应用分子杂交技术对“子宫颈癌高危患者”筛查及随访的临床——病…

目的：应用分子杂交技术对子宫颈癌高危患者进行筛查及随访的临床－病理学研究。方法：应用缺口翻译法＾３２Ｐ－标记的ｈＰＶ１６，１８，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ－１及ｃ－ｍｙｃ－ＤＮＡ与子宫颈组织中的ＤＮＡ进行分子杂交，并通过Ｘ线胶片显示杂交结果，结果：慢性子宫颈炎组织中ｈＰＶ１６，１８，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ－１及ｃ－ｍｙｃ阳性２９例，经１年随访，４例病情加重，２例手术治疗，２例保守治疗，４种高危因素均为阴性者随访２     

P^21ras c—mycp53和雌孕激素受体在子宫内膜癌的表达

应用免疫组化ＬＳＡＢ法，对３２例子宫内膜癌，６例腺瘤型增生，２０例腺囊型增生组织的癌基因Ｐ＾２１ｒａｓ，ｃ－ｍｙｃ及抑癌基因ｐ５３蛋白表达进行了检测，对３２例子宫内膜癌进行了雌，孕激素受体的检测，并对子宫内膜癌组织Ｐ＾２１ｒａｓ，ｃ－ｍｙｃｐ５３过度表达与雌，孕激素受体的关系了分析，结果显示：Ｐ＾２１ｒａｓｃ－ｍｙｃｐ５３在子宫内膜癌组织中的阳性表达率分别为５９．４％，６２．５％和１８．８％，雌，     

原癌基因C—myc,C—N—ras,C—Di—ras,C—erbB2在卵巢癌组织中的…

对３２例巢癌、４例卵巢良性上皮性肿瘤、３例卵巢上皮性交界性肿瘤及２例正常卵巢组织进行ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交研究，发现在卵巢癌组织中原癌基因Ｃｍｙｃ，Ｃ－Ｎ－ｒａｓ和Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ，Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增率分别为５０％、４４％、３１％、２５％。Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ扩增主要发生在早期和分化好的卵巢癌患者中。Ｃ－Ｎ－ｒａｓ扩增在晚期患者也有表现。Ｃｍｙｃ和Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增主要发生在Ⅲ期以上、分化较差     

c—Ha—ras,c—erbB2癌基因产物和p53,nm23抑癌基因产物对葡萄？…

目的：探讨ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因产物和ｐ５３ｎｍ２３抑癌基因产物表达异常和葡萄胎恶变的关系及在预测葡萄胎恶变的价值。方法：采用针对４种基因产物的单克隆抗体，ＳＰ法免疫组织化学染色，回顾分析了≥２ａ随访证实发生恶变的葡萄胎５０例（恶变组）和未发生恶变的葡萄胎３２例（非恶变组）中４种基因产物的表达情况，结果：恶变组中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ和ｎｍ２３基因产物的表达程度显著低于非恶变组（Ｐ〈０．     

c-Ha-ras、c-erbB_2癌基因产物和p53、nm23抑癌基因产物对葡萄胎恶变的预测价值

目的：探讨ｃ－Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因产物和ｐ５３、ｎｍ２３抑癌基因产物表达异常和葡萄胎恶变的关系及在预测葡萄胎恶变的价值。方法：采用针对４种基因产物的单克隆抗体，ＳＰ法免疫组织化学染色，回顾分析了≥２ａ随访证实发生恶变的葡萄胎５０例（恶变组）和未发生恶变的葡萄胎３２例（非恶变组）中４种基因产物的表达情况。结果：恶变组中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ和ｎｍ２３基因产物的表达程度显著低于非恶变组（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．００１）；恶变组中ｃ－ｅｒｂＢ２及ｐ５３基因产物的表达程度显著高于非恶变组（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。进一步以４种基因产物的表达程度为变量，进行ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归判别分析，表明４种基因产物联合应用对葡萄胎恶变的预测敏感性率为８６％，特异性率为７８．１％，而ｌｏｇｉｓｔｉｃ逐步回归判别分析显示，ｃ－ｅｒｂＢ２和ｎｍ２３基因产物联合应用时，对葡萄胎恶变的预测敏感性率为８４％，特异性率为７５％。结论：ｃ－Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因产物及ｐ５３、ｎｍ２３抑癌基因产物表达异常与葡萄胎恶变密切相关，用以预测葡萄胎恶变具有较高的价值     

子宫颈癌及慢性子宫颈炎组织中ras致癌基因产物p~(21)蛋白表达临床意义的研究

目的：研究ｒａｓ致癌基因产物ｐ２１蛋白（ｒａｓｐ２１）在子宫颈癌和慢性子宫颈炎组织中的表达情况及其临床意义。方法：采用流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测４０份子宫颈癌和２０份慢性子宫颈炎标本中ｒａｓｐ２１的表达。结果：用荧光指数（ＦＩ）表示ｒａｓｐ２１的表达，慢性子宫颈炎组织中有一定量ｒａｓｐ２１的表达，子宫颈癌的ＦＩ明显高于慢性子宫颈炎，且随子宫颈癌组织学分级的升高ＦＩ增加。结论：临床检测ｒａｓｐ２１有助于判断子宫颈癌的恶性度和及时发现早期子宫颈癌。     

原癌基因C－myc、C－N－ras、C－Ki－ras、C－erbB2在卵巢癌组织中的扩增

对３２例卵巢癌、４例卵巢良性上皮性肿瘤、３例卵巢上皮性交界性肿瘤及２例正常卵巢组织进行ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交研究，发现在卵巢癌组织中原癌基因Ｃ－ｍｙｃ、Ｃ－Ｎ－ｒａｓ和Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ、Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增率分别为５０％、４４％、３１％、２５％。Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ、Ｃ－Ｎ－ｒａｓ扩增主要发生在早期和分化好的卵巢癌患者中。Ｃ－Ｎ－ｒａｓ扩增在晚期患者中也有表现。Ｃ－ｍｙｃ和Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增主要发生在Ⅲ期以上、分化较差的患者中。所有死亡患者均有Ｃ－ｅｒｂＢ２基因扩增，两种以上癌基因扩增者占死亡者８３％。     

正常胎盘及葡萄胎滋养细胞H—ras和C—myc基因产物表达

目的：探索ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白在正常胎盘发育中的作用及ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白表达与葡萄胎临床预后关系。方法：用免疫组化方法，分析４０例正常胎盘及５０例葡萄胎组织Ｈ－ｒａｓ和Ｃ－ｍｙａ基因蛋白表达情况。结果：孕早期胎盘ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白的表达部位主要在细胞滋养细胞，表达率分别为７０％和８０％，孕早期表达部位主要在全体滋养细胞，表达率逐渐降低，足月时表达消失。葡萄胎ｒａｓ、ｍｙｃ基因蛋白表达率分     

子宫颈癌p53抑癌基因突变与病毒感染的研究

采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、多重引物ＰＣＲ和巢式引物ＰＣＲ，对同一宫颈癌组织中ｐ５３基因（第６～８外显子）突变以及人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染进行相关性研究。并与正常宫颈组织进行对照。结果：３８例宫颈癌组中，２例有ｐ５３第７外显子突变。其中１例伴有ＨＰＶ１６感染，２例伴有ＨＣＭＶ感染。宫颈癌组ＨＰＶＩ６、１８ＤＮＡ的阳性率为６３．２％（２４／３８），ＨＣＭＶＤＮＡ为８４．２％（３２／３８）。２１例对照组中，ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ和ＨＣＭＶＤＮＡ的阳性率分别为４．８％和３８．１％（Ｐ＜０．００５）。ＨＰＶ１６、１８阳性的子宫颈癌中，８７．５％伴有ＨＣＭＶ感染。对照组中，无一例同时检测出ＨＰＶ１６、１８和ＨＣＭＶ者。提示：宫颈癌组织中，ｐ５３基因突变并不常见，其突变与ＨＰＶ１６、１８感染无显著关系。宫颈癌与ＨＰＶ１６、１８关系密切，ＨＣＭＶ可能与ＨＰＶ协同作用，导致宫颈癌的发生。     

人子宫颈高分化鳞癌裸鼠移植瘤株的建立及其生物学特征的研究

目的：建立人子宫颈癌裸鼠移植瘤株，为开展宫颈癌的实验研究奠定基础。方法：将子宫颈高分化鳞癌手术标本移植于裸鼠皮下，生长后，于鼠间连续传代，并检测移植瘤的相关生物学特征；进行光镜、电镜观察和染色体分析；用免疫组化技术检测ＥＲ、ＰＲ、Ｋｅｒａｔｉｎ、ＣＥＡ、ＰＣＮＡ，Ｐ５３、ｎｍ２３、ＨＥＲ－２；用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测ｈＰＶ１６、１８、ＨＳＶ－Ⅱ、ＣＭＶ；用流式细胞术检测ＤＮＡ含量；进行铂类抗癌药物敏感试验以及癌细胞的体外培养等。结果：历时１７个月，传了２６代，建成人子宫颈高分化鳞癌裸鼠移植瘤株，命名为ｈＣＣ－９４Ｖ。瘤株生长稳定，潜伏期１６～２０ｄ，移植成功率９２．９％，浸润转移率１１．１％。光镜、电镜下形态学与患者肿瘤结构特征一致。染色体多为异倍体，总数为９～１２０条。免疫组化检测肿瘤标记物（ＴＭ）呈高表达，癌基因蛋白呈低表达。ＰＣＲ检测ｈＰＶ１６（＋），对铂类抗癌药物敏感。用移植瘤建成体外培养细胞系ｈＣＣ－９４Ｖ及其亚株。结论：ｈＣＣ－９４为进一步进行子宫颈癌的实验研究提供了理想的动物模型和瘤源     

新疆维吾尔族妇女子宫颈癌活检组织中人类乳头状瘤病毒DNA的检测

目的：研究我国宫颈癌高发区新疆维吾尔族妇女宫颈癌与人类乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系。方法：对６５例新疆维吾尔族妇女的宫颈癌活检组织标本，应用原位杂交法检测ＨＰＶ６／１１、１６／１８和３１／３３／３５ＤＮＡ；Ｌ１共有序列引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）及Ｅ６特异型引物ＰＣＲ检测其中的５８例ＨＰＶ６、１６和１８ＤＮＡ。结果：６５例宫颈癌患者中，原位杂交法检测ＨＰＶＤＮＡ有２８例阳性（４３．１％）；Ｌ１ＰＣＲ和Ｅ６ＰＣＲ检测ＨＰＶＤＮＡ阳性分别为１３例（２２．４％）和４５例（７７．６％）。结论：对宫颈癌标本中的ＨＰＶＤＮＡ检测，Ｅ６特异性引物ＰＣＲ敏感性最高，Ｌ１ＰＣＲ及原位杂交相对较低。新疆维吾尔族妇女宫颈癌发病与ＨＰＶ感染有密切关系。     

癌基因、妊娠性滋养细胞增生与葡萄胎恶变关系的研究

目的：探讨癌基因、妊娠性滋养细胞增生程度与葡萄胎恶变的关系。方法：采用针对Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ及Ｃ－ｅｒｂＢ２基因表达产物Ｐ２１和Ｐ１８５的单克隆抗体进行免疫组织化学染色。检测８２例葡萄胎中两种基因产物的表达情况，经２年以上随访证实未发生恶变３２例为非恶变组，经手术和临床证实发生恶变５０例为恶变组，其中３５例行手术治疗。结果：恶变组Ｐ２１的表达程度低于非恶变组（Ｐ＝０．００８２）；Ｐ１８５的表达显著高于非恶变组（Ｐ＝０．００２８）。手术治疗的３５例中，恶变后两种基因产物的表达改变较恶变前更明显。两组葡萄胎中滋养细胞增生程度差异无显著性（Ｐ＝０．４１３）。不同来源的绒毛膜癌（绒癌）之间及绒癌与侵蚀性葡萄胎（侵葡）之间，Ｐ２１和Ｐ１８５的表达差异亦无显著性（Ｐ＝０．２６８，Ｐ＝０．７１９）。结论：Ｐ２１的低表达及Ｐ１８５的高表达与葡萄胎恶变有关，但与其恶性转化方向无关；滋养细胞增生程度与葡萄胎恶变亦无关。     

The possibility of viral etiology in cervical carcinogenesis

Oncogenic potential of herpes simplex virus type 2 (HSV-2) and human papillomavirus (HPV) which are both associated with occurrence of cervical cancer and the mechanism of oncogenesis by these viruses were investigated by transformation experiments in vitro. The results were obtained as follows. 1) HSV-2 induced neoplastic transformation of normal diploid cells is a multistep process. Cervical cancer associated antigen AG-4 is encoded within the specific region of HSV-2 DNA which converts immortalized cells to tumorigenic lines. 2) Tumor cells express cellular oncogene at a final stage of neoplastic transformation induced by HSV-2 and "hit and run" theory is applicable to oncogenesis of this virus. 3) Complete carcinogenesis can be mediated by HPV-16 or HPV-18 DNA under collaboration with other cofactors such as HSV-2. 4) It is suggested that neoplastic transformation induced by HPV-18 DNA is based on "hit and run" oncogenesis. 5) HPV-16 or HPV-18 DNA can immortalize primary diploid cells and convert them to fully tumorigenic phenotype by repeating cell passage. 6) It has been experimentally proved that the difference in transforming potential exists between HPV 6/11 and HPV 16/18. 7) Amplification and overexpression of c-myc oncogene was detected in transformed cells obtained by HPV-16 transfection. While overexpression of c-myc was detected in transformed cells induced by HPV-18 DNA, but no amplification was observed. On the other hand, detection of HPV, DNA and amplification or overexpression of protooncogenes was performed in cervical intraepithelial neoplasias (CIN) and invasive cervical carcinomas. The results were summarized as follows. 1) HPV DNA was detected in approximately 70% of a population with CIN by in situ hybridization. CIN II showed the highest incidence of positive HPV DNA (91%), and the positive ratio decreased in CIN III (56%). 2) Immunohistochemical study of paraffin-embedded specimens with monoclonal antibodies to oncogene products revealed that only some of cervical invasive carcinomas expressed c-myc protein, ras p21 or EGFR. 3) HPV DNA was detected in 46% of invasive cervical carcinomas by Southern blot hybridization. The percentage of patients with positive results for HPV 16/18 was 29%. However, it increased up to 58% by use of polymerase chain reaction (PCR), suggesting that there are many cervical cancer tissues in which a number of cells lack viral DNA. 4) Northern blot hybridization analysis revealed overexpression of c-myc mRNA in 30% of cervical invasive carcinomas although amplification of c-myc oncogene was detected in only one of invasive carcinomas.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)     

HSP70在子宫颈鳞癌中的表达及与P53、c-myc表达的关系

目的 :探讨热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP70 )在宫颈鳞癌组织中的表达 ,以及它与抑癌基因p5 3、原癌基因c myc表达之间的关系。方法 :采用免疫组化SABC法检测正常宫颈上皮组织、癌前病变宫颈上皮组织和浸润性宫颈鳞癌组织中HSP70、P5 3蛋白、c myc蛋白的表达 ,并分析其相互关系。结果 :HSP70在正常宫颈上皮组织、癌前病变宫颈组织和浸润性宫颈鳞癌组织中的免疫组化记分呈递增趋势 ,两两相比差异有显著性。HSP70免疫组化记分随鳞癌组织分化程度降低而升高。浸润性宫颈鳞癌中P5 3蛋白阳性组和c myc蛋白阳性组HSP70组织化学记分分别高于P5 3阴性组和c myc阴性组。结论 :HSP70表达与宫颈鳞癌发生发展有关 ,且与较低分化程度有关。HSP70可能通过与P5 3蛋白和c myc蛋白之间某种相互作用参与宫颈鳞癌的发生发展     

阴道上皮内瘤变28例临床分析

目的: 探讨阴道上皮内瘤变(VAIN)的临床特点、危险因素、诊治及预后。方法: 回顾性分析北京协和医院2005-2011年住院收治VAIN病例28例临床资料。其中VAINⅡ7例,VAINⅢ21例。结果: 患者年龄29～76岁(中位年龄48岁)。绝经21例(75%)。26例(93%)无临床症状。25例(89%)病变位于阴道顶端。27例进行超薄液基细胞学涂片(TCT)检查异常。23例人乳头瘤病毒(HPV)检测阳性。15例有子宫切除术史,其中因宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌切除子宫10例。子宫切除术后至诊断VAIN时间：宫颈疾病平均3.1年,非宫颈疾病8.8年。不同级别VAIN在年龄、子宫切除原因、目前及既往合并宫颈疾病、TCT结果差异无统计学意义。28例全部进行手术治疗,3例术后复发。结论: HPV病毒感染、宫颈病变、宫颈病变或宫颈癌行子宫切除术史是VAIN的危险因素;细胞学-阴道镜-组织病理学适用于VAIN的诊断及随诊;宫颈病变切除子宫治疗后应密切随访,尤其是术后3年内应警惕VAIN。　　     

女性肾移植患者合并下生殖道癌前期病变的临床分析

目的:了解女性肾移植患者发生下生殖道癌前期病变的临床特征。方法:回顾分析阴道镜门诊应用宫颈细胞学、阴道镜与组织病理学,检查评估12例肾移植患者是否合并宫颈、阴道、外阴、肛周等部位的癌前期病变;用凯普核酸分子导流杂交基因芯片技术检测其中8例患者宫颈阴道分泌物中人乳头瘤病毒(HPV)基因分型。结果:(1)宫颈细胞学检测结果异常11例;(2)阴道镜检查宫颈转化区异常10例,同时合并阴道或外阴、肛周多部位病变8例;(3)组织病理学诊断结果:宫颈上皮内瘤变(CIN)2～3级5例,CIN1级及(或)宫颈HPV感染6例;同时合并阴道或外阴、肛周多部位病变8例;(4)HPV基因分型的检测结果:高危型HPV感染5例,低危型HPV感染1例;(5)失访1例。获得随访的11例(6～66个月)均持续存在宫颈细胞学及(或)阴道镜检查结果异常,无1例进展为浸润癌。结论:女性肾移植患者发生高危型HPV感染与下生殖道多部位的癌前期病变相当常见。高等级的CIN、外阴上皮内瘤变(VIN)与肛周上皮内瘤变(AIN)的发生率高且消退缓慢。     

Epstein–Barr virus plays little role in cervical carcinogenesis in Korean women

We examined whether Epstein-Barr virus (EBV) infection plays a role in cervical carcinogenesis in Korean women. EBV infection was examined using polymerase chain reaction (PCR) with two different primer pairs flanking the BamHI "W" fragment of EBV and by EBV-encoded small RNAs (EBER) in situ hybridization in various histologic types of cervical cancer, including 17 cases of squamous cell carcinoma, 36 cases of adenocarcinoma, and 3 cases of small-cell carcinoma. We also evaluated 20 cases of cervical intraepithelial neoplasia and 20 cases of normal uterine cervix. One case of squamous cell carcinoma and three cases of cervical intraepithelial neoplasia were positive for EBV DNA using PCR, but EBER in situ hybridization analysis showed that none of the PCR-positive cases expressed EBER. EBV DNA was not found using PCR in any of the 20 normal uterine cervices. From our results, EBV infection does not seem to play a role in cervical carcinogenesis in Korean women.