丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用

目的: 观察丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用。方法: 以1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理Eca-109细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞凋亡的形态,四甲基噻唑氮蓝法检测抑制细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果: Eca-109细胞经丁酸钠处理后:光镜下观察细胞变小、变圆,部分从培养瓶壁上脱落下来;电镜下细胞核体积缩小,染色质浓缩聚集于核膜处;细胞增殖受到明显抑制,1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理24h、48h和72h后,细胞生长抑制率分别是13.38%、34.15%、39.02%,14.04%、33.33%、46.49%和31.11%、40.74%、48.15%,与低浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05~P<0.01);2.5mmon/L丁酸钠处理24h组与阴性对照组细胞凋亡率分别是5.5%和1.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: 丁酸钠可抑制食管癌Eca-109细胞增殖、促进凋亡,且呈浓度和时间依赖性。     

丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中NDRG2的表达及意义

目的：研究丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中抑癌候选基因NDRG2的表达特点及意义．方法：采用丁酸钠诱导结肠癌HT29,SW480,SW620细胞分化,通过碱性磷酸酶（AKP）测定和透射电镜评价结肠癌细胞的分化程度,应用Real time RT—PCR和Western Blot法测定不同分化点（0,1,2,3,4,5,6d）NDRG2mRNA和蛋白的表达特点．结果：经丁酸钠作用24h-6d后,结肠癌细胞中NDRG2基因mRNA和蛋白水平均显著高于对照组水平．结论：丁酸钠诱导结肠癌细胞分化过程中NDRG2表达显著升高,提示NDRG2是参与结肠癌细胞分化的相关基因．     

丁酸钠对乳腺癌细胞增殖的影响

目的研究丁酸钠对乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响。方法观察丁酸钠处理MDA-MB-435S细胞前后细胞生长速度、倍增时间、克隆形成率和细胞周期分布等变化,并进行统计学比较。结果与对照组相比,实验组生长速度明显减慢,倍增时间明显延长(P<0.01),且呈现浓度和时间依赖性。对照组细胞和实验组细胞克隆形成率分别为(75.00±5.67)%和(11.70±2.56)%,对照组高于实验组(P<0.01)。与对照组相比,实验组细胞出现明显的G1期阻滞(P<0.01),G2/M期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论丁酸钠可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-435S的增殖。     

NDRG2对乳腺癌细胞增殖的影响

目的：观察NDRG2（N—myc downstream regulated gene 2）对于乳腺癌细胞系增殖的影响．方法：采用脂质体转染法将NDRG2基因转入乳腺癌细胞系SK-BR-3,经G418筛选后获得稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系SK—BR-3／NDRG2-flag及仅转染载体的SK—BR-3／pcDNA3．1（＋）．应用Western Blot检测NDRG2在转染细胞中的表达;应用平板克隆形成试验、MTT、流式细胞仪检测转染前后细胞增殖能力的差异．结果：成功建立了稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系SK—BR-3／NDRG2-flag;NDRG2的高表达导致了乳腺癌细胞系增殖能力减弱（P〈0．01）：细朐周期阳滞存G0／G1期．结论：存乳腺痛细胞系SK—BR-3中,过表达NDRG2可有效抑制细胞增殖并导致细胞周期的阻滞．     

Bax蛋白在丁酸钠诱导食管癌细胞凋亡中的表达

目的:探讨丁酸钠对人食管癌Eca-109细胞凋亡的作用。方法:以1 mmol/L、2.5 mmol/L和5 mmol/L丁酸钠分别与人食管癌Eca-109细胞共培养,倒置显微镜观察细胞生长情况,免疫组化(SP)法检测凋亡抑制基因bax蛋白的表达。结果:Eca-109细胞经丁酸钠处理后,在倒置显微镜下观察到丁酸钠处理后的Eca-109细胞形态学发生了改变,细胞生长明显受到抑制;免疫组化检测实验组细胞的bax蛋白表达阳性率低于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。结论:丁酸钠可诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,其机制与下调凋亡抑制基因bax蛋白表达有关。     

全反式维甲酸对食管癌EC9706细胞NDRGl mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响.方法:将10μmol/LATRA作用于人食管癌EC9706细胞,应用免疫组织化学SP法和RT-PCR方法分别检测对照组及ATRA作用1 d、2d、3 d及5 d组NDRG1蛋白和mRNA的表达.结果:ATRA作用1 d、2 d、3 d及5 d组NDRG1 mRNA相对含量分别为1.47±0.18、1.69±0.24、1.72±0.19和1.58±0.25,均高于对照组的1.08±0.10(P＜0.05或0.01).ATRA作用1 d、2 d、3 d及5 d组NDRG1蛋白表达积分分别为254±37、277±34、265±30和239±24,均高于对照组的164±29(P＜0.01).结论:ATRA可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1的表达,从而促进其分化.     

1,25-(OH)2VitD3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响

目的了解1，25-（OH）2VitD3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响。方法采用1,25-（OH）2VitD3作用于人食管癌EC9706细胞，应用免疫组化和RT—PCR方法分别检测1,25-（OH）2VitD3作用不同时间后NDRG1基因的表达。结果1，25-（OH）2-VitD3作用24h～5d NDRG1基因蛋白和mRNA均显著高于对照组水平（P〈0．05）。结论1,25-（OH）2 VitD3可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1表达，促使其分化。     

食管鳞癌组织中NDRGl mRNA和蛋白的表达

目的：探讨食管鳞癌组织中NDRGlmRNA和蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系。方法：分别采用RT-PCR和免疫组织化学SP法检测49例食管鳞癌组织（分化程度Ⅰ级14例，Ⅱ级23例，Ⅲ级12例；有淋巴结转移2l例，无淋巴结转移28例）、23例癌旁不典型增生黏膜组织及49例正常食管黏膜组织中NDRG1 mRNA和蛋白的表达。结果：食管鳞癌组织中NDRG1 mRNA相对含量低于癌旁不典型增生黏膜组织及正常食管黏膜组织（P〈0．05或0．01）；不同分化程度的食管鳞癌组织之间NDRG1 mRNA相对含量差异无统计学意义（P〉0．05）；伴淋巴结转移的食管鳞癌组织与无淋巴结转移的食管鳞癌组织NDRG1 mRNA相对含量差异无统计学意义（P〉0．05）。癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中NDRG1蛋白（＋＋）阳性率（3／23和4／49）均低于正常黏膜组织的43／49（P〈0．01）；食管鳞癌组织中NDRG1蛋白表达与癌组织的分级及有、无淋巴结转移无关（P均〉0．05）。结论：食管鳞癌组织中NDRG1 mRNA和蛋白表达降低，其低表达可能与食管鳞癌发生有关。     

丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞的数量及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平的影响,探讨丁酸钠对HeLa细胞增殖的作用及相关机制。方法体外分组培养的HeLa细胞分别加入不同浓度的丁酸钠作用72h后,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞生长情况,逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组细胞VEGFmRNA表达情况。结果经不同浓度的丁酸钠作用后,宫颈癌HeLa细胞增殖水平及VEGFmRNA表达水平较对照组均有明显降低,在一定范围内呈现浓度依赖性。结论丁酸钠不但能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,还可抑制宫颈癌HeLa细胞VEGF基因的表达水平。丁酸钠抑制VEGF基因表达水平的作用可能是其抑癌机制之一。     

NDRG3对前列腺癌细胞致癌潜能的影响

目的：研究过表达外源性和RNA干扰内源性NDRG3对前列腺癌细胞克隆形成的影响。方法：将NDRG3表达质粒稳定转染人类PC3前列腺癌细胞株,用1个NDRG3稳定表达亚克隆与做为对照的亲代和空质粒转染的PC3细胞进行克隆形成实验;同时利用RNA干扰技术沉默CL-1细胞的内源性NDRG3,并用Western blotting技术进行鉴定,在对照组、GFP-siRNA组和NDRG3-siRNA组进行克隆形成实验。结果：过表达外源性NDRG3的PC3细胞形成的克隆数明显多于亲代和空质粒转染的PC3细胞株;在RNA干扰实验中,CL-1对照组和GFP-siRNA组形成的总克隆数和大克隆数均明显多于NDRG3-siRNA组（P<0.05）。结论：NDRG3可以提高前列腺癌细胞的致癌潜能和克隆形成能力。     

上调stathmin基因表达对食管鳞癌EC9706细胞的作用

目的 构建stathmin基因真核表达载体,研究上调stathmin基因表达对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用RT-PCR扩增stathmin cDNA,克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体.重组载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染细胞株.显微镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞stathmin蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成,流式细胞仪分析细胞周期,裸鼠移植瘤实验研究转染细胞的成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pcDNA3.1(+)载体,获得pcDNA3.1-stathmin重组表达载体.Western印迹法证实重组载体上调EC9706细胞stathmin蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组细胞比较,pcDNA3.1-stathmin转染细胞形态变大、多核、有丝分裂障碍;pcDNA3.1-stathmin转染细胞倍增时间延长(25～28 h)、增殖活性降低、细胞克隆形成率下降(34.5%±6.9%),细胞分裂阻滞于G2/M期(21.7%±3.4%),裸鼠体内致瘤性降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 重组质粒pcDNA3.1-stathmin上调stathmin基因表达能够抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖和致瘤性,stathmin可能成为食管鳞癌患者治疗的理想靶点.     

丁酸钠抑制人喉癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的 研究丁酸钠对人喉癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法 将人喉癌细胞株Hep-2细胞接种于12只裸鼠皮下,建立喉癌移植瘤模型.分为实验组和对照组,每组6只,分别给予丁酸钠和磷酸盐缓冲液(PBS)治疗4周.治疗过程中定期测量肿瘤大小及裸鼠体质量,于治疗结束时取肿瘤组织切片进行HE染色、电镜观察、TUNEL标记及免疫组化S-P法检测Ki-67、survivin蛋白表达情况,取心、肝、肺、脾、肾等组织切片进行药物毒性评估.结果 治疗组肿瘤体积明显小于对照组,肿瘤组织内坏死面积增大,细胞凋亡率显著增高,Ki-67核抗原、survivin蛋白表达水平降低.治疗过程中裸鼠生长良好,无明显毒性反应.治疗结束时,心、肝、肺、脾、肾组织切片光镜下检查未见异常.结论 丁酸钠对人喉癌裸鼠皮下移植瘤有明显的生长抑制作用,其机制可能与抑制survivin表达而诱导细胞凋亡及抑制Ki-67表达有关.治疗剂量的丁酸钠对裸鼠心、肝、肺、脾、肾等组织无毒性.     

正丁酸钠对人胃腺癌细胞超微结构的影响

本实验观察到正了酸钠能有效地抑制人胃腺癌细胞系的增殖,查明其生长特性。在光镜下看到,经过正丁酸钠处理的胃癌细胞体积增大,充分铺展,核与质比例下降。电镜下可见这些细胞表面微绒毛减少或消退;高尔基复合体组数增多,体积较大,具有典型的完整结构;粗面内质网变长;游离核糖体减少。这两类形态结构的变化可作为癌细胞分化的指标。     

NDRG1基因在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨分化相关基因NDRG1蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶链接法检测子宫内膜癌组、不典型增生子宫内膜组及正常子宫内膜组中NDRG1蛋白的表达.结果 子宫内膜癌组中NDRG1表达水平明显高于不典型增生子宫内膜组及正常子宫内膜组,表达水平与肌层浸润、淋巴结转移有关,深肌层浸润的表达高于浅肌层浸润,有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移,NDRG1蛋白表达与癌组织的分级、FIGO临床分期无关.结论 NDRG1蛋白的高表达与子宫内膜癌的发生发展有关;检测NDRG1蛋白对于子宫内膜癌的早期诊断有重要参考价值.     

复方苦参注射液对人食管鳞癌EC9706细胞凋亡及生长抑制的影响

目的 探讨复方苦参对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制和诱导凋亡作用.方法 体外实验分为复方苦参25.00 μl/ml组、6.25 μl/ml组及对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达.流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡,Western印迹检测细胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、Bc1-2及Fas蛋白的表达.平板克隆形成实验测定细胞克隆形成率.裸鼠移植瘤实验检测复方苦参的体内抑瘤作用,分为200μl／d治疗组、25μl／d治疗组及生理盐水对照组.SP法检测移植瘤PCNA及Bc1-2的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果 体外实验中25.00 μl/ml组细胞48、72、96h增殖活性均低于对照组(均P＜0.01);PCNA表达水平及体外克隆形成率均低于对照组(均P＜0.05);细胞凋亡率、激活型caspase—3表达及Fas表达均高于对照组[(25.2±7.3)％比(3.4±1.5)％、(21.3±4.4)％比(1.8±0.6)％、(30.2±8.3)％比(5.4±1.6)％,均P＜0.01],Bc1-2表达低于对照组(P＜0.01).动物实验200μL／d治疗组瘤体质量低于生理盐水对照组[ (987±386) nmg比(1935±838) mg,P＜0.01],凋亡指数高于生理盐水对照组[(33.8±8.7)％比(5.3±1.4)％,P＜0.01].结论 复方苦参能够抑制EC9706细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻止移植瘤生长.诱导凋亡机制可能与EC9706细胞周期阻滞、Bc1-2表达下调、Fas表达上调及caspase-3激活有关.