察大鼠牵张性脊髓损伤后脊髓神经细胞中半胱氨酸天冬氨酶3(Caspase-3)的表达及其在神经细胞凋亡中的作用。方法:大鼠脊髓T13~L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位监测P1-N1波幅下降至术前波幅70%后维持10m in,分别于术后6h、1、4、7、14、21d处死取材。采用流式细胞仪、原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL法)、免疫组织化学检测等方法观察大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3表达变化及神经细胞凋亡情况,测定Caspase-3活性。结果:脊髓损伤后神经细胞凋亡率、TUNEL阳性细胞数、Caspase-3免疫组织化学阳性表达及Caspase-3活性测定均较空白对照组及椎板切除组显著升高(P<0.05或0.01),前三项指标改变趋势大致相同,均为术后7d达高峰,而Caspase-3活性则术后4d达高峰。结论:大鼠牵张性脊髓损伤后神经细胞中Caspase-3表达增高、Caspase-3活性增强,是检测神经细胞凋亡的早期生物学指标,对认识脊髓损伤机制具有一定的意义。     

大剂量5-FU致肠黏膜严重损伤时肠上皮细胞msi-1的表达及其意义

目的 观察大剂量5-Fu致肠黏膜严重损伤时肠上皮细胞musashi-1(msi-1)的表达及其意义.方法 成年C57BL/6J小鼠40只,分为对照组(n=8,D组)和处理组(n=32).D组给予腹腔注射PBS,处理组给予腹腔注射大剂量5-Fu(150 mg·kg-1·d-1×5 d),分别于处理后1 d(A组)、3 d(B组)、5 d(C组)剖杀濒死小鼠取出小肠,用来常规HE染色,免疫组化检测肠上皮干细胞标记物msi-1的表达;制备A组小鼠肠黏膜细胞悬液,流式细胞术检测msi-1阳性细胞比例. 结果 大剂量5-FU作用后,小鼠肠黏膜被严重破坏,黏膜萎缩,绒毛、隐窝结构消失;免疫组化结果显示msi-1表达上升,msi-1阳性细胞比例显著增高(P＜0.01);流式检测提示A组小鼠肠黏膜细胞悬液中前向角(FSC)数值较大的细胞群msi-1阳性细胞比例较高,约为67.75%. 结论 小鼠大剂量5-Fu腹腔注射后,肠黏膜细胞中表达msi-1的肠上皮干细胞比例大幅增加,可为肠上皮的进一步分离纯化及其生物学特征的研究奠定基础.     

颈椎病大鼠颈脊髓神经细胞凋亡的研究

目的 研究Caspase-3在颈椎病大鼠颈脊髓的表达及神经细胞凋亡的研究.方法 将4月龄SD大鼠96只,破坏颈椎后柱稳定性后分别饲养3、5个月,用斜板试验评价运动功能;HE染色观察颈椎间盘组织的形态学变化;免疫组织化学染色及Western Blot测定颈脊髓Caspase-3的表达;TUNEL法检测颈脊髓神经细胞凋亡情况,与对照组比较,并作经统计学处理.结果 斜板试验评价运动功能,3月对照组与模型组斜板角度为75.4±3.8及46.4±6.5,5月对照组与模型组斜板角度为74.9±4.0及45.1±7.2;颈椎间盘C4-5、C5-6退变程度Miyanmoto分级评分结果,3月对照组与模型组分别为1.32±0.39及2.10±0.58,5月对照组与模型组分别为1.39±0.69及3.98±0.84.经斜板试验及组织学观察,模型组与对照组间均有统计学意义,P＜0.01.颈椎病大鼠颈脊髓Caspase-3的阳性细胞数3月对照组与模型组分别为2.01±1.36及13.23±3.21,5月对照组与模型组分别为3.26±3.02及26.32±4.01;Western Blot法测定颈脊髓不同组间Caspase-3的蛋白表达,用图象处理系统ECL对条带进行扫描,测定其区带的感光密度,并进行处理.3、5月模型组间有统计学意义,P＜0.05.3月对照、3月模型、5月对照、5月模型的凋亡指数分别为:4.20±1.56;16.53±2.01;6.32±2.32;29.56±4.25.对照组间无统计学差异(P＞0.05),模型组间及模型组与对照组间均有统计学意义(P＜0.05).结论 破坏大鼠颈椎后柱稳定可成功建立颈椎病模型.Caspase-3被认为是细胞凋亡过程中的关键酶之一,Caspase-3介导了慢性脊髓损伤后的细胞凋亡,并随颈椎退变程度增强而表达增强.     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素（minocyc line）对Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。[方法]成年大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组（A组）和应用生理盐水对照组（B组），于损伤后不同时点取材，用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞，原位末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞。[结果]HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达，神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均B组〉A组（P〈0．01）。[结论]二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡。     

纳洛酮对大鼠颅脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的　探讨纳络酮对大鼠颅脑损伤后神经细胞凋亡的影响。方法　采用Feeney氏自由落体法制备脑损伤动物的模型 ,将 90只大鼠随机分为实验组及对照组 ,于伤后 1 5、60min及2 4h分别给予纳洛酮或 0 .9%氯化钠溶液 ,伤后第 5天断头处死大鼠 ,采用原位末端脱氧核苷酸生物素末端标记 (TUNEL)法测定神经细胞原位凋亡情况 ,并用光镜观察细胞形态学改变。结果　与对照组比较 ,大鼠脑损伤后 1 5及 60min应用纳洛酮可明显减少神经细胞凋亡 ,而伤后 2 4h给药 ,则两组神经细胞的凋亡率差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　早期应用大剂量纳洛酮可明显减少脑损伤后神经细胞的凋亡 ,从而可有效地保护神经细胞功能     

纳络酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素含量变化及其临床意义

目的 探讨纳络酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素（ET）含量变化及其临床意义，评价纳络酮治疗急性重型颅脑损伤的意义。方法 观察了52例纳洛酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆ET含量在治疗前1d、治疗后3、8d及2周的变化，并且以46例颅脑损伤患者按常规治疗作对照组。结果 颅脑损伤24h内两组患者血浆内皮素较正常人均明显升高（P〈0．05），伤后第3天、第8天两治疗组血浆内皮素较治疗前均明显下降（P〈0．05），但纳络酮治疗组低于常规治疗组（P〈0．05），治疗2周后两组ET水平基本恢复到正常水平。结论 急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素含量明显升高，与病情轻重相关，纳络酮治疗较常规治疗能更迅速地降低血浆ET水平。     

大鼠颅脑损伤后细胞凋亡及纳络酮的抗凋亡作用

目的 探讨颅脑损伤后神经细胞凋亡的时相特点及其药物调控作用。方法 采用原位末端标记法（TUNEL）结合流式细胞术对外伤组、伤后纳络酮治疗组及对照组大鼠伤侧大脑皮质的细胞凋亡情况进行定量分析。结果 凋亡细胞从伤后24h开始逐渐增多，伤后3－5d发展到项峰，此后逐渐下降；是纳络酮治疗组各时相点凋亡细胞数均明显低于外伤组。结论 外伤后第3－5天是细胞凋亡的高峰期，纳络酮具有显著的抗凋亡作用。     

颅内压及脑电双频指数联合监测在重型颅脑外伤患者术后临床应用中的研究

目的 探讨脑电双频指数及颅内压监测在重型颅脑外伤患者术后意识评测和短期预后评估中的应用价值.方法 采用简单随机抽样法随机选择2014年1月-12月江苏省苏北人民医院神经外科重症监护病房颅脑外伤昏迷患者30例,每8h评价患者的GCS评分,记录患者手术治疗后3d内的GCS评分,记录相同时刻的脑电双频指数值及颅内压值,依据GCS评分将患者分为两组:A组20例(3分≤GCS≤5分),B组10例(5分＜ GCS≤8分),统计两组患者的21 d生存率.采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验比较脑电双频指数值和颅内压之间的关系.结果 A组脑电双频指数值为45.3 ±3.8,颅内压值为(18.6±2.8) mmHg,B组脑电双频指数值为32.2 ±8.2,颅内压值为(33.4±4.6) mmHg,A组21d生存率为55％,B组21 d生存率为30％,重型颅脑外伤患者术后脑电双频指数值与昏迷程度呈正相关,与颅内压值呈负相关(r =0.532,P ＜0.05;r =0.521,P ＜0.05).重型颅脑损伤患者,入院时病情越重,患者术后颅内压越高,脑电双频指数值越低,其预后越差.结论 脑电双频指数与颅内压联合监测在评估重型颅脑外伤患者术后昏迷程度及预后方面具有较高的应用价值.     

PICCO监测和CVP压力监测指导下的重型颅脑损伤患者液体复苏疗效的比较研究

目的比较分析PICCO监测和CVP压力监测指导下重型颅脑损伤患者液体复苏的疗效。方法选取2012年1月至2014年6月本院收治因颅脑重型损伤患者100例,按照动态随机分组法随机分为PICCO组和CVP组,每组50例;PICCO组患者在PICOO监测指导下进行液体复苏治疗,而CVP组患者则在CVP监测指导下进行液体复苏治疗;比较两组患者治疗时间、颅脑恢复率、肺水肿出现率、生存率以及住院期间格拉斯哥昏迷评分（GCS）的数值变化等。结果 PICCO组颅脑恢复良好率为68%,显著高于CVP组的28%,两者间差异具有统计学意义（χ^2=16.026,P〈0.05）;PICCO组脑水肿出现7例少于CVP组的11例,但两组比较无差异（χ^2=1.084,P〉0.05）;PICCO组治疗时间为（16.7±5.7）天显著性低于CVP组的（21.5±6.3）天（t=3.067,P〈0.05）;但PICCO组死亡3例,生存率为94.0%显著性高于CVP组的56.0%（χ^2=19.253,P〈0.05）。两组在诊治之前,GCS无显著差异（P〉0.05）,诊治之后,PICCO组患者GCS数值变动与CVP组对比优越很多,两组GCS数值变动在诊治1天之时、诊治1周之时、诊治2周之时均有统计学意义（均P〈0.05）。结论采用PICCO监测能更加快速准确地评估重型颅脑损伤患者的血容量状态,显著提高重型颅脑损伤患者的抢救成功率,对其液体管理具有重要的临床价值。     

颅脑损伤早期血清炎性细胞因子的变化与预后关系分析

目的：探讨颅脑损伤患者早期血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素8（IL-8）变化与预后之间的关系及其临床意义。方法选取2012年3月至2014年3月期间,在本院住院的急性颅脑损伤患者80例作为观察组,并按照格拉斯哥昏迷评分标准（GCS）分为两组,其中颅脑损伤中重型（3~12分）40例,轻型（13-15分）40例;同时选择本院同期健康体检志愿者共80例为正常对照组;分别采用放射免疫法及酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组血清中TNF-α、IL-6和IL-8的含量水平,并且分析血清中TNF-α、IL-6和IL-8的含量与颅脑损伤程度的关系。结果住院后第1天颅脑损伤组血清中TNF-α、IL-6和IL-8水平均显著高于正常对照组（P＜0.05）;且发现所有时间点中重度组的炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8水平均显著性高于轻度组（P＜0.05）;所有患者入院1个月后,按照格拉斯哥评分（GOS）评定患者,预后良好30例,预后不良60例,对比两组炎症因子水平,发现预后不两组患者TNF-α、IL-6和IL-8水平均显著高于预后良好组（P＜0.05）。结论血清中TNF-α、IL-6和IL-8水平可作为判断颅脑损伤严重程度的指标,其联合检测敏感性和特异性均较高,对颅脑损伤的早期诊断及预后判断意义重大。     

Expression of Hsp70 and Caspase-3 in rabbits after severe traumatic brain injury

ObjectiveTo investigate the expression of Caspase-3 and Hsp70 in rabbits after severe traumatic brain injury (TBI) and to explore the feasibility of its application in estimation of injury time in forensic medicine.MethodsA rabbit model of heavy TBI was developed by high velocity impact on the parietal bone with an iron stick. Totally 8 healthy adult New Zealand white rabbits were randomly divided into control group (n=2) and injury group (n=6). Four hours after injury, tissue specimens from the parietal lobe, temporal lobe, occipital lobe, cerebellum and brainstem were harvested to detect the expression of Hsp70 and Caspase-3 by immunohistochemistry. Besides, the gray values of cells positive for Hsp70 and Caspase-3 were analyzed with an image analyzer.ResultsImmunohistochemistry staining demonstrated a low level of Caspase-3 and Hsp70 expression in normal control group. While in injury group, both the Caspase-3 and Hsp70 expression was significantly elevated (P<0.05). Positive cells gathered around the lesion focus. Occipital lobe and cerebellum had fewer positive cells while temporal and brainstem had the fewest.ConclusionThe expression of Caspase-3 and Hsp70 at an early stage following severe TBI is characteristic and can be applied to estimate the time of injury.     

高迁移率族蛋白B1在烧伤小鼠大脑中表达的研究

目的：检测烫伤小鼠高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在大脑中的表达.方法：应用BALB/c小鼠15%TBSAⅢ度烫伤（95 ℃热水浸烫8 s）和假伤（室温水,8 s）模型,并以正常小鼠作为对照（6只）.在4、8、24和48h（每个时间点6只）处死动物.采用苏木精-伊红染色观察大脑形态学改变,免疫荧光方法检测caspase-3和HMGB1在大脑的表达,ELISA方法检测大脑组织HMGB1含量.结果：15%体表面积Ⅲ度烫伤8 h即导致大脑发生显著性病理改变,如炎性细胞浸润,烫伤24h大脑终纹出现caspase-3阳性细胞,而在假伤组未见特异性染色.免疫荧光染色发现,HMGB1位于假伤组小鼠神经细胞的胞核;而在烫伤后4h即释放至细胞浆.释放到脑组织中的细胞外HMGB1在烧伤后 24和48h,显著高于假伤组和对照组（P〈0.01）.结论：烫伤导致小鼠大脑HMGB1的分布和含量发生改变,可能参与了烧伤后脑损伤的病理过程.     

Increase in apparent diffusion coefficient in normal appearing white matter following human traumatic brain injury correlates with injury severity

Following diffuse traumatic brain injury, there may be persistent functional or psychological deficits despite the presence of normal conventional MR images. Previous experimental animal and human studies have shown diffusion abnormalities following focal brain injury. Our aim was to quantify changes in apparent diffusion coefficient (ADC) and absolute relaxation times of normal appearing white matter (NAWM) in humans following traumatic brain injury. Twenty-three patients admitted with a diagnosis of head injury (nine mild, eight moderate, and six severe) were scanned an average of 7.6 days after injury using a quantitative echo planar imaging acquisition to obtain co-registered T1, T2, and ADC parametric maps. Mean NAWM values were compared with a control group (n = 13). The patient group showed a small but significant increase in ADC in NAWM, with no significant change in T1 or T2 relaxation times. There was a correlation between injury severity and increasing ADC (p = 0.03) but no correlation with either T1 or T2, suggesting that ADC is a sensitive and independent marker of diffuse white matter tissue damage following traumatic insult. None of the patients had a reduced ADC, making ischaemia unlikely in this cohort. Pathophysiological mechanisms that may explain diffusely raised ADC include vasogenic edema, chronic ischemic phenomena, or changes in tissue cytoarchitecture or neurofilament alignment.