牙髓干细胞分化为成牙本质细胞相关标记物的研究进展

体外诱导牙髓干细胞分化为成牙本质细胞,检测牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶活性等相关标记物的变化,从而鉴定其分化能力,是近年来在牙髓干细胞领域中研究的热点。本文就上述标记物的研究进展进行综述。     

成牙本质细胞的基本特征及其研究进展

成牙本质细胞作为牙髓细胞的主要成分，具有在牙发育期间和成熟牙内生成牙本质的功能。目前的研究多基于牙髓细胞的二维体外培养，随着对牙髓组织研究的不断深入，牙髓细胞体外三维立体模型的建立将是未来研究的热点。作者回顾了近年来对成牙本质细胞的研究情况，主要阐述了成牙本质细胞的形态、超微结构、功能、蛋白表达的特征及其研究进展和今后的研究方向。     

牙髓干细胞与牙本质再生相关性的研究进展

牙髓中存在具备自我更新和多向分化潜能的牙髓干细胞。这些细胞经诱导可向成牙本质细胞分化并形成牙本质样结构，有望成为牙本质再生的种子细胞。本文就牙髓干细胞的来源、生物学特性及其在牙本质再生中的应用作一综述。     

牙髓干细胞与牙本质再生相关性的研究进展

牙髓中存在具备自我更新和多向分化潜能的牙髓干细胞.这些细胞经诱导可向成牙本质细胞分化并形成牙本质样结构,有望成为牙本质再生的种子细胞.本文就牙髓干细胞的来源、生物学特性及其在牙本质再生中的应用作一综述.     

牙髓干细胞分化的研究进展

牙髓干细胞(DPSC)是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在一定条件下可向特定的细胞类型分化,在牙髓修复和牙齿再生中发挥着重要的作用。本文主要就DPSC成骨向分化、成牙本质向分化的研究进展作一综述。     

人成牙本质细胞样细胞的原代培养

目的：培养人原代牙本质细胞。方法：取引产的8月龄死胎，剥离乳磨牙胚牙乳头，组织块法培养。然后采用滤纸片法挑取了3个与成牙本质细胞形态相似的细胞克隆，扩大培养。对培养细胞从形态学、矿化结节、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性、人牙本质基质蛋白-1（human dentin matrix protein-1,hDMP-1）和人牙本质涎磷蛋白（human dentin sialophosphoprotein,hDSPP）在mRNA水平上的表达等方面进行鉴定。结果：有一个克隆来源的细胞呈梭形、有单侧较长细胞突起，未见核极化，同时它们具矿化功能，表达人成牙本质细胞特异性标志hDMP-1、hDSPPmRNA。结论：该培养细胞为人成牙本质细胞样细胞，为进一步的有关研究奠定了基础。     

人牙髓干细胞向成牙本质细胞定向分化过程中miRNAs表达谱筛选及鉴定

目的:筛选人牙髓干细胞向成牙本质细胞定向分化过程中差异表达的microRNAs(miRNAs)并进行初步鉴定。方法:体外分离、培养和鉴定人牙髓干细胞,miRNAs芯片筛选牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中差异表达的miRNAs,并通过TargetScan数据库预测靶基因,实时定量PCR法对结果进行初步鉴定。结果:人牙髓干细胞vimentin、nestin、GFAP和I型胶原4种细胞表型均表达;成脂诱导3周后细胞内有油红O染色阳性脂滴出现;成牙本质诱导可见钙结节形成;基因芯片结果显示,牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中,发生2倍以上表达变化的miRNAs有6条,其中上调3条,下调3条。通过miRNA靶标预测工具预测靶基因,发现hsa-miR-633和hsa-miR-210有与牙髓干细胞分化相关的靶基因;real time-PCR验证hsa-miR-633和hsa-miR-210表达变化与基因芯片结果相符。结论:人牙髓干细胞经诱导向成牙本质细胞分化过程中miRNAs表达谱具有显著变化,为牙髓干细胞分化机制研究提供了新的提示。     

成牙本质细胞的终末分化

成牙本质细胞是一种有丝分裂终末细胞。成牙本质细胞的终末分化依赖于内釉上皮和基底膜的存在。转化生长因子β超家族（ＴＧＦβｓ）成份可能启动了细胞的终末分化过程。纤维连结蛋白（ＦＮ）与细胞膜上一种１６５ｋＤ蛋白受体结合导致细胞骨架的重组，细胞发生极化。     

血管生成素4对牙髓干细胞成牙本质向分化的作用

目的 探讨血管生成素4(angiopoietin 4,ANGPT4)对牙髓干细胞成牙本质向分化的影响。方法 本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准,并获得患者知情同意。将人前磨牙进行固定、脱钙、脱水、包埋和切片,免疫荧光染色观察ANGPT4的表达及定位。体外分离培养人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,hDPSCs）,于倒置相差显微镜下观察hDPSCs的生长状态及形态;流式细胞术检测细胞表面相关分子标志物的表达;碱性磷酸酶和茜素红S染色鉴定h DPSCs成牙本质向分化的潜能;油红O染色鉴定hDPSCs成脂向分化潜能。提取hDPSCs成牙本质向诱导后不同时间点的RNA,采用RT-qPCR分析hDPSCs体外成牙本质向分化过程中ANGPT4基因及成牙本质细胞相关基因的表达。采用siRNA基因沉默技术沉默hDPSCs中ANGPT4基因的表达,通过RT-qPCR和Western blot检测沉默效率;在hDPSCs中沉默ANGPT4基因表达24 h后进行成牙本质向诱导,在诱导的第7天和14天分别进行碱性磷酸酶和茜素红S染色,检测沉默ANGPT4后hDPSCs的...     

LED红光上调MAPK信号促进炎性环境中人牙髓干细胞成骨/成牙本质分化

目的 探讨发光二极管(light-emitting diode,LED)红光对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨/成牙本质分化的影响及机制。方法 本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准。组织块酶消化法培养hDPSCs,在0、1、5、10μg/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下,CCK-8法检测hDPSCs增殖,筛选LPS刺激浓度。设置CG组(矿化诱导)、LPS+CG组、LPS+CG+LED光照组(能量分别为2、4、6、8、10 J/cm²)。第7天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性测定,实时荧光定量PCR检测ALP、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因表达情况,第21天进行茜素红染色及钙结节定量分析,筛选最佳光照能量。设置LPS+CG组、LPS+CG+LED组(...     

牙髓-牙本质复合体

牙髓-牙本质复合体的各结构组分相互依赖、相互影响、相互作用,构成一个功能性的有机整体.本文就牙髓-牙本质复合体的概念、动力学特性、体外培养及临床应用等方面作一综述.     

牙髓—牙本质复合体

牙髓－牙本质复合体的各结构组合相依赖、相互影响、相互作用,构成一个功能性的有机整体,本文就牙髓－牙本质复合体的概念、动力学特性、体外培养及临床应用等方面作一综述。     

细胞外基质磷酸化糖蛋白在人牙髓细胞成牙本质分化中的表达

义(P<0.05).蛋白质印迹法检测显示各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调.结论 在hDPC诱导成牙本质分化的过程中,MEPE与DSPP、DSP、BSP、Ⅰ型胶原呈现相似的表达变化趋势,提示MEPE与hDPC的成牙本质分化有关,可作为hDPC向成牙本质样细胞分化的标志.     

早期牙髓损伤修复中牙本质涎磷蛋白表达的免疫组化研究

目的：衬步探讨牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP)在早期早贿损伤修复中的作用。方法：制备大鼠牙髓损伤模型,分别对损伤后6h,12h,1d,2d,3d,7d及正常大鼠牙髓标本进行HE和免疫组织化学染色,检测各实验组标本中DSPP的表达。结果：正常大鼠牙髓中仅在成牙本质细胞层有DSPP的阳性着色;牙髓损伤后6h,12h,DSPP在成牙本质细胞层的染色明显减弱;损伤后1-3d,梁色较正常牙增强。此时,牙尖及富细胞区的牙髓细胞也有了性着色;损伤后7d,染色与正常对照无明显差异。结论：DSPP在牙髓损伤的早期阶段表达下调;随后在成牙本质细胞及富细胞区牙髓细胞中表达增强;7d时表达趋于正常。提示：它可能在牙髓损伤早期的自身修复中起作用。     

组蛋白去甲基化酶FBXL11抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶FBXL11对牙髓干细胞定向分化能力的影响.方法 成骨分化诱导培养基诱导牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化.逆转录病毒转染构建过表达FBXL11的牙髓干细胞稳定转染细胞,进行FBXL11获得性功能研究.碱性磷酸酶活性实验及碱性磷酸酶染色检测成骨/成牙本质分化早期分化指标-碱性磷酸酶活性.茜素红染色及钙离子定量分析检测牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化能力.实时定量RT-PCR检测FBXL11及成骨/成牙本质分化相关基因-骨涎蛋白、骨桥蛋白和骨钙素的表达.结果 成骨诱导牙髓干细胞抑制FBXL11的表达.过表达FBXL11明显抑制牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、牙髓干细胞体外矿化能力以及骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达.结论 组蛋白去甲基化酶FBXL11具有抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.     

人牙髓细胞向成牙本质细胞分化的蛋白质组学研究

目的 采用蛋白质组学方法分析人牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞蛋白表达谱的改变,揭示特征蛋白在分化过程中所起的作用.方法对人牙髓细胞进行矿化诱导,提取诱导前后细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质,DeCyder V6.0软件确定差异蛋白点,质谱鉴定差异蛋白质.结果双向电泳确认46个差异蛋白质斑点,质谱鉴定20个蛋白斑点,差异蛋白质涉及细胞周期调节、能量代谢、信号传导等细胞生物学过程.结论蛋白质组学技术可高通量筛选与人牙髓细胞向成牙本质细胞分化相关的功能蛋白.     

牙髓中的干细胞

和体内其它组织一样，牙髓中也存在成体干细胞－牙髓干细胞，它有分化为其它细胞的能力。但对其定性和定位尚不明确。该细胞不表达牙本质唾磷蛋白，碱性磷酸酶活性也较低。免疫组化研究表明，牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞有施工相似之处，但也有细胞特异性的表面标记物。关于它的研究对于牙髓生理学，根管治疗学等产生深远的影响。     

大鼠牙髓干细胞与牙乳头间充质细胞成牙能力的比较研究

目的:探讨采用牙髓干细胞替代牙乳头间充质细胞进行牙齿再生研究的可行性。方法:分别分离培养6周龄SD大鼠切牙牙髓干细胞(DPSCs)和出生1d的SD仔鼠切牙牙乳头间充质细胞(DPMCs),对上述2种细胞的表面标记、增殖能力、体外矿化能力以及向成牙本质细胞分化能力进行比较。结果:DPSCs与DPMCs均具有较强的增殖能力和矿化能力,体外诱导均有成牙本质细胞特异性标记物DSPP基因表达,体内移植后均能够形成牙本质样结构。结论:DPSCs是一种较为理想的牙胚间充质细胞的替代细胞,在适宜的诱导环境中能够替代DPMCs进行牙齿的再生研究。