真菌荧光染色在侵袭性真菌感染病理学诊断中的应用研究

目的：评估真菌荧光染色法在侵袭性真菌感染（IFIs）石蜡包埋组织病理切片中的应用价值。方法：经真菌培养确诊，同时行组织病理学检查的55例真菌感染患者，其中马尔尼菲篮状菌感染30例，取其石蜡包埋切片分别行过碘酸—希夫（PAS）染色、六胺银（GMS）染色及真菌荧光染色，采用McNemar检验对3种染色方法的检出率进行比较分析。结果：55例样本中，真菌荧光染色检出43例（78.2%）,GMS染色检出37例（67.3%）,PAS染色检出23例（41.8%），真菌荧光染色检出率显著高于GMS染色及PAS染色（P<0.01）;30例马尔尼菲篮状菌感染中，真菌荧光染色检出21例（70.0%）,GMS染色检出14例（46.7%）,PAS染色检出6例（20.0%），真菌荧光染色检出率显著高于GMS染色及PAS染色（P<0.01）。结论:真菌荧光染色在IFIs真菌病理学诊断中检出率高于PAS染色和GMS染色，是组织病理学诊断IFIs的快速、高效的方法。     

着色芽生菌病的研究进展

着色芽生菌病是由一组暗色真菌引起的皮肤和皮下组织感染性的慢性真菌病,呈全球性分布。组织病理改变主要表现为3个方面:表皮假上皮瘤样增生、化脓性肉芽肿性炎、纤维增生机化。确诊依靠真菌培养及组织病理学找到棕色厚壁孢子,分子生物学技术(DNA技术)为该病的研究提供了新的手段。本文对其流行病学、微生物学、临床病理表现、实验室诊断和鉴别诊治等方面的研究现状进行综述,提高对该病的认识。     

马尔尼菲青霉菌感染的实验室检测

目的 确定检出患者体内所感染的病原体为马尔尼菲青霉菌.方法 取患者血液、骨髓、淋巴结穿刺物涂片染色镜检和真菌双相培养,观察真菌生长情况及菌落形态,并涂片、固定、染色、显微镜下观察菌体特征.结果 可排除组织胞浆菌,鉴定为马尔尼菲青霉菌.结论 从患者体内分离出的病原菌鉴定为马尔尼菲青霉菌.     

皮炎芽生菌病的临床和病理

取皮肤、支气管等活检标本,用组织化学方法研究皮炎芽生菌病的形态,其特征为慢性混合性肉芽肿和化脓性损害,病原体及芽孢常见于小脓肿和巨细胞内。结合真菌培养,资以鉴别其他真菌病,结核病和增生性脓皮炎等。     

马尔尼菲青霉菌的实验室诊断

目的明确并检出患者体内的病原菌为马尔尼菲青霉菌。方法取患者血液、骨髓、皮损分泌物等直接涂片染色镜检，同时做真菌培养，分别置25℃和35℃孵育，观察真菌生长情况及菌落形态，并涂片、固定、染色。显微镜下观察菌体特征。结果培养出双相性真菌，于25℃为青霉相，产生具有特征性的红色色素，镜下可见典型的帚状枝；于35℃为酵母相，无色素产生，镜下可见酵母样细胞，形似腊肠。结论从患者体内分离出的致病菌可排除荚膜组织胞浆菌。鉴定为马尔尼菲青霉菌。     

电镜和荧光显微技术在细胞凋亡研究中的应用

目的：探讨荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法：应用拓扑异构酶Ⅱ抑制剂VP-16及化学毒物叠氮钠分别诱导HL-60细胞凋亡和死亡，用透射电镜和经Hoechst 33258染色的荧光显微镜对凋亡及死亡动态观察和定量分析。结果：HL-60细胞在VP16处理后，荧光显微镜下可见核浓缩、染色质凝集、核碎裂等凋亡特征；而叠氮钠诱导的细胞死亡则出现核溶解、核染色质弥散，但无上述改变；两者电镜的观察与荧光显微镜的改变一致；凋亡细胞及坏死细胞荧光显微镜下呈不同的形态特征。对处理的不同时间点细胞的荧光显微镜观察发现：处理后4h核形态开始变化，有核浓缩的细胞比例在处理8h达高峰，然后下降，核碎裂细胞的比例在24h达高峰，约占80％，表明核浓缩发生在核碎裂之前。结论：荧光显微镜技术可明确观察判断细胞凋亡及坏死，并可进行动态及定量分析，是良好的凋亡检测方法。     

四肢异物显微镜下取出术

目的探讨四肢异物伤的特点并介绍显微镜下异物取出术。方法对四肢异物伤122例，通过X线摄片检查、采集病史和查体等明确诊断，分别采用直接取出术、切开取出术和显微镜下异物取出术三种方法治疗。结果122例153个异物均顺利取出，用时5～220min，平均用时58min。3例同时行断指再植术，再植指均成活。显微镜下异物弹道及周围组织分为弹道口、弹道区和异物区，由中心向外周弹道区可见组织断裂带、出血区、充血区和正常组织；异物区可见异物、出血区、充血区和正常组织。结论四肢异物伤经诊断明确均应考虑取出；非陈旧性和未探查过的四肢异物适用显微镜下异物取出术。     

桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC-823细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用

[目的]观察桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC-823细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用.[方法]选用人胃癌细胞株BGC-823进行体外培养,用MTT法测定桦褐孔菌提取物对BGC-823细胞株的增殖抑制率,应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、AO/EB双染色荧光显微镜及透射电子显微镜等仪器观察桦褐孔菌提取物对肿瘤细胞形态结构的影响.[结果]10,20,40,80 mg/L桦褐孔菌提取物对胃癌BGC-823细胞株有抑制增殖作用,且表现出浓度依赖关系.HE染色在光学显微镜下可见桦褐孔菌组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或形成块,部分细胞膜形成凋亡小体;在倒置显微镜下可见桦褐孔菌组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力明显减弱;在AO/EB双染色荧光显微镜下可见桦褐孔菌组肿瘤细胞胞核染色质呈橘红色,胞质内的橘红色或橘黄色荧光消失,细胞周围有呈亮绿色的荧光凋亡小体;在透射电子显微镜下可见80 mg/L桦褐孔菌提取物组肿瘤细胞核染色质固缩边集,胞质内可见有空泡,凋亡小体凸出于细胞表面.[结论]桦褐孔菌提取物可抑制人胃癌BGC-823细胞株的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡.     

九例误诊为组织胞浆菌病的马尔尼菲青霉病的临床病理分析

目的:对9例诊断为组织胞浆菌病的病例进行复习及特殊染色检查以鉴别诊断.方法:收集本室过去诊断为组织胞浆菌病的9例病例,采用常规HE切片及特殊染色方法进行研究.结果:9例送检组织均为淋巴结,镜下见正常淋巴结结构破坏,巨噬细胞弥漫性增生,细胞内见多少不等的圆形及椭圆形酵母样菌被吞噬,PAS及GMS真菌染色阳性,菌体直径2～3μm,有腊肠状菌和横隔而无芽孢繁殖迹象,可排除组织脑胞菌而符合马尔尼菲青霉病.     

人芽囊原虫滋养体和包囊的形态学观察

用普通光学显微镜和荧光显微镜对人芽囊原虫的三株滋养体和二株包囊进行了形状、大小和结构的观察。滋养体为生长在ＬＡＳ双相培养基内４～５天的培养物;包囊为带虫者粪便经蒸馏水反复３次洗涤的沉淀物,均作涂片,分别以不染色、碘染色和１：１０＾４吖啶橙染色,镜下识别和鉴定,滋养体以空泡型（包括二分裂状态的）占多数,其次为变形型,颗粒型及其它类型少见,颗粒型为多分裂繁殖体,人芽囊原虫包囊形状较单一,都是圆形或卵圆     

荧光染色技术在艾滋病患者活检标本病原学诊断中的应用

目的探讨快速真菌与抗酸分枝杆菌荧光技术在艾滋病患者活检标本病原体诊断中的应用价值及意义。方法选取艾滋病患者500例活检标本,采用快速真菌荧光染色及六胺银、PAS染色对300例可疑真菌感染的活检标本进行检测,采用抗酸分枝杆菌荧光染色及萋尼抗酸染色对200例可疑结核的活检标本进行检测,并对检测结果进行对比。结果（1）快速真菌荧光镜检法检出阳性205例（阳性率68.3%）,六胺银染色法检出阳性209例（阳性率69.7%）,PAS染色法检出阳性97例（阳性率39.5%）,快速真菌荧光染色与六胺银染色检出阳性率差异无统计学意义（P>0.05),但高于PAS染色法;（2）抗酸分枝杆菌荧光染色检出阳性179例（阳性率89.5%）,萋尼抗酸染色法检出阳性117例（阳性率58.5%）,抗酸分枝杆菌荧光染色阳性率高于萋尼抗酸染色法,两者差异有统计学意义（P<0.01）;（3）荧光染色比常规特殊染色操作更快速、简便、显示更清晰。结论艾滋病患者并发机会性感染病原体种类多样,普通的特殊染色阳性率不高并且费时费力,而快速真菌及抗酸荧光染色特别是抗酸荧光染色的阳性率明显增高,为活检组织诊断真菌及结核分枝杆菌感染提供一种快速、准确、经济、对比更清晰的染色方法,能够为真菌感染及结核病患者诊断提供可靠的指导依据,值得在病原体诊断工作中广泛使用。     

微生物诊断的某些新进展

细菌、原虫、真菌等快速镜检的方法这类方法比较简单,只要有适当的显微镜及必要的条件,基本上在基层都可以进行。普通染色法包括固紫(革兰氏)染色,吕氏硷性美兰染色,抗酸染色,芽胞染色,鞭毛染色,荚膜染色,暗视野观察,以及荧光抗体或酶抗体染色。有条件可进行电镜观     

二十碳五烯酸协同长春瑞滨对人肺癌A-549细胞的作用

[目的]探讨二十碳五烯酸(EPA)联合长春瑞滨(NVB)对人肺癌A-549细胞株的增殖、凋亡及细胞周期的影响.[方法]选用人肺癌A-549细胞株进行体外培养.应用倒置显微镜、HE染色、AnnexinⅤ-PI双染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化.应用流式细胞仪检测EPA和NVB联合作用于人肺癌A-549细胞株后细胞凋亡情况.[结果]在倒置显微镜下,用EPA处理的A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞膜起泡形成凋亡小体,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱.HE染色:在倒置显微镜下,EPA处理组A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞核脱落,有的细胞膜起泡形成凋亡小体.MTT实验结果表明,EPA在15～45 mg/L范围内,于24,48,72h对肺癌A-549细胞株均有抑制生长作用且与NVB有协同作用,并表现出质量浓度、时间依赖性关系.在An-nexinⅤ-PI双染色荧光显微镜下,实验组A-549肿瘤细胞核染色质呈红色或A-549肿瘤细胞呈绿色,细胞周围可见亮绿色荧光的凋亡小体.流式细胞仪检测结果发现,EPA联合NVB组的凋亡率较单用NVB组明显增加.[结论]EPA与NVB对人肺癌A-549细胞的抑制具有协同作用,与单用NVB相比,联合应用可减少NVB的用药剂量.     

兔髓核细胞原代培养及其生物学特性的实验研究

目的建立兔髓核组织体外直接分离培养的方法及其相关生物学特性的测定。方法取2周龄健康日本大耳白兔,无菌条件下分离出椎间盘凝胶状髓核组织,直接加入含有20%FBS的DMEM培养液中培养,倒置显微镜下观察原代髓核细胞的形态;细胞爬片培养后进行甲苯胺蓝和番红O染色观察;通过RT-PCR法,免疫组化法检测Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达;MTT法绘制髓核细胞生长曲线。结果髓核细胞甲苯胺蓝和番红O染色显示阳性;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和蛋白聚糖免疫组化荧光检测呈阳性;RT-PCR鉴定发现细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白聚糖mRNA表达阳性;MTT生长曲线与体外细胞培养时生长过程相符。结论成功建立了髓核组织直接分离培养方法,原代髓核细胞生长状态良好,为组织工程髓核的种子细胞研究提供了实验依据。     

离体耳蜗毛细胞凋亡形态及凋亡率

目的探讨离体时相对耳蜗毛细胞的凋亡改变。方法采用胶原酶制备离体耳蜗毛细胞，0．01％吖啶橙进行荧光染色，在倒置显微镜、荧光显微镜和电镜下观察凋亡改变。结果凋亡毛细胞的主要形态特征包括：胞膜完整，有皱折扭曲，双折光现象明显减弱或消失；胞核位置基本正常，有时胞核皱缩；纤毛泡状或倒伏；胞质内可见布朗运动。荧光显微镜下凋亡毛细胞呈红色或红黄色荧光，毛细胞形态完整，无胞膜破裂或胞质溢出。随着离体时间延长，毛细胞凋亡数逐步增多，凋亡率增高。结论离体环境下凋亡细胞有其独特的形态特征，跟活性毛细胞和坏死毛细胞有明显差别；随着离体时间的延长，毛细胞凋亡率逐渐增高。     

荧光下豚鼠听觉离体毛细胞的凋亡改变

目的:探讨离体耳蜗毛细胞的凋亡改变。方法:采用胶原酶制备离体耳蜗毛细胞、0.01%吖啶橙进行荧光染色,荧光显微镜观察凋亡改变。结果:凋亡毛细胞的主要形态特征包括:胞核皱缩;荧光显微镜下凋亡毛细胞呈红色或红黄色荧光,毛细胞形态完整,无胞膜破裂或胞质溢出。结论:离体耳蜗毛细胞的凋亡改变使细胞呈红色或红黄色荧光,胞膜完整。     

Tunel检测凋亡细胞后直接行HE染色法探讨

目的近一步确认TUNEL法检测石蜡组织切片中凋亡细胞在组织中具体分布位置及毗邻组织结构。方法取2例试剂盒中阳性对照石蜡切片和10例肝硬化石蜡组织切片进行法检测凋亡细胞,并以荧光显微镜激发荧光,观察组织细胞凋亡情况;荧光显微镜观察后直接省去脱蜡与复水程序,行HE染色。结果以生物素标记的地高辛抗体行SABC-FITC进行荧光显色后,所有石蜡组织切片均可以直接行HE染色。从而实现在同一张切片下实现两种检测方法,达到"一片两用"的效果。结论 TUNEL法检测凋亡细胞后可以直接行HE染色,有助于进一步确认何种细胞凋亡及其周围组织结构,而且缩短了HE染色的时间,在同一张切片上可以先后进行TUNEL法检测凋亡细胞和HE染色。     

弹力纤维瘤4例的病理学观察

弹力纤维瘤较少见,1959年由Jrvi首次报道。作者报告4例的组织学检查发现:常规HE和Weigert弹力纤维染色片瘤组织中,有大量增生的弹力纤维,荧光显微镜下具强的自发荧光。认为此瘤为起源于弹力纤维的真性肿瘤。     

流式细胞术用于特比萘芬着色芽生菌的药敏试验研究

探索建立快速、敏感、可靠的评价抗真菌药物活性的方法。方法流式细胞术检测不同药物浓度作用下各药物浓度管的荧光强度，根据荧光强度的梯度变化趋势，判定特比萘芬对７株着色芽生菌的抗菌活性。结果 全部试验过程中不足２５ｈ，所测最小抑菌浓度与液基稀释法对比相差不超过３个倍比稀释浓度，两者有很好的一致性。     

姜黄挥发油对人肺腺癌A549细胞作用的形态学研究

目的研究中药姜黄提取物姜黄挥发油对人肺腺癌A549细胞的作用.方法采用倒置显微镜、Giemsa染色及丫啶橙荧光染色观察不同浓度姜黄挥发油作用下人肺腺癌A549细胞形态的变化.结果①倒置显微镜下见,不同浓度(0.08～1.5 μl/ml)的姜黄挥发油处理肺癌细胞24～72 h后,肺癌细胞呈散在分布,细胞稀少,大多数为圆形或椭圆形,显示细胞增殖受到抑制,上述变化与姜黄挥发油的浓度有关;②Giemsa染色实验表明,姜黄挥发油作用24～72 h后,0.8 μl/ml组和1.0 μl/ml组细胞凋亡率分别为34%和42%,与阴性对照组(13.5%)比较差异显著(P<0.01),凋亡细胞多表现为胞体缩小、变圆,核浓缩,呈紫黑色;③丫啶橙荧光染色可较细致地显示细胞凋亡时的多种结构、形态改变,能够发现较早期的凋亡细胞,因而其敏感度可能更高.结论姜黄挥发油可抑制肺癌细胞的生长和增殖,对肺癌细胞有诱导凋亡作用.