抗重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备与鉴定

目的 :获得能特异性识别人红细胞生成素 (hEPO)的单克隆抗体 (McAb)。方法 :用重组人红细胞生成素 (rHuEPO)作抗原免疫Balb/c小鼠 ,以细胞融合、酶联免疫吸附实验 (ELISA)筛选和克隆化技术获得抗hEPO的杂交瘤细胞株。用生物学方法鉴定杂交瘤细胞 ,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果 :获得 3株稳定分泌抗hEPO McAb的杂交瘤细胞株 (1H7、4G11、1B4 )。培养上清的ELISA效价分别为 :1∶10 2 4、1∶5 12、1∶5 12 ;腹水效价为 :1× 10 7、1× 10 6、2× 10 4。阻断法表明 1H7识别的hEPO上的抗原决定簇和 4G11、1B4识别的不同。结论 :成功建立了 3株稳定分泌抗hEPO McAb的杂交瘤细胞株 ,它们分别识别hEPO上 2个不同的抗原位点 ,有望作为EPO定量检测的特异性抗体。     

抗红细胞生成素单克隆抗体的制备与初步鉴定(简报)

红细胞生成素(Epo)是红系造血十分重要的成份。我们利用亲和层析法从再生障碍性贫血病人尿液中分离提取出来的Epo对BALB/C小鼠进行了多次免疫,取其脾细胞与P_3-X63-59小鼠骨髓瘤细胞在50％浓度的PEG作用下进行了融合。在一次融合率达90％以上的成功试验中,从330个有克隆生长孔中筛选出20个阳性孔,经过扩大培养,冻存及数次亚克隆,获得了5个稳定的能持续分泌抗Epo单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,并制备了腹水。McAb用酶联免疫测定法(ELISA)筛选和鉴定,并用CFU-E方法鉴定了抗     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

用O型人红细胞免疫的Balb/c小鼠脾细胞和NS--1骨髓瘤细胞融合、克隆后,获得两株杂交瘤细胞株。两株细胞分泌的单克隆抗体都是IgG_s亚类。文中对此类抗体的特性进行探讨。吸收试验表明,这两种单克隆抗体并不是和红细胞H抗原反应,但可能是同ABO各型红细胞上一种共同抗原反应。     

抗人A血型单克隆抗体的制备及其初步鉴定

分别用A型全血球和提取A型膜抗原免疫8周龄Balb/c鼠,进行细胞融合,建立了10株抗A型血型单克隆抗体。特异性鉴定表明仅与A、AB型血球发生盐水凝集。无冷凝集现象。培养上清和腹水与2％A型血球盐水凝集效价分别在1:32～128和1:512～4096,对200人份献血员血液标本检定,其中6株与标准人血清符合率达100％,A亚型鉴定10株全部属抗A_1亚型。免疫球蛋白亚类测定除A_4株是IgG_3,余均属IgM。     

抗人MIF单克隆抗体的制备及其活性的初步鉴定

目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(human macrophage migrationinhibitoryfactor,hMIF)原核表达系统并制备其单克隆抗体.方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hMIF cDNA,测序后构建pET11b/hMIF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hMIF;重组hMIF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性.结果构建pET11b/hMIF重组表达质粒,表达出预期hMIF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%.Western blotting鉴定为hMIF,NO释放实验证实具有生物学活性.两种免疫方案共获得9株分泌抗hMIF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经Western blotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性.结论获得hMIF重组蛋白和抗hMIF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础.     

抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定

用纯化的人肌红蛋白（Ｍｂ）抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠通过细胞杂交技术。获得１０株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株．其中３株分泌ＩｇＧ_１亚类抗体，２株为ＩｇＧ_（２ａ），５株为ＩｇＧ_（２ｂ）．间接ＥＬＩＳＡ法证明单抗腹水与Ｍｂ起特异性反应，与人血红蛋白（Ｈｂ）．人白蛋白（Ａｌｂ）无交叉反应．免疫印迹检测结果表明，６株单抗腹水能特异性识别分子量１７ＫＤ的Ｍｂ，抗Ｍｂ单克隆抗体的制备，对于急性心肌梗塞早期诊断很有应用价值．     

抗人肺癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

以人肺癌细胞株GLC作为抗原，免疫BALB／C小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。经克隆筛选获得两株分泌抗人肺癌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株，并对其McAb特异性进行了初步鉴定。1材料和方法1.1动物和细胞系BALB／C小鼠由同济医院动物中心提供；SP2／0、SMC7721、BGC均为本室冻存细胞；GLC由中国科学院肿瘤所提供。1.2免疫过程人肺腺癌细胞系GLC培养在含20％小牛血清的RPMI1640完全培养液中，取对数生长期细胞调整细胞浓度为1×10~7细胞／ml，BALB／C小鼠腹腔注射1ml，间隔2周加强注射1次，于融合前3d每天加强免疫1…     

抗人粒细胞单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人粒细胞单克隆抗体(McAb),并对其组织特异性及相关特性进行鉴定.方法采用分离的人全白细胞免疫Balb/c小鼠,按常规融合方法并经ELISA筛选后进行McAb特性研究.结果成功制备1株抗人粒细胞McAb,命名为SZ-102.ELISA法测定其腹水效价为5×10-5.琼脂糖双扩散鉴定均为IgG1类.流式细胞仪及SP免疫组化法测定表明SZ-102McAb与外周血液中的粒细胞、单核细胞呈强阳性反应,与淋巴细胞、红细胞、血小板不反应;SZ-102抗原在正常人肝、肺、胸腺、脾、淋巴结组织中也表达.免疫沉淀测定抗原分子量为20kD左右的蛋白多肽.结论抗人粒细胞McAb的研制将有助于临床肿瘤感染病灶和隐匿性炎症的放免显像诊断研究.     

抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的 研制抗腺病毒载体(Adv)表面蛋白的单克隆抗体(McAb).方法 将Adv以Al(OH)3佐剂化,常规免疫BALB/c小鼠.采用细胞融合技术制备抗Adv McAb;采用ELISA、免疫细胞化学及Western blot法对McAb进行筛选与鉴定.结果 共获得6株可稳定分泌特异性McAb的细胞(A4H11、A8C7、F1H5、G1D2、G4E3、H2G8),其染色体数目为102～106条,所分泌McAb均属IgG1亚类,持续3个月适应培养仍能保持其稳定的抗体分泌能力.腹水抗体的ELISA效价在1∶106～1∶108之间;Western blot结果显示6株McAb均与来自腺病毒载体及野生3、5、7型腺病毒抗原提取物中分子量约为114 kD的多肽反应,据此推测它们均是抗ADV-TK六邻体蛋白的McAb.结论 成功制备出6株抗腺病毒载体六邻体单克隆抗体,为腺病毒载体应用于肿瘤基因治疗的临床前研究提供物质基础.     

酶标记抗人IgM单克隆抗体的制备及其初步鉴定与应用

用HRP以改良过碘酸钠法标记了6种国产抗人IgM单克隆抗体并进行了初步鉴定。选用高效价的HRP标记抗人IgM McAb,用ELISA间接夹心法检测病人血清中特异性IgM抗体,其特异性阳敏感性与采用HRP标记羊抗人μ链检测基本相同。     

抗血管性血友病因子单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的　研制抗人血管性血友病因子 (vWF)单克隆抗体 (McAb) ,鉴定其各种生物学特性。方法　Ⅷ因子浓缩物经Sepharose 4B凝胶柱提纯出vWF蛋白 ,免疫Balb/c小鼠 ,按常规方法融合并经间接ELISA方法筛选 ,制备稳定分泌抗vWFMcAb的细胞株 ,并对McAb的亚型、免疫活性及组织特异性等进行鉴定 ,运用放射免疫方法等与单抗SZ - 2 9,SZ - 34进行比较。结果　分离纯化出vWF ,vWF抗原含量为 12 0IU/mg ,并成功制备了一株抗人血管性血友病因子McAb ,暂命名为 4E10。琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类 ,ELISA法测定其腹水效价为 5× 10 -5。放射免疫分析证实McAb4E10能特异的与血浆中vWF蛋白结合 ,应用间接免疫荧光法显示出与人脐静脉内皮细胞内vWF所特有的颗粒型荧光反应。流式细胞仪及免疫组化法测定表明McAb4E10与人脐静脉内皮细胞反应呈阳性 ,与外周血红细胞、白细胞、未活化的血小板不反应 ,而与其他组织细胞没有反应。放射免疫测定证实McAb4E10与SZ - 2 9,SZ - 34识别vWF蛋白上不同的结构。还原条件下Westernblot法证实McAb4E10和SZ -2 9都能识别相对分子量为 2 2 5kD和 180kD左右的单链蛋白多肽。结论　制备出了抗人血管性血友病因子单克隆抗体 4E10 (McAb4E10 ) ,它能特异识别血浆及内皮细胞的vWF ,将对相关血管性疾病的     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研究及其初步应用

在用人A型红细胞悬液免疫的Balb/c小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞进行融合屡遭失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株,即为:3B_2、3H_2、8C_3细胞株。3株抗人A型红细胞单克隆抗体3B_2、3H_2、8C_3血清学检验和应用结果表明:3株单抗均可作为血型诊断试剂,可用以取代人源标准血清。     

抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121的制备和初步鉴定

目的探讨抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121的制备并对其进行初步鉴定。方法用人胰腺癌细胞株Patu8988作为免疫原,利用杂交瘤技术制备抗人胰腺癌单克隆抗体,应用流式细胞术和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果成功获得一株能够稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系SZ-121,该抗体与胰腺癌组织呈阳性反应,与胰腺良性病变组织呈弱阳性反应。结论单抗SZ-121对胰腺癌的早期诊断可能具有一定的潜在价值。     

抗乳腺癌人单克隆抗体CM-1的制备和初步鉴定

用乳腺癌患者术后腋下淋巴结制备的淋巴细胞与人骨髓瘤细胞系SHM-D_(33)融合,获得1株分泌抗乳腺癌人McAb抗体的杂交瘤细胞克隆株CM-1.该株细胞已传代2年,仍能稳定地分泌特异性抗体.该株细胞的染色体为103,SHM-D_(33)人骨髓瘤细胞的染色体为80,证明CM-1细胞株确是杂交瘤细胞株.ELISA和琼脂免疫双扩散法测得CM-1细胞分泌的抗体为人IgM(λ链).CM-1细胞培养液中的抗体含量为35.9μg/ml,裸鼠腹水中的抗体含量为8mg/ml.用ELISA检测CM-1细胞培养上清液的抗体滴度     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研究及其初步应用

在用人A型红细胞悬液免疫的Balb／c小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞进行融合屡遭失败的情况下，改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合，终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株，即为：3B2、3H2，8C3细胞株。3株抗人A型红细胞单克隆抗体3B2、3H2，8C3血清学检验和应用结果表明；3株单抗均可作为血型诊断试剂，可用以取代人源标准血清。     

抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２、ＡＩ３、ＡＩ４、ＡＩ５、ＡＩ６、和ＡＩ）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ＇）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３ＡＩ、ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３、ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ可识别χ和λ型ＩｇＧ四个亚类以及Ｆ（ａｂ＇）２片段，不识别游离χ、λ链。ＡＩ５ＭｃＡｂ特异地抗ＩｇＧ１结合型χ，作用于ＩｇＧ独特型位点。ＡＩ６ＭｃＡｂ只抗λ型ＩｇＧ，可能作用于ＩｇＧＣＬ区。６种抗人ＩｇＧＭｃＡｂ除了ＡＩ５外，均能用于人血清中ＩｇＧ的检测。     

人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体的初步鉴定

目的：制备高效价的人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体（GPA McAb),为研制快速全血凝集试剂提供关键的双功能抗体成分。方法：首先用MNGP亚型GPA,经SPDP与小鼠血清白蛋白连接后,常规免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备GPA McAb;用ELISA和血凝方法对克隆进行筛选和鉴定。结果：4次融合共获3个可分泌高效价GPA McAb细胞株（3F6、5C7和5G3）。分泌的单克隆抗体均与GPA发生特异性反应,但均不引起人A、B、AB和O型红细胞凝集,属于人红细胞GPA的特异性非凝集抗体。在3株抗体中,2株为IgG1亚型,1株为IgG2亚型。结论：小分子GPA经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白连接后用作免疫抗原,研制的2株IgG1亚型抗体可用于全血凝集试剂中双功能抗体的制备。     

抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２，ＡＩ３，ＡＩ４，ＡＩ５，ＡＩ６和ＡＩ７）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３，ＡＴ７，ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３，ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ铰链区。ＡＩ３，ＡＩ７，ＭｃＡｂ可识别ｘ和λ链。