利用Caco-2细胞单层模型预测柯楠碱、育亨宾、阿马碱、萝芙木碱的人肠吸收

目的：研究中药化学成分柯楠碱（corynanthine，COR）、育亨宾（yohimbine，YOH）、阿马碱（ajmalicine，AMC）和萝芙木碱（ajmaline，AML）在人肠Caco-2细胞单层模型的转运吸收。方法：利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究COR，YOH，AMC和AML由绒毛面（AP侧）到基底面（BL侧），BL侧到AP侧两个方向的转运吸收过程。应用高效液相色谱法分离、紫外检测法检测对上述4个生物碱进行定量分析，计算转运参数和表观渗透系数（Papp），并与在Caco-2细胞单层模型上呈易吸收的阳性对照药普萘洛尔和难吸收的阳性对照药阿替洛尔的进行比较。用药物的ADMET预测软件，考察4个化合物的P-值与其log D值之间的关系。结果：COR，YOH，AMC和AML由AP侧到BL侧的Papp值分别为（1．863±0．055）×10^-5，（1．540±0．082）×10^-5，（2．5224-0．246）×10^-5，（1．155±0．099）×10^-5cm·s^-1；由BL侧到AP侧的Papp值分别为（2．390±0．017）×10^-5，（1．987±0．154）×10^-5，（1．374±0．260）×10^-5，（2．418±0．124）×10^-5cm·s^-1，与普萘洛尔的Papp A→B值[（2．23±0．10）×10^-5cm·s^-1]基本一致。COR，YOH，AMC和AML的Papp B→A/PappA→B分别为1．28，1．29，0．54和2．09；AML外流是摄取的2．09倍。结论：COR，YOH，AMC和AML能够通过Caco-2细胞单层被动吸收，属于良好吸收的化合物。其中，AML在Caco-2细胞单层模型的转运可能存在外流机制。在4个生物碱的转运吸收过程中，油／水分配系数起着关键性的作用。     

盐酸黄连碱和小檗红碱在人源Caco-2细胞单层模型中的吸收研究

目的：研究中药化学成分盐酸黄连碱(coptisine chloride,COP)和小檗红碱(berberrubine,BRB)在人肠的吸收。方法：采用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究COP和BRB由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)、BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱、紫外检测法对COP和BRB进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数,并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较。结果：COP和BRB由AP侧到BL侧的表观渗透系数(P_app) 分别为(1.103±0.162)×10^-5,(1.309±0.102)×10^-5cm·s^-1；由BL侧到AP侧的P_app分别为(0.300±0.041)×10^-5,(1.955±0.055)×10^-5cm·s^{-1,与在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的阳性对照药普萘洛尔［(2.23±0.10)×10-5 cm·s-1］的基本一致。COP和BRB的P_{app A→B}/Papp B→A分别为3.67和0.67；BRB外流是摄取的1.49倍。结论：COP和BRB可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内,属于良好吸收的药物,在两者的吸收转运过程中,油/水分配系数起着关键性的作用；BRB在Caco-2细胞单层模型中的转运可能存在外流机制。}     

麻黄生物碱在人源肠Caco-2细胞单层模型的吸收转运研究

目的:研究传统中药麻黄中左旋麻黄碱(l-ephedrine,LEP)、右旋伪麻黄碱(d-pseudoephedrine,DPEP)和右旋去甲伪麻黄碱(d-norpseudoephedrine,DNPE)3个生物碱在人源肠Caco-2细胞单层模型中的吸收特性。方法:利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试LEP,DPEP和DNPE从绒毛面(AP端)到基底面(BL端)、BL端到AP端2个方向的转运过程。应用偶联紫外检测器的反相高效液相色谱法对上述3个生物碱进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(Papp),并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔的进行比较。结果:LEP,DPEP和DNPE双向转运的Papp在1.0×10-5cm.s-1数量级,与在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的普萘洛尔的Papp在一个数量级。3个生物碱在10~200μmol.L-1的转运效率与浓度呈正相关。结论:LEP,DPEP和DNPE可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内,为吸收良好的化合物。     

红参水提物中人参三萜在人源肠Caco-2细胞单层模型上的吸收转运研究

目的 研究红参水提物中人参三萜在人小肠上皮细胞的吸收特性。方法 利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试红参水提物中人参三萜从顶端（apical,AP）侧到底端（basolateral,BL）侧、BL侧到AP侧2个方向的转运过程。应用色谱-质谱技术对人参三萜进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数（P_app）。结果 在Caco-2细胞单层模型中,发现大多数人参三萜皂苷吸收程度中等或不良,但是,唯有2个苷元20（S）-原人参三醇（protopanaxatriol,PPT）和20（R）-PPT吸收程度良好（P_app值接近1×10^-5 cm/s）;此外,还发现人参三萜皂苷20（S）-G-Rh₁、20（R）-G-Rh₁、G-Rk₃、G-Rh₄、PG-RT₅这5个单糖苷的P_app值皆在1×10^-6 cm/s数量级,提示它们吸收程度中等。所考察的42个人参三萜其中包括8对R、S差向异构体,结果显示R/S异构体的吸收情况并没有显著性差异。结论 随着人参三萜皂苷苷元上糖取代基数目的增多,其P_app值越来越小,提示多糖基的人参三萜皂苷在体内很难被吸收,可能是前药。     

HPLC同时测定萝芙木中利血平和育亨宾的含量

目的:建立HPLC法测定萝芙木提取物中利血平和育亨宾的含量。方法:采用Hypersil-ODS2C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-20 mmol/L磷酸二氢钾(40︰60)(V/V),磷酸调节pH至3.0;流速为0.3 ml/min;检测波长为270 nm,柱温为30℃。结果:育亨宾和利血平的线性关系均良好,线性范围分别为:0.026~2.080μg,0.026~2.090μg;加样回收率分别为97.21%和95.92%,RSD分别为2.51%和1.10%(均n=6)。结论:该方法可同时测定萝芙木中育亨宾和利血平的含量,稳定可靠,重复性好。     

黄连多组分在Caco-2细胞单层模型的吸收及其相互作用

目的 研究黄连水提取物中多组分的不同组合与吸收的相关性,探索甄别中药多组分吸收相互影响的方法.方法 采用Caco-2细胞单层模型,以黄连水提取物中的多组分及其不同组合为受试药物,通过HPLC法对各组分同时进行定量,以各组分单独转运时的固有表观渗透系数作为参照,采用最小二乘法多元线性回归进行拟合,获得各组分间表观渗透系数的作用强度与各组分浓度及其不同组合间的相关性,分析多组分在吸收中的相互作用类型及强度.结果 甄别出黄连碱、药根碱、小檗碱和巴马汀跨Caco-2细胞单层膜吸收的相互作用,得到影响各组分吸收的单组分因素和多组分组合因素,获得影响其吸收的定量关系.结论 本实验采用数学方法研究黄连多组分在吸收中的相互作用切实可行.     

通脉方中异黄酮类化合物在人源肠Caco-2细胞模型的吸收转运

通脉方是由葛根、丹参和川芎3味药按质量1∶1∶1组成的复方。该文研究通脉方中异黄酮类化合物大豆苷元、芒柄花素、5-羟基芒柄花苷、芒柄花苷、大豆苷、3'-甲氧基葛根素、染料木苷、葛根素、芒柄花素-8-C-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芒柄花素-7-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、澳白檀苷、葛花宁、大豆苷元-7,4'-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、泰国野葛根素、3'-羟基葛根素、3'-甲氧基大豆苷、芒柄花素-8-C-β-D-吡喃木糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、染料木素-8-C-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、染料木素-7-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、3'-羟基泰国野葛根素、6″-O-β-D-木糖基葛根素、鹰嘴豆芽素A-8-C-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、3'-甲氧基大豆苷元-7,4'-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大豆苷元-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大豆苷元-7-O-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在肠的吸收转运。采用人源肠Caco-2细胞单层模型,研究通脉方中上述25个异黄酮类化合物由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)或从BL侧到AP侧2个方向的转运过程。应用高效液相色谱法分离、紫外检测法对化合物进行定量分析,计算表观渗透系数(P_(app)),并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔比较。大豆苷元和芒柄花素由AP侧到BL侧的P_(app)分别为(2.55±0.03)×10~(-5),(3.06±0.01)×10~(-5)cm·s~(-1);由BL侧到AP侧的P_(app)分别为(2.62±0)×10~(-5),(2.65±0.11)×10~(-5)cm·s~(-1)。与本试验中在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的阳性对照药普萘洛尔的P_(app)(2.66±0.32)×10~(-5)cm·s~(-1)和呈难吸收的阳性对照药阿替洛尔的P_(app)(2.34±0.10)×10-7cm·s~(-1)比较,大豆苷元和芒柄花素与普萘洛尔在同一数量级;其他化合物与阿替洛尔在同一数量级。大豆苷元和芒柄花素的P_(app AP→BL)/P_(app BL→AP)分别为0.97,1.15。可以预测,大豆苷元和芒柄花素可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内,属于良好吸收的化合物;其他化合物属于吸收不良的化合物。5-羟基芒柄花苷、染料木苷、澳白檀苷、葛花宁和染料木素-7-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的P_(app AP→BL)/P_(app BL→AP)分别为0.18,0.28,0.45,0.38,0.49,推测它们在Caco-2细胞单层模型中的转运可能存在外流机制。     

茯苓三萜类化合物在人源Caco-2细胞单层模型中的吸收研究

目的：研究中药茯苓中3-表去氢土莫酸(3-epidehydrotumulosic acid，EDHTA)、猪苓酸C(polyporenic acid C,PPAC)和6α-羟基猪苓酸C(6α-hydroxypolyporenic acid C,HPPA)在人肠的吸收。方法：采用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究EDHTA,PPAC和HPPA由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)、BL侧到AP侧2个方向的转运过程。应用高效液相色谱法分离、紫外检测法对上述3个化合物进行定量分析，计算转运参数和表观渗透系数，并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较。结果：EDHTA，PPAC和HPPA由AP侧到BL侧的表观渗透系数(P_app) 值分别为(9.99±1.08)×10^-6、(10.06±0.53)×10^-6和(3.32±0.66)× 10^-6 cm·s^-1；由BL侧到AP侧的P_app值分别为(17.76±0.91)×10^-6、(19.23±1.16)×10^-6和(8.19±0.57)×10^-6 cm·s^-1。与本实验中在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的阳性对照药普萘洛尔的P_app值(1.45×10^-5 cm·s^-1)和呈难于吸收的阳性对照药阿替洛尔的P_app值(4.22×10^-7 cm·s^-1)比较，EDHTA和PPAC与普萘洛尔在同一数量级；HPPA介于普萘洛尔和阿替洛尔之间。EDHTA、PPAC和HPPA的P_{app A→B}/P_{app B→A}比值分别为0.56,0.52和0.41；EDHTA,PPAC和HPPA外流分别是摄取的1.78，1.91，2.47倍。结论：EDHTA，PPAC和HPPA可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内，EDHTA和PPAC属于良好吸收的化合物；HPPA属于中等吸收的化合物。EDHTA、PPAC和HPPA在Caco-2细胞单层模型中的转运可能存在外流机制。     

Caco-2细胞单层模型中熊果酸摄取转运机制的研究

目的 研究熊果酸在Caco-2细胞单层模型中的吸收转运机制.方法 利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究熊果酸在有或无P-糖蛋白专属性抑制维拉帕米存在时,评价其双向转运特征,并考察时间、药物浓度、体系温度以及培养介质pH值对Caco-2细胞摄取熊果酸的影响.采用高效液相色谱-紫外检测法对熊果酸进行定量分析,计算其表现渗透系数(P_(app)).结果 浓度在10～40 μmol/L内,Caco-2细胞对熊果酸摄取量呈线性增加.双向转运研究发现加入P-糖蛋白专属性抑制剂维拉帕米后.其P_(app)发生显著改变,表观渗透率由3.445下降至1.386.结论 熊果酸在Caco-2细胞模型的吸收转运机制以被动转运为主,P-糖蛋白参与主动转运的过程.     

Caco-2细胞体外吸收模型的建立及评估

目的:建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法:将细胞接种在Transwel转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值(TEER)和表观渗透系数(Papp)及碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果:培养21d后,细胞间形成紧密连接,跨膜电阻值达到恒定值,为500Ω/cm2,表观渗透系数低于0.5×10-6cm/s;肠腔侧碱性磷酸酶活性显著高于基底侧酶活性。结论:在本实验室条件下构建的Caco-2细胞模型在形态上与小肠上皮细胞相似,细胞已产生极性,可作为小肠吸收的体外模型。     

Studies on Absorption and Tansport of Limoninoids from Fructus Evodiae in Caco-2 Cell Monolayer Model

Objective To study the intestinal absorption and transepithelial transport of three limoninoids: evodol (EVO), limonin (LIM), and shihulimonin A (SHIA), isolated from Fructus Evodiae [the unripe fruit of Evodia rutaecarpa and Evodia rutaecarpa var. bodinieri] in the human intestine. Methods The in vitro cultured human colon carcinoma cell line, Caco-2 cell monolayer model, was applied to studying the absorption and transepithelial transport of the three limoninoids from apical (AP) to basolateral (BL) side ...     

异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上转运机制的研究

异丹叶大黄素具有抗炎、抗氧化、抗癌等药理活性。该文研究了异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上的吸收转运机制。采用UPLC法,应用PDA检测器在310 nm处对异丹叶大黄素进行含量测定并计算表观渗透系数P_(app)。考察不同浓度异丹叶大黄素在Caco-2细胞上的毒性以确定转运实验的给药浓度。探讨了时间、浓度、温度、转运体抑制剂对异丹叶大黄素在体外细胞模型上跨膜转运的影响。实验结果表明,异丹叶大黄素在10~60μmol·L~(-1),孵育14 h内,对Caco-2细胞没有明显毒性。异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上的转运具有一定的浓度依赖性,其表观渗透系数P_(app)大于10×10~(-6)cm·s~(-1),易被Caco-2细胞吸收。BL侧的转运量在3 h达到最大值,6 h有所下降。4℃条件下,P_((app)(AP-BL))与P_((app)(BL-AP))均比37℃条件显著减小。加入P-gp转运体抑制剂维拉帕米后P_((app)(AP-BL))明显增大;加入MRP转运体抑制剂丙磺舒和MK-571后,P_((app)(BL-AP))明显减小。研究结果提示,异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上的转运方式主要是被动扩散,P-gp及MRP可能参与了异丹叶大黄素的外排转运。     

Caco-2细胞单层研究淫羊藿黄酮类成分的吸收转运

目的 研究淫羊藿黄酮类成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运.方法 采用超高压液相法测定药物浓度,计算表观渗透系数(Papp),研究淫羊藿黄酮5个主要成分淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I在Caco-2细胞模型中的双向转运.结果 淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的吸收渗透系数(P_(AB))较小,分别为5.91×10~(-7)、3.22×10~(-7)、2.76×10~(-7)、4.23×10~(-7) cm/s,宝藿苷I相对较大,为1.46×10~(-6)cm/s;5个化合物的分泌渗透系数(P_(BA))都比其相应的吸收渗透系数要大,其中宝藿苷I的分泌渗透系数是其吸收渗透系数的9.8倍.结论 淫羊藿黄酮类成分的肠道吸收较差,可能存在肠道转运蛋白的外排机制,其中三糖苷(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C)的吸收要小于二糖苷(淫羊藿苷),二糖苷的吸收要小于单糖苷(宝藿苷I).     

用于中药复方物质基础研究的Caco-2细胞胶原包被6孔转运板体系的构建

6孔转运板胶原包被后进行Caco-2单层细胞培养,测定不同的胶原种类、鼠尾胶原铺胶浓度和铺胶时间下Caco-2细胞单层的跨膜电阻以及阳性药物普萘洛尔和阿替洛尔的被动扩散表观渗透系数,发现不同胶原包被条件对Caco-2细胞单层的完整性和转运能力无明显影响。因此2 μg·cm^-2鼠尾胶原铺胶1 h即可构建稳定的Caco-2细胞培养的胶原包被6孔转运板体系,为研究中药复方物质基础的吸收提供体外研究技术方法。     

姜黄素葡甲胺共晶的大鼠肠吸收特征研究

目的比较姜黄素葡甲胺共晶(MGC,姜黄素与葡甲胺通过氢键连接的新共晶化合物)与姜黄素的肠吸收参数变化。方法采用大鼠在体肠段单向灌流模型,用紫外分光光度法(UV)对药物的质量浓度进行检测,分别计算在大鼠各肠段的吸收速率常数(Ka)和表观渗透系数(Papp)。结果 MGC在十二指肠与结肠的Ka和Papp比较有明显差异(P0.05),其他各肠段间吸收特征相近(P0.05)。各肠段Ka数据排序:十二指肠空肠回肠结肠;Papp数据排序:十二指肠空肠结肠回肠,MGC的全肠段Ka为(9.966±0.030)×10-3 min-1,Papp为(6.871±0.013)×10-3 cm/min,较姜黄素分别提高了1.53和2.21倍。结论 MGC较姜黄素有更好的肠吸收特征,提示MGC生物利用度可能提高。     

川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对P-糖蛋白表达的影响

目的 研究川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征以及对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法 MTT法确定川芎嗪对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;以Caco-2细胞单层模型研究川芎嗪的双向转运机制,以表观渗透系数(Papp)为检测指标,考察时间、药物浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对川芎嗪转运的影响;Western blotting法检测川芎嗪对P-gp表达的影响.结果 从顶侧(AP)到底侧(BL) (AP→BL),川芎嗪的Papp＞ 10-6 cm/s,表明其吸收性良好;川芎嗪的转运量与其浓度和时间呈正相关,且川芎嗪AP→BL的转运量明显大于BL→AP的转运量;川芎嗪不仅受到P-gp的外排作用,同时也抑制P-gp表达.结论 川芎嗪在Caco-2细胞模型的转运方式为被动转运,且受到P-gp的外排作用,并对P-gp的表达有抑制作用.