SCF或（和）GM—CSF体内基因转染对“自杀基因”疗法抗肿瘤作用的增？…

目的 通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效,探讨其相关免疫学机理。方法 采用腺病毒介导的ＳＣＦ,ＧＭ－ＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌,观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期,不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果 一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭ－ＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染,能增强“自杀基因”疗法的疗效,在肿瘤局部出     

SCF或(和)GM-CSF体内基因转染对"自杀基因"疗法抗肿瘤作用的增强效应及其相关机理的研究

目的通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效，探讨其相关免疫学机理。方法采用腺病毒介导的ＳＣＦ、ＧＭＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌，观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期、不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染，能增强“自杀基因”疗法的疗效。在肿瘤局部出现新的细胞因子表达，包括ｍＩＬ４、ｍＩＬ２、ｍＩＦＮγ和ｍＴＮＦα。脾细胞对ＣＴ２６细胞的杀伤作用增强。结论ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的联合转染对“自杀基因”系统的疗效具有明显的增强作用，其与机体特异抗肿瘤免疫功能以及肿瘤局部分泌的细胞因子有关。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

T细胞及相关免疫分子在淋巴细胞趋化因子增强肿瘤自杀 …

本室以往的研究表明，用腺病毒作为载体将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｉｎ）基因联合体内转染，具有显著的抗肿瘤效应。本文对其免疫机理进行了进一步研究，发现ＣＴ２６结肠腺癌细胞体外经过ＣＤ／Ｌｉｎ基因转染并给予前体药物５－ＦＣ后，ＣＴ２６结肠腺癌细胞表达ＣＤ８０和ＣＤ５４分子明显增加，提示经ＣＤ自杀基因和Ｌｉｎ基因联转移后，肿瘤细胞免疫原性增加。荷瘤小鼠体内经联合治疗后，小     

CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗？…

本研究以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胸嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｔｎ）基因体内联合转染，观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理。小鼠皮下接种结肠腺癌ＣＴ２６细胞后３天，肿瘤局部注射表达Ｌｔｎ的重组腺病毒ＡｄＬｔｎ和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胸嘧啶（５－ＦＣ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗，结果表明，联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制，小鼠存活期明     

腺病毒介导的CD/5FC自杀基因疗法对小鼠结肠腺癌的治疗作用及相关免疫机理的研究

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶CD可以将前体药物5FC代谢为毒性产物5FU,具有抗肿瘤作用.本课题我们观察了腺病毒介导的CD/5FC自杀基因疗法对小鼠结肠癌生长的治疗作用并探讨其作用机理.结果表明,首先,CD/5FC自杀基因疗法小鼠结肠癌CT26体内外生长均具有显著的抑制作用,4O%的荷瘤小鼠经过治疗后长期存活;其次,我们还研究了自杀基因疗法治疗肿瘤时可能涉及的免疫机理.结果发现在以CD/5FC系统治疗结肠腺癌小鼠过程中能在一定程度上诱导出机体的抗肿瘤免疫反应,包括脾脏CT6L活性的增高、肿瘤局部浸润免疫细胞表达,DEC-205、B7-2、I-A~(b,d)分子增加等.本实验结果提示虽然CD/5FC系统可以诱导机体产生一定的抗肿瘤免疫反应,但其程度不够显著.     

CD基因联合mIL-2/mGM-CSF基因治疗胃癌的研究

目的：观察ＣＤ基因联合ｍＩＬ－２／ｍＧＭ－ＣＳＦ基因对小鼠胃癌的治疗作用。方法：ＣＤ基因构建于逆转录病毒载体ｐＬｘＳＮ,ｍＩＬ－２和ｍＧＭ－ＣＳＦ基因构建于ｐＩＲＥＳ。先用ＣＤ／５－ＦＣ治疗胃癌细胞株,然后联合ｍＩＬ－２／ｍＧＭ－ＣＳＦ两种细胞因子基因治疗小鼠模型胃癌,以期产生显革的抗肿瘤作用。ＲＴ－ＰＣＲ检测基因表达。结果：体外结果显示２０％的转基因细胞即可杀灭７０％￣８０％的肿瘤细胞。动物实验     

5—FC对经基因修饰而表达胞嘧啶脱氨酶的哺乳类细胞杀伤作用

为获得５┐氟胞嘧啶（５┐ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ，５┐ＦＣ）对含ＣＤ基因哺乳类细胞的“诱导”杀伤表型数据。方法小鼠成纤维细胞ＮＩＨ／３Ｔ３、大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６和包装细胞ＰＡ３１７，经基因修饰而表达非哺乳类酶－胞嘧啶脱氨酶（ｃｙ┐ｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）。结果体外，ＣＤ基因的表达几乎不影响细胞的生长速率。薄层层析分析（ＴＬＣ）表明，被含有重组逆转录病毒载体ｐＬＣＤＳＮ的假型病毒感染的哺乳类细胞及包装细胞的抽提液可将胞嘧啶代谢成脲嘧啶。５┐ＦＣ对有ＣＤ活性的细胞产生致死性细胞毒性。结论本实验支持了在５┐ＦＣ参与下，于肿瘤细胞内选择性表达ＣＤ的基因治疗方案。     

联合应用MLV-rIL-2、TIL、CY抗鼠H22肝癌的实验研究

表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（ＣＤ）基因的重组腺病毒ＡｄＣＤ体外转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６Ｆ１０，结果显示转梁了ＣＤ基因的Ｂ１６Ｆ１０细胞对５－氟胞嘧啶（５ＦＣ）的敏感性显著提高。将经ＡｄＣＤ／５ＦＣ系统处理的Ｂ１６Ｆ１０细胞止清倍比稀释后，加至野生型了Ｂ１６Ｆ１０细胞中，发现当上清仅占６．２５％时即可对野生型Ｂ１６Ｆ１０细胞发挥明显的杀伤作用，提示ＡｄＣＤ／５ＦＣ介导的旁观者效应可能是通过５ＦＣ经Ｃ     

胞嘧啶脱氨酶/氟胞嘧啶体系对人乳腺癌基因的实验治疗作用

目的：研究胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）／氟胞嘧啶（５－ＦＣ）体系对人乳腺癌的实验治疗作用。方法：应用ＭＴＴ法测定人乳腺细胞对５－ＦＣ的敏感性。结果：５－ＦＣ对导入ＣＤ基因的人乳腺癌细胞有明显的细胞毒作用,而对未导入ＣＤ基因的人乳腺癌细胞的毒性较低,５－ＦＣ对导入ＣＤ基因的人乳腺癌细胞的ＩＣ５０分别为４１８μｇ／ｍｌ和１４２９μｇ／ｍｌ。结论：ＣＤ／４－ＦＣ体系对体外转基因的人乳腺癌细胞具有抗肿瘤作用。     

腹腔注射分泌粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒的抗肿瘤肺转移作用

通过体内途径直接注射各种载体进行细胞因子基因治疗，具有重要的临床意义。作者观察了表达小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重组痘苗病毒（ＶＶＧＭ－ＣＳＦ）对肺转移荷瘤小鼠模型的治疗作用。给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠尾静脉注射２×１０５Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后开始腹腔内注射ＶＶＧＭ－ＣＳＦ１０６ＰＦＵ／０．１ｍｌ，２次／周，连续治疗２周。结果显示，ＶＶＧＭ－ＣＳＦ能够显著减少荷瘤小鼠肺转移结节的数目，并明显延长荷瘤小鼠的存活期。研究发现，经过ＶＶＧＭ－ＣＳＦ治疗，小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤、吞噬及其释放一氧化氮的能力明显提高，结合其它实验结果，荷瘤小鼠持续表达ＧＭ－ＣＳＦ并导致以上巨噬细胞功能改变，可能是ＶＶＧＭ－ＣＳＦ的抗肿瘤转移作用机理之一。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL—2基因疗法的肿瘤治 …

以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移,研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天,肿瘤局部 注射表达ＩＬ－２的重要腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达的ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ,然后连续０天给予５－氟胞嘧啶３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。     

CD/5－FC体系对人乳腺癌基因治疗作用的实验研究

目的：探讨ＣＤ／５－ＦＣ体系对人乳腺癌的实验治疗作用。方法：应用ＭＴＴ法测定人乳腺癌细胞对５－ＦＣ的敏感性。结果：实验显示,５－ＦＣ对导入ＣＤ基因的人乳腺癌细胞有明显的细胞毒作用,而对未导入ＣＤ的人乳腺癌细胞的毒性较低,５－ＦＣ对导入和未导入ＣＤ基因的人乳腺癌细胞的ＩＣ５０分别为４１８μｇ／ｍｌ和１２４９μｇ／ｍｌ。结论：ＣＤ／５－ＦＣ体系对体外转基因的人乳腺癌细胞有一定的抗肿瘤作用。     

CEA启动子驱动cd—tk表达对CEA阳性肿瘤细胞的杀伤作用

目的：大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ，ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）和Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＴＫ，ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ）融合基因ｃｄｔｋ，在癌胚抗原（ＣＥＡ，ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ）阳性肿瘤细胞表达，联合使用前体药５氟胞嘧啶（５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ，５ＦＣ）和丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）可明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：ＰＣＲ法分别扩增出ＣＥＡ启动子、ｃｄ和ｔｋ；构建真核表达载体ｐＣＥＡｃｄｔｋ；用脂质体将它导入ＣＥＡ阳性肿瘤细胞株ＨＴ２９、ＬｏＶｏ、ＳＧＣ７９０１、ＧＬＣ８２及ＣＥＡ阴性细胞株ＢＥＬ７４０２中；ＭＴＴ法检测５ＦＣ、ＧＣＶ对这类细胞的毒性作用及对放疗射线的增敏效果。结果：融合基因ｃｄｔｋ只在ＣＥＡ阳性细胞中表达，且表达该基因的肿瘤细胞对５ＦＣ和ＧＣＶ都很敏感。联合使用ＧＣＶ和５ＦＣ时，对这些肿瘤细胞的毒性明显增加，该体系也可明显增强放疗射线对细胞的杀伤作用。结论：与单独使用ＣＤ／５ＦＣ，ＴＫ／ＧＣＶ相比，ＣＤＴＫ／５ＦＣ＋ＧＣＶ体系对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强，该体系对放疗射线有较强的增敏作用。     

腹腔注射分泌粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒的…

通过体内途径直接注射各种载体进行细胞因子基因治疗，具有重要的临床意义，作观察了表达小鼠粒细胞－巨噬细胞落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重组痘苗病毒９ＶＶＧＭ－ＣＳＦ）对肺转移荷瘤小鼠模型的治疗作用。给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠尾静脉注射２×１０＾５Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后开始腹 内注射ＶＶＧＭ－ＣＳＦ１０＾８ＰＦＵ／０．１ｍｌ，２粗埽瘟疲仓堋＝峁允荆郑郑牵停茫樱颇芄幌灾跎俸闪鲂∈笙赴纳鄙恕     

G-CSF基因治疗及配合大剂量化疗对结肠癌小鼠的治疗作用

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)具有明显的促进粒系造血祖细胞分化成熟、有效地提高外周血白细胞数量的作用;体内单独应用还具有抑制肿瘤的生长、抗肿瘤转移的作用。为了探讨G-CSF基因治疗及其配合大剂量化疗后的体内抗肿瘤效果,我们以C-26结肠癌小鼠为模型,研究腹腔内移植成纤维细胞介导的G-CSF基因治疗,rhG-CSF直接注射治疗,以及分别配合化疗后对肿瘤的治疗作用。结果发现,rhG-CSF直接注射疗法可明显抑制早期结肠癌小鼠肿瘤的生长(P<0.01),明显延长早期荷瘤小鼠的存活期;G-CSF基因治疗可明显抑制早期、中期结肠癌小鼠肿瘤生长(P<0.01),明显延长早期、中期结肠癌小鼠的存活期(P<0.01)。配合大剂量化疗后,rhG-CSF注射疗法及G-CSF基因疗法可更明显地抑制结肠癌小鼠肿瘤的生长,更明显延长结肠癌小鼠的存活期。结果表明,G-CSF基因疗法可有效地延长结肠癌小鼠的存活期,配合大剂量化疗能更有效地发挥抗肿瘤作用,提高结肠癌小鼠的存活期;同时表明,G-CSF基因治疗具有比应用rhG-CSF更显著的体内抑制肿瘤的效果。     

异基因外周血造血干细胞移植治疗白血病

５例白血病患者接受ＨＬＡ相合异基因外周血干细胞移植。外周血干细胞动员采用供者连续皮下注射Ｇ－ＣＳＦ（１０μｇ／ｋｇ）５天，于第５天和第６天用ＣＳ３０００Ｐｌｕｓ血细胞分离机分离单个核细胞（ＭＮＣ）。患者平均输入ＭＮＣ６．０×１０８／ｋｇ，ＣＤ３４＋细胞２２．６×１０６／ｋｇ，ＣＤ３＋细胞４１２×１０６／ｋｇ，ＣＤ４＋细胞２０５×１０６／ｋｇ和ＣＤ８＋细胞１６２×１０６／ｋｇ。移植后造血重建迅速，中性粒细胞绝对计数＞０．５×１０９／Ｌ和血小板计数＞２０．０×１０９／Ｌ的平均时间分别为１３．４天和１１．４天。５例均未发生急性ＧＶＨＤ，２例发生慢性ＧＶＨＤ。供者对大剂量Ｇ－ＣＳＦ耐受良好     

HSV-tk基因在人乳腺癌细胞中的表达及其诱导杀伤的特性研究

ＨＳＶ ｔｋ基因转移联合ＧＣＶ的方法已成为肿瘤基因治疗的重要策略之一[1] 。ＨＳＶ/ＴＫ ＧＣＶ系统通过直接作用或旁观者效应杀伤肿瘤细胞 ,被杀死的瘤细胞经抗原递呈细胞如ＤＣ处理后 ,递呈给Ｔ细胞 ,从而产生了肿瘤特异性免疫。自杀基因疗法在治疗肿瘤时 ,瘤细胞的接种作用和凋亡现象均能刺激机体免疫系统 ,通过免疫反应可能达到消灭肿瘤、保护宿主以防肿瘤复发和转移的长期作用[2 ] 。本研究利用逆转录病毒将Ｈｙ ｔｋ基因转入人乳腺癌细胞株ＭＣＦ 7中 ,经潮霉素筛选获得了稳定表达ｔｋ的ＭＣＦ 7/ＴＫ细胞克隆 ,在ＧＣＶ作用下 ,其…     

腺病毒介导的人GM-CSF基因转染瘤苗增强机体免疫功能的实验研究

目的 研究腺病毒介导的人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗体内抗肿瘤免疫作用极其机理。方法 应用ＧＭ－ＣＳＦ基因转染、的瘤苗对小鼠肝癌模型进行免疫基因治疗,观察该疗法对荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ、ＬＡＫ、ＣＴＬ活性的影响、脾淋巴细胞围化反应的影响以及荷瘤习的生存期。结果 经ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗治疗后,插细胞ＣＴＬ活性显著升高,而ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性未见明显增强、脾淋巴细胞转化反应显著增强、生存期显著延长。结论     

肿瘤的“自杀基因”疗法研究进展

将“自杀基因”导入肿瘤细胞而将前体药物在肿瘤细胞内代谢为毒性产物进而杀伤肿瘤细胞的“自杀基因”疗法是肿瘤基因治疗中引人注目的途径之一。细胞的自杀机制是设计该疗法的基础，“自杀基因”有多种，包括ｔｋ及ＣＤ等，将肿瘤细胞特异的调控元件或转录元件下自杀基因相结合可使“自杀基因”特异地在肿瘤细胞中表达，从而选择性地杀伤肿瘤细胞。美国ＮＩＨ已批准ＨＳＶ－ｔｋ基因转染疗法用于脑瘤等的临床试治。