细胞周期蛋白E在急性白血病中表达的研究(摘要)

目的研究细胞周期蛋白E(Cyc linE)在成人急性白血病(AL)患者中的表达,探讨CyclinE在急性白血病中的作用机制及其临床意义·方法应用免疫细胞化学SP法检测32例成人AL患者和20例对照CyclinE的表达,并用蛋白印迹(Western-blot)法检测其中22例AL患者及10例对照CyclinE的表达,分析CyclinE在成人AL·患者中有无异常表达及其表达与病情进展和预后的关系·结果32例成人AL患者CyclinE阳性表达率(71·8%)明显高于对照组(10%)(P<0·001),急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者CyclinE阳性表达率均高于对照组(P<0·01…     

运动神经元190KD蛋白的免疫细胞化学研究

采用ＳＤＳ凝胶电泳方法从人脊神经前根中分离出运动神经元特有的蛋白组份１９０ＫＤ。将该蛋白作为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经杂交瘤技术，获得抗１９０ＫＤ蛋白的单克隆抗体。     

细胞周期蛋白A2在肝细胞癌中的表达及其意义

目的：探讨细胞周期蛋白A2(CCNA2)在肝细胞癌（HCC）中的表达及其意义。方法：从TCGA、GEO、GETx数据库获得测序数据,通过STATA 15.0进行meta分析评估HCC患者肿瘤组织中CCNA2 mRNA的表达水平;通过数据库GEPIA绘制CCNA2在HCC中的生存曲线,探究CCNA2对HCC预后的影响。在HCC细胞系（Huh7和SK-Hep1）沉默CCNA2(shCCNA2组),并设置空载体对照组（shNC组）,通过细胞功能学实验检测沉默CCNA2对HCC细胞增殖、迁移与侵袭、细胞周期和细胞凋亡中的影响。通过在鸡胚绒毛尿囊膜构建HCC细胞移植瘤模型,观察并分离瘤体,检测CCNA2在体内对HCC生长的影响。结果：CCNA2在HCC患者肿瘤组织中m RNA水平显著高于非癌肝组织（SMD=1.65,95%CI:1.46～1.85,I2=89%）。CCNA2高表达与肝癌患者的不良预后呈负相关关系。与shNC组相比,shCCNA2组细胞增殖、迁移和侵袭能力降低（P<0.05）。shCCNA2组Huh7和SK-Hep1细胞的G0/G1期、S期、G2/M期占比发生改变（P<...     

三氧化二砷对人肝癌细胞周期相关基因表达的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞周期的阻滞作用及相关基因的表达.探讨As2O3抗肝癌作用的机理.方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化;通过免疫细胞化学检测cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达.结果 As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1期.与对照组比较,经As2O3作用的人肝癌细胞cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达减少.结论 As2O3 通过干扰细胞周期的进程,下调cyclinD1、PCNA基因编码蛋白的表达,抑制肿瘤的增殖和转移,从而具有抗肿瘤的作用.     

人肝癌细胞系HCC-9810的建立及染色体分析

目的：对1998年本室建立的人肝癌细胞系HCC-9810进行细胞遗传学分析。方法：采用组织块培养法，培养液为含20％的胎牛血清的RPMI-1640，用扫描电镜和透射电镜观察细胞形态，放射免疫方法检测肿瘤标志物，并用改良的热变性姬姆萨R显代(RHG)方法与G显带相结合进行细胞遗传学检测。结果：该细胞系经异种接种能形成移植性肿瘤，染色体为非整倍体，有4q-，11q-，13q 等。结论：检出的这些畸变可能与肝癌的发生、发展有关。     

细胞周期蛋白在恶性肿瘤中的表达

肿瘤是一类细胞周期性疾病,细胞周期调控异常在肿瘤的发生发展中起关键作用。细胞周期蛋白(Cyclins)作为细胞周期调控的正性调节蛋白,在正常组织中不表达或者低表达,但在很多恶性肿瘤中都存在高表达、异位表达和不定期表达的现象,其异常表达会导致细胞周期的循环加速和细胞过度增殖,进而引起肿瘤的发生     

大鼠心肌细胞阴离子交换蛋白免疫细胞化学定位的研究

目的：观察带３样蛋白（ＡＥ３）在成年大鼠心肌细胞的免疫细胞化学定位,并对其生物学意义作初步的探讨。方法 采用免疫细胞（组织）化学酶染色法及免疫荧光技术研究带３样蛋白在心肌细胞的定位,第一抗体为红细胞带３蛋白单克隆抗体。结果：免疫化学酶染色显示带３样蛋白存在于成年大鼠心肌细胞膜及膜的皱褶或折入处,免疫荧光法显示带３蛋白单克隆抗体标记了心肌细胞膜和肌纤维模纹结构的部位。结论：阴离子交换蛋白（ＡＥ）免疫     

人肝癌细胞系HCC—9204的建立及其特性研究

作者用组织块培养法，对１２例肝细胞肝癌手术标本进行培养，并对能存活的细胞进行形态学观察，ＬＤＨ同工酶谱和ＡＦＰ检查，核型分析，对数求解和放射自显影测定细胞增殖周期，异种移植及生物学特性研究。结论：ＨＣＣ－９２０４是一株人体肝癌细胞系，可用于肝癌防治研究。     

人肝癌细胞系HCC-9724的建立及其生物学特性

目的 建立一株肝癌细胞系ＨＣＣ－９７２４,为肝癌研究提供实验模型。方法 无菌切除肝癌手术标本,６只裸鼠右后肢皮下包埋,体内连续传３代后,取移植瘤体外培养,绘制细胞生长曲线,光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染铎体核形分析,用免疫荧光法测定荷瘤鼠中ＡＦＰ的表达,结果 移植模型原代获得率为３３．３％,潜伏期为５２ｄ,自第３代后肿瘤获得率为１００．０％,潜伏期为１６ｄ,该模型移植瘤具有生长,稳定,     

Overexpression of bcl-2 protects hepatoma cell line HCC-9204 from ethanol-i nduced apoptosis

目的：探讨bcl-2过表达对乙醇诱导的原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞凋亡的影响。方法：用脂质体介导的转染法将含有人bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB导入不表达bcl-2蛋白的人肝癌细胞系HCC-9204中,并设转染pDOR和不转染的HCC-9204细胞对照。用G-418筛选后获得转入bcl-2基因的细胞克隆,并用免疫细胞化学ABC法检测Bcl-2蛋白的表达情况。有限稀释法连续克隆化直至获得用流式细胞仪检测100％表达Bcl-2蛋白的单克隆细胞株。6％乙醇分别作用于上述细胞6h后,甲噻唑蓝法检测细胞杀伤率,TUNEL染色法和流式细胞仪DNA含量检测分析细胞凋亡的发生程度。结果：转染pDOR-SB的细胞大部分为Bcl-2蛋白阳性,而转染pDOR或未转染的HCC-9204细胞中未见Bcl-2蛋白阳性信号。经过连续3次克隆化后,流式细胞仪检测表明所获得的单克隆细胞株100％稳定表达Bcl-2蛋白,命名为HCC-bcl2细胞。HCC-bcl2细胞在6％乙醇作用6h后的细胞杀伤率、TUNEL指数和亚二体凋亡峰比例均明显低于转染pDOR或未转染的HCC-9204细胞。结论：Bcl-2蛋白过表达能够抑制乙醇诱导的肝癌细胞系HCC-9204细胞凋亡。     

Establishment of the human hepatocellular carcinoma cell line HCC－9204 and its characteristics

ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＨＣＣ－９２０４ａｎｄｉｔｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓＨｕＣｈｕａｎｍｉｎ；（胡川闽）；ＬｉｕＹａｎｆａｎｇ；（刘彦仿）；ＳｕｉＹａｎｆａ...     

人肝癌细胞系HCC－9204的建立及其特性研究

目的和方法：作者用组织块培养法，对１２例肝细胞肝癌手术标本进行培养，并对能存活的细胞进行形态学观察，ＬＤＨ同工酶谱和ＡＦＰ检查，核型分析，对数求解和放射自显影测定细胞增殖周期，异种移植及生物学特性研究，结果：１例获得长期体外生长的能力，将其命名为ＨＣＣ－９２０４，无论形态学观察，还是ＬＤＨ同工酶谱的变化，均符合肝癌细胞的一般特征，并具有体外分泌ＡＦＰ的能力，染色体众数为７８～８０条各群染色体均增加，而以Ｃ，Ｅ群增加最为明显，并恒定出现Ｍ＿２ｄｅｒ（４）ｔ（４；１９）和Ｍ＿８ｄｅｌ（１３）两种标记染色体，增殖周期约为２０ｈ，异种移植成瘤率１００％．结论：ＨＣＣ－９２０４是一株人体肝癌细胞系，可用于肝癌防治研究．     

乙型肝炎病毒S区蛋白肝癌细胞株的稳定表达

构建了乙肝病毒S区不同蛋白的重组真核表达质粒pcLS2、pcLS4,并转染肝癌细胞株HepG2。转染细胞经新霉素筛选后,获得稳定表达S区不同蛋白的细胞株。Westernblotting可分别检测到相对分子质量为39000的大蛋白及24000的主蛋白在pcLS2、pcLS4稳定转染的细胞中表达。免疫组化实验显示这些蛋白均主要呈细胞质分布。     

耐长春新碱肝癌细胞系HCC-7721/VCR的建立

目的: 培养建立耐长春新碱肝癌细胞系HCC-7721/VCR,并对其生物学特性进行研究.方法: 应用人肝癌细胞系HCC-7721,采用长春新碱大剂量间歇诱导法,建立耐药人肝癌细胞系HCC-7721/VCR.观察该细胞的生长规律;用MTT法鉴定该耐药细胞模型对多种抗癌药物的多药耐药性;以流式细胞技术检测该耐药细胞模型细胞周期分布.结果: 经MTT法鉴定,HCC-7721/VCR细胞较HCC-7721细胞的长春新碱半数致死浓度(IC50)增大了4.15倍,并对多种化疗药物产生耐药性,其耐药性提高了2～4倍不等;耐药细胞倍增时间明显延长,S期细胞减少,而G1、G2期细胞增多.结论: HCC-7721/VCR是一个明确的多药耐药细胞模型,具有耐药细胞的基本生物学特性.     

纤维蛋白对人肝癌细胞系QGY—7703细胞分...

The effects of fibronectin (FN) on cytodifferentiation and cell cycle in a human hepatoma cell line QGY-7703 were studied by flow cytometry, electron microscopy, etc. The results indicated that FN inhibited cell proliferation and mitosis; significant differences were noted between the control group and the experimental group (P < 0.01). FN blocked the cell cycle in phase S; cell spreading improved with less cell overlapping, and the growth of monolayer cell was partially restored. The number of microvilli and marginal ruffles decreased and that of mitochondria, Golgi complex, endoplasmic reticulum increased. The findings suggested that FN could partially restore QGY-7703 cell normal phenotype and probably be useful for the treatment of tumor.     

龙力胶囊对人肝癌细胞诱导分化及机理研究

目的：研究中药复方龙力胶囊对人肝癌ＨＣＣ－９２０４的诱导分化作用及其机理。方法：用体外培养ＨＣＣ－９２０４细胞，观察龙力胶囊对ＨＣＣ－９２０４细胞形态学、集落形成能力、ＡＥＰ与ＡＬＢ分泌量、γ－ＧＴ活力、核型、细胞周期以及癌基因表达的影响。结果：龙力胶囊能改善ＨＣＣ－９２０４细胞的异型性，降低其集落形成能力，降低ＡＦＰ分泌量及γ－ＧＴ活力，提高ＡＬＢ分泌量，降低细胞染色体主流范围，降低ｃ－ｍｙｃ、     

瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖

目的：观察瘦素对人肝癌细胞株Huh 7增殖活性的影响,并初步探讨其可能的机制。方法：在培养液中加入不同浓度的瘦素后,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21^waf1的表达。结果：MTT检测显示,瘦素可促进Huh 7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例;瘦素（100 ng/ml）处理24 h后,实时荧光定量PCR检测发现Cyclin D1 mRNA表达量增高至对照组的3.15倍,P21^waf1mRNA表达量则为对照组的55%,两者均有显著性差异（P〈0.01）。免疫细胞化学染色结合图像分析系统分析也发现100 ng/ml的瘦素处理24 h后,与对照组相比,Cyclin D1蛋白的表达明显增高（P〈0.01）,P21^waf1蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论：瘦素可通过促进Cyclin D1表达、抑制P21^waf1表达,使人肝癌细胞Huh7由G0/G1期向S期转换,从而促进其增殖。     

转染的FasL基因诱导HCC9204细胞凋亡的形态学研究

目的 构建含FasL基因的腺病毒载体，转染肝癌9204细胞株，观察FasL基因对9204细胞株的影响。方法 以腺病毒作载体，把FasL基因克隆入腺病毒载体，构建成含FasL基因的转基因载体并酶切鉴定，用脂质体包裹法把含FasL的腺病毒载体转染HCC9204细胞株，用RT－PCR方法证实转染后有无FasL基因表达，采用电镜观察9204细胞形态学变化。结果 酶切鉴定证实含FasL基因的转基因载体构建成功；RT－PCR显示转染后9204细胞株FasL基因表达水平显高于未转染细胞株（P＜0.01）；肝癌细胞株9204转染FasL基因72h后，在光镜下可见调亡细胞体积缩小，生长不良，染色质浓度，密度增高，胞核中出现颗粒样物质，电镜下可见调亡小体。结论 成功地构建了FasL基因的转基因载体；转染FasL基因可诱导肝癌9204细胞株出现凋亡。