循环miRNA在活动性肺结核中的表达及其在疾病治疗中的诊疗价值

目的 研究循环miRNA在活动性肺结核患者中的表达水平及其在疾病治疗中的诊疗价值。 方法 选择2015年1月—2016年12月在绍兴市立医院就诊并确诊为活动性肺结核患者110例作为观察组，同时，选取绍兴市立医院其他肺部疾病患者45例作为其他肺部疾病对照组，及同期于绍兴市立医院进行健康体检者45例作为健康对照组。活动性肺结核患者进行2H3R3Z3E3/4H3R3或2HRZE/4HR标准方案治疗。采用qRT-PCR技术检测并分析miR-155-5p、miR-21-5p、miR-29a和miR-142-5p的表达变化。 结果 活动性肺结核组的miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a显著高于健康对照组和其他肺部疾病对照组(P<0.05)。其他肺部疾病对照组的miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a显著高于健康对照组(均P<0.05)。但3组间miR-142-5p表达的差异无统计学意义(均P>0.05)。经规范化抗结核治疗后，活动性肺结核组患者miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a均出现不同程度的下降(P<0.05)。而miR-142-5p表达在治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。经ROC曲线分析，miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a对活动性肺结核具有良好的诊断意义，敏感性和特异性均较好。 结论 miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a在活动性肺结核中呈高表达状态，且给予规范化抗结核治疗后可显著降低，其水平变化可作为诊断肺结核及评价抗结核治疗效果的有效标记物。      

IFN-γ和IL-10在活动性肺结核鉴别诊断和疗效监测中的临床应用评价

目的：探讨干扰素-γ(interferon-gamma, IFN-γ)和白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)在活动性肺结核鉴别诊断和疗效监测中的临床价值。方法：选取2015年2—7月期间常州市第三人民医院收治的初治活动性肺结核患者46例,结核潜伏感染患者40例,另选取健康对照组40例。应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测健康对照组、结核潜伏感染患者及肺结核患者治疗前后血浆IFN-γ和IL-10的表达水平。采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。运用单因素ANOVA检验、LSD-t检验、配对t检验、受试者工作特征(receive operating characteristic, ROC)曲线对数据进行分析。结果：活动性肺结核患者血浆IFN-γ和IL-10表达水平高于结核潜伏感染患者及健康对照组(均P＜0.001);ROC曲线分析结果显示,IFN-γ和IL-10鉴别活动性肺结核和结核潜伏感染曲线下面积分别为0.879±0.040(95%CI: 0.801~0.956)和0.925±0.034(95%CI: 0.859~0.991);治疗后患者血浆IFN-γ和IL-10的表达水平均显著低于治疗前(t=4.751、3.762, P=0.002、0.007)。结论：IFN-γ和IL-10可作为活动性肺结核和结核潜伏感染较好的鉴别诊断标志物;动态监测活动性肺结核患者的IFN-γ和IL-10表达水平,对患者疗效判断可能具有一定意义。     

血浆miR-769-5p、miR-320a和miR-22-3p水平检测在结核分枝杆菌感染的肺结核诊断中的应用价值研究

目的 研究miR-769-5p、miR-320a和miR-22-3p这三种血浆游离miRNAs水平在诊断结核分枝杆菌感染的肺结核中的价值。方法 随机选择95例结核分枝杆菌感染的肺结核患者作为病例组,以95例健康体检者作为对照组,采用反转录实时定量PCR(RT-PCR)检测血浆中游离的miR-769-5p、miR-320a和miR-22-3p水平。结果 血浆miR-769-5p、miR-320a和miR-22-3p水平与年龄、性别没有显著的相关性(P>0.05)。病例组患者血浆miR-769-5p、miR-320a和miR-22-3p水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血浆miR-769-5p水平诊断结核分枝杆菌感染的肺结核的曲线下面积(AUC)为0.92,血浆miR-320a水平诊断结核分枝杆菌感染的肺结核的AUC为0.84,血浆miR-22-3p水平诊断结核分枝杆菌感染的肺结核的AUC为0.70。结论 血浆游离miR-769-5p、miR-320a和miR-22-3p具有潜在的肺结核诊断价值。     

痰菌阴性活动性肺结核患者CD4+T细胞的miR-29及其靶基因IFN-γ表达水平的诊断价值研究

目的 探讨痰菌阴性活动性肺结核患者的CD4+T细胞的miR-29及其靶基因IFN-γ的表达在痰菌阴性活动性肺结核患者诊断中的应用价值。 方法 采取便利抽样法,选取2017年1-12月在浙医二院长兴院区治疗痰菌阴性活动性肺结核患者60例(痰菌阴性组),痰菌阳性活动性肺结核患者60例(痰菌阳性组),潜伏结核感染者35例(潜伏感染组),选取同期体检42名健康人为对照组。分离纯化4组受试者外周血中的CD4+T细胞;用核酸杂交与荧光定量PCR检测CD4+T细胞内miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达;用定量PCR检测miR-29的靶基因IFN-γ的表达。 结果 miR-29a、miR-29b和miR-29c在痰菌阴性组、痰菌阳性组、潜伏感染组和对照组CD4+T细胞中的表达水平均不同(P<0.05);miR-29b和miR-29c在痰菌阴性组、痰菌阳性组的表达高于对照组,miR-29a、miR-29b和miR-29c在痰菌阴性组、痰菌阳性组的表达均低于潜伏感染组,差异均有统计学意义(均P<0.05);IFN-γ在4组之间的表达水平亦不同(均P<0.05)。 结论 CD4+T细胞内miR-29a、miR-29b及miR-29c在痰菌阴性活动性肺结核发病过程中可能起到重要作用,这为结核病的诊治提供潜在的靶标和新的策略。      

miR-191及miR-886-5p在肺结核外周血中的表达与临床价值研究

目的研究miR-191、miR-886-5p在肺结核外周血中的表达与临床价值。方法选取2019年1月至2020年8月在武汉市新洲区人民医院确诊为肺结核的患者50例作为结核组,潜伏感染结核杆菌的患者50例作为潜在感染组,选取同期在武汉市新洲区人民医院体检的健康者50例作为对照组。所有入组受试者于清晨空腹采集2 mL静脉血,采用RNA试剂盒提取循环RNA,定量计算miR-191、miR-886-5p的表达水平。利用Person相关性分析肺结核患者miR-191、miR-886-5p表达与年龄、性别、肺部病灶个数、空洞个数的相关性,构建logistic回归分析模型分析肺结核发生的危险因素。结果对照组、潜在感染组、肺结核组患者miR-191水平依次降低,而miR-886-5p水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肺结核患者miR-191、miR-886-5p表达水平与肺部病灶个数、空洞个数呈正相关(P<0.05),与年龄、性别不具相关性(P>0.05)。ROC曲线表明miR-191、miR-886-5p在诊断肺结核都有意义,miR-191、miR-886-5p联合诊...     

外周血miR-29a-3p、miR-365a-3p在活动性肺结核和结核潜伏感染者中的表达

目的探讨外周血miR-29a-3p、miR-365a-3p在活动性肺结核和结核潜伏感染者中的差异表达。方法收集深圳市南山区慢性病防治院结核病防治科门诊2012年1～10月诊治的活动性肺结核患者30例,及同期发现的结核潜伏感染者30例。采集全血,提取总RNA,利用定量PCR方法检测外周血miR-29a-3p、miR-365a-3p的表达。结果结核潜伏感染者外周血中miR-29a-3p（1.16±0.65）明显高于活动性肺结核患者的表达（0.71±0.32）,差异有统计学意义（P〈0.05）;外周血miR-365a-3p的表达在结核潜伏感染者（0.43±0.51）与活动性肺结核患者（0.32±0.71）之间差异无统计学意义（P〉0.05）;进一步分析发现,结核潜伏感染者外周血miR-29a-3p表达与结核菌特异性酶联免疫斑点数呈负相关（r=-0.42,P=0.02）。结论 miR-29a-3p在肺结核感染、发病中可能起到重要作用,可能成为诊断结核潜伏感染者的标志物。     

血清miR-150-5p和miR-155-5p对老年糖尿病肾病的诊断价值

目的探讨血清miR-150-5p和miR-155-5p在老年糖尿病肾病(DN)中的表达水平及其诊断价值。方法采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测2015年1月—2017年12月海南西部中心医院收治的126例老年DN患者(DN组)、140例2型糖尿病患者(2型糖尿病组)和65例健康体检者(对照组)的血清miR-150-5p和miR-155-5p水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-150-5p和miR-155-5p水平对老年DN患者的诊断价值。结果 DN组血清miR-150-5p(3.35±1.26)和miR-155-5p(5.47±1.80)表达水平均高于2型糖尿病组和对照组,差异有统计学意义(P0.01)。2型糖尿病组与对照组血清miR-150-5p和miR-155-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-150-5p和miR-155-5p诊断老年DN的最佳截值分别为2.65、4.16,灵敏度分别为82.7%和80.3%,特异度为74.8%和83.6%。二者联合诊断老年DN的AUC(95%CI)为0.892(0.834～0.953)优于单项miR-150-5p[0.805(0.749～0.865)]和miR-155-5p[0.837(0.779～0.894)](P0.05),其灵敏度(90.4%)和特异度(85.7%)最好。结论血清miR-150-5p和miR-155-5p水平在老年DN患者中升高,有望作为老年DN诊断的生物学标志物。     

miR-155在甲状腺乳头状癌组织及血浆中的表达

目的:检测miR-155在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)组织及血浆中的表达差异,评价其对PTC的诊断价值?方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测52例PTC?32例结节性甲状腺肿患者组织中miR-155的表达水平及对应患者血浆?30例同期于本院行体检健康者血浆miR-155表达水平?应用受试者工作曲线(ROC)分析血浆miR-155的诊断价值,并分析其在 PTC 血浆与癌组织中表达的相关性?结果:miR-155在PTC与结节性甲状腺肿组织中的相对表达量分别为8.43 ± 6.14 和1.14 ± 0.41,PTC组高于结节性甲状腺肿组,差异有统计学意义(P < 0.01)?PTC组?结节性甲状腺肿组?对照组血浆miR-155表达量分别为3.35 ± 1.85?1.30 ± 0.30和1.41 ± 0.24,PTC组高于结节性甲状腺肿组及对照组,差异有统计学意义(P < 0.01)?PTC组与对照组区分的ROC曲线下面积(AUC)为0.932(95%CI:0.851~0.970,P < 0.001),PTC组与结节性甲状腺肿组区分的AUC为0.887(95%CI:0.811~0.961,P < 0.001)?miR-155在PTC组织表达与血浆中的表达呈正相关(r=0.589,P < 0.000 1)?其表达量与患者临床病理参数无相关性(P > 0.05)?结论:PTC患者血浆中miR-155表达量升高,有可能成为一种新的血液学标志物用于PTC的诊断?     

肺结核患者血清中miR-431、miR-194-5p、SOCS1的表达及诊断效能

目的探讨肺结核患者血清中微小RNA-431（miR-431）、微小RNA-194-5p（miR-194-5p）、细胞因子信号转导抑制物1（SOCS1）的表达及用于诊断肺结核的效能。方法选取2019年11月至2020年11月台州市第一人民医院收治的肺结核患者45例（肺结核组）、肺炎患者45例（肺炎组）、肺癌患者45例（肺癌组）及同期在本院体检中心健康体检的健康志愿者45名（对照组）作为研究对象。采用RT-PCR法检测所有研究对象入院时空腹血清miR-431、miR-194-5p表达水平,采用ELISA法检测血清SOCS1表达水平。ROC曲线评估血清miR-431、miR-194-5p、SOCS1单独检测及联合检测诊断肺结核的效能。采用Pearson相关分析miR-431、miR-194-5p、SOCS1表达水平的相关性。结果肺结核组患者血清miR-431、miR-194-5p表达水平均高于对照组和肺癌组,低于肺炎组;SOCS1表达水平低于对照组和肺癌组,高于肺炎组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。有吸烟史、有结核空洞、病灶范围大、疾病处于进展期与肺结核患者血清miR-431、miR-194-5p、SOCS1表达水平均有关（均P＜0.05）。ROC曲线显示,与血清miR-431、miR-194-5p、SOCS1单独检测以及miR-431联合miR-194-5p、miR-431联合SOCS1、miR-194-5p联合SOCS1检测相比,3项指标联合检测对肺结核的诊断效能更高（均P＜0.05）。相关性分析显示,肺结核患者血清miR-431表达水平和miR-194-5p表达水平呈正相关（r=0.680,P＜0.01）,血清miR-431、miR-194-5p表达水平与SOCS1表达水平均呈负相关（r=-0.962、-0.639,均P＜0.01）。结论肺结核患者血清中miR-431、miR-194-5p表达升高,SOCS1表达降低,3项指标之间呈线性相关,且与患者的临床病理特征有关,对肺结核的临床诊断有参考价值。     

脓毒症患者血浆miR-223表达水平及其临床意义

目的：探讨脓毒症患者血浆miR-223表达水平及其诊断价值。方法选取克拉玛依市中心医院2013年3月至2016年2月收治的脓毒症患者31例(病例组)和同期健康查体者33例(对照组)为研究对象，分别采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法和免疫比浊法检测两组患者血浆miR-223和C反应蛋白(CRP)表达水平，并应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)计算miR-223和CRP诊断脓毒症的价值。结果病例组患者的血浆miR-223和CRP表达水平分别为(19.56±5.78)×10-4copy和(48.61±12.88) mg/L，对照组分别为(12.22±4.75)×10-4copy和(8.63±3.21) mg/L，病例组患者的miR-223和CRP均明显著高于对照组，差异均有显著统计学意义(P<0.01)；血浆miR-223、CRP及两者联合诊断脓毒症的敏感性分别为83.3%、60.9%和80.6%，特异性分别为71.9%、53.1%和81.3%，ROC曲线下面积AUC分别为0.82，0.67和0.90。结论脓毒症患者血浆微小miR-223和CRP均显著升高，可作为脓毒症诊断的生物学参考指标。     

LncRNA CASC2、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性研究

目的：分析长链非编码RNA(LncRNA)癌易感性候选基因2(CASC2)、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性关系。方法：采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测87例上皮性卵巢癌病人(上皮性卵巢癌组)及72例卵巢良性肿瘤病人(对照组)LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平,比较2组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平,分析上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与临床病理特征的相关性关系。根据上皮性卵巢癌组病人术后化疗是否出现继发耐药分为化疗耐药组(n=32例)和化疗敏感组(n=55例),分析LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与化疗敏感性的关系。同时采用Pearson法分析上皮性卵巢癌组织中LncRNA CASC2与miR-155-5p的相关性关系,采用Kaplan-Meier法分析两者与上皮性卵巢癌病人5年生存情况的关系。结果：上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2表达水平低于对照组,而miR-155-5p表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);...     

miR-155-5p对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及可能机制

目的: 探讨miR-155-5p对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）细胞凋亡的影响及可能机制。方法: 收集43例AML患者和21例缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMNC）,qRT-PCR法检测两组细胞miR 155 5p和Bcl 2 mRNA表达水平。AML细胞转染miR 155 5p类似物或抑制剂后,CCK 8法检测经不同浓度阿糖胞苷作用后AML细胞的活性,流式细胞术检测经阿糖胞苷（0.16 μg/mL）作用后AML细胞的凋亡情况。通过qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测AML细胞转染miR-155-5p抑制剂后NF-κB、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结果： AML患者较缺铁性贫血患者BMMNC的miR 155 5p（t=4.688, P=0.002）和Bcl-2 mRNA（t=4.066, P=0.014）的表达水平明显升高。CCK 8和流式细胞术检测结果显示,转染miR 155 5p类似物的AML细胞经阿糖胞苷处理后细胞活性增高,凋亡明显减少;相反,转染miR-155-5p抑制剂组细胞活性降低,凋亡明显增多（P均<0.01）。qRT-PCR和蛋白质印迹结果显示,转染miR 155 5p抑制剂后AML细胞NF κB、Bcl-2表达水平降低。结论： miR-155-5p可能通过上调NF-κB、Bcl-2的表达抑制AML细胞凋亡。     

miR-31、miR-21和miR-155在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的分析mi R-31、mi R-21和mi R-155在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中的表达水平,并探讨其与DLBCL临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RT-PCR)检测92例DLBCL患者和84例对照mi R-31、mi R-21和mi R-155的表达水平,间期荧光原位杂交技术分析患者MYC和p53基因的异常情况,根据Hans的分类方法分为生发中心B细胞型(germinal center Bcell type,GCB型)和非生发中心B细胞型(non-GCB型)。结果 DLBCL组mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平高于对照组(P0.05),mi R-31、mi R-21及mi R-155在non-GCB型的表达高于GCB型(P0.05)。与MYC基因没有发生重排的患者相比,mi R-31、mi R-21及mi R-155在MYC重排的患者中表达下调(P0.05)。mi R-31、mi R-21及mi R-155在p53基因丢失组的表达较基因正常组下调(P0.05)。BCL-2蛋白阳性组mi R-31、mi R-21及mi R-155的表达较BCL-2蛋白阴性组下调(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,mi R-31、mi R-21及mi R-155高表达的DLBCL患者生存率低于低表达的患者(P0.05)。应用单因素和多因素Cox模型分析,发现mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平、免疫分型、p53基因与预后差异有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-31、mi R-21和mi R-155对DLBCL的诊断分型及预后判断有一定的参考价值,有望成为DLBCL治疗的新靶点。     

miR-155和miR-146a在系统性红斑狼疮患者中的表达

目的通过检测miR-155和miR-146a在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)和血浆中的表达,探讨miR-155和miR-146a的表达在SLE发病中的作用。方法 SLE患者20例,健康对照组15例。取外周血分离PBMC和血浆,提取和纯化miRNA,实时定量PCR检测miR-155和miR-146a的表达,以小分子RNAU6作为内对照,计算标准化后的2-△Ct值表示miRNA的相对表达含量。结果 SLE患者PBMC中miR-155和miR-146a的表达水平是健康对照组的3.07倍(P<0.01)和1.91倍(P=0.056);SLE患者血浆中miR-155和miR-146a的表达水平比对照组低,但差异无统计学意义;同时SLE患者中蛋白尿阳性组血浆中两种miRNAs表达水平有降低的趋势,活动组患者血浆中两种miRNAs表达水平也有降低的趋势,但差异无统计学意义。结论 SLE患者PBMC中miR-155和miR-146a异常高表达,但血浆miR-155和miR-146a的表达水平有下降的趋势。     

miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

痰液miR-155检测作为诊断结核分枝杆菌感染标志物的研究

目的 分析结核分枝杆菌H37Rv感染诱导宿主巨噬细胞表达miRNA的变化,进而验证差异miRNA对结核分枝杆菌感染的临床诊断意义。方法 使用H37Rv菌株感染人巨噬细胞系THP-1细胞后,收集12 h、24 h和48 h细胞并提取总RNA,进行miRNA微阵列芯片分析;再将临床分离的120株不同个体来源的结核分枝杆菌菌株与THP-1细胞共培养,使用实时定量PCR (real time-PCR, rt-PCR)验证差异miRNA的表达水平;随后收集结核患者的痰液标本处理后,提取总RNA,进行实时荧光定量PCR检测痰液中的差异表达的miRNA水平。结果 H37Rv体外刺激THP-1细胞,使用miRNA微阵列芯片分析,结果显示：miR-155、miR-29b-1*、miR-150、miR-146a、miR-212和miR-483-5p 共计6个miRNAs水平在3个时间点升高均较为明显;将来自不同区域的120株结核菌株分别与THP-1细胞的共培养24 h,检测发现miR-155表达水平最高;以miRNA-155为检测靶标,对68例结核患者的痰液进行检测,灵敏度和特异度分别为94.1%和93.8%。其灵敏度高于痰涂片的22.1%和结核抗体的83.8% ,差异具有统计学意义（P<0.05）。但与ELISpot法的97.1%,差异无统计学意义（P>0.05）。在对痰涂片阳性结果与miRNA检测结果相关性分析中,发现miR-155其表达水平与痰涂片阳性等级呈正相关（R²=0.743, P<0.05）。结论 此研究提示miR-155能够作为活动性结核诊断的有效靶标,且对间接评估患者肺部荷菌量有重要意义。