Sortilin调控ABCA1蛋白水平影响荷脂巨噬细胞内脂质流出

目的　探讨Sortilin对荷脂THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白表达及胞内脂质流出的影响。 方法　采用Western blot和qRT-PCR检测细胞内ABCA1蛋白和mRNA表达水平;Co-IP实验检测Sortilin和ABCA1的结合情况;高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量变化;油红O染色观察细胞内脂滴情况。 结果　Sortilin下调细胞内ABCA1蛋白水平,但对其mRNA水平无显著影响;Co-IP结果表明Sortilin能与ABCA1结合;与对照组相比,Sortilin过表达后荷脂巨噬细胞内胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴肥大,数量明显增多,Sortilin沉默后荷脂巨噬细胞胆固醇流出增加,胞内脂质含量减少,脂滴瘦小,数量减少;溶酶体抑制剂氯喹共处理可部分逆转Sortilin过表达对巨噬细胞ABCA1蛋白和胆固醇流出的抑制作用。 结论　Sortilin下调巨噬细胞ABCA1蛋白水平,抑制胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积。     

Sortilin调控ABCA1蛋白水平影响荷脂巨噬细胞内脂质流出

目的　探讨Sortilin对荷脂THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白表达及胞内脂质流出的影响。 方法　采用Western blot和qRT-PCR检测细胞内ABCA1蛋白和mRNA表达水平；Co-IP实验检测Sortilin和ABCA1的结合情况；高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量变化；油红O染色观察细胞内脂滴情况。 结果　Sortilin下调细胞内ABCA1蛋白水平，但对其mRNA水平无显著影响；Co-IP结果表明Sortilin能与ABCA1结合；与对照组相比，Sortilin过表达后荷脂巨噬细胞内胆固醇流出减少，胞内脂质含量增加且脂滴肥大，数量明显增多，Sortilin沉默后荷脂巨噬细胞胆固醇流出增加，胞内脂质含量减少，脂滴瘦小，数量减少；溶酶体抑制剂氯喹共处理可部分逆转Sortilin过表达对巨噬细胞ABCA1蛋白和胆固醇流出的抑制作用。 结论　Sortilin下调巨噬细胞ABCA1蛋白水平，抑制胆固醇流出，促进胞内脂质蓄积。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象, 探讨ABCA1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法:用液体闪烁计数器检测胆固醇流出。RT-PCR方法检测ABCA1mRNA的表达。结果:氧化型低密度脂蛋白可增加THP-1巨噬细胞胆固醇流出, 22(R)-羟基胆固醇剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出, 而DIDS剂量依赖性减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出;逆转录聚合酶链反应显示, 22(R)-羟基胆固醇可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达, DIDS可抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达。结论:ABCA1在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用, 并为开发和寻找对ABCA1表达有特异性调控作用的药物提供了新的思路。     

载脂蛋白A-Ⅰ对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察载脂蛋白A-I对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的影响,从而探讨载脂蛋白A-I对动脉粥样硬化(As)发生发展的影响。方法:用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出, 高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量, 运用逆转录-多聚酶链反应和Western 印迹分别检测ABCA1 mRNA 与ABCA1蛋白的表达,用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度。 结果:载脂蛋白A-I引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少, 而ABCA1蛋白质水平、细胞平均ABCA1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加,但ABCA1 mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂(leupeptin 和ALLN)增加ABCA1蛋白质水平,而其它蛋白酶抑制剂(pepstatin A、aprotinin及phosphoramiddon)不增加ABCA1蛋白质水平,蛋白体抑制剂(lactacytin)和溶酶体抑制剂(NH4Cl)也不影响ABCA1蛋白质水平。 结论:巯基蛋白酶可降解THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质,而载脂蛋白A-I可阻碍巯基蛋白酶降解ABCA1蛋白质,从而提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 蛋白质水平, 增加细胞内胆固醇流出, 降低细胞内胆固醇聚积。     

IL-17A通过上调ABCA1的表达减少RAW264.7巨噬细胞脂质的积聚

目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)对RAW264. 7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法:用不同浓度及的IL-17A处理小鼠RAW264. 7细胞6 h或24 h,或用同一浓度IL-17A处理RAW264. 7细胞不同时间;采用RT-qPCR及Western blot法检测细胞ABCA1的mRNA和蛋白表达情况;采用NBD-胆固醇法检测细胞胆固醇流出情况;采用油红O染色法测定细胞脂质蓄积情况。结果:与对照组相比,IL-17A可以增加RAW264. 7巨噬细胞ABCA1蛋白的表达水平,但不影响ABCA1 mRNA的表达。经IL-17A干预,RAW264. 7巨噬细胞内胆固醇向Apo A-1流出增多,同时细胞脂质蓄积显著减少(P 0. 01)。结论:IL-17A可以增加RAW264. 7巨噬细胞ABCA1的表达水平,其机制并不是通过转录水平实现的,这种影响可能与其抗动脉粥样硬化作用有关。     

黄芪甲苷通过调控miR-33a及ABCA1信号发挥抗动脉粥样硬化作用

目的:观察黄芪甲苷是否通过调控微小RNA-33a(miR-33a)而影响下游信号三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出,从而研究黄芪甲苷抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:体内实验:采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度real-time PCR和Western blot分别检测小鼠主动脉ABCA1的mRNA和蛋白表达。体外实验:建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,然后用黄芪甲苷含药SD大鼠血清处理,采用real-time PCR检测细胞miR-33a表达;细胞随机分为空白血清组、黄芪甲苷含药血清组及黄芪甲苷含药血清+miR-33a mimic处理组,real-time PCR和Western blot法检测细胞ABCA1的mRNA和蛋白表达,油红O染色和高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,[3H]法检测细胞内胆固醇流出。结果:体内实验显示,黄芪甲苷组小鼠血管各层结构正常,排列整齐,局部有小灶性的钙化颗粒物沉积,病变轻,斑块小,泡沫细胞和脂质减少,弹力板基本完整,病变程度明显轻于模型组。与模型组相比,黄芪甲苷组小鼠主动脉的miR-33a表达量降低,ABCA1 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P 0. 05)。体外实验显示,在不影响THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞活性的情况下,黄芪甲苷含药血清能明显上调ABCA1的mRNA和蛋白表达,但能被转染miR-33 mimic抑制;黄芪甲苷含药血清可减少细胞中的脂质蓄积,但能被细胞中转染miR-33 mimic所弱化;黄芪甲苷减少细胞内胆固醇蓄积与其促进细胞内胆固醇流出有关,细胞中转入过量miR-33a可以抑制胆固醇流出。结论:黄芪甲苷可通过减少miR-33a的生成,进而上调ABCA1表达,促进巨噬细胞中胆固醇流出,这可能是黄芪甲苷抗动脉粥样硬化作用的分子机制之一。     

血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1的影响

目的： 以THP-1源性泡沫细胞为研究对象，探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达、细胞内胆固醇含量及胆固醇流出的影响。方法: 运用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blotting分别检测AngⅡ对ABCA1 mRNA与ABCA1蛋白表达的影响，采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量，应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果: AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著升高(P<0.05)、ABCA1表达显著减少（P<0.05），AngⅡ受体拮抗剂厄贝沙坦（Irb）能显著减少细胞内胆固醇含量(P<0.05)、促进细胞内胆固醇流出及减轻AngⅡ对ABCA1的抑制作用(P<0.05)。结论: AngⅡ有通过其受体抑制ABCA1表达，促进泡沫细胞形成，加速动脉粥样硬化的作用。     

可溶性Klotho蛋白抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的:探讨可溶性Klotho(KL)蛋白对THP-1源性泡沫细胞形成的影响。方法:THP-1单核细胞与160 nmol/L佛波酯孵育48 h后,诱导分化为THP-1源性巨噬细胞,给予THP-1源性巨噬细胞不同浓度(25、50、100和200μg/L)的可溶性KL蛋白预处理后,再由氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导其转变为泡沫细胞。油红O染色观察细胞内脂滴形成情况,通过液体闪烁计数法测定THP-1源性泡沫细胞内胆固醇流出情况,酶荧光法检测细胞内游离胆固醇及胆固醇酯的含量,并分别用Western blot法及RT-qPCR法检测酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的蛋白及mRNA表达。结果:可溶性KL蛋白能增加THP-1源性巨噬细胞内胆固醇流出,抑制THP-1源性泡沫细胞形成,且可溶性KL蛋白呈一定浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成过程中ACAT1表达的上调和ABCA1表达的下调(P<0.05)。结论:可溶性KL蛋白能够抑制THP-1源性泡沫细胞形成,其机制可能与靶向调控细胞内ACAT1和ABCA1的表达有关。     

黄芪多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察不同浓度黄芪多糖对胆固醇流出和ABCA1基因表达的影响。方法：将THP-1细胞诱导分化成泡沫细胞，用不同浓度黄芪多糖对其干预24 h，γ计数仪检测胆固醇流出，RT-PCR及流式细胞仪检测ABCA1的表达。结果：黄芪多糖呈剂量依赖性（10-100 mg/L）促进胆固醇流出；增加ABCA1的表达。结论：黄芪多糖可能通过增加ABCA1的表达而促进胆固醇流出。     

肺炎衣原体下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1、ABCG1表达的机制研究

目的:观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)对肺炎衣原体(Cpn)诱导的THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调控作用,探讨Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1表达的信号转导机制。方法:将THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后,观察Cpn感染对细胞内ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。并用不同浓度的JNK特异性抑制剂SP600125对细胞进行预处理,观察SP600125对Cpn诱导的ABCA1/ABCG1、PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。分别用RT-PCR和Western blotting检测各组ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达。结果:Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1及其上游调控基因PPARγ mRNA和蛋白表达。而SP600125能呈浓度依赖性地抑制Cpn感染所带来的上述影响。结论:Cpn可能通过JNK-PPARγ信号转导通路下调AB-CA1/ABCG1表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出,促进动脉粥样硬化发生发展。     

Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1和G1表达的调控作用

目的： 研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人ATP结合盒转运子A1和G1（ABCA1/ABCG1）表达的调控作用。方法: 体外培养人源单核细胞系THP-1,由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL作用不同时间,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用PT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内外胆固醇含量并计算胆固醇流出率。结果: Ghrelin干预可明显减少细胞内脂滴的形成,显著增加胆固醇流出率,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA 水平和蛋白表达,且此作用呈浓度依赖性而不呈时间依赖性。结论: Ghrelin可能通过上调ABCA1和ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生。     

血管紧张素-(1-7)通过AC-cAMP途径增加THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达并减少细胞胆固醇含量

目的: 构建THP-1源性泡沫细胞模型,探讨血管紧张素-(1-7) 和腺苷酸环化酶抑制剂MDL对THP-1源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白——ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达和胆固醇含量的影响。方法: 将THP-1源性单核细胞诱导为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)建立泡沫细胞模型。实验分为4组:正常泡沫细胞组、MDL组、Ang-(1-7)组和MDL+Ang-(1-7)组。处理24 h后,分别通过ELISA法、荧光定量PCR法和Western blotting检测各组细胞cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量,闪烁计数法检测各组细胞胆固醇流出率,高效液相色谱法检测各组细胞胆固醇含量。结果: (1)Ang-(1-7)组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显升高(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显增高(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组显著降低(P<0.05)。(2)MDL组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显降低(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显降低(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组增高(P<0.05)。(3)MDL+Ang-(1-7)组数值介于Ang-(1-7)组与泡沫细胞组之间。结论: (1)Ang-(1-7)能促进泡沫细胞ABCA1的表达增加,促进胆固醇外流,减少泡沫细胞胆固醇含量,逆转泡沫细胞的形成。(2) MDL可以抑制腺苷酸环化酶的活性,减少cAMP的生成,从而部分拮抗Ang-(1-7)的上述作用,但不能完全阻断Ang-(1-7)的作用。     

肥大细胞改变THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇含量及抑制胆固醇流出

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，探讨肥大细胞（MC）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量、分配和流出的影响及机制。方法： THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞在MC颗粒释放物存在或缺乏下与高密度脂蛋白3（HDL₃）共育。高效液相色谱检测泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和酯化胆固醇(EC)含量，用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出，运用逆转录聚合酶链反应检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平，采用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL₃及apoA-Ⅰ的降解。结果： MC组泡沫细胞内TC、FC明显高于对照组（TC对照组为527.3 mg/g，MC组为917.9 mg/g）；EC/TC比值低于对照组（7.6% vs 47.5%）；细胞内胆固醇流出少于对照组(26.92％±2.6％ vs 40.98％±3.4％,P<0.05)；而泡沫细胞ABCA1的mRNA水平与对照组无明显差异。MC颗粒释放物处理HDL₃后，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，约有28%的apoA-Ⅰ被降解，在分子量26 kD左右处出现了新的条带，产生了1个26 kD的小多肽。结论：肥大细胞可通过降解HDL₃及apoA-Ⅰ抑制细胞内胆固醇流出而增加细胞内胆固醇蓄积，这个作用与ABCA1表达无直接关系。     

miRNA-33对Hcy干预RAW264.7巨噬细胞衍生的泡沫细胞表达ABCA1/ABCG1的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)是否通过微小RNA-33 (miRNA-33)抑制三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)的表达,从而降低胆固醇逆转运(RCT)效率。方法:复制RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导为泡沫细胞的模型,油红O染色确定模型是否复制成功,用LipofectamineTM2000将miRNA-33 mimics和miRNA-33 inhibitor分别转染入细胞内,再给予5 mmol/L的Hcy干预24 h后进行实验;用油红O染色观察细胞内脂滴情况;real-time PCR和Western blot检测ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平;液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇流出率;高效液相色谱分析细胞内胆固醇含量。结果:(1)与空白对照组相比,miRNA-33 mimics组细胞内脂滴含量增加,ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达量降低(P 0.05),细胞内胆固醇含量逐渐增加(P 0.05),细胞内胆固醇流出率逐渐减少(P 0.05);(2)与空白对照组相比,miRNA-33 inhibitor组检测结果与miRNA-33 mimics组的结果相反,差异具有统计学意义(P 0.05);(3)空白对照组、miRNA-33 mimics-NC组和miRNA-33 inhibitor-NC组3组间相比,所有检测结果的差异均无统计学显著性。结论:Hcy可间接通过诱导miRNA-33表达而抑制ABCA1和ABCG1的蛋白表达,降低RCT效率。     

载脂蛋白E在ABCA1和ABCG1介导的胆固醇流出中的作用

目的:探讨载脂蛋白E(ApoE)在ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)介导的胆固醇流出中的作用及可能机制。方法:将RAW264.7细胞随机分为3组:空白对照组:用单纯培养基培养;低密度脂蛋白受体基因敲除(LDLr^-/-)组:用20mg/LLDLr^-/-小鼠脂蛋白处理细胞;ApoE基因敲除(ApoE^-/-)组:用20mg/LApoE^-/-小鼠脂蛋白处理细胞。采用透射电镜和酶法检测细胞内脂质含量,用液闪仪技术检测胆固醇流出变化,用免疫印迹技术和实时定量PCR技术检测ABCA1和ABCG1的表达水平。结果:与对照组相比,LDLr^-/-小鼠脂蛋白处理后细胞内脂质含量并未明显改变,而ApoE^-/-小鼠脂蛋白处理48h后,细胞内胆固醇酯增加了60%;同时,与LDLr^-/-小鼠脂蛋白处理组相比,用ApoE^-/-小鼠脂蛋白处理后,巨噬细胞胆固醇流出至载脂蛋白A-I(ApoA-I)和高密度脂蛋白(HDL)的量均明显降低。与对照组相比,LDLr^-/-小鼠脂蛋白和ApoE^-/-小鼠脂蛋白处理显著增加ABCA1和ABCG1的蛋白和mRNA水平,但是ApoE^-/-小鼠脂蛋白对ABCA1和ABCG1蛋白和mRNA水平的诱导程度明显低于LDLr^-/-小鼠脂蛋白。结论:ApoE在介导巨噬细胞胆固醇流出中发挥重要作用,该作用与其调节ABCA1和ABCG1的表达水平有关。     

PKC参与化学修饰的LDL对ABCA1表达和功能的调节

目的 探讨PKC信号途径对oxLDL和acLDL诱导的小鼠巨噬细胞ABCAl表达的影响。方法 分别以100μg/ml acLDL和oxLDL温育小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞24 h,同时加入PKC信号途径的激活剂(PMA)或抑制剂(GF109203X),应用胆固醇外排实验、半定量RT-PCR和Western印迹,检测小鼠巨噬细胞内ABCAl功能、mRNA及蛋白质表达的水平。结果 1.0 μmol/L GF109203X可分别使aeLDL孵育组的胆固醇外排率下降至对照组的56.0％,ABCA1 mRNA水平下降至(54.0±8.2)％,蛋白质水平下降至(68.1±2.0)％;oxLDL孵育组的胆固醇外排率下降至对照组的47.0％,ABCA1 mRNA水平下降至(43.0±5.0)％,蛋白质水平下降至(73.0±10.0)％。160 nmol/L PMA作用24 h可分别使acLDL孵育组的胆固醇外排率升高至134.0％,oxLDL孵育组升高至125.1％;ABCA1 mRNA水平升高至(211.0±17.0)％,蛋白质水平升高至(305.0±21.0)％。结论 PKC信号途径在oxLDL和acLDL对小鼠巨噬细胞内ABCA1表达调控中发挥作用,该信号途径的激活可上调ABCA1的表达,促进ABCA1介导的胆固醇外排。     

抗ABCA1自身抗体在SLE患者动脉粥样硬化发病机制中的意义

检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)抗体及探讨其致SLE早发动脉粥样硬化(AS)的机制。采用免疫印迹法检测75份SLE患者血清中抗ABCA1自身抗体。75份性别年龄匹配正常人血清为对照。观察抗ABCA1抗体阳性患者血清IgG对细胞胆固醇流出的影响。结果显示,SLE患者血清中存在抗ABCA1抗体,阳性率为29.3%,正常人中无一阳性(P<0.05)。SLE有斑块组的抗ABCA1抗体阳性率高于SLE无斑块组(43.8%和16.3%,P<0.05)。纯化的抗ABCA1抗体阳性SLE患者IgG体外可抑制THP-1细胞内胆固醇的流出,抑制率最高可达28.7%,正常人IgG抑制率相比有显著性差异。实验表明,SLE患者血清中抗ABCA1抗体阳性率明显高于正常人,且纯化的抗AB-CA1抗体阳性患者IgG在体外能抑制细胞内胆固醇的流出,从而促进SLE患者早发动脉粥样硬化的发生。     

丹参酮ⅡA上调ABCA1表达促进泡沫细胞胆固醇流出

目的:探讨丹参酮ⅡA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成的影响及其机制。方法:体外培养的鼠源性巨噬细胞株,用ox-LDL(50μg/mL)孵育细胞以诱导泡沫细胞,同时用不同质量浓度的丹参酮ⅡA(10-5,10-4和10-3mol/L)处理。用油红O染色观察细胞荷脂情况,高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离胆固醇(free cholesterol,FC)和胆固醇酯(cholesteryl ester,CE)的水平。采用[3H]标记的胆固醇测定胆固醇流出率。实时定量PCR和Western印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)的mRNA和蛋白的表达。结果:Ox-LDL处理48 h后,与正常巨噬细胞相比,油红O染色阳性细胞数显著性增加,细胞体积明显增大,细胞内可见大量的脂滴,形态多呈不规则形。与泡沫细胞模型相比,10-4或10-3mol/L丹参酮ⅡA处理组油红O染色阳性细胞数显著减少,细胞内脂滴明显减少,细胞体积明显缩小。与泡沫细胞模型组相比,10-4或10-3mol/L丹参酮ⅡA显著性降低了细胞内TC,FC,CE水平和CE/TC比值,显著性增加了细胞胆固醇流出率和ABCA1mRNA和蛋白的表达。结论:丹参酮ⅡA可抑制ox-LDL诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成,其机制可能与丹参酮ⅡA增加泡沫细胞中ABCA1的表达,促进胆固醇流出有关。     

温胆汤抑制氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞泡沫化

目的:从巨噬细胞泡沫化角度探讨温胆汤抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用MTT法确定温胆汤的无毒性干预浓度;药物干预后,采用油红O染色法检测泡沫细胞的形成;采用酶法检测细胞内胆固醇水平及细胞胆固醇流出;采用Western blot检测巨噬细胞膜蛋白CD36、A类清道夫受体(SR-A)及ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和B类I型清道夫受体(SR-BI)的蛋白表达水平。结果:温胆汤冻干粉溶液对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)刺激的THP-1细胞源性巨噬细胞的无毒性干预浓度为0～6 g/L,于是设置温胆汤干预浓度梯度为1.5、3和6 g/L进行后续实验。各浓度温胆汤干预可抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成,半定量分析显示温胆汤浓度依赖性降低细胞内脂质沉积(P<0.05或P<0.01)。温胆汤浓度依赖性降低细胞内总胆固醇、胆固醇酯和胆固醇酯化率(P<0.05或P<0.01),促进细胞胆固醇流出(P<0.01),减少CD36表达(P<0.01)。6 g/L温胆汤显著减少SR-A的表达(P<0.05);3和6 g/L温胆汤显著促进ABCA1和SR-BI...     

ATP结合盒A1在胆固醇流出和动脉粥样硬化中的作用

ABCA 1是ATP结合盒 (ABC)转运子超家族成员。ABCA 1基因的表达受到多种代谢物的严格调控。ABCA 1基因的突变引起Tangier病 (TD)。胆固醇逆向转运清除组织过量的胆固醇 ,防止动脉粥样硬化(AS)的产生。而细胞内胆固醇的流出是胆固醇逆向转运的限速步骤 ,ABCA 1促进胆固醇的流出而参与胆固醇的逆向转运过程。TD杂合子和转ABCA 1基因的研究证实 ,ABCA 1具有防止早期AS的作用。ABCA 1激活剂已成为临床上预防和治疗AS的新靶点。