mrp反义RNA逆转胃癌细胞系SGC7901对VCR的耐受性

目的：探讨以多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）作为靶分子进行胃癌多药耐药基因治疗的可行性。方法：采用已构建成功的ｍｒｐ反义ＲＮＡ真核载体ｐｃＤＮＡ－Ａｍｒｐ转染胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１,用Ｇ４１８抗性筛选出稳定细胞克隆,命名为Ｍ－ＳＧＣ７９０１;用＾３２Ｐ标记的寡核苷酸探针打点杂交检测Ｍ－ＳＧＣ７９０１细胞中ｍｒｐ ｍＲＮＡ表达的变化;从细胞生长曲线中,观察Ｍ－ＳＧＣ７９０１细胞生长速度的变化;经０．００     

HSP90β蛋白低调肿瘤细胞系的建立 *

目的：通过转染ＨＳＰ９０β反义核酸重组子ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０于４株人消化系肿瘤细胞系,以建立ＨＳＰ９０β蛋白低调肿瘤细胞系,并研究ＨＳＰ９０β蛋白低调后细胞的生长情况。方法：用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导将ｐｅＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ７４０２及人食道癌细胞系Ｅｃ１０９,用Ｇ４１８进行筛选,用ＲＮＡ酶保护分析法鉴定ＨＳＰ９０β反义核酸的表达,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＳＰ９０β蛋白的表达。用细胞生长曲线研究基因转染细胞的生长情况。结果：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９有ＨＳＰ９０β反义ＲＮＡ表达,这些细胞ＨＳＰ９０β蛋白表达低调。研究还发现这些细胞的生长受到不同程度的抑制,其中ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及ＡＨ－Ｅｃ１０９细胞受抑程度更明显。结论：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９　ＨＳＰ９０β蛋白表达降低,细胞的生长受到不同程度的抑制。     

反义bcl-2基因转染对单核白血病细胞存活及化疗耐受能力的影响

目的：探讨ｂｃｌ－２反义核酸在单核白血病细胞系Ｕ９３７细胞中的作用,以丰富ｂｃｌ－２及其反义核酸调控肿瘤细胞凋亡的资料。方法：将反义ｂｃｌ－２基因表达载体ｐＬＸＳＮ／ａｓ－ｂｃｌ－２转染于Ｕ９３７细胞,建立Ｕ９３７／ａｓ－ｂｃｌ－２细胞模型,利用流式细胞技术模型细胞ｂｃｌ－２的表达水平。通过细胞计数观察模型细胞在正常培养条件下和有化疗药物Ａｒａ－Ｃ或三     

反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达.     

c－ets－2、c－myc、N－ras三个癌基因联合反义RNA对肝癌细胞恶性表型的逆转

作者构建了一个能表达ｃ－ｅｔｓ－２、ｃ－ｍｙｃ及Ｎ－ｒａｓ三个癌基因联合反义ＲＮＡ的重组逆转录病毒载体，经病毒包装细胞ＰＡ３１７包装成假型逆转录病毒，利用此病毒成功地感染了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，经Ｇ４１８筛选得到Ｇ４１８抗性细胞，基因组ＤＮＡ杂交结果表明重组病毒稳定地整合入７７２１细胞基因组中。ＲＮＡ杂交结果表明转化细胞中有较高水平的联合反义ＲＮＡ表达。初步结果表明，反义ＲＮＡ使７７２１细胞生长速率下降约７０％，软琼脂集落形成能力及裸鼠致瘤能力显著下降。这一结果表明，针对多个癌基因的联合反义ＲＮＡ可能给肿瘤基因治疗提供新的途径，有进一步探索的价值。     

放射治疗诱发肾癌细胞凋亡及机制探讨

目的探讨射线诱发肾癌细胞凋亡的作用和射线对肾癌细胞Ｐ５３，Ｂｃｌ－２基因表达的影响。方法利用末端脱氧核苷酰转移酶标记的流式细胞技术定性和定量分析射线诱导肾癌细胞凋亡。利用Ｐ５３和Ｂｃｌ－２单抗进行ＳＰＴＭ法免疫组织化学染色。结果０Ｇｙ、５Ｇｙ、１０Ｇｙ、１５Ｇｙ和２０Ｇｙ照射后细胞凋亡量分别为１．０２％、０．０３％、７．０３％、４．２２％和３６．０９％。０Ｇｙ照射组Ｐ５３表达标记指数为０．８０％，２０Ｇｙ照射后Ｐ５３表达明显增加达２３．８０％。０Ｇｙ照射组Ｂｃｌ－２基因表达为２４．４０％，２０Ｇｙ照射后Ｂｃｌ－２基因表达明显减少为１．８０％。结论低剂量Ｘ射线照射诱发肾癌细胞凋亡量很低，２０Ｇｙ时明显增加。射线诱发肾癌细胞凋亡伴随Ｐ５３基因表达增加和Ｂｃｌ－２基因表达减少，提示射线诱发细胞凋亡是多基因相互影响，相互作用的结果。     

二种体外肿瘤侵袭模型的比较研究

本文采用双层培养板法和双套管是浮培养法，分别以人羊膜和ＳＤ胚鼠心肌组织作为靶组织，以小鼠Ｂ１６细胞，人ＳＧｃ－７９０１和ＨＲ８３４８细胞作为侵袭细胞，研究观察了上述三种肿瘤细胞体外侵袭行为。实验表明Ｂ１６和ＳＧｃ－７９０１细胞对人羊膜以及ＨＲ８３４８和ＳＧｃ－７９０１细胞对ＳＤ胚鼠心肌都有不同程度的侵袭作用。本文还对二种不同的体外侵袭模型的特点作了分析比较。     

bcl—2反义寡核苷酸抑制HL—60细胞增殖的研究

目的 研究ｂｃｌ－２反义寡核苷酸在抑制ＨＬ－６０细胞增殖和下调细胞内ｂｃｌ－２蛋白表达水平的作用。方法 将人工合成的ｂｃｌ－２反义寡核苷酸片段与ＨＬ－６０细胞共培养,在作用的第０天,１天,３天,５天通过细胞计数和锥虫蓝染色法检测细胞的生长,存活情况,同时通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化情况,结果 ｂｃｌ－２正,反义寡核革酸均可抑制ＨＬ－７０细胞增但ｂｃｌ－２反义     

bcl-2反义基因调控对人宫颈癌裸鼠移植瘤体内治疗的探讨

ｂｃｌ－２基因与宫颈癌关系密切，本研究采用回体转移法（Ｅｘ ｖｉｖｏ）和活体直接转移法（Ｉｎ ｖｉｖｏ）观察反义ＯＤＮ及反义ＲＮＡ作用于移植瘤的治疗效果。１材料与方法１．１一般资料 硫代磷酸修饰ｂｃｌ－２脱氧寡核苷酸（上海生工生物工程有限公司），反义链（ＡＯＤＮ）５＇－ＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＣ—３＇；无义链（ＮＯＤＮ）５＇－ＴＣＧＣＣＡＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＣＣＧ—３＇。含反义 ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ部分序列（６２２ｂｐ）的质粒ｐＤＯＲ－ＡＢ（７．１２ｋｂ）由第四军医大学王成济教授惠赠…     

CYP2B7 cDNA的克隆,鉴定及真核细胞重组表达载体的构建

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＤＮＡ重组技术从人肝组织中克隆细胞色素Ｐ４５０ ２Ｂ７（ＣＹＰ２Ｂ７）基因的ｃＤＮＡ片段至ｐＧＥＭ－３Ｚ戴 本上，经限制性内切酶酶切图谱分析和ＤＮＡ序列分析确证克隆的片段为ＣＹＰ２Ｂ７的ｃＤＮＡ。然后将该片段亚克隆入－合适真核细胞表达载体的ＢａｍＨＩ位点处，获得４个克隆。其中１个含有正向插入片段，３个含有反向插入片段。为导入哺乳类细胞中，建立稳定表达ＣＹＰ２Ｂ７ｃＤＮＡ的细胞     

真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１的构建及其在胆管癌细胞的表达

目的　构建真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１,并在胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９中进行表达。方法　采用ＲＴ-ＰＣＲ法从人胆管组织中克隆ＫＡＩ１基因,连接Ｔ载体并测序正确后与真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ连接,经ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ双酶切鉴定后通过脂质体法转染ＱＢＣ９３９细胞中,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中ＫＡＩ１的表达。结果　成功构建真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１,用脂质体法转染胆管癌细胞ＱＢＣ９３９后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测可见细胞内有ＥＧＦＰ及ＫＡＩ１的表达。结论　真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１构建成功并在胆管癌细胞ＱＢＣ９３９中得到稳定表达,为研究ＫＡＩ１对肿瘤的生物学作用以及ＫＡＩ１在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。     

高表达bcl-2卵巢癌细胞系参与药物抵抗和细胞凋亡作用的研究 *

目的：探讨化疗的敏感性与细胞凋亡的关系,观察细胞凋亡抑制分子ｂｃｌ－２在卵巢癌化疗抵抗中的作用。方法：构建了逆转录病毒ｂｃｌ－２表达载体ｐＬＸＳＮ／ｂｃｌ－２,应用ｌｉｐｏｆａｃｔｉｎ法建立转染ｂｃｌ－２基因和转染空载体ｐＬＸＳＮ的卵巢癌细胞系。ＭＴＴ法观察细胞系抵抗药物的细胞毒作用。ＦＡＣＳ和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察ｂｃｌ－２高表达细胞系在阿霉素诱导细胞凋亡中的变化。结果：转染 ｂｃｌ－２的卵巢癌细胞系ＯＣ３／ｂｃｌ－２稳定表达ｂｃｌ－２分子并抵抗药物介导的细胞毒作用,明显提高细胞的存活率,与此同时也抑制细胞凋亡的发生。结论：化疗的敏感性与细胞凋亡的调节密切相关,凋亡抑制基因ｂｃｌ－２在肿瘤耐药中起重要作用。     

反义c—fox寡脱氧核苷酸对淋巴瘤细胞株SCA—ⅡB2恶性表型…

已发现ＳＡＣ－ⅡＢ２淋巴瘤细胞中中原癌基因ｃ－ｆｏｓ呈过度表达，针对小鼠ｃ－ｆｏｓｃＤＮＡ第２－７编码序列，设计合成了１８聚反义，正义和无义的寡脱氧核苷酸。结果发现，反义ｃ－ｆｏｓ寡脱氧核苷酸能促使ＳＣＡⅡＢ２的细胞形态向成熟阶段分化并抑制共增殖速度，同时降低其对裸鼠的致瘤性及Ｆｏｓ蛋白的表达，但对ＳＣＡ－ⅡＢ２的细胞动力学没有明显的影响。     

重组RA538,反义c—myc腺病毒对bcl—2高表达细胞系的作用及分子 …

目的 研究重组ＲＡ５３８（Ａｄ－ＲＡ５３８）、反义ｃ－ｍｙｃ腺病毒（Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ）在ｂｃｌ－２高表达细胞系中的作用及其分析机制。方法 采用细胞形态学观察、ＭＴＴ、ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ等方法,研究ＲＡ５３８,反义ｃ０ｍｙｃ重组腺病毒在ｂｃｌ－２高表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ－ｂｃｌ２和ＳｉＨａ－ｂｃｌ２以及在其亲本细胞中的生物学作用及其分子机制。结果 以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉ     

紫杉醇对胃癌细胞株环氧化酶-２表达的影响及其信号转导通路的研究

目的　探讨紫杉醇对胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１环氧化酶-２（ＣＯＸ-２）ｍＲＮＡ表达及其信号传导通路的影响。方法　采用ＭＴＴ法检测紫杉醇不同剂量、不同时间点和Ｐ３８信号通路抑制剂ＳＢ２０３５８０不同剂量对胃腺癌细胞株ＳＧＣ-７９０１生长的影响;在此基础上采用ＲＴ-ＰＣＲ方法检测一定浓度范围内紫杉醇作用ＳＧＣ-７９０１胃癌细胞株２４ｈ以及联合ＳＢ２０３５８０对其ＣＯＸ-２ｍＲＮＡ表达的影响。结果　紫杉醇对胃腺癌细胞株ＳＧＣ-７９０１的生长具有细胞毒作用,呈时间和剂量依赖性;在一定剂量范围和时间点内,随着紫杉醇剂量逐渐升高,胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１的ＣＯＸ-２ｍＲＮＡ表达呈剂量依赖的上升趋势,而随着ＳＢ２０３５８０的剂量增高,则呈下降的趋势。结论　紫杉醇可诱导胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１的ＣＯＸ-２ｍＲＮＡ表达,Ｐ３８信号通路可能是紫杉醇诱导其ＣＯＸ-２表达的通路之一。     

温热与羟基喜树碱（OPT）联合对胃腺癌（SGC—7901）细胞的作用

以体外长期培养胃低分化腺癌细胞系（ＳＧＣ－７９０１）细胞为模型，采用水浴加温法对细胞的生长抑制规律进行了观察。表明：１）温热、ＯＰＴ对ＳＧＣ－７９０１细胞均有一定的抑制增殖和直接杀伤作用；温热与药物联合应用具有协同抑制增殖和杀伤细胞的作用。２）温热和ＯＰＴ联合对ＳＧＣ－７９０１细胞的杀伤和生长抑制作用均较温热或药物单独作用强，但序贯方面以热药同时为佳。３）温热、ＯＰＴ都可使ＳＧＣ－７９０１细胞结构     

雌激素及其受体抑制剂在体外对人胃癌细胞增殖的影响

作者采用荧光染色法检测，证实人胃癌ＳＧＣ－７９０１细胞具有雌激素受体。在细胞培养过程中予以不同浓度的雌二醇处理，结果显示：于０．００１～１μｍｏｌ／Ｌ浓度时可刺激ＳＧＣ－７９０１细胞的生长，其中以０．１μｍｏｌ／Ｌ刺激作用最强，细胞群体倍增时间短于对照组（Ｐ＜０．０５），克隆形成率明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达亦较对照组强。流式细胞术检查发现，经雌二醇处理后，细胞增殖指数略高于对照组，而雌激素受体抑制剂三苯氧胺，可部分抑制雌二醇所产生的上述这些效应。实验结果提示，生理浓度的雌二醇对ＳＧＣ－７９０１细胞具有一定的生长刺激作用，而三苯氧胺可部分抑制这种刺激作用。其机制可能是通过雌激素受体介导的。     

幽门螺杆菌及其cagA因子对胃粘膜中原癌基因蛋白表达的影响

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染告别是其细胞毒素相关基因（ｃａｇＡ因子）与胃粘膜中ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、ｐ２１－ＷＡＦ１、ｐ１６－ＭＴＳ１蛋白表达异常的关系。从而从分子水平初步探讨ｃａｇＡ是否为一致癌因子及其可能的一致癌的机理。方法：１、利用血抗Ｈｐ－ＩｇＧ、ＲＵＴ、ＰｃＲ－Ｈｐ－ＤＮＡ３种方法２７０例病人的ＨＰ感染情况及ｃａｇＡ＊Ｈｐ感染情况。２、利用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测胃癌演化系列胃粘膜中ｂｃｌ     

转染金属蛋白酶抑制剂对胃癌细胞体外侵袭能力的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ－２）对ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞体外侵袭能力的影响。方法：将人全长ＴＩＭＰ－２基因经脂质体包裹转染ＰＡ３１７细胞系，Ｇ４１８筛选，感染人ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞系，经体外细胞增殖、细胞电泳率、软琼脂形成和侵袭小室的实验综合分析其生物学行为改变。结果：经ＴＩＭＰ－２基因转不的ＳＧＣ－７９０１细胞和ＭＦＣ细胞和细胞电泳率。软琼脂形成和侵袭能力均明显低于对照组，而     

EGCG诱导胃癌和肝癌细胞凋亡及bcl—2表达下调的研究

探讨表没食子儿茶素没食子酸酯「（－）－ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ－３－ｇａｌｌａｔｅ,ＥＧＣＧ」诱导胃癌ＭＣＧ－８０３细胞和肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞凋亡的作用及其凋亡在基因ｂｃｌ－２产物表达的改变。方法：用ＭＴＴ法,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测ＥＧＣＧ处理,ＭＧＣ－８０３细胞和ＢＥＩ－７４０２细胞后,他们在形态学和生化方面的改变以及ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化。结果：ＥＧＣＧ以剂量依赖的方