毛囊干细胞定位和体外向表皮分化

目的研究毛囊干细胞在毛发不同生长周期中定位和体外向表皮分化能力。方法采用免疫荧光染色检测皮肤组织中K19表达;分离毛囊干细胞并体外培养,以成纤维细胞为底物,采用气-液界面立体培养,形态学观察毛囊干细胞体外向表皮分化能力。结果K19阳性细胞主要定位于毛囊外根鞘。生长期毛发中,K19阳性细胞主要位于毛囊外根鞘膨突处和下部毛球部;退行期和静止期毛发中K19阳性细胞则沿毛囊外根鞘处连续分布,并在新的生长周期开始再次分开为两处。体外采用真皮类似物立体培养外根鞘细胞,获得具有多层表皮结构的皮肤类似物。结论毛囊干细胞主要定位于毛囊外根鞘,并随毛囊周期性生长有所迁移,体外具有形成表皮结构的能力。     

大鼠生长期触须毛囊干细胞中FGF-13的表达研究

目的探讨大鼠生长期触须毛囊中以及体外培养的毛囊隆突部细胞即毛囊干细胞中FGF-13的表达分布及其意义.方法分别采用免疫组织化学方法和免疫细胞化学方法检测FGF-13的表达.结果体外和在体两种情况下,毛囊隆突部细胞都有FGF-13的表达,在体情况下毛囊Bulge区以下毛球部以上的外根鞘细胞中亦有干细胞标记和FGF-13的表达.结论提示FGF-13参与生长期触须毛囊隆突部细胞沿毛囊外根鞘向下迁移这一过程.     

毛囊隆突细胞

毛囊具有不断更新的功能,提示毛囊中存在干细胞。由于周期漫长的细胞集中存在于隆突部位,所以隆突细胞被认为是表皮组织的干细胞。现已成功证实隆突细胞具有干细胞的一系列特性:高增殖能力、多向分化能力等。基于技术的飞速发展,人们对隆突细胞的表面标志、分离技术以及基因表达都有了较深刻的认识。     

大鼠表皮干细胞的分布与体外分离培养

目的 研究大鼠表皮干细胞的分布与体外分离培养.方法 用免疫组织化学技术研究大鼠表皮干细胞的分布;用DispaseⅡ、胰酶二步法消化新生大鼠皮肤,获得单细胞悬液,Ⅳ型胶原筛选,体外培养大鼠表皮干细胞,进行免疫组化鉴定,荧光标记流式细胞仪分析.结果 在表皮基底层、毛囊外根鞘区α 6-integrin、K15等表皮干细胞标记物染色阳性,而分化指标CD71染色阴性;CD34在表皮基底层阴性表达,而在毛囊隆突区阳性表达;体外分离的基底层表皮干细胞生长良好,具有较高的克隆形成率;干细胞标记物α 6-integrin、 K15呈阳性表达,流式细胞仪检测α 6-integrin达到84%,说明较为成功地体外分离培养出大鼠表皮基底层干细胞.结论 在表皮基底层、毛囊外根鞘区存在表皮干细胞.     

毛囊外根鞘细胞的分离培养及鉴定

目的建立毛囊隆突处外根鞘细胞的分离和培养方法。方法利用中性蛋白酶分离得到单个毛囊,采用胰酶消化法进行细胞培养,倒置6显微镜观察细胞形态,绘制细胞生长增殖曲线,免疫荧光检测干细胞相对特异性标识分子角蛋白19(K19)和β1整合素表达情况,分别用分离培养的角质形成细胞(Keratinocytes,KCs)做对照。结果免疫荧光检测显示90%左右的毛囊外根鞘细胞胞浆中均有K19和β1整合素的阳性表达。结论应用中性蛋白酶和胰酶消化法体外培养毛囊隆突处外根鞘细胞简单、可行。     

毛囊干细胞的体外研究

毛囊是皮肤的重要附属器官,其生长具有周期性.这与其中存在的毛囊干细胞的功能密不可分.毛囊干细胞具有强大的增殖潜能及多向分化能力,可以分化成毛囊及表皮的多种细胞.它不仅对维持毛发的周期性生长有重要作用,同时也是表皮及皮肤附属器官再生的重要细胞来源.目前对成人毛囊干细胞的定位还没有明确的结论,多数的在体研究认为它可能存在于毛囊膨出部(立毛肌插入点附近)和外根鞘的最外层,其特点是体积小,分化程度低,具有慢周期性,特异性表达β1整合素和角蛋白19型(Keratin 19,K19).     

在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成的初步研究

目的探索人毛乳头细胞和外根鞘细胞在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成的可能性。方法用毛乳头细胞和与外根鞘细胞构建复方壳多糖双层皮肤替代物,观察其体外和大白鼠移植后的组织学特征。结果体外毛乳头细胞和外根鞘细胞构建的皮肤替代物表皮细胞排列更紧密、角化突出,真皮内可见与表皮相连的上皮细胞柱及球形膨大细胞团。但移植后未见肯定的毛囊样结构形成。结论目前的细胞培养技术尚不能在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成。     

两种人毛囊外根鞘细胞培养方法的比较

目的　建立外根鞘细胞的培养方法 ,并比较不同方法的优缺点 ,以进一步探索毛囊干细胞的体外培养条件。方法　分别采用组织法和消化法进行外根鞘细胞的培养。结果　两种方法均能培养出大量的外根鞘细胞并进行传代 ,组织法操作简单 ,但细胞生长比率低 ,细胞不易融合 ,消化法培养细胞分布均匀 ,细胞克隆形成能力强 ,增殖迅速。结论　消化法适合于进行毛囊外根鞘细胞的体外培养。     

CD34在胎儿头皮毛囊中的表达

目的:观察胎儿头皮毛囊中CD34的表达。方法:获取因胎儿畸形引产的胎龄8个月的死亡2 h胎儿头皮,分成2份。1份制备冷冻切片,CD34免疫荧光标记,激光共聚焦显微镜观察摄片;另1份无菌处理,消化头皮获取游离毛囊,制备毛囊细胞悬液,采用流式细胞术检测。结果:共聚焦显微镜下观察到,CD34主要表达于胎儿头皮的毛囊外根鞘隆突区,也见于毛球处、表皮基底部;流式细胞仪检测出CD34+细胞占毛囊总数的8.54%~13.04%。结论:胎儿头皮毛囊隆突区有较多的CD34+细胞,推测该部位为毛囊干细胞的居处。部分毛囊中部、毛球处出现CD34+细胞,提示不同毛发周期,干细胞或其直接子代的居所发生变化。胎儿表皮基底层存在均匀分散的CD34+细胞。     

小鼠触须毛囊外根鞘细胞的体外培养及uPA和uPAR表达研究

目的建立小鼠毛囊外根鞘细胞的体外培养方法及研究尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体(uPA/uPAR)的表达.方法建立以毛囊真皮鞘细胞为滋养层,培养外根鞘细胞并对uPA/uPAR的表达进行免疫细胞化学鉴定.结果外根鞘细胞在此滋养层上生长较好,并有uPA/uPAR的表达.结论毛囊真皮鞘细胞是外根鞘细胞较好的滋养层,毛囊外根鞘细胞具有迁移增殖能力.     

环氧合酶-2在毛囊皮脂腺单位的表达及其意义

目的研究环氧合酶-2(cyc looxygenase-2,COX-2)在成年大鼠毛囊皮脂腺单位中的表达模式。方法用RT-PCR、免疫组织化学技术和原代干细胞培养技术观察COX-2在毛囊皮脂腺单位的表达情况。结果成年大鼠毛囊皮脂腺单位中,bu lge(隆突)区弱表达,皮脂腺高表达,而毛球部未见表达。结论COX-2在正常成年大鼠皮脂腺中呈特异性的表达,并且它的表达模式联系毛囊干细胞从bu lge到皮脂腺迁移分化通路,提示COX-2在毛囊干细胞定向分化为皮脂腺细胞中可能起一定的作用。     

uPA/uPAR在人胚胎毛囊隆突区中表达的研究

目的 研究人胚胎毛囊干细胞所在部位隆突区形态及uPA/uPAR表达.方法 通过HE染色,确定毛囊隆突区的部位及大小;采用免疫细胞化学和原位杂交技术研究毛囊干细胞的隆突区部位uPA/uPAR的表达.结果 在球形毛钉期,毛囊隆突区最为明显;位于毛囊隆突区的干细胞有uPA/uPAR的表达.结论 球形毛钉期是研究人毛囊干细胞的较佳期;uPA/uPAR的表达与毛囊干细胞的增殖、迁移和细胞间信号传递有关.     

大鼠胚胎背部皮肤发育过程中毛囊干细胞的发育初探

目的探讨大鼠胚胎背部皮肤毛囊干细胞的发育规律。方法使用冰冻超薄切片后固定,结合免疫组织化学染色方法（IHC）,显示出毛囊干细胞的位置和发育程度,然后对医学阳性程度表达区域使用软件分析和统计方法处理。结果大鼠胚胎背部皮肤呈现逐渐增厚的趋势,其中毛囊隆突区并不明显,但可明显观察到三种干细胞标记物在皮肤全层,尤其是基底层的表达变化。结论形态学观察说明毛囊发生初期毛囊干细胞（hair follicle stem cell,HFSC）不仅仅定位于毛囊上段,三种HFSC标志物的表达有差异。背部皮肤基底层细胞具有干细胞特性,未分化为表皮细胞或者毛囊中的各种细胞。β1-integrin,CD34和K15的表达变化可能与毛囊干细胞以及毛囊的生物学特性有关。     

TPA促进小鼠毛囊中TCF3的表达

目的 检测12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13 (TPA)处理C57 BL/6( B6)小鼠背部皮肤后TCF3表达的变化情况.方法 采用免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot等技术,检测TPA和丙酮分别处理7周大小的B6鼠背部皮肤1、2和4周后TCF3的表达情况.结果 与丙酮处理组相比,TPA处理组中B6鼠...     

无血清K-SFM培养条件下大鼠毛囊Bulge细胞生物学特性的研究

目的研究无血清K-SFM培养条件下,大鼠毛囊Bulge细胞的生物学特性.方法分离大鼠毛囊Bulge细胞,分别置于无血清的K-SFM培养基(实验组)及有血清DMEM/F12培养基(对照组)的培养条件下培养.比较Bulge细胞在两种培养体系中的生长增殖和K19的表达状况.结果无血清培养的Bulge细胞在克隆形成率及K19的表达率均明显高于对照组(P＜0.05).结论体外培养和扩增大鼠毛囊Bulge细胞,无血清的K-SFM培养基较有血清DMEM/F12培养基更有利于Bulge细胞的扩增和表型的维持.     

毛囊来源的表皮干细胞在不同培养条件下细胞生长情况的比较及效果评价

目的：探讨毛囊来源的表皮干细胞(ESCs)培养条件,阐明成纤维细胞在ESCs培养中的作用。方法：以拔出的毛发为细胞来源,通过细胞培养的方式,比较在无包被、鼠尾胶原包被、Ⅳ型胶原包被和3T3成纤维细胞作为饲养层细胞条件下细胞生长情况。并通过RT-PCR和免疫荧光等方法对培养出的细胞进行细胞角蛋白(CK)15的检测。结果：在无包被、鼠尾胶原包被、Ⅳ型胶原包被和3T3成纤维细胞作为饲养层细胞条件下,以3T3成纤维细胞作为饲养层对细胞的生长最为有利;同时,对不同毛囊节段（毛球、中间节段、隆突和峡部）的培养表明,毛囊隆突部位的细胞增殖能力最强。RT-PCR及免疫荧光结果表明,应用此种方法从毛囊中分离培养的细胞表达表皮干细胞的特异性标志CK15。结论：以3T3成纤维细胞作为饲养层细胞,可以从拔出毛发根部的隆突部位培养出ESCs,此培养条件对细胞的生长最为有利。     

大鼠表皮干细胞的定位、分离和体外培养

目的：定位大鼠的表皮干细胞,探讨表皮干细胞分离和体外培养的方法。方法：用免疫组化法定位表皮干细胞。用胶原酶冷、温消化和胰蛋白酶联合消化新生鼠皮肤,获得单细胞悬液。选取在鼠尾胶原上快速贴壁的细胞为目的细胞,未快速贴壁的细胞为对照组,二者在相同条件下培养,适时传代,测定细胞克隆形成率．免疫学方法鉴定表皮干细胞。结果：毛囊隆突区细胞胞浆表达角蛋白15（K15）随年龄的增长,K15阳性细胞出现在毛母质细胞区和表皮基底层。体外培养的细胞能形成大克隆,克隆形成率为14．06％,传至第4代,细胞形态无明显改变,细胞浆内表达K15。结论：表皮干细胞位于毛囊隆突区,此研究所用的方法可以分离、纯化和培养表皮干细胞。