FAM3A在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及机制

<正>目的:研究FAM3A在小鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤中的作用及机制;探索FAM3A是否介导罗格列酮对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法和结果:在IR小鼠肝脏中,PPARγ和FAM3A表达增加。利用siRNA敲减肝脏FAM3A后,行IR手术,相较于对照组,敲减FAM3A组血浆AST、ALT水平及氧化应激显著升高,肝脏坏死区域增加,炎症因子及促凋亡因子水平上     

FAM3C通过激活Akt促进口腔鳞癌细胞活力

目的:探讨FAM3C (family with sequence similarity 3, member C)蛋白在口腔鳞癌细胞中的表达和作用。方法:通过RT-qPCR及Western blot法检测人口腔鳞癌癌前病变细胞DOK和口腔鳞癌细胞WSU-HN6中FAM3C的mRNA及蛋白表达水平。在WSU-HN6细胞中分别使用siFAM3C和抗FAM3C抗体处理,在DOK细胞中使用腺病毒过表达FAM3C,分别在处理后24、48和72 h使用CCK-8和Western blot法检测FAM3C对细胞活力及蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)激活的影响。结果:(1)与DOK细胞相比,WSU-HN6细胞中FAM3C的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05);(2)siFAM3C在转染后48 h和72 h均可抑制WSU-HN6细胞的活力(P0.05),同时抑制Akt的激活(P0.05);(3)抗体封闭FAM3C蛋白48 h和72 h也能抑制WSU-HN6细胞的活力,并抑制Akt的激活(P0.05);(4)过表达FAM3C 48 h和72 h可促进DOK细胞的活力,并激活Akt(P0.05)。结论:FAM3C可能通过激活Akt促进口腔鳞癌细胞的活力。     

硫化氢抑制小鼠胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞系抵抗素的分泌

目的观察硫化氢(H2S)是否通过AMPK信号通路影响小鼠胰岛素抵抗3 T3-L1脂肪细胞系抵抗素的分泌。方法将细胞分为对照组、胰岛素抵抗3T3-L1组和50μmol/L Na HS组,利用ELISA法检测抵抗素(resistin)的分泌,Western blot检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)磷酸化蛋白的表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测resistin及AMPK mRNA表达。结果与对照组比较,给予Na HS后抵抗素分泌明显降低(P0.05)。正常和胰岛素抵抗细胞中AMPK和ACC磷酸化蛋白表达显著增加(P0.05)。AMPK通路特异性阻断剂compound C可减弱Na HS对AMPK及ACC蛋白磷酸化的作用,且降低正常和胰岛素抵抗细胞抵抗素的分泌。结论 H2S可能通过激活AMPK通路来抑制小鼠正常和胰岛素抵抗3 T3-L1脂肪细胞的抵抗素分泌。     

胰岛素受体亚型改变及相关通路活化在糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖中的作用

 目的:探讨胰岛素受体亚型改变及其相关下游通路活化情况在糖尿病小鼠肠上皮细胞异常增殖中的作用。方法:用腹腔注射链脲霉素的方法制作糖尿病小鼠模型,采用增殖细胞核抗原标记法比较糖尿病小鼠及对照组小鼠肠上皮细胞的增殖情况。利用RT-PCR法测定胰岛素受体亚型表达比例在2组中的差异。采用real-time PCR及Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测2组之间胰岛素受体相关通路各分子MEK1/2、ERK1/2、PI3K以及Akt的表达情况。结果:糖尿病组小鼠的小肠上皮细胞增殖指数显著升高(P<0.05),且细胞中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值也明显升高(P<0.05)。糖尿病小鼠肠上皮细胞中MEK1、MEK2和ERK1/2的mRNA水平及磷酸化蛋白水平均高于对照组(P<0.05)。结论:糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖可能与其中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值增高及其相关MEK/ERK通路的激活有关。     

短期高果糖喂养对小鼠肝脏脂质沉积和胰岛素敏感性的影响

目的: 探讨短期高果糖饮食对小鼠肝脏甘油三酯含量及胰岛素敏感性的影响。方法: 雄性C57BL/J6小鼠分为对照组及高果糖组,经喂养3 d后对小鼠行腹腔葡萄糖耐量试验,处死小鼠后测定各组肝脏甘油三酯含量,采用HE染色观察肝脏组织的病理改变;测定肝脏脂质合成酶类的蛋白表达,同时通过比较各组注射与未注射胰岛素的小鼠磷酸化Akt/总Akt (p-Akt/t- Akt)和磷酸化GSK-3α/β/总GSK-3α/β(p- GSK-3α/β/t- GSK-3α/β)表达变化评估肝脏胰岛素敏感性。结果: 喂养3 d后,与对照组相比,高果糖组葡萄糖耐量曲线下面积和肝腔甘油三酯均显著增加(均P<0.01),同时肝组织HE染色显示高果糖组小鼠肝细胞已有明显脂滴沉积;与对照组相比,高果糖组的乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)和硬脂酰辅酶A脱饱和酶-1(SCD-1)表达显著增加(均P<0.01);胰岛素注射后,与对照组相比,高果糖组的p-Akt/t-Akt及p-GSK-3α/β/t-GSK-3α/β均显著降低(均P<0.01)。结论: 3 d高果糖饮食即可引起肝脏脂质沉积,脂质沉积与果糖刺激FAS、ACC和SCD-1表达增加有关;肝脏脂质沉积的同时伴有肝脏胰岛素抵抗发生。     

糖皮质激素对3T3-L1脂肪细胞PI-3K、p38 MAPK磷酸化的影响

目的： 观察地塞米松对3T3-L1脂肪细胞糖转运活动的影响,及介导糖转运的胰岛素信号通路PI-3K/AKT、p38 MAPK途径在其中的作用,探讨糖皮质激素诱导脂肪细胞胰岛素抵抗的可能机制。方法: 将3T3-L1脂肪细胞与1 μmol/L地塞米松共孵育48 h,加或不加100 nmol/L胰岛素继续温育30min。以葡萄糖氧化酶法测定3T3-L1脂肪细胞中糖转运活动,以Western blotting测定3T3-L1脂肪细胞Glut4的表达及分布、Akt、phospho-Akt、p38 MAPK、phospho-p38 MAPK的蛋白表达水平。结果: 地塞米松抑制3T3-L1脂肪细胞的糖转运活动。对细胞内总Glut4蛋白表达无影响,但抑制了胰岛素刺激的Glut4转位,同时抑制了胰岛素激活的Akt、p38 MAPK磷酸化水平。结论: 地塞米松抑制胰岛素激活的PI-3K/Akt、p38 MAPK信号途径,影响Glut4的转位及活性,下调胰岛素刺激的葡萄糖转运,并可能由此诱导胰岛素抵抗的发生。     

短期高脂喂养诱导脂肪肝的肝胰岛素敏感性和炎性因子变化

目的 探讨短期(3日)高脂饮食对小鼠肝脏三酰甘油(TG)含量、肝胰岛素敏感性及肝脏炎性通路的影响.方法 雄性C57BL/J6小鼠分为对照组及高脂组,经喂养3d后处死小鼠,测定空腹血糖、血TG及血清谷丙转氨酶(AST),应用GPO-PAP法测定各组肝脏TG含量,应用Western blot法测定磷酸化Akt/总Akt、磷酸化GSK-3α/β/总GSK-3α/β以及JNK途径(磷酸化-JNK/总JNK)和IKKα/β-NF-κB(磷酸化-IKKα/β/总IKKα/β,NF-κB)途径的蛋白表达.结果 喂养3日后,高脂组小鼠的空腹血糖、血TG、血AST较对照组无明显变化;高脂组的肝TG含量较对照组显著增加,分别为11.03±0.29和24.92±2.98 (mmol/g)(P＜0.01);高脂组小鼠胰岛素刺激后磷酸化Akt/总Akt和磷酸化GSK-3α/β/总GSK-3α/β比值较对照组减少(P＜0.01);高脂组的磷酸化-JNK/总JNK的蛋白表达较对照组显著增加(P＜0.01).结论 肝脏JNK炎性通路介导了高脂喂养诱导早期脂肪肝和胰岛素抵抗的发生发展.     

泽明红山颗粒通过PI3K/AKT通路抑制NASH小鼠骨骼肌损伤

目的 观察泽明红山颗粒对非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠骨骼肌损伤的保护作用及可能机制.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组(control组)、非酒精性脂肪性肝炎模型组(NASH组)、非酒精性脂肪性肝炎模型+泽明红山颗粒组(ZMHS组),采用高脂纯化饲养(MD45％添加0.5％胆固醇)法建立NASH小鼠模型,ELISA检测肌肉组织中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、磷酸肌酸激酶(CPK)、α羟丁酸脱氢酶(α-HBD)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)表达,评价泽明红山颗粒对NASH小鼠骨骼肌损伤的保护作用,HE染色及肌糖原测定评价小鼠骨骼肌病理改变,TUNEL染色观察骨骼肌细胞凋亡情况,Western blot检测PI3K/Akt通路相关蛋白表达.结果 泽明红山颗粒显著降低NASH小鼠骨骼肌组织中CPK、α-HBD、ALT、LDH表达,促进ATP表达(P＜0.05),改善NASH小鼠骨骼肌病理损伤,促进肌糖原合成,抑制骨骼肌细胞凋亡(P＜0.05).泽明红山颗粒可以显著上调PI3K的表达,促进Akt磷酸化水平(P＜0.05).结论 泽明红山颗粒可以改善NASH小鼠骨骼肌损伤,其作用机制可能通过激活PI3K/Akt通路抑制骨骼肌细胞凋亡有关.     

PI3K/Akt信号通路及内质网应激在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的作用

目的观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停滞及DNA损伤基因(CHOP/GADD153)在四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化中的表达并探讨其可能的作用。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型(皮下注射40%CCl4橄榄油溶液)4及8周组。HE染色法观察肝组织病理形态学;用real-time PCR技术检测肝脏内GRP78及CHOP mRNA的表达;用Western blot检测肝脏内PI3K/Akt信号通路中Akt1、磷酸化Akt1及内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP的表达;用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测细胞凋亡。结果与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝脏内GRP78及CHOP mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05),而肝脏内Akt1和磷酸化Akt1蛋白的表达则较正常大鼠显著降低(P0.05);与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝细胞凋亡显著升高(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路及内质网应激可能在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中发挥了重要作用。     

溶质载体家族6成员1通过调节PI3K/Akt信号通路磷酸化促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨溶质载体家族6成员1（SLC6A1）对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及分子机制。 方法 下载并综合分析数据集GSE125989和GSE100534,筛选差异基因;通过STRING数据库和Cytoscape 3.6.1 软件构建差异基因的蛋白相互作用网络,并筛选hub基因;通过Ualcan和GEPIA数据库检测hub基因SLC6A1在乳腺癌中的表达及其对预后的影响;转染SLC6A1-siRNA干扰乳腺癌细胞MDA-MB-231中SLC6A1的表达;细胞划痕实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的变化;基因集富集分析和Western blotting检测SLC6A1在乳腺癌中发挥作用的机制;采用SC79激活Akt通路并检测细胞迁移和侵袭能力的变化。 结果 共筛选出92个乳腺癌原位癌与转移瘤的差异基因,并确定Ⅰ型胶原蛋白α1（COL1A1）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、SLC6A1等20个hub基因;SLC6A1在乳腺癌组织中高表达（P＜0.001）,且与患者预后相关（P=0.01）;SLC6A1表达被干扰后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力显著下降（P＜0.05）;SLC6A1表达降低可抑制PI3K/Akt信号通路的磷酸化（P＜0.05）;激活PI3K/Akt通路后 SLC6A1-siRNA对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用消失（P＜0.05）。 结论 SLC6A1通过调节PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌的侵袭和转移。     

miR-let-7a调节PI3K/Akt信号通路抑制人系膜细胞增殖和炎症反应

为探究miR-let-7a对LPS诱导的人系膜细胞(human mesangial cell, HMC)增殖和炎症反应的影响及其通过调节PI3K/Akt信号通路发挥作用的机制,体外条件下用0.1μg/mL LPS处理HMC, CCK-8法检测各时间点细胞活性;Western blotting检测HMC增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、凋亡相关蛋白BAX及信号通路蛋白PI3K、p-Akt的表达情况;qPCR检测细胞中miR-let-7a及炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和Ⅳ型胶原蛋白mRNA的表达。转染miR-let-7a mimic或inhibitor改变HMC中miR-let-7a的表达,或使用抑制剂LY294002阻断HMC中PI3K/Akt信号通路,观察不同处理对HMC增殖、炎症反应及PI3K/Akt信号通路激活的影响。结果显示,LPS处理可诱导HMC增殖和炎症反应,抑制miR-let-7a的表达(均P<0.05)并激活PI3K/Akt信号通路(均P<0.01);与LPS组相比,过表达miR-l...     

FXR通过调节促甲状腺素胚胎因子减轻Con A诱导的自身免疫性肝炎病变

 目的：观察法尼酯衍生物X受体（farnesoid X receptor,FXR)-促甲状腺素胚胎因子（thyrotropin embryonic factor,TEF）通路在自身免疫性肝炎模型小鼠肝损害中的作用,探讨FXR-TEF通路改善自身免疫性肝炎的部分可能机制。方法：检测FXR在伴刀豆球蛋白A (concanavalin A, Con A) 诱导的肝炎（Con A-induced hepatitis, CIH）小鼠肝脏的表达;检测FXR激活对TEF表达的影响;观察C57BL/6小鼠和鹅去氧胆酸（chenodeoxycholic acid,CDCA）激活FXR的CIH小鼠肝脏病理、肝脏酶学及炎症因子变化。结果：FXR在CIH小鼠中低表达;CDCA激活FXR的C57BL/6小鼠TEF表达上调;FXR被激活的CIH小鼠的肝损害较轻,FXR激活可减轻肝脏炎症因子释放。结论：CDCA激活FXR能减轻CIH引起的肝功能损害和炎症反应。FXR激活使TEF上调。FXR可能是自身免疫性肝炎的保护因素,其保护作用可能是通过TEF来实现的。激活FXR可能成为治疗自身免疫性肝炎的一个途径。     

PI3K/Akt调控内质网应激对GRP78的诱导

目的: 研究内质网应激条件下PI3K/Akt信号通路对HEK293细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的调控作用。方法: 采用PI3K抑制剂LY294002、Akt1失活型突变载体Akt1(K179M)及Akt siRNAs阻断内质网应激介导的Akt活化,采用Akt激活型突变载体Myr-Akt过度激活内质网应激介导的Akt活化,并利用RT-PCR和Western blotting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt信号途径对HEK293细胞中GRP78表达水平的调控作用。结果: LY294002、Akt1(K179M)及Akt1 siRNA均明显抑制了内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt1明显促进内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt2/3及Akt2/3 siRNA对GRP78的诱导均无影响。PI3K/Akt信号通路阻断或过度激活对GRP78 mRNA水平的诱导无影响,但是对GRP78的降解有显著影响。结论: HEK293细胞中,PI3K/Akt通过蛋白稳定性调节促进内质网应激对GRP78的诱导。     

甲状腺癌中miR-106b负性调控FAM129A基因表达的作用及机制

目的研究甲状腺癌中miR-106b的表达及其调控靶基因FAM129A表达的作用及分子机制。方法实时定量PCR法检测miR-106b及FAM129A基因的表达。将miR-106b的前体(agomiR-106b)转染甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,Western blot法检测FAM129A蛋白表达,荧光素酶实验验证miR-106b与FAM129A基因3'非翻译区的特异性结合。结果相对于癌旁组织,MiR-106b在甲状腺癌组织表达较癌旁组织下调明显,而FAM129A在甲状腺癌组织表达显著上调,二者呈明显的负性相关。AgomiR-106b能够显著抑制甲状腺癌TPC-1细胞中FAM129A蛋白的表达,miR-106b能够特异性地结合FAM129A基因的3'UTR,并抑制荧光素酶活性。结论 miR-106b与FAM129A基因的表达异常与甲状腺癌的发生相关,miR-106b在甲状腺癌细胞能靶向沉默FAM129A基因。     

PPARs信号通路在小鼠糖尿病肝病中的作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)及炎症相关信号通路在糖尿病肝病中的作用。方法:高能量饲料喂养联合多次腹腔注射小剂量链脲菌素(STZ;40 mg·kg~(-1)·d~(-1),5 d)诱导糖尿病形成后,继续喂养4周,HE染色观察肝脏形态学改变;检测代表小鼠肝功能的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的变化;检测空腹血糖(FBG)、血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)及血清胰岛素水平(INS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);利用q PCR和Western blot分别检测PPARs和炎症相关信号通路中相关m RNA及蛋白表达。结果:给予STZ 7 d后,小鼠FBG持续11.1 mmol/L,糖尿病形成。4周后,实验结束时血清胰岛素水平及HOMA-IR均明显增加(P0.01),血脂升高(P0.01),ALT和AST亦显著增加(P0.01),病理检查见肝细胞脂肪变性及炎性细胞浸润,提示糖尿病小鼠出现肝损伤。与正常对照组相比,糖尿病肝损伤小鼠肝脏PPARα、PPARβ及PPARγ的mRNA和蛋白表达均明显下调(P0.01),核因子κB(NF-κB)、环氧合酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达则明显上调(P0.01)。结论:PPARs下调及NF-κB-COX-2/i NOS信号通路激活可能与糖尿病肝损伤的发生发展有关。     

下调宫颈癌细胞FAM111B表达对增殖、周期和凋亡的影响

目的观察下调FAM111B对宫颈癌细胞系C-33A和HeLa增殖、细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法应用慢病毒载体siRNA-FAM111B及Null,分别感染C-33A和HeLa细胞。实时定量PCR方法(qRTPCR)和Western blot方法分别检查各组细胞FAM111B基因与蛋白的表达。应用CCK-8方法检测FAM111B对细胞增殖能力的影响。流式细胞术PI染色细胞周期检测各组细胞周期变化。流式细胞术Annexin V/PI双染方法检测各组细胞的凋亡情况。Western blot法检测p53及下游Bax和Bcl-2的表达。结果成功转染C-33A和HeLa细胞,FAM111B基因与蛋白表达水平均下调。转染siR-FAM111B能抑制宫颈癌细胞的增殖,C-33A和HeLa细胞发生G1期阻滞。下调FAM111B诱导宫颈癌细胞凋亡,促进p53蛋白表达,进而上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达。结论下调FAM111B抑制宫颈癌细胞的增殖,促使细胞周期G1期阻滞,诱导细胞凋亡,与调节p53蛋白进而激活下游相关信号通路相关。     

尼克地尔通过PI3K/AKT信号通路调节糖尿病大鼠的糖和脂质代谢

目的 探讨尼克地尔在改善糖尿病大鼠糖脂代谢中的作用及其机制。方法 30只SD大鼠随机分为正常对照组（Control组）、糖尿病组（Model组）和尼可地尔干预组,每组10只。8周后,检测空腹血糖、随机血糖、空腹胰岛素、胰岛素耐量试验;ELISA法检测大鼠总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平;HE染色和油红观察肝脏的病理形态学改变;Western blot检测PPAR γ、FAS、LPL、SRE BP1-c和PI3K/AKT通路相关的蛋白。结果 尼可地尔可显著改善糖尿病大鼠血糖水平、胰岛素水平和糖耐量。尼可地尔可降低糖尿病大鼠血清TC、TG水平,上调肝脏PPAR γ、FAS和LPL表达,下调SRE BP1–c表达;并可以通过PI3K/AKT信号通路减轻糖尿病大鼠肝脏形态损伤和脂质积聚。结论 尼克地尔通过PI3K/AKT信号通路调节糖尿病大鼠的糖和脂质代谢。     

C-KIT抑制剂对过敏性哮喘气道炎症反应的作用及机制探讨

目的研究C-KIT抑制剂对过敏性哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法使用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)构建过敏性哮喘小鼠模型,收集支气管肺泡灌洗细胞进行细胞定量和定性分析,使用IL-13处理细胞并检测细胞中内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER)蛋白的表达和信号通路状态,处死小鼠后收集其肺部组织,通过免疫组化检测内质网应激标志物的表达,通过免疫印迹分析相关蛋白表达;通过RNA模拟物诱导肺上皮细胞中C-KIT的过表达,使用IL-13处理细胞并检测相关蛋白的表达。结果 OVA可以诱导野生小鼠气道炎症,促进杯状细胞增生,增加嗜酸性理细胞比例,促进内质网应激标志物的表达,而c-kit敲低/C-KIT抑制剂处理可以抑制OVA诱导的ER应激和炎症反应;体外实验显示,相对于敲除小鼠,野生小鼠肺部细胞中IL-13表达增加,从而促进PI3K/Akt/NF-κB的激活并诱导ER,c-kit敲低/C-KIT抑制剂处理可以抑制IL-13表达,并下调PI3K/Akt/NF-κB的激活。结论 C-KIT抑制剂能够通过抑制PI3K/AKT信号通路减轻IL-13诱导的内质网应激,从而起到治疗过敏性哮喘小鼠模型中的气道炎症的作用。     

黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞PI3K/Akt/eNOS信号通路的影响

背景：前期研究证实黄芪通过P38MAPK通路促进内皮祖细胞增殖,其影响是否通过PI3K/Akt/eNOS途径实现？ 目的：观察黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞蛋白激酶B、内皮型一氧化氮合酶表达的影响。 方法：采用密度梯度离心法获取糖尿病患者外周血单个核细胞,培养7 d后鉴定内皮祖细胞。观察0,50,200,800,3 200,6 400 mg/L黄芪多糖分别干预6,12,24,48 h对内皮祖细胞影响的量效和时效关系;用黄芪多糖及黄芪多糖与PI3K抑制剂LY294002联合干预糖尿病患者内皮祖细胞,Western blot检测磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达水平。以未进行任何处理健康人内皮祖细胞作为对照组。 结果与结论：糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力较对照组明显下降(P  < 0.05)。黄芪多糖显著增加糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力,当黄芪多糖在200~800 mg/L质量浓度范围,干预6~24 h可呈时间及剂量依赖性增强内皮祖细胞的增殖能力(P < 0.01),并呈剂量依赖性升高内皮祖细胞磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达(P < 0.05);PI3K抑制剂LY294002能阻断黄芪多糖诱导的Akt、内皮型一氧化氮合酶的磷酸化(P < 0.05)。说明黄芪多糖通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路促进内皮祖细胞增殖和向内皮细胞的分化。     

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移

 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用。方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6, rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和05 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt, t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt, p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。 结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P<005）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P<005）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降103%～697%,细胞迁移率下降379%～416%,差异均有统计学意义（P<005）。 结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。