bFGF对跟腱成纤维细胞创伤愈合影响的体外研究

目的：研究ｂＦＧＦ在跟腱损伤修复中的作用及机制。方法：采用体外创伤愈合和细胞运动模型及ＭＴＴ方法,分别对ｂＦＧＦ作用下,跟腱成纤维细胞创伤愈合,运动与增殖行为进行分析。结果：ｂＦＧＦ浓度为５ｎｇ／ｍｌ时,即可显著地促进跟腱成纤维细胞的创伤愈合与增殖,当ｂＦＧＦ浓度提高至１００ｎｇ／ｍｌ,这种促进作用达到最大值。     

bFGF促进创伤愈合的作用机制研究

目的 探讨ｂＦＧＦ促愈合的作用机制。方法 在新西兰大白兔背部制作创伤模型，外用ｂＦＧＦ（１０００Ｕ／ｍｌ）进行肉眼观察，病理学检查，免疫组化分析和电镜观察，并用０．０２ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢＳ做对照。     

bFGF喷雾剂对颌面部软组织创伤愈合的影响

目的：观察见林bFGF（外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子）喷雾剂治疗颌面部开放性软组织创伤的临床效果，探讨软组织创伤新的治疗途经。方法：对2004～2006年收治的72例颌面部创伤患者，按随机抽取的方法将患者分为见林bFGF剂治疗组及常规外科治疗组。结果：两组患者均治愈，见林bFGF剂治疗法无明显瘢痕增生，平均愈合期5．6天；常规外科治疗法有9例产生瘢痕增生，平均愈合期7．5天。在半年及1年时复查，见林bFGF剂治疗组创口愈合后，创面区域平复无增生，皮肤无异常。结论：见林bFGF喷雾剂治疗颌面部开放性软组织创伤优于常规外科治疗法。     

bFGF对猪关节软骨细胞合成氨基葡聚糖的作用

[提要]目的:观察bFGF对软骨细胞外分泌基质氨基葡聚糖含量的影响。方法:通过Ⅱ型胶原酶消化法获得高活性的软骨细胞,定量接种6×106个细胞于培养皿,在细胞贴壁后更换培养基时,加入bFGF10ng/ml,每周传代一次,连续5周,留取所有培养液用阿利新蓝法(AlcianBlue)测定软骨细胞外分泌基质氨基葡聚糖(GAG)的变化;利用光镜观察原代及传代软骨细胞的生长情况。结果:体外培养的软骨细胞从传代后合成氨基葡聚糖类基质,第二代传代细胞分泌GAG的能力最强;加入bFGF能明显促进传代软骨细胞合成大量的氨基葡聚糖类基质。结论:bFGF能明显促进体外培养的传代软骨细胞合成大量的氨基葡聚糖类基质。     

生长因子对成人关节软骨细胞的促增殖作用

目的观察不同生长因子对成人关节软骨细胞（adult human articular chondrocytes，AHAC）增殖的影响，探索AHAC体外大量扩增的方法。方法以酶消化法从成人关节软骨分离细胞，条件培养基培养；传2代细胞分别用不同浓度成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor-2，FGF-2）、转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF—β1）、血小板衍生因子bb（platelet derived growth factor-bb，PDGF-hb）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）或其不同组合作用。用MTT法比较细胞增殖情况，用组化和免疫组化检测观察细胞表型变化。结果FGF-2、TGF—β1、PDGF—bb、HGF均有促AHAC增殖的作用，其最大效应剂量分别是50ng/ml、1ng／ml、1ng／ml、20ng／ml。5ng／ml FGF-2＋1ng/ml TGF-β1有最强的促增殖作用，继续加用PDGF—bb和（或）HGF无进一步促进作用；用这一因子组合培养AHAC，可以传10代以上，细胞扩增2000倍以上，且传9代细胞仍弱表达Ⅱ型胶原和aggrecan。结论FGF-2、TGF-β1、PDGF—bb、HGF均对AHAC有一定的促增殖作用；5ng／ml FGF-2＋1ng/ml TGF-β1有最大的促增殖效应，细胞短期内大量扩增，且在大量扩增的同时维持了一定的软骨细胞表型，因此是合适的AHAC体外大量扩增促进剂。     

人负重关节软骨细胞的体外分离与培养

目的　研究人负重关节软骨细胞的分离培养技术。方法　对 10例手术切除的负重关节软骨进行0 2 %Ⅱ型胶原酶分离、10 %DMEM中培养 ,观察软骨细胞获得率、贴壁率、增殖状况及形态学改变。结果　① 0 2 %Ⅱ型胶原酶消化尽 2 0 0～ 70 0mg软骨标本需 4～ 14h ,细胞获得率 (1 82± 0 5 7)× 10 6/g ,存活率(79 4± 9 9) %。②细胞可传 6～ 12代 ,前 4代培养时间平均 (33± 10 )d ,生长倍数平均 198倍 ,倍增时间(4 13± 1 34)d。③第 3、4代细胞呈多角形、部分梭形 ,8、9代后细胞梭状铺平。结论　 30 0～ 5 0 0mg软骨标本 ,经该方法培养 3～ 4周后可达第 4代 ,细胞数可达 (0 6～ 1 0 )× 10 8个 ,可满足临床上修复 15～ 2 5cm2软骨缺损的需要。     

碱性成纤维细胞生长因子转染兔关节软骨细胞的研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)基因转染兔关节软骨细胞后对培养的关节软骨细胞形态、分裂增殖及代谢等方面的影响。方法　将bFGF基因克隆于真核表达载体pHβ。AP 1中 ,构建重组真核表达载体 pHβ bFGF ,转染兔关节软骨细胞。G418筛选阳性克隆 ,检测阳性细胞bFGF基因的表达水平。测定培养软骨细胞的DNA含量、糖醛酸含量、软骨细胞增殖情况及进行细胞周期分析。结果　bFGF基因转染软骨细胞表型未见显著变化 ;bFGF基因转染组、载体对照组、空白对照组DNA含量分别为 ( 77.37± 6 .2 1)、( 40 .39± 4.33)、( 33 .77± 4.2 5 ) μg/瓶 (P <0 .0 1) ,糖醛酸含量分别为 ( 30 8.8± 10 .2 )、( 77.9± 8.7)、( 80 .2± 10 .5 ) μg/瓶 ( P <0 .0 1) ,软骨细胞G1期分别为 5 9.3± 2 .1、6 9.5± 4.0、73 .1± 3 .9(P <0 .0 5 )。结论　bFGF转染关节软骨细胞后 ,可显著促进细胞分裂增殖并缩短细胞周期 ,为软骨组织工程研究提供新的技术路线及理论基础。     

蝇蛆治疗与创伤愈合

生物治疗是近年来重又兴起的治疗方法。应用无菌蝇蛆促进创伤愈合，为烧伤及难治性溃疡提供了一种有效的手段。本文就蝇蛆的选择，无菌化培养，临床应用及其促进创伤愈合机理的研究进展作一综述。     

生长因子与软组织创伤愈合

生长因子对软组织创伤愈合过程中的多种细胞具有促生长、分裂、趋化性迁移和分化作用。动物实验的研究结果表明,生长因子在体内可以加速创伤愈合的速度。国外已开始进行生长因子治疗软组织创伤的临床实验研究。     

碱性成纤维细胞生长因子对急性坏死性胰腺炎犬肠道细菌移位的影响

目的 探讨基因重组碱性成纤维细胞生长因子(bFCF)对急性坏死性胰腺炎犬(ANP)肠道细菌移位的影响。方法 杂种犬23只,分对照组(n=7)、ANP组(n=8)和bFCF组(n=8)。bFCF组犬复制ANP模型后,每日静脉注射bFCF(5μg/kg)。结果 bFCF治疗ANP后,肠粘膜损伤明显减轻,脏器细菌培养阳性率下降50％,细菌移位数量减少15～30倍,肠粘膜蛋白质、DNA含量显著增加(P<0.05),丙二醛含量明显减少(P<0.05)。结论 bFCF可显著减少ANP时肠道细菌移位,其机制可能是通过增加肠粘膜蛋白质合成,促进肠粘膜损伤修复有关。     

酸性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子对兔韧带细胞增殖的影响

目的：观察酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和表皮生长因子(EGF)对内侧副韧带(MCL)和前十字韧带(ACL)细胞增殖行为的影响。方法：培养10周龄新西兰白兔内侧副韧带和前十字韧带细胞，在培养液中分别加入aFGF和EGF，以XTT方法测定细胞的增殖行为。结果：aFGF在1ng／ml时即对两种细胞具有显著的促进增殖作用，其浓度达50ng／ml时，对MCL细胞的促进作用最大，达100ng／ml时对ACL细胞的促进作用最大。EGF在0．78ng／ml时即对MCL细胞有显著的促增殖作用，在1．56ng／ml时始对ACL细胞有显著的促增殖作用，其浓度达3．125ng／ml时对2种细胞的促进作用最大。aFGF和EGF在超过其最佳浓度后，随浓度升高促进作用均下降。结论：aFGF和EGF可以促进韧带成纤维细胞增殖。     

牛脑垂体中碱性成纤维细胞生长因子的提纯及其体外骨形成作用初步观察

本实验首先参照Gospodarowicz等人介绍的硫酸铵盐析、CM-Se phadex C-50阳离子交换层析、肝素-Sepharose亲和层析三步方法提取碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),并从以下三方面进行鉴定:①生物活性鉴定显示bFGP能明显促进3T3细胞增殖。②SDS-PAGE结果显示提取bFCF分子量为18.4KD,且呈单一蛋白区带,表明样品纯度较高。③双向免疫扩散试验显示提取bFGF与bFGF标准品免疫化学性质相同。再按以往文献报导的方法分离、培养成骨细胞,并从光镜、电镜观察以及碱性磷酸酶染色三个方面加以鉴定,结果表明分离成骨细胞效果较好,其纯度>95％。最后以培养的成骨细胞作为研究体外骨形成的生物学模型,观察了bFGF对成骨细胞体外骨形成过程的影响,结果显示bFGF将来有可能在临床作为一种生物制剂用于骨折、骨不连、骨缺损、骨质疏松、成骨不良性疾病等的治疗。     

Elevated Serum Vascular Endothelial Growth Factor and Basic Fibroblast Growth Factor Levels in Patients with Thymic Epithelial Neoplasms

Neovascularization, an essential event for the growth of solid tumors, is regulated by a number of angiogenic factors, among which vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF), are considered to exert potent angiogenic activity. In this study, we investigated whether serum VEGF and bFGF levels could be predictors of the development and extension of thymic epithelial neoplasms. The subjects of this study were 37 patients with thymoma, 6 with thymic carcinoma, and 23 healthy volunteers. Serum samples were collected before clinical treatment. Serum VEGF levels were significantly (P < 0.05) elevated in the patients with thymic carcinoma (1 080 ± 1 185 pg/ml) compared with those in the healthy volunteers (407 ± 589 pg/ml). Serum bFGF levels were also significantly (P < 0.05) elevated in the patients with thymic carcinoma (2 740 ± 631 pg/ml) compared with those in the healthy volunteers (1 728 ± 1 192 pg/ml). However, the serum VEGF and bFGF levels did not significantly differ between the patients with thymoma and the healthy volunteers. Serum VEGF and bFGF levels did not significantly differ according to the stage and pathological subtype of thymoma. Moreover, there was no correlation between the serum levels of VEGF and those of bFGF. Thus, while serum VEGF and bFGF levels may serve as markers for thymic epithelial tumors, it is unlikely that circulating VEGF and bFGF could be used as markers for assessing the progression of thymoma tumors. Received: November 10, 2000 / Accepted: May 15, 2001     

Effects of a Single Percutaneous Injection of Basic Fibroblast Growth Factor on the Healing of a Closed Femoral Shaft Fracture in the Rat

Recently, bioactive agents to stimulate bone formation have been available in the orthopedic field. We have shown previously that a single, local injection of basic fibroblast growth factor (bFGF) contributes to the formation of a larger cartilage (soft callus) but does not promote replacement of the cartilage by osseous tissue during experimental closed femoral fracture healing. Aiming at a clinical application, the present study was undertaken to clarify the effects of locally injected bFGF on bone (hard callus) formation and the mechanical properties of the callus in closed fracture healing in rats. Immediately after fracture, a carrier (200 μL of fibrin gel) containing 100 μg of bFGF or carrier alone was applied to the fracture site. At days 42 and 56 postfracture, the bone union rate, bone mineral density (BMD), and mechanical properties (strength and stiffness) of the callus were evaluated. Unexpectedly, with the exception of reduced stiffness in the FGF-injected callus at day 56, none of these parameters showed a significant difference between the control and the FGF-injected groups. Furthermore, the temporal expression pattern of OPN mRNA during healing was very similar between groups. We conclude that, in the healing of closed fractures of long bones, administration of bFGF forms a larger callus but does not necessarily accelerate the healing process.     

bFGF保护脊髓组织、促进神经再生的实验研究

目的　探讨应用外源性碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对脊髓损伤的保护作用以及促进脊髓神经再生的影响。方法　利用Allen氏WD (Weightdrop ,WD)技术 ,以 10 g× 2 5cm致伤力造成SD大白鼠T8脊髓损伤模型 ,并于损伤平面以下蛛网膜下腔置细塑料导管。治疗组分别于术后即刻、 1、 2、 3、 4、 8、 12、 2 4及 48h经导管注入bFGF溶液 2 0 μl (含bFGF10 0 μ) ,以后每周经导管注入 2 0 μlbFGF ;对照组则在同时间注入等量生理盐水 ,术后取伤区脊髓组织进行形态学观察及特殊染色 ,观察神经纤维再生情况。结果　伤区白质内髓鞘结构紊乱 ,囊性变严重 ,应用bFGF可明显改善 ;Gless染色发现bFGF治疗组神经纤维生长情况明显优于生理盐水对照组 ,Fast-blue染色发现bFGF治疗组脊髓变性较轻 ,经统计学分析两组差异有显著性意义 (P <0 0 1)。结论　脊髓损伤后应用外源性bFGF可以保护脊髓神经组织 ,并且对神经纤维有明显的促进作用。     

Prognostic Significance of Vascular Endothelial Growth Factor,Basic Fibroblast Growth Factor,and Angiogenin in Patients With Resectable Hepatocellular Carcinoma After Surgery

Background: Hepatocellular carcinoma (HCC) is a hypervascular malignancy. Vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), and angiogenin (ANG) are important angiogenic factors of neoangiogenesis. This study investigated the predictive value of serum VEGF, bFGF, and ANG in tumor recurrence, disease-free survival (DFS), and overall survival (OS) in HCC patients.Methods: Preoperative serum VEGF, bFGF, and ANG were measured in 98 patients with resectable HCC and in 15 healthy controls. The median follow-up time was 43 months.Results: Preoperative serum VEGF was increased in patients with resectable HCC compared with healthy controls (P < .05). Increased serum VEGF was correlated with tumor recurrence (P = .001). Univariate analysis showed that serum VEGF, tumor-node-metastasis stage, tumor size and number, macroscopic portal vein invasion, and microscopic vascular invasion were correlated with OS and DFS. Serum bFGF and ANG were not associated with survival. Multivariate analysis showed that serum VEGF was the most significant predictor of DFS (relative risk, 2.35; 95% confidence interval, 1.26–4.39; P = .007) and OS (relative risk, 3.44; 95% confidence interval, 1.81–6.57; P < .001) in HCC patients after surgical resection.Conclusions:Preoperative serum VEGF is a significant independent predictor of tumor recurrence, DFS, and OS in patients with resectable HCC.     

碱性成纤维细胞生长因子和血管生成与胃癌发展的关系

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和血管生成与胃癌发展的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测56例人胃癌组织碱性成纤维细胞生长因子表达和微血管密度(microvasculardensity,MVD),分析bFGF和MVD及其与胃癌组织学分型、浸润深度、生长方式、淋巴结转移、远处转移和预后的关系.结果:bFGF阳性者MVD值显著高于bFGF阴性者(P<0.01),MVD值和bFGF表达与胃癌浸润深度(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)和远处转移(P<0.05)密切相关;MVD≥43或bFGF表达阳性的胃癌患者5年生存率较低.结论:血管生成在胃癌发展中具有重要作用,bFGF不仅与胃癌的血管生成有关,而且与胃癌的生长和浸润转移也有关,MVD或bFGF可作为判断胃癌患者预后的指标.     

表皮生长因子对肠吻合口愈合影响的实验研究

目的　探讨重组人表皮生长因子 (rhEGF)对家兔小肠吻合口愈合的促进作用。方法　将 4 8只实验兔随机均分为实验组及对照组 ,均行近端小肠部分切除再吻合术 ,实验组动物于吻合时行rhEGF黏膜下注射。行外周血WBC计数 ,观察吻合口胶原纤维及羟脯氨酸的合成以及吻合口漏发生率。结果　两组术后 3d、5d及 7d与术前比较WBC略有升高 ,但差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。实验组吻合口漏发生率为 4 .3% ,而对照组为16 .7%。实验组术后 3d、5d及 7d胶原纤维面积密度较对照组明显增多 ,吻合口周围成纤维细胞明显增多 ,核大、浓染且胞浆丰富。实验组吻合口组织新生血管较多且有正常腺管结构 ,而对照组黏膜细胞结构破坏重。羟脯氨酸生成在术后 5d及 7d实验组与对照组相比差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。结论　炎症反应存在于创伤修复的全过程 ,但EGF局部应用对全身炎性反应的影响不大。rhEGF有促进创伤愈合、细胞向创面迁移的作用 ,使成纤维细胞增多 ,胶原纤维合成及转运加快 ,同时促进创面新生血管产生 ,可有效促进吻合口的愈合 ,防止吻合口漏的发生。